示差分光光度法
（4）从吸收曲线形状可以解释物质的颜色。 物质的颜色与吸收光颜色互为补色。
光的互补：蓝 黄
9
§7-3
光吸收的基本定律
一、Lamber-Beer定律 二、吸光系数和吸收光谱 三、偏离Beer定律的因素 四、透光率的测量误差
10
一、Lamber-Beer定律—吸收光谱法基本定律
描述物质对单色光吸收强弱与 液层厚度和待测物浓度的关系
→ 定性、定量依据
14
2．吸光系数两种表示法： 1）摩尔吸光系数：
在一定λ下，c=1mol/L，b=1cm时的吸光度
2）百分含量吸光系数 / 比吸光系数a：
在一定λ下，c=1g/100mL，b=1cm时的吸光度
3）两者关系
M 1% a1cm 10
3．吸收光谱（吸收曲线）：λ~A 最大吸收 最小吸收 肩峰 特征值→定性依据
13
二、吸光系数和吸收光谱
1．吸光系数的物理意义： 单位浓度、单位厚度的吸光度
A a bc
讨论：
1）a=f（组分性质，温度，溶剂，λ） 当组分性质、温度和溶剂一定，a=f（λ） 2）不同物质在同一波长下a可能不同（选择性吸收） 同一物质在不同波长下a一定不同 3）a↑，物质对光吸收能力↑, 定量测定灵敏度↑
第七章
§7-1 §7-2 收 §7-3 §7-4 §7-5 §7-6 思考题
可见分光光度法
概 述 物质对光的选择性吸 光吸收的基本定律 分光光度计简介 分光光度法的建立 分光光度法的应用
1
§7-1
概
述
一、吸光光度法
在光谱分析中，依据物质对光的选择性 吸收而建立起来的分析方法称为吸光光度法。 主要有: 红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长 范围800nm50m 。 主要用于有机化合物结构鉴定。 紫外吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长 范围200400 nm（近紫外区）。 可用于结构鉴定和定量分析。
2
可见吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范
围400800nm ，主要用于有色物质的定量分析。
二、吸光光度法的特点：
（1）灵敏度高； （2）准确度高； （3）操作简便 快速；
（4）应用广泛。
3
§7-2
物质对光的选择性吸收
一、物质的颜色
物质的颜色是由于物质对不同波长的光具 有选择性吸收而产生的。
ï Ö Î Ê Ñ Õ É « » Â Æ Ì Æ » È ³ ì º Ï º × ì × Ï ¶ À Ì À  ¶ ¶  À Ì Î ü Ê Õ ¹ â Õ « Ñ É × Ï ¶ À Ì À  ¶ ¶  À Ì Ì Â Æ Â » Ì Æ » È ³ ì º ² ¨¤ ³ /nm 400« ¡ 450 450« ¡ 480 480¡ « 490 490« ¡ 500 500« ¡ 560 560« ¡ 580 580« ¡ 600 600« ¡ 650 650« ¡ 750
15
4．吸光度测量的条件选择： 1）测量波长的选择: 左右 max
max Amax 测定灵敏高
较小的A A 须在 max 下测定 bc
2）吸光度读数范围的选择：
空白溶液 配制样品的溶剂
光学性质和厚度相同 参比池 样品池
选A=0.15~1.00
17
（一）光学因素
1．非单色光的影响： Beer定律应用的重要前提——入射光为单色光 照射物质的光经单色 器分光后并非真正单 色光 其波长宽度由入射狭 缝的宽度和棱镜或光 栅的分辨率决定 为了保证透过光对检 测器的响应，必须保 证一定的狭缝宽度 这就使分离出来的光 具一定的谱带宽度
dI x k dn Ix S
n k dS dI x I0 I 0 S x I
I k n I n ln lg k I0 S I0 S
I V n 由S 和n V C l C lg klC abc I0 l S 12
