鉴别试验检查方法确认实验
(整理)第4章药物的鉴别试验
第4章药物的鉴别学习目标1.掌握鉴别试验的项目、原理，及物理常数的测定；2.熟悉药物鉴别的意义、一般鉴别试验的方法、试验的条件和结果判断；3.了解专属性鉴别试验的原理、鉴别试验的灵敏度和专属性对试验的意义。
药物的鉴别试验是根据药物的分子结构、理化性质，用规定的方法判断药物的真伪。
主要用以证实鉴别对象是否为标签所示的药物，不能鉴别未知药物。
第1节鉴别试验的项目对于鉴别项下规定的实验方法，仅适用于鉴别药物的真伪，对于原料药，还应结合性状项下的外观和物理常数等进行确认。
一、性状药物的性状主要反映药物特有的物理性质，如外观、臭、味、溶解度及其物理常数等。
1.外观是指药品的外表感观和色泽，包括药品的聚集状态、晶形、色泽、以及臭味等特征，在一定程度上可以反映药物的内在质量。
如链霉素片的性状描述为“本品为糖衣片或薄膜衣片，除去包衣后，显白色至微带黄绿色”。
2.溶解度溶解度是药物的一种物理性质，在一定程度上反映了药品的纯度。
《中国药典》采用“极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶”来描述药品在不同溶剂中的溶解性能。
3.物理常数物理常数是评价药品的主要指标之一，其测定结果不仅对药品具有鉴别意义，也反映了该药品的纯度。
《中国药典》收载的物理常数包括：相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘傎、吸收系数等。
二、一般鉴别试验一般鉴别试验是以药物的化学结构及其物理化学性质为依据，通过化学反应来鉴别药物的真伪。
一般鉴别试验只能证实某一类药物，而不能证实为哪一种药物，需进行专属鉴别试验，方可确认。
《中国药典》附录项下的一般鉴别试验包括的项目有：丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类、有机氟化物、无机金属盐类（钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、镁盐、钙盐、钡盐、铁盐、铝盐、锌盐、铜盐、银盐、汞盐、铋盐、锑盐、亚锡盐）、有机酸盐（水杨酸盐、枸橼酸盐、乳酸盐、苯甲酸盐、酒石酸盐）、无机酸盐（亚硫酸盐或亚硫酸氢盐、硫酸盐、硝酸盐、硼酸盐、碳酸盐与碳酸氢盐、醋酸盐、磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物）。
药物的鉴别试验方法及原理
第一章药物的鉴别试验第一节概述依据药典进行的药物分析主要有三大项：鉴别、检查和含量测定。
药物的鉴别试验（identification test）是用于鉴别药物的真伪，在药物分析中属首项工作，只有证实被分析的药物是真的，才有必要接着进行检查、含量测定。
药典所收载的药物项下的鉴别试验方法，仅适用于贮藏在有标签容器中的药物，用以证实是否为其所标示的药物。
它与分析化学中的定性鉴别有所区别。
这些试验方法不能赖以鉴别未知物。
原料药：鉴别试验结合性状项下的外观和物理常数进行确证。
一、鉴别的项目（一）性状药物的性状反映了药物特有的物理性质，一般包括外观、嗅、味、溶解度以及物理常数等。
（二）一般鉴别试验（general identification test）*以药物的化学结构及其物理化学性质为依据，通过化学反应来鉴别药物真伪的。
*无机药物：根据其组成的阴离子和阳离子的特殊反应，并以药典附录III项下的一般鉴别试验为依据，*有机药物：采用典型的官能团反应。
*一般鉴别试验的项目：丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类、有机氟化物类、无机金属盐类（钠盐、钾盐、锂盐、钙盐、钡盐、铵盐、镁盐、铁盐、铝盐、锌盐、铜盐、银盐、汞盐、铋盐、锑盐、亚锡盐）、有机酸盐（水杨酸盐、枸橼酸盐、乳酸盐、苯甲酸盐、酒石酸盐）、无机酸盐（亚硫酸盐或亚硫酸氢盐、硫酸盐、硝酸盐、硼酸盐、碳酸盐与碳酸氢盐、醋酸盐、磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物）。
