黄连中小檗碱的提取
黄连中盐酸小檗碱的提取纯化及抑菌活性研究
黄连中盐酸小檗碱的提取纯化及抑菌活性研究摘要黄连是一种常用的中药材，具有抗菌作用。
其中的盐酸小檗碱是其主要活性成分之一，具有广谱抑菌活性。
本研究旨在提取纯化黄连中的盐酸小檗碱，并探究其抑菌活性。
采用超声波提取法提取黄连中的活性成分，然后使用TLC和HPLC对提取物进行纯化。
通过红外光谱（IR）和质谱（MS）对纯化产物进行鉴定。
采用平板扩散法和微量平板法对盐酸小檗碱的抑菌活性进行评价。
实验结果表明，超声波提取法对黄连中的盐酸小檗碱具有高效的提取效果，提取物中的盐酸小檗碱含量较高。
TLC和HPLC纯化方法能够有效去除提取物中的杂质，提高盐酸小檗碱的纯度。
红外光谱和质谱结果表明，通过超声波提取和纯化得到的产物确实为盐酸小檗碱。
抑菌实验结果显示，盐酸小檗碱对多种常见病原菌具有一定的抑制效果，其抗菌活性与目前常用的抗菌药物相当。
本研究成功提取纯化了黄连中的盐酸小檗碱，并证明其具有一定的抑菌活性。
这为开发利用盐酸小檗碱作为抗菌剂提供了一定的理论和实验基础。
AbstractIn conclusion, this study successfully extracted and purified berberine hydrochloride from Huanglian, and demonstrated its antibacterial activity. This provides a theoretical and experimental basis for the development and utilization of berberine hydrochloride as an antibacterial agent.Keywords: Huanglian; berberine hydrochloride; extraction; purification; antibacterial activity。
黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定
实验七黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eraneh）、三角叶黄连（coptis deltoidca C．Ycheng et Hsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。
黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。
黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。
其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。
小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。
[目的要求]1．学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。
2．学习和掌握生物碱的柱色谱分离方法。
3．学习和掌握生物碱的化学检识及薄层色谱的鉴定方法。
[实验原理]小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。
盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。
小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。
OC H3C H3N HC H OOOO C H3O C H3季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）N+OOO C H3C H3小檗碱（黄连素）掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶，溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。
盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶，并有强烈的黄色荧光。
