培养基的配制过程

培养基的配制过程

计算用量:200ml固体培养基10g/L 蛋白胨. 3g/L 牛肉膏.5g/L NaCl .2% 琼脂粉 称量：托盘天平

溶解：自来水

调pH：自然pH

灭菌：

一般培养基，121 0C, 15-30min：20min；

含糖培养基：112 0C, 15-30min；

易产生沉淀的物质：分别灭菌后再混合

倒平板

灭菌

待灭菌物品的包

装锅、加

加盖（对角线均匀拧旋

升温、排气（放大气5min

横温121℃、20min

切断电源、冷

开锅取

倒平板

◆融化的琼脂培养基,冷却至50℃左右(以手背能忍受的温度为准)

平板划线的基本程序

灭菌接种（杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标）

沾取菌

接

灭菌接种（杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境）

平板涂布的基本程

灭菌过的移液

吸取菌液0.1ml滴在培养皿中

用灭菌的涂布棒均匀涂布：

将菌悬液先沿一条直线轻轻地来回推动,使之分布均匀，

然后改变方向沿另一垂直来回推动，平板内边缘处可改变方向用三角玻扒再涂布几次。

三角铁扒

具体操作步骤：

⏹（1）加入适量自来水于灭菌锅中（至水位线）。

⏹（2）放入需要灭菌的东西。

注意：不要摆得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果。

⏹（3）加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气（对角线均匀拧旋）

⏹（4）打开放气阀，打开电源，自开始产生大气后5分钟（此时蒸汽锅内的冷空气

由排气阀排尽），关紧放气阀，让温度随蒸汽压力上升而上升，当达所需压力时（即温度上升到121℃），控制热源维持所需时间（20分钟），然后停止加热，让其自然冷却。

注意：应用此法灭菌是否彻底的一个重要关键是在压力上升之前，必须将锅内的冷空气完全排尽。

（5）待压力降至0磅时，打开排气阀，再打开锅盖，取出灭菌物。

注意：压力未降至0磅时，切勿打开锅盖，否则突然降压，招致培养基沸腾，沾湿棉塞，甚至冲出管外。