*一般鉴别试验仅供确认单一的化学药物，如为数种化学药物的混合物或有干扰物质存在时，除另有规定外，应不适用。
*通过一般鉴别试验只能证实是某一类药物，而不能证实是哪一种药物。
例如，经一般鉴别反应的钠盐试验，证实某一药物为钠盐，但不能辨认是氯化钠、苯甲酸钠或者是其它某一种钠盐药物。
要想最后证实被鉴别的物质到底是哪一种药物，必须在一般鉴别试验的基础上，再进行专属鉴别试验，方可确认。
（三）专属鉴别试验（specific identification test）*根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性的不同，选用某些特有的灵敏定性反应，来鉴别药物真伪的。
鉴别试验的原理
鉴别试验的原理
鉴别试验是一种通过特定的实验方法来确定或区分某种现象、物质、材料等的方法。
它的原理主要包括以下几个方面：
1. 对照试验：鉴别试验通常会设置对照组或对照条件，用以进行比较和参照，以便发现差异和特征。
对照组可以是一种已知的物质或现象，用来对比和验证待鉴别物质或现象的特殊性。
2. 观察和测量：鉴别试验通常会通过观察特定现象、变化或测量特定物理、化学参数等方法，来获取相关数据和信息。
这些观察和测量的数据有助于进一步分析和辨别待鉴别物质或现象的特性和性质。
3. 实验设计：鉴别试验需要科学合理的实验设计，包括选择适当的实验条件、方法和工具，以确保有效和可重复的实验结果。
实验设计应考虑到实验目的、可行性、误差控制等因素。
4. 数据分析：通过对实验数据进行统计和分析，可以找出待鉴别物质或现象的特征和规律。
数据分析可以借助统计学方法、图表、模型等工具，以增加鉴别试验的准确性和可靠性。
5. 结果判断：根据实验结果，结合已有的理论知识和背景，对待鉴别物质或现象进行判断，确定其特性、性质、成分或身份。
结果判断应考虑到实验的可靠性和合理性，避免主观偏见和不确定性。
6. 结论推断：根据鉴别试验的结果和判断，可以进行推断和推
论，对待鉴别物质或现象做进一步的解释和归纳。
结论推断应建立在充分的实验证据和科学逻辑基础上。
鉴别试验的原理在不同领域和实验目的下可能有所不同，但以上原理是鉴别试验的一般规律和基础。
鉴别试验的可靠性和准确性取决于实验设计的合理性和实验操作的严谨性。
(完整版)检验方法验证和确认管理规程
页次：共11 页第1 页文件名称：检验方法验证和确认管理规程编码：03SMP01200起草审核批准颁发部门质量保证部日期日期日期实施日期分发部门及份数：质量管理部1份目的：明确检验方法的验证和确认的管理规程，确保所采用的检验方法科学、合理，符合检验要求并能有效控制药品的内在质量。
范围：仅适用于本公司对物料、产品的理化检验方法的验证和确认；清洁验证方法的验证。
职责：质量管理部QC、QA人员、质量管理部负责人对本规程的实施负责。
内容：1. 方法验证及确认工作职责分工1.1 质量控制部QC负责验证或确认方案的起草、验证或确认工作具体实施以及报告的填写。
1.2质量控制部负责人或其指定人员负责验证或确认方案、报告的审核，组织验证或确认工作的实施，对验证或确认工作中出现的问题及时纠正。
1.3 质量保证部QA负责验证或确认方案、报告的审核，监督确认工作实施，对确认工作中出现的问题提出改进意见并监督落实。
确保检验方法验证或确认程序达到符合性要求，程序被遵照执行，并且方法的预定用途被有效的且以文件记录的数据所支持。
1.4 质量管理部负责人负责验证或确认方案及报告的审核批准。
2 方法验证2.1定义：方法验证就是根据检验项目的要求，预先设置一定的验证内容和验证标准要求，并通过设计合理的实验来验证所采用的分析方法是否符合检验项目的要求。
2.2 目的：方法验证是证明采用的方法适合于相应检测要求。
2.3 适用范围：符合下列情形之一的，应当对检验方法进行验证：（1）采用新的检验方法；（2）检验方法需变更的；（3）采用《中华人民共和国药典》及其他法定标准未收载的检验方法；（4）法规规定的其他需要验证的检验方法。
文件名称：检验方法验证和确认管理规程编码：03SMP012002.3.1 在建立药品质量标准时，应对分析方法中的各检验项目进行完整的验证。