表7-1 物质的颜色与吸收光颜色的互补关系
4
5
二、光吸收曲线
用不同波长的单色光照射某一吸光物质测 定其吸光度，以波长为横坐标，以吸光度为 纵坐标，绘制曲线。描述物质对不同波长光 的吸收能力。
6
吸收曲线
图为1,10-邻二氮杂菲亚铁溶液的吸收曲线， 在波长510nm处有最大吸收。
7
吸收曲线的讨论： （1）一种吸光物质对不同波长的光吸收程度 不同。吸光度最大处对应的波长称为最大吸 收波长λmax 。 吸收曲线是定量分析中选择入射光波长的重 要依据。 （2）同一种物质浓度不同，其吸收曲线形状 相似λmax不变。 在λmax处，吸光度A正比于浓度C。测定测定 最灵敏 （3）吸收曲线可以提供物质的结构信息，并 作为物质定性分析的依据之一。
I Lamber Beer定律表达式 lg a b c I0
I 透光率 T I0 吸光度 A lg T a b c
讨论：
或 T 10 A 10abc
a：吸光系数
1．Lamber-Beer定律的适用条件（前提） 入射光为单色光，均匀非散射的稀溶液 2 ．该定律适用于均匀非散射固体、液体和气体 样品 3．在同一波长下，各组分吸光度具有加和性 A=A1+A2++An
3）参比溶液(空白溶液)的选择：
空白溶液 参比池 调节光路 A参 0 ，T 100% 样品溶液 样品池 A样
注：采用空白对比消除因溶剂和容器的吸收、 光的散射和界面反射等因素对透光率的干扰
16
三、偏离Beer定律的因素
A bc
依据Beer定律，A 与C关系应为经过 原点的直线 偏离Beer定律的 主要因素表现为 以下两个方面 （一）光学因素 （二）化学因素
Lamber定律： A l Beer定律： A C
假设一束平行单色光通过一个均匀的、非散射 的吸光物体
入射光强为 I 0 透过光强为 I 物体截面为 S 厚度为 l 吸光质点数为 n
11
取物体中一极薄层 设入射光强为 I x
薄层的吸光质点数为 dn 不让光子通过的面积为 dS k dn dS k dn 光子通过薄层被吸收的 几率 S S 透过薄层减弱的光强为 dI x
示差分光光度法
示差分光光度法示差分光光度法1示差法的原理吸光光度法一般仅适用于微量组分的测定，当待测定组分浓度过高或过低，亦即吸光度测量值过大或过小时，从上节的测量误差的讨论得知，在这种情况下即使没有偏离朗伯—比耳定律的现象，也会有很大的测量误差，导致精准度大为降低。
采纳示差法可克服这一缺点。
目前重要有高浓度示差法，稀溶液示差法和使用两个参比溶液的精密示差法。
其中以高浓度示差法应用*多，本节将侧重讨论。
示差光度法和一般的光度法不同之处重要在于，示差法不是以空白溶液（不含待测组分的溶液）作为参比溶液，而是采纳比待测溶液浓度稍低的标准溶液作参比溶液，然后测量待测溶液的吸光度，再从测得的吸光度求出它的浓度。
这样便大大提高测定结果的精准度。
设用作参比的标准溶液浓度为cs，待测溶液浓度为cx，且cxcs，依据朗伯—比耳定律得到Ax=εcxbAs=εcsb两式相减：A相对=Ax—As=εb（cx—cs）=εbΔc（2—12）实际操作是：用已知浓度的标准溶液作参比，调整其吸光度为零（透光率100%），然后测量待测溶液的吸光度。
这时测得的吸光度实际是这两种溶液吸光度的差值（相对吸光度）。
从（2—12）式可知，所测得的吸光度差值与这两种溶液的浓度差成正比。
这样便可以把空白溶液为参比的稀溶液标准曲线作为ΔA对应于Δc的工作曲线，依据测得的ΔA找出相应的Δc值，从cx=cs+Δc，便可求出待测溶液之浓度，这就是示差法定量测定的基本原理。
2示差法的误差用示差法测定浓度过高或过低试液，其精准度比一般分光光度法高。
这可从图2—3看出。
设图2—3示差法标尺原理按一般分光光度法用试剂空白作参比溶液，测得溶液的透光率Tx=6%，明显，这时的测量读数误差是很大的。