易溶于热水或热乙醇，在冷水中的溶解度也比盐酸小檗碱大。
N+H3COH3COOCH3OCH3掌叶防己碱本实验是利用小檗碱和掌叶防己碱的硫酸盐在水中溶解度大的性质，用硫酸水提取出来总生物碱，再利用其盐酸盐难溶于水及盐析作用，使生物碱盐析出，以除去水溶性杂质。
实验三黄连中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定
实验三黄连中盐酸⼩檗碱的提取分离与鉴定实验三黄连中盐酸⼩檗碱的提取分离与鉴定⼩檗碱⼜称黄连素，是在⾼等植物中分布⽐较⼴泛的、有明显⽣理活性的化学成分。
主要存在于黄连、黄柏、三颗针等中草药中。
⼩檗碱具有显著的抗微⽣物、抗原⾍的作⽤，临床⽤其盐酸盐（即盐酸黄连素）治疗细菌性感染如痢疾、急性肠胃炎、呼吸道感染等症。
黄连为⽑茛科黄连属植物黄连（Coptis chinensis Franch 。
），三⾓叶黄连（C 。
deltoidea C 。
Y 。
Cheng et Hsiao ）或云连（C 。
teetoides C 。
Y 。
Cheng ）的根茎，含有⼩檗碱(1)、巴马汀(2)、黄连碱(3)、甲基黄连碱(4)、药根碱(5)等⽣物碱，其中以⼩檗碱含量最⾼，可达10%左右，⼩檗碱以盐酸盐的形式存在于黄连中。
⽬前制药⼯业提取⼩檗碱主要以三颗针为原料。
三颗针来源于⼩檗科⼩檗属（Berberis ）多种植物，其根⽪含⽣物碱约2%，主要含⼩檗碱、⼩檗胺、药根碱、巴马汀等⽣物碱。
N +OH ￡-R 1O OR 4OR 3R 2OR 5R 1 R 2 R 3 R 4 R 5CH 3 CH 3 HCH 3 CH 3 CH 3 CH 3 H H CH 3 H CH 3 CH 3 CH 3 HCH 212345CH 2CH 2CH 2CH 2⼩檗碱 (Berberine)属异喹啉类⽣物碱，⾃⽔和⼄醇中结晶出来的⼩檗碱为黄⾊长针状结晶，含5个结晶⽔，在100℃⼲燥时即失去结晶⽔，转为棕黄⾊，加热⾄110℃时，其颜⾊加深变暗⾊。
Mp.145℃⾄160℃即分解。
N HH 3NO CH 3O CH 3O O HON HH 3COC H 3⼩檗胺游离⼩檗碱能缓缓溶于⽔，在热⽔及热⼄醇中易溶，⽽在冷⼄醇中溶解度为1：100，但难溶于苯、氯仿、丙酮等溶剂。
醇式和醛式⼩檗碱则具有⼀般⽣物碱的通性，难溶于⽔，易溶于有机溶剂。
⼩檗碱的盐类除中性硫酸盐、磷酸盐外，⼀般在⽔中的溶解度均较⼩。
中药化学实验指导—实验十 黄连中盐酸小檗碱的提取分离与检识
实验十 黄连中盐酸小檗碱的提取分离与检识（一）目的要求学习提取精制和检识黄连中的小檗碱，通过实验要求：1．掌握小檗碱的结构特点和理化性质。
2．熟悉浸渍法、盐析法、结晶法和薄层色谱法的基本操作过程及注意事项。
3．了解盐酸小檗碱的检识方法。
（二）主要化学成分的结构及性质黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch.、三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao 、峨嵋野连Coptis omeiensis (Chen)C.Y.Cheng 或云连Coptis teeta Wall.的根茎。
黄连的根状茎含多种生物碱，主要为小檗碱（黄连素），约5％～8％，其次为黄连碱、甲基黄连碱、掌叶防己碱、药根碱、木兰碱等。
叶含小檗碱1.49％。
小檗碱(berberine)：分子式(C 20H 18NO 4)＋，分子量336.37。
系季铵生物碱。
游离小檗碱为黄色针状结晶（乙醚），mp.145℃，能缓缓溶于冷水（1∶20），可溶于冷乙醇（1∶100），易溶于热水或热乙醇，难溶于丙酮、氯仿、苯，几乎不溶于石油醚。
盐酸小檗碱(C 20H 17NO 4·HCl ·2H 2O)，为黄色结晶，微溶于冷水（1∶500），易溶于沸水，几乎不溶于冷乙醇、氯仿和乙醚。
硫酸小檗碱( (C 20H 18NO 4)2·SO 4·3H 2O)，溶于水（1∶30），溶于乙醇。
重硫酸小檗碱(C 20H 18NO 4·HSO 4)为黄色结晶或粉末，溶于水（1∶150），微溶于乙醚。