2.3.2 当药品生产工艺变更时，制剂的组分变更、原分析方法修订时，可根据变更的内容决定对分析方法进行部分验证还是完全验证。
鉴别试验检查方法确认实验
鉴别试验检查法适用性验证日期：鉴别试验检查法适用性验证方案目录1、主题内容 (4)2、适用范围 (4)3、职责 (4)4、引用文件 (4)5、概述 (4)6、验证目的 (5)7、实验要求 (5)8、验证项目 (5)9、偏差处理 (7)10、验证结果评定与结论 (7)1、主题内容本方案规定了我公司鉴别试验检查法确认实验方案的实验方法及标准。
制定本方案是为了明确鉴别试验检测的测定方法，确保检验结果的准确性。
2、适用范围本标准适用于本公司生产的人血白蛋白、静注人免疫球蛋白（pH4)、狂犬病人免疫球蛋白、破伤风人免疫球蛋白、乙型肝炎人免疫球蛋白、人免疫球蛋白、人纤维蛋白原、人凝血酶原复合物、的鉴别试验检定。
3、职责3.1 确认领导小组3.1.1 确认领导小组：协调和组织确认实验项目，管理确认实验小组。
3.1.2 质量管理部负责人：赵学梅，审核确认实验方案及报告。
3.1.3 确认总负责人：刘欣晏，审批确认实验方案及报告，同时方法确认实验合格，签署合格证。
3.2确认小组3.2.1确认小组组长：班凯，负责方法确认实验的组织和协调工作。
3.3 确认小组组员3. 3.1姜志文：起草确认方案，负责实验的实施，起草确认实验报告。
3. 3.2邓应群、龙红玉：协助起草方案。
4、引用文件4.1《中国药典》2010年版三部。
5、概述根据<<中国药典>>2010版三部的要求,用于我公司生产的人血白蛋白、静注人免疫球蛋白（pH4)、狂犬病人免疫球蛋白、破伤风人免疫球蛋白、乙型肝炎人免疫球蛋白、人免疫球蛋白、人纤维蛋白原、人凝血酶原复合物的鉴别试验检定。
6、验证目的通过实验确认该方法是否适用于对我公司生产的人血白蛋白、静注人免疫球蛋白（pH4)、狂犬病人免疫球蛋白、破伤风人免疫球蛋白、乙型肝炎人免疫球蛋白、人免疫球蛋白、人纤维蛋白原、人凝血酶原复合物、的鉴别试验检查的目的。
7、实验要求7.1 供试品的蛋白质浓度需用生理氯化钠溶液稀释至适当浓度。
检验方法验证与确认-
重复性（RSD ） 1% 1.5% 2% 3% 4% 6% 8% 15%
重现性（RSD ） 2% 3% 4% 6% 8% 11% 16% 32%
3、专属性
定义：指在其他成分（如杂质、降解 产物、辅料等）可能存在下，采用的 方法能正确测定出被测物的特性。
验证方法（鉴别反应）：
➢ 要求阴性样品均呈负反应。
验证方法（原料）： ➢ 测定已知含量的对照品或供试品； ➢ 测定结果与其他方法比较。
1、准确度
验证方法（制剂）： ➢ 直接回收法； ➢ 加样回收法； ➢ 测定结果与其他方法比较。
1、准确度
验证方法（杂质定量测定）： ➢ 直接回收法； ➢ 测定结果与其他方法比较。
表1 样品中待测定成分含量和回收率限度
3、专属性
验证方法（含量测定及有关物质）：
➢ 要求辅料不干扰，杂质分离度符合要求； ➢ 阴性对照：薄层色谱、高效液相色谱、气相
色谱； ➢ 影响因素试验：杂质检查考察分离度。
3、专属性
可接受标准（含量测定）：
➢ 空白对照应无干扰，主成分与各 有关物质应能完全分离，分离度 不得小于2.0，以二极管阵列检测 器进行纯度分析时，主峰的纯度 因子应大于980。
一、法规要求
分析方法验证或确认指导原则
机构或组织
文件名称
美国药典（USP）
<1225>Validation of compend procedures 方法验证
<1226>Verification of compendial procedures 方法确认
人用药品注册技术要求国际协 Q2（R1）Validation of Analytical
待测定成分含量 100% 10% 1% 0.1% 0.01% 10μg/g (ppm) 1 μg/g 10μg/kg (ppb)
分析方法验证及确认管理规程
文件制修订记录1.目的: 制定分析方法验证及确认的管理规程。
2. 范围: 适用于分析方法的验证及确认。
3. 责任: QC检测员，QC主管。
4. 内容：4.1 方法验证方法验证就是根据检验项目的要求，预先设置一定的验证内容和验证标准要求，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法是都符合检验项目的要求。