采纳示差法时，假如按一般分光光度法测得的Ts=10%的标准溶液作参比溶液，使其透光率从标尺上Ts1=10%处调至Ts2=100%处，相当于把检流计上的标尺扩展到原来的十倍（TS2/TS1=100/10=10），这样待测试液透光率原来为6%，读数落在光度计标尺刻度很密，测量误差很大的区域，改用示差法测定时，透光率则是60%，读数落在测量误差很小的区域，从而提高了测定的精准度。
磺基水杨酸差示分光光度法测定不同含量铁的研究及应用_包桂兰
磺基水杨酸差示分光光度法测定不同含量铁的研究及应用包桂兰1,刘青山2(1.内蒙古师范大学地理系,内蒙古呼和浩特010022;2.内蒙古轻工业学校,内蒙古包头014000)摘 要:研究了用磺基水杨酸显色,差示分光光度法测定不同含量铁的方法.在pH 1.80—3.00的缓冲介质中,铁与磺基水杨酸生成紫红色络合物,表观摩尔吸光系数ε490为1.7×103L ·mol -1·cm -1,铁含量在4.00—28.00mg ·L -1(或16.00—40.00mg ·L -1)范围内符合比耳定律.该法简便快速,选择性好,准确度高,测定范围广,适用于地质样、钢样中常量特别是高含量铁的测定.关键词:铁;磺基水杨酸;差示分光光度法中图分类号:O 657.32 文献标识码:A 文章编号:1001-8735(2001)02-0139-03关于差示分光光度法的原理、特点、实验技术条件等方面介绍的文献很多[1,2],以磺基水杨酸显色光度法测定铁已有报道[3],但差示分光光度法测定常量铁未见报道.经典的常量铁的分析是用重铬酸钾滴定法,而此法测定的废液中大量的H g 2Cl 2和Cr 3+将污染环境,用差示分光光度法可克服一般分光光度法误差大和分析带来的污染等缺点.用此法测定地质样和钢样中的高、中含量铁,相对误差在±0.3%以内.1 实验部分1.1 仪器与试剂 721型分光光度计(上海第三分析仪器厂);pHS -3型数字式酸度计(天津第二分析仪器厂).0.2000g ·L -1Fe (Ⅲ)标准溶液:称取高纯铁0.1000g 于小烧杯中,加硝酸(1+1)10mL ,加热溶解,煮沸除去氮的氧化物,冷却,移入500m L 容量瓶中,以水稀释至刻度,摇匀;5%磺基水杨酸溶液;H 3BO 3-Na 2B 4O 7缓冲溶液:pH 9.0的Na 2B 4O 7溶液和H 3BO 3饱和溶液(1+1)混合配制;硝酸、盐酸、高氯酸:AR 级;氢氟酸:ρ=1.13.所用试剂均为分析纯,实验用水为二次蒸馏水.1.2 实验方法 移取一定量的Fe (Ⅲ)标准溶液于25m L 容量瓶中,加2.00m L 5%磺基水杨酸,10mL H 3BO 3-Na 2B 4O 7缓冲溶液,用水稀释至刻度,摇匀.以0.100mg (或0.400mg )Fe (Ⅲ)的显色液作参比,用1cm 比色皿,于490nm 波长处测定吸光度.2 结果与讨论2.1 最大吸收波长 试验表明,在pH 1.80—3.00缓冲介质中,Fe (Ⅲ)与磺基水杨酸生成收稿日期:2001-02-23作者简介:包桂兰(1965-),女(蒙古族),内蒙古科右中旗人,内蒙古师范大学实验师.第30卷第2期2001年6月内蒙古师大学报自然科学(汉文)版Journal of I nner M ongolia Normal University (N atural Science Edition )Vol .30No .2Jun .2001紫红色络合物,其最大吸收波长λmax =490nm ,ε=1.7×103L ·mol -1·cm -1,实验用490nm .2.2 酸度的影响与显色剂用量 在pH 1.80—3.00时,磺基水杨酸是差示分光光度法测定铁的理想显色剂,完全符合文献[2](pH <1.80时络合物吸光度不稳定;pH >3.00时,显色不完全),有色化合物摩尔吸光率可以不必很大,以便溶液浓度较浓时,其吸光度也不会太大,可使测定范围较广.Fe (Ⅲ)溶液(或试液)和磺基水杨酸溶液本身的酸度很高,25m L 体积保持pH 1.80—3.00,5%磺基水杨酸溶液用量在2.00mL 时,H 3BO 3-Na 2B 4O 7缓冲溶液需要8—11m L ,实验选用10mL .