N OCH 3OCH 3OO +N +HOCH 3O HO CH 3O CH 3CH 3小檗碱 木兰碱（三）实验原理根据小檗碱的盐酸盐在水中溶解度小，而小檗碱的硫酸盐水中溶解度较大。
因此，从植物原料中提取小檗碱时常用稀硫酸水溶液浸泡或渗漉，然后向提取液中加入10％的食盐，在盐析的同时，也提供了氯离子，使其硫酸盐转变为氯化小檗碱（即盐酸小檗碱）而析出。
黄连中小檗碱提取的方法及其影响因素的分析
黄连 中小檗碱提取 的方法及其影 响 因素 的分析
徐 龙 广 于鑫 鑫 （ 大庆志飞生物化工有限公 司 黑龙江大庆 １ ６ ３ ４ １ １ ）
从发现黄连药用功效开始 ，我 国对其 的研究 已 经有 ４ ０ ０ 余年的历史。随着 医药科学 的不断进步 ， 小 檗碱作为黄连的主要有效成分 ，已经显示 出越来越
多 的医 药功效 。各 种经 过 改进 、 运 用最 新技 术 的提取 方法 为 黄 连 小檗 碱 的提 取 和 规模 化 生 产提 供 了新 的 思路 和途 径 ，为 更 进一 步 研究 小 檗 碱 的药 用 功效 奠
定 了坚 实 的基 础 。
经 在 生 物 医药 行业 逐 渐 扩 大 。此方 法 的原 理 是利 用
主要有效 成分 为生物碱 ，其 中小檗碱含量最高 ， 达 １ ０ ％ 左右。 因最初发现黄连具有抗菌， 抗病毒功效 ， 临 床上一直作为清热解读和抗感染药物 ，主要是用来 治疗肠道细菌感染性疾病 。近年来 随着临床药理学 的不断深入研究 ， 陆续发现其还有抗心律失常药物 ， 降血糖 ， 降血脂 ， 抗肿瘤等药理作用 ， 被广泛用于心 律失 常、 心力衰竭 、 高脂血症 、 防治癌 症等治疗 。因 此 ，提取黄连中生物碱对于临床研究和治疗有着重 要 的意义 ， 作者查 阅资料并结合实际情况 ， 开展了对
检 测 波 长为 ２ ６ ５纳 米 ， 流速 为 ｌ 毫升 于 １ ０ ０ ０ ０ 。 精 密 称 取 减 压 干燥 至恒 重 的盐 酸小 檗 碱 对 照 品适 量 ，
１ 提 取 方 法
煎煮法是将药材加水煎煮， 去渣取汁的方法。本
效成分提取充分的 目的， 用 乙醇对黄连单独提取 ， 以 盐 酸小 檗 碱 的含 量 和 出 固率 为 指标 并 讨 论 部 分试 验 影 响因素 。色谱条件流动相为 乙腈 一 ０ ． １ ％磷酸溶 液 （ ４ ０： ６ ０ ，每 １ ０ ０毫升 加 十二烷 基 磺 酸钠 ０ ． １ ２克 ） 。
小檗碱的提取分离及鉴定
盐酸小檗碱的提取分离及鉴定黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。
黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。
其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。
小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。
[目的要求]1．学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。
2．学习和掌握生物碱的柱色谱分离方法。
[实验原理]小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。
盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。
小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。
O33NHCHOOOOCH3OCH3季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）N+OOOCH3OCH3小檗碱（黄连素）掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶，溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。
盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶，并有强烈的黄色荧光。
易溶于热水或热乙醇，在冷水中的溶解度也比盐酸小檗碱大。