4.1.1 方法验证的一般原则通常情况下，分析方法需进行方法验证。
对于仅需按照实验室日常测试操作步骤即可测定的检验项目不需要进行验证，如外观、崩解时限、密度、重量、pH值、灰分、装量等。
方法学验证的内容应根据检验项目的要求，结合所采用分析方法的特点确定。
同一分析方法用于不同的检验项目会有不同的验证要求。
4.1.2 需要验证的检验项目检验项目是为控制药品质量，保证药品安全有效而设定的测试项目，根据检验项目的设定目的和验证内容的不同要求，需验证的检验项目分为四类：1. 鉴别试验；2. 杂质的限度检查；3. 杂质的定量测定；4. 含量测定，包含原料药或制剂中有效成分的含量，制剂中其他成分（如防腐剂等）的含量，溶出度与释放度等检查中的溶出量。
以及含量均匀度。
除此之外还有一些物理项目的检测如粒径分布、旋光度、熔点和硬度，其要求与其他检验项目有所不同，通常其分析方法验证应有不同的要求。
鉴别的目的在于判定被分析物是目标化合物，而非其他物质。
用于鉴别的分析方法要求具有较强的专属性和耐用性。
杂质检查主要用于控制主成分意外的杂质，如无机杂质、有机杂质等。
杂质检查分为限度检查和定量测定这两部分。
用于限度检查的分析方法验证侧重专属性、检测限和耐用性。
用于定量测定的分析方法验证强调专属性、准确度、精确度、线性、范围、定量限和耐用性。
含量测定对准确度要求较高，因此所采用的分析方法要求具有一定的专属性、准确度和线性要求。
《中国药典》2010年版中规定了不同的检验项目需要验证不同的内容，详见表一：表一验证项目和验证内容备注：1. *：已有重现性验证，不需验证中间精密度；2. **：如一种方法不够专属，可由其他分析方法予以补充；3. ***：视具体情况予以验证；4. “是”代表该项内容需要验证，“否”代表该项内容不需要验证。
药物分析02药物的鉴别试验
紫外光谱鉴别法
对比吸收光谱 特征参数
比较吸收度比 值一致性
对比吸收光谱 一致性
红外光谱鉴别法
对比供试品红外吸收光谱与药品 标准红外光谱的一致性，尤其是 指纹一致性。
Saturday, June 13, 2020
药物分析
19
鉴别试验条件
（一）溶液的浓度 （二）溶液的温度 （三）溶液的酸碱度 （四）试验时间 （五）干扰成分的存在
溶解度：一定程度上反映了药品的纯度。药品在不同溶剂
中的溶解性能用“极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、 极微溶解、几乎不溶或不溶”来描述。
物理常数：用于药品鉴别，反映其纯杂程度。药典收载的
物理常数包括：相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、 折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。
性 状--- 物理常数
专属鉴别试验
依 据： 药物分子中的特殊基团或官能团特殊
反应或典型的有机官能团反应。
如四氮唑法: C17位上有α-醇酮基的药 物,如皮质激素分析。
Saturday, June 13, 2020
药物分析
12
化学鉴别法
四 、 鉴
别
光谱鉴别法
方
法
色谱鉴别法
生物学法
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（二）提高反应灵敏度的方法
1. 加入与水互不相溶的有机溶剂提取浓集 在鉴别试验中，如生成物具有颜色并颜色很浅 时，可利用加入少量与水互不相溶的有机溶剂 ，浓集有色生成物，使其在有机溶剂中颜色变 深，易于观测。
2. 改进观测方法 如将目视观测溶液的颜色，改为可见分光光度 法；将观测生成沉淀改为比浊度法等。
这两种物理常数可用以区别药品、检查纯度 或测定制剂的含量。
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鉴别试验检查法适用性验证
日期：
鉴别试验检查法适用性验证方案
目录
1、主题内容 (4)
2、适用范围 (4)
3、职责 (4)
4、引用文件 (4)