图1 标准曲线1 以0.100mg Fe (Ⅲ)显色液作参比2 以0.400mg Fe (Ⅲ)显色液作参比2.3 标准曲线 分别取Fe (Ⅲ)标准溶液0.100,0.200,0.400,0.500,0.600,0.700,0.800,1.000mg 于25m L 容量瓶中,按实验方法显色定容,摇匀.以0.100mg Fe (Ⅲ)显色液作参比,在490nm 波长处,用1cm 比色皿,测定0.100—0.700mg Fe (Ⅲ)这一系列吸光度.再以0.400mgFe (Ⅲ)显色液作参比,测定0.400—1.000mgFe (Ⅲ)这一系列吸光度,绘制两条标准曲线,如图1所示.2.4 共存离子的影响 pH 1.80—3.00时,由于氢离子浓度较大,抑制了试剂本身的离解,使其它金属离子与磺基水杨酸阴离子生成络合物的可能性减小[4],实验条件下常见阳离子均不显色.试验表明,对于0.300mg Fe (Ⅲ),在拟定条件下,可允许下列离子存在(以mg 计,未作上限量):Ca 2+,M g 2+,Ba 2+,Cd 2+,Bi 3+,M n 2+,Pb 2+,Zn 2+,Al 3+,Sn 2+(10),M o 6+,V 5+(5),Cr 6+(3),Ni2+,Cu 2+,Co 2+(2),Cr 3+(0.25),Ti 4+(0.02),M n 7+(1.0)(因MnO -4本身的颜色干扰严重,但20min 内与显色剂发生氧化还原反应而退色,消耗一定量的显色剂),Cl -,NO -3,F -,PO 3-4等对测定无影响.所测定地质样铅锌矿中含有Pb ,Zn ,Cu ,铁矿中除铁无其它金属元素,钢样中含有Mn (0.44%),Ni (2.97%),Cr (1.59%)等均低于可允许量,不用掩蔽剂可直接测定铁.3 样品分析3.1 铅锌矿中铁的测定 分别称取0.1000g 铅锌矿c 1、c 2置于小烧杯中,加几滴水润湿后,加入浓盐酸10m L ,盖表面皿,加热溶解片刻.然后加浓硝酸3m L ,滴加氢氟酸数滴,煮沸驱尽氮氧化物,冷却后移入100m L 容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀.取此试液2.00m L ,以0.100mg Fe (Ⅲ)显色液作参比,按实验方法测定,结果见表1.3.2 铁矿中铁的测定 称取0.1000g 铁矿置于小烧杯中,加几滴水润湿,加入浓盐酸10mL ,盖表面皿,低温加热溶解,加5滴氢氟酸,继续加热完全溶解,冷却后移入100m L 容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀.取此试液1.00m L ,以0.100mg Fe (Ⅲ)显色液作参比,按实验方法测定,结果见表1.3.3 钢样中铁的测定 称取0.1000g 钢样142号于小烧杯中,加入10硝酸·140· 内蒙古师大学报自然科学(汉文)版第30卷 (1+2)溶液,加高氯酸5m L ,氢氟酸数滴,低温加热近干,冷却后用水浸出移入100m L 容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀.取此试液1.00mL ,以0.400mg Fe (Ⅲ)显色液作参比,按实验方法测定,结果见表1.表1 样品分析结果样品推荐值(%)测得值(%)平均值(%)相对误差(%)c 117.8017.7617.7717.7417.76-0.22c 215.8015.7615.7515.7515.76-0.25铁矿50.8850.8350.8250.8250.82-0.11钢样14294.3194.3294.3494.3594.34+0.03参考文献:[1] 罗庆尧,邓延倬,蔡汝秀,等.