N+H3COH3COOCH3OCH3掌叶防己碱本实验是利用小檗碱和掌叶防己碱的硫酸盐在水中溶解度大的性质，用硫酸水提取出来总生物碱，再利用其盐酸盐难溶于水及盐析作用，使生物碱盐析出，以除去水溶性杂质。
再利用两种生物碱极性不同，采用柱色谱分离。
[实验内容]一、提取分离黄连粗粉50g500ml，浸渍20分钟加石灰乳调PH值至中性放置10分钟，抽滤滤液加HCl调PH2～3加滤液体积4～5％的NaCl，放置30分钟，抽滤沉淀滤液（主要含小檗碱、掌叶防己碱、黄连碱等生物碱）加200ml水加热至澄明趁热抽滤滤液放置、抽滤沉淀二、生物碱类检识1．化学检识：（1）丙酮加成反应：取样品0.05g，溶于50ml热水中，加入10％NaOH 溶液2ml，混合均匀后，于水浴中加热至50℃，加入丙酮5ml，放置，即有柠檬黄色结晶析出。
小檗碱的提取PPT课件
主要的提取方法有：
1、酸水法 2、石灰乳法 3、乙醇法 4、超声波法 5、酶法 6、超临界萃取法
•2
一、酸水法提取小檗碱
1、首先选择含有小檗碱的植物组织，例如：三棵针，黄 连和黄柏的干燥树皮，进行粉碎。
2、固液比1:100，加入0.3％硫酸水溶液浸提24小时，
然后过滤，弃去滤渣，得到滤液。 3、将上述滤液有石灰乳调节PH=7.0，放置10分钟，然 后抽滤，得到滤液。
▪ 小檗碱又称黄连素，广泛分布在植物界。它 是临床上一种常用的广谱抗菌药，主要用于菌痢、 胃肠炎、痈肿等细菌性感染。
▪ 小檗碱是黄色针状晶体，表现为季铵型、醇 型，其中以季铵碱型最稳定。小檗碱能缓慢溶解 于冷水（1∶20）或冷乙醇（1∶100），在热水 或热乙醇中溶解度比较大，难溶于丙醇、氯仿或 苯。
•3
4、再将上述滤液用盐酸调节PH=2～3，然后加入滤液
体积4～5％的精制食盐，放置半小时左右使试验完全溶 解，抽滤得到沉淀。
5、将上述沉淀加入到适当水溶液中加热溶解，当溶液 澄明时，趁热抽滤，得到的沉淀即为粗品小檗碱。
•4
▪ 简要工艺流程图：
•5
二、乙醇法加热回流提取小檗碱
1、称取一定量的含有小檗碱的植物组织粉末，放入250 ml圆底烧瓶中用100 ml乙醇作提取溶媒，热水浴加热回流 30 min 。
•7
简要工艺流程图
•8
2、上述溶液放置浸泡1 h，抽滤，滤渣重复上述处理两 次，合并3次，得到滤液。减压蒸出乙醇直到为棕红色糖浆 状 为止
•6
3、在棕红色糖浆状物中加入1%醋酸（约30～40 ml）加热使 置用冰水冷却，即有盐酸小檗碱析出。
5、抽滤，结晶用水洗涤两次，再用丙酮洗涤一次， 干燥、烘干，即得到初品小檗碱。
黄连生药中盐酸小檗碱提取工艺的优选
黄连生药中盐酸小檗碱提取工艺的优选
背景介绍
盐酸小檗碱是一种具有重要药理活性的生物碱，可以广泛应用于医学、农业等领域。
而黄连是盐酸小檗碱的主要来源之一，其含盐酸小檗碱的量与品质对提取工艺有着至关重要的影响。
目的和意义
本文旨在探讨黄连生药中盐酸小檗碱的提取工艺，在优选提取工艺的同时，还可为进一步研究盐酸小檗碱提供参考。
研究内容
1.实验材料和方法
本实验以黄连粉末为原料，用超声波辅助萃取技术进行提取。
以提取出的总碱含量和含盐酸小檗碱的含量为考核指标，通过单因素试验和正交试验进行工艺优选。
2.实验结果和分析
通过单因素试验，考察了提取温度、乙醇浓度、固液比、萃取时间等因素对提取效果的影响。
结果表明，提取温度、乙醇浓度、萃取时间对提取效果有着显著影响，而固液比对提取效果的影响不显著。
通过正交试验，构建了四因素三水平的正交实验设计，并对数据进行分析。
结果表明，最优提取条件为提取温度 60℃、乙醇浓度 70 %、固液比1:25、萃取时间 30 min，此时盐酸小檗碱的提取率为 4.76%，和总碱含量达到最大值。
3.结论
通过实验，得出了黄连生药中盐酸小檗碱提取工艺的最优条件，同时也得出了一些有关提取工艺的结论。
此外，对于提取工艺的优化和完善也提供了参考。
总结
本文探讨了黄连生药中盐酸小檗碱的提取工艺，并通过实验得出了最优条件。
在进一步研究和实践中，可继续完善和提高盐酸小檗碱的提取效果，为其广泛应用于医学、农业等领域提供更好的条件和效益。
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黄连中小檗碱的提取、精制、鉴定及含量测定黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eraneh）、三角叶黄连（coptis deltoidca C．Ycheng et Hsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。
黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。
黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。
其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。
小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。
一、目的要求
1、从黄连中提取小檗碱的原理和方法，以及小檗碱精制方法。
2、学习渗漉法提取天然产物的方法。
3、熟悉握小檗碱的化学性质和鉴定方法。
二、实验原理
小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。
盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。
小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。
季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）
小檗碱（黄连素）
掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶，溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。
盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶，并有强烈的黄色荧光。
易溶于热水或热乙醇，在冷水中的溶解度也比盐酸小檗碱大。
掌叶防己碱
本实验是利用小檗碱属于季铵碱，其游离型在水中的溶解度最大。
而它们的盐类以含氧酸盐在水中溶解度较大，不含氧酸盐难溶于水，其盐酸盐在水中溶解度则更小。
利用此性质结合盐析法，可从黄连中提取小檗碱。
再利用两种生物碱极性不同，采用柱色谱分离。
三、仪器与试剂
1、试剂：黄连粗粉50g，2%硫酸溶液，苯，乙酸乙酯，甲醇，异丙醇，氨水，饱和石灰水，氯化钠。
2、仪器：粉碎机，渗漉筒，烧杯，硅胶G-CMA-Na薄层板，真空干燥箱。
四、实验步骤：
1、提取分离
黄连粗粉50g
加0.3％H2SO4500ml（超过药材0.2cm），浸渍20分钟，
装入渗漉筒，30分钟，滤过
滤液
加石灰乳调PH值至中性放置10分钟，抽滤
滤液
加HCl调PH2～3，加滤液体积10％的NaCl，
放置过夜，抽滤
盐酸小檗碱粗品
2、精制
盐酸小檗碱粗品
加饱和石灰水，趁热过滤
滤液
加盐酸调ph至1-2，冷却。
放置，析晶
析出大量黄色沉淀
常压过滤
沉淀
蒸馏水洗结晶，过滤，三次
沉淀
80℃以下干燥1小时
称重，计算提取率（精制的盐酸小檗碱）
3、鉴定
检识实验
（1）取自制精制盐酸小檗碱0.05g溶于50ml热水中，加入10%NaOH溶液2ml，混合均匀后，于水浴上加热至50℃，加入丙酮5ml，放置，即有柠檬色丙酮小檗碱结晶析出。
抽滤，水洗后，干燥，测mp。
（2）取自制精制盐酸小檗碱少许，加稀盐酸2ml待溶解后，加漂白粉少许，即显樱红色。
（3）取自制精制盐酸小檗碱少许，加水1ml待溶解后，加浓硝酸1~2滴，即产生绿色硝酸小檗碱沉淀。
（4）取自制精制盐酸小檗碱少许，加水1ml待溶解后，加锌粉少许，再分数次加入浓硫酸数滴，每隔10min加1次，观察其黄色是否消退。
薄层色谱检识
吸附剂：硅胶G-CMC-Na薄层板
对照品：盐酸小檗碱甲醇溶液
样品：不同色带的甲醇溶液
展开剂： CHCl3-MeOH-冰醋酸（7：1：2）
检视：先在紫外灯光（365nm）下观察荧光，再喷改良碘化铋钾试剂。
记录图谱并计算Rf值
五、注意事项
1. 渗漉速度不可太快；
2. 精制时加饱和石灰水后要趁热过滤。
六、思考题
1、提取分离过程中加NaCl起什么作用？
2、根据盐酸小檗碱的性质，还可以用其他方法进行提取与分离？
3、小檗碱属于哪一类生物碱，可以用盐酸水溶液提取吗？。