分光光度分析[M ].北京:科学出版社,1992.355-371.[2] 国家机械工业委员会.光度分析[M ].北京:机械工业出版社,1988.55-58.[3] 衡兴国,黄按佑.实用快速化学分析新方法[M ].北京:国防工业出版社,1996.226-276,335.[4] 刘绍璞,朱鹏鸣,张国轩,等.金属化学分析概论与应用[M ].重庆:四川科学技术出版社,1985.914.S TU DY AN D APPLICA TIO N O F DET ERM INA TION O FDIFFEREN T CO N TEN T LEV EL IRON BY S U LFO SA LICYLICACID DIFFEREN T IA L SPECT ROSCO PYBAO Gui -lan 1,LIU Qing -shan 2(1.Department of G eography ,Inner Mongolia Normal University ,Huhhot 010022,China ;2.I nner Mongolia L ight I ndustry Scho ol ,Baotou 014000,China )A bstract :In this paper ,different content iron are determined by using sulfosalicylic acid .In the pH 1.80—3.00buffer solution ,iron and sulfosalicy lic acid can form purplish red complexes ,and its apparent molar absorption coefficient ε490is 1.70×103L ·mol -1·cm -1.Beer s law is obeyed for the content of iron in the range of 4.00—28.00mg ·L -1(or 16.00—40.00mg ·L -1).The method is simple ,rapid and alternative .Its deg ree of accuracy is hig h and scope of determination is wide .The method is suitable for macro -iron ,especially high content iron determination in the geological sam ple and steel sample .Key words :iron ;sulfosalicy lic acid ;differential spectroscopy 【责任编辑董祥林】·141· 第2期包桂兰等:磺基水杨酸差示分光光度法测定不同含量铁的研究及应用 。
示差分光光度法
示差分光光度法
示差分光光度法是一种在分子取向反应或光谱特性中应用广泛的
分析方法。
首先，示差分光光度法通过比较两种不同取向下的吸收光谱，来
探测反应中的分子结构变化。
通过这种方法，我们可以更好地理解反
应的机理和特性。
其次，示差分光光度法在不同波长或时间段内测量光谱信号，可
以得到很高的灵敏度和分辨率。
这使得该方法在许多不同领域都有应用，如化学、生物学、医学等等。
此外，示差分光光度法还可以用于探测微量物质的存在和浓度变化。
这种方法可以用于监测环境污染、药物代谢等方面。
需要注意的是，示差分光光度法需要设备精细和技术娴熟的操作。
对于初学者来说，需要认真学习理论知识和实验技能，才能获得准确
的测量结果。
总之，示差分光光度法是一种应用广泛、灵敏度高、分辨率高的
分析方法。
在化学、生物学、医学等领域都有广泛的应用前景。
如今，随着技术的不断发展和创新，示差分光光度法将会得到更广泛的应用
和挖掘。
仪器分析思考题及答案
复习思考题1、 电位滴定法的优点 答案：电位滴定法的优点： 电位滴定法一般具有较高的准确度和精密度，但分析时间较长。
由于电位滴定法测量的是随滴定剂加入而引起的电池电动势的变化， 而不是电动势的绝对值，即使电极的斜率少有变化， 也不影响测量结果。
而其液接电位和活度系数的变化很小， 等当点附近电位突跃较大， 容易准确测定终点。
2、 在气相色谱法中，用于定性的参数是什么答案：保留时间。
3、 在原子吸收分光光度法中，吸收线的半宽度是指：在中心频率吸收系数一半处的 线轮廓上两点间的频率差。
4、 测定饮用水中F 含量时，加入总离子强度缓冲液的作用是什么。
答案：1:维持试液和标准液很定的离子强度 2保持试液在离子选择性电极适合的内3:使被测离子释放成为可检测的游离离子。
5、 衡量色谱柱柱效能的指标是什么答案：用有效塔板数能的指标。
6. 在液相色谱中，范第姆特方程式中的哪一项对柱效的影响可以忽略不计答案：纵向扩散 项。
7、库仑分析的理论基础是什么答：法拉第电解定律。
&在电位滴定中，以△ £/△V 〜V 作图绘制滴定曲线，滴定终点是哪一点答：尖峰所对应的V 值即为滴定终点。
9 .物质的紫外-可见吸收光谱的产生的机理答：由分子中价电子能级跃迁产生。
分子具有三 种不同能级：电子能级、振动能级和转动能级三种能级都是量子化的，且各自具有相应的能量。
价电子跃迁的同时，伴随着核振动、分子自身转动能级的跃迁(带状光谱) 10、 气相色谱分析中，理论塔板高度与载气线速 小值。
11、 原子吸收光谱分析中光源的作用答： 辐射待测元素的特征光谱。
获得较高的灵敏度和准确度。
12、 电化学分析法分为哪些答： 电位分析法(potentiometry )、电导分析法(conductometry )、 库仑分析法(coulomtry )、电解分析法(electranalysi )。
直接电位法、直接电导法、控制电 位库仑法。
示差法
要求：
示差法要求仪器光源强度要足够 大，仪器检测要足够灵敏。因为只 有这样的仪器才能将标准参比溶液 调到T%为100%，否则调不到。
进一步ห้องสมุดไป่ตู้
设待测溶液的浓度为Cx，标准溶液为Cs（Cs〈 Cx）， 则有： △A=Ax-As=Ɛb(Cx-Cs)=Ɛb△c 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的 吸光度之差。示差法测得的吸光度与△c呈线性关系。由 标准曲线上查的相应的值，则待测溶液的Cx： Cx=Cs+△C
示差法标尺扩展原理：
示差法
722型可见分光光度计
——高含量组分的测定
微生物11301班 七组
了解：
普通分光光度计一般只适于测定微量组 分。然而，当待测组分含量较高时，其将产 生较大的误差。
思考：采用什么方法才适合于高含量组 分的测量计算？
示差法
示差法又称为示差分光光度法。它与一般 分光光度法区别仅仅在于它采用一个已知浓度 作参比溶液，才大大提高了测定的准确度，使 其用于测定过高含量的组分，所以将这种吸光 度测量方法来扩大测量范围并提高灵敏度和准 确度的方法称之为示差法。
为什么示差分光光度法可以提高测 定的准确度?
吸光光度法一般仅适用于微量组分的测定，当待 测定组分浓度过高或过低，亦即吸光度测量值过大或 过小时，即使没有偏离朗伯--比尔定律现象。也会有很 大的测量误差，导致准确度大为降低，采用示差法可 克服这一缺点。 示差法和一般的光度法不同之处在 于，示差法不是以空白溶液（不含待测组分的溶液） 作为参比溶液，而是采用比待测溶液浓度稍低的标准 溶液作为参比溶液，然后测量待测溶液的吸光度，从 而测出待测液的浓度，从而大大提高测定结果的准确 度。
§9-6 吸光光度法的应用
§9-6 吸光光度法的应用
吸光度差与这两种溶液的浓度差成正比。以把空 白溶液作为参比的稀溶液的标准曲线作为ΔA和Δc的标 准曲线，根据测得的ΔA求出相应的Δc值，从cx=co+c可 求出待测试液的浓度，这就是示差吸光光度法定量的 基本原理。
Hale Waihona Puke Ax cxbA0 c0b
A相对 A Ax A0 b(cx c0 ) bc bc相对
§9-6 吸光光度法的应用
1 示差吸光光度法（differential）
（1）示差吸光光度法的原理 吸光光度法一般仅适用于微量组分的测定，当待 测定组分浓度过高或过低，会引起很大的测量误差， 导致准确度降低。示差吸光光度法可克服这一缺点。 目前，主要有高浓度示差吸光光度法、低浓度示差吸 光光度法和使用两个参比溶液的精密示差吸光光度法。 它们的基本原理相同，且以高浓度示差吸光光度法应 用最多，仅介绍高浓度示差吸光光度法。
§9-6 吸光光度法的应用
4 络合物组成的测定
（2）连续变化法(又称等摩尔系列法)
cM+cR=c，改变 cM和cR的相对量，
配制一系列溶液，在有色络合 物的最大吸收波长处测量这一 系列溶液的吸光度。当溶液中 络合物MRn 浓度最大时， cR/cM 比值为n。 当 cM/c为0.5时，络 合比为1:1；当 cM/c 为0.33， 络合比为1:2；当 cM/c=0.25时， 络合比为1:3。
连续变化法
§9-6 吸光光度法的应用
3 弱酸和弱碱解离常数的测定
HB==H++B-
( AHB A) pKa lg pH ( A AB )
作图法求pKa
§9-6 吸光光度法的应用
4 络合物组成的测定
紫外可见分析的应用-定量分析(示差光度法)
定量分析5. 示差分光光度法用普通分光光度法测定很烯或很浓溶液的吸光度时，测量误差都很大。
若用一已知合适浓度的标准溶液作为参比溶液，调节仪器的100％透射比点（即0吸光度点），测量试样溶液对该已知标准溶液的投射比，则可以改善测量吸光度的精确度。
这种方法称为示差分光光度法。
其原因如图13.25所示。
当测定低透射比（高吸光度）的高浓度试液时，用比试液浓度C1稍低的标准溶液C2作参比溶液，这种示差法叫高吸收法；当测定主透射比（低吸光度）的低浓度溶液时，用比试液浓度稍高的标准溶液作参比溶液，这种示差法叫低吸收法；若同时用浓度不同的两种标准溶液（试液的浓度需介于两标准溶液之间）分别调仪器的100%透射比点及零透射比点，这种示差方法叫最精密法。
较常用的时高吸收法，其原理如下：根据吸收定律有则即用C2作参比测得的A为示差法实质上是相当于把仪器的测量标尺放大，以提高测定的精确度。
如果C2以常规法测得的透射比为10％，在示差法用调至透射比为100％，意味着标尺扩大了10倍。
若待测试液以常规法的最终分析法得的透射比为5％，用C2作参比的示差法测得透射比为50％。
示差法的最终分析结果准确度比常规法高，这是因为尽管示差法测出的很小的ΔC，而测得的误差dC也很大，则仍很大，但最终分析结果的相对误差为，Cs是标准参比溶液，Cs相对很大，所相对误差仍然很小。
6. 光度滴定法分光光度滴定法是利用被测组分或滴定剂或反应产物在滴定过程中的吸光度的变化来确定滴定终点，并由此计算试液中被测组分含量的方法。
分光光度滴定曲线是在某一给定波长处在滴定过程中所测得的吸光度与已知浓度的滴定剂体积之间的关系曲线，其曲线的形状取决于反应体系中样品组分、滴定剂或产物的吸光程度，如图13.26所示。
图13.26（a）是用有色滴定剂（其摩尔吸光系数εt>0）滴定含非吸收组分（εs>0）的试液，生成的产物也无吸收（εp＝0），即εt>0，εs=εp=0；（b）是εp>0，εs=εt=0；（c）是εs>0，εp=εt=0；（d）是εs>0，εt=εp=0；（e）是εp >0，εs=εt=0；（f）是εs>0，εp=εt=0。
差示分光光度法含量测定的原理和方法
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示差分光光度法测定水样中非那西汀的含量
实验方法及步骤
1.标准溶液的配制 非那西汀标准溶液（100μg/ml）：准确称取非 那西汀0.0500g于小烧杯中，加少许乙醇溶解，转移 到500ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀备 用 2.吸收曲线绘制 移取5.00ml非那西汀标准溶液于50ml容量瓶中， 蒸馏水稀释至刻度，摇匀。以蒸馏水为空白，进行 全波长扫描，绘制吸收曲线，找出最大波长。
1. 示差分光光度法的测定步骤：
1）采用浓度为cs的标准溶液为参比溶液;
2 ）测定一系列 Δc 已知的标准溶液的相对吸光度 (ΔA)； 3）绘制ΔA-Δc工作曲线； 4）由测得试样溶液得相对吸光度 ΔA，从工作曲 线上求出 Δc ，根据 cx ＝ cs+Δc 即可求出试样浓 度cx
试剂与器材
UV-2450紫外-可见分光光度计， 石英比色皿（1cm）， 容量瓶（50ml）， 移液管（1ml、10ml）， 未知样品液。
三、示差分光光度法原理
普通分光光度法 一般测定痕量组分 参比溶液浓度为零
即朗伯—比耳定律只适用于稀溶液。
示差分光光度法
用于测定浓度较高组分 用浓度稍低于待测溶液的标准溶液 作参比
设：待测溶液浓度为cx， 标准溶液浓度为cs(cs < cx)。 则： Ax= εb cx As = εb cs ΔＡ＝Ａx －Ａs =εb(cx － cs ）=εbΔc
测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准 溶液的吸光度之差ΔＡ(也叫相对吸光度Ar)。
示差法测得的吸光度ΔA与Δc呈直线关系。由标 准曲线上查得相应的Δc值，则待测溶液浓度cx ： cx = cs + Δc 示差法标尺扩展原理
普通法： cs的T =10%；cx的T = 5% 示差法： cs 做参比，调T =100% 则： cx的T = 50% 标尺扩展10倍
差示分光光度法范文
差示分光光度法范文分光光度法（spectrophotometry）是一种常见的分析方法，用于测定溶液中物质的浓度。
它通过测量溶液对特定波长的光的吸收程度来确定物质的浓度，可以应用于各个领域，包括化学、生物、环境等。
分光光度法的原理是基于光的吸收现象。
物质吸收光的能力与其浓度成正比，所以可以通过测量吸光度来推断物质的浓度。
在分光光度法中，一束光通过样品，然后被接收器接收，并转化为电信号。
接收器的输出信号与样品吸收的光的强度成正比。
由于吸收光的强度与物质的浓度相关，通过测量样品吸光度，可以推断物质的浓度。
分光光度法的具体步骤如下：首先，根据实验需要，选择适当波长的光源。
对于一些物质来说，它们对特定波长的光有较高的吸收能力，因此需要选择合适波长的光源。
接下来，将待测溶液置于透明的试管或比色皿中，并将其放置在光路中。
光由光源穿过试管中的溶液，并被接收器接收。
然后，通过调节接收器的增益或调节光源的强度，使被接收到的光的强度控制在适当的范围内。
过高或过低的光强度都会影响测量结果的准确性。
接着，进行基线校正。
基线校正是为了排除试管或比色皿对光的吸收而引起的误差。
在进行测量之前，将纯溶剂（无待测物质的溶液）置于光路中，并记录接收器测得的光强度作为基线。
在测量待测溶液时，将接收器测得的光强度减去基线值，即可得到正式的吸光度。
最后，通过对一系列标准溶液进行测量，建立吸光度和浓度之间的标准曲线。
标准曲线可以通过绘制吸光度与浓度之间的线性关系来确定，从而将待测溶液的吸光度转化为浓度。
通过标准曲线可以方便地计算出待测溶液中物质的浓度。
综上所述，分光光度法是一种简单、灵敏且可靠的分析方法，广泛应用于各个领域。
通过测量溶液对特定波长的光的吸收程度，可以确定物质的浓度。
通过建立标准曲线，可以方便地将吸光度转化为浓度。
分光光度法为我们提供了一种快速准确地测定物质浓度的手段，对于科学研究和工业生产都有着重要的意义。