5、概述 (4)
6、验证目的 (5)
7、实验要求 (5)
8、验证项目 (5)
9、偏差处理 (7)
10、验证结果评定与结论 (7)
1、主题内容
本方案规定了我公司鉴别试验检查法确认实验方案的实验方法及标准。
制定本方案是为了明确鉴别试验检测的测定方法，确保检验结果的准确性。
2、适用范围
本标准适用于本公司生产的人血白蛋白、静注人免疫球蛋白（pH4)、狂犬病人免疫球蛋白、破伤风人免疫球蛋白、乙型肝炎人免疫球蛋白、人免疫球蛋白、人纤维蛋白原、人凝血酶原复合物、的鉴别试验检定。
3、职责
3.1 确认领导小组
3.1.1 确认领导小组：协调和组织确认实验项目，管理确认实验小组。
3.1.2 质量管理部负责人：赵学梅，审核确认实验方案及报告。
3.1.3 确认总负责人：刘欣晏，审批确认实验方案及报告，同时方法确认实验合格，签署合格证。
3.2确认小组
3.2.1确认小组组长：班凯，负责方法确认实验的组织和协调工作。
3.3 确认小组组员
3. 3.1姜志文：起草确认方案，负责实验的实施，起草确认实验报告。
3. 3.2邓应群、龙红玉：协助起草方案。
4、引用文件
4.1《中国药典》2010年版三部。
5、概述
根据<<中国药典>>2010版三部的要求,用于我公司生产的人血白蛋白、
静注人免疫球蛋白（pH4)、狂犬病人免疫球蛋白、破伤风人免疫球蛋白、乙型肝炎人免疫球蛋白、人免疫球蛋白、人纤维蛋白原、人凝血酶原复合物的鉴别试验检定。
6、验证目的
通过实验确认该方法是否适用于对我公司生产的人血白蛋白、静注人免疫球蛋白（pH4)、狂犬病人免疫球蛋白、破伤风人免疫球蛋白、乙型肝炎人免疫球蛋白、人免疫球蛋白、人纤维蛋白原、人凝血酶原复合物、的鉴别试验检查的目的。
7、实验要求
7.1 供试品的蛋白质浓度需用生理氯化钠溶液稀释至适当浓度。
7.1.1 免疫双扩散蛋白质浓度为10%；免疫电泳蛋白质浓度为0.5%。
7.2 电泳时应有冷却系统，否则琼脂糖凝胶会出现干裂。
7.3 用生理氯化钠溶液浸泡应充分，以除去未结合蛋白质，否则背景不清晰。
8、验证项目
8.1 实验人员的确认。
8.1.1 合格标准：人员已经培训，并能独立操作。
8.1.2 确认方法：查看是否有培训记录。
8.1.3 结果：见（附表1）
8.2 SOP的确认。
8.2.1 合格标准：与该验证有关的SOP都已经批准。
8.2.2 确认方法：记录与该验证有关的SOP的名称和文件编号。
8.2.3 结果：见（附表2）
8.3 实验依据的确认。
8.3.1 合格标准：《中国药典》2010年版三部附录。
8.3.2确认方法：查看《中国药典》2010年版三部附录是否有鉴别试验检查方法。
8.3.3结果：见（附表3）
8.4 实验仪器的确认。
8.4.1 合格标准：实验仪器在检定有效期内。
8.4.2 确认方法：记录仪器名称和文件编号，查看上述实验仪器使用时间是否在再验证时间之前。
8.4.3 结果：见（附表4）
8.5 实验试剂的确认。
8.5.1合格标准：实验试剂在有效期内。
8.5.2确认方法：记录实验所用试剂名称，查看是否在有效期内。
8.5.3结果：见（附表5）
8.6 实验样品确认。
8.6.1合格标准：实验样品为我公司生产制品。
8.6.2确认方法：查看制品名称、批号。
8.6.3结果：见（附表6）
8.7实验方法的确认。
8.7.1合格标准：通过三次实验，免疫双扩散各阳性对照出现相应的沉淀线，供试品与人血清（血浆）抗体之间出现相应沉淀线。
免疫电泳应产生相应的沉淀线。
8.7.2确认方法：查看实验记录。
8.7.3结果：见（附表9）及实验记录。
9、偏差处理
在验证方案实施过程中如有与验证方案不一致的地方将被视为偏差。
9.1验证方案实施人员应对所发生的偏差进行描述并记录；
9.2 验证小组应评估偏差对验证方案的实施和该系统质量的影响，提出偏差纠正措施并经QA审核批准后实施；
9.3 以上偏差纠正措施的实施均应填写偏差纠正措施实施记录；
9.4 验证小组应对偏差纠正措施实施后的效果进行评价。
10、验证结果评定与结论
10.1 验证小组负责对验证结果进行综合评审，做出验证结论，发放验证证书。
对验证结果的评审应包括：
10.1.1 验证实验是否有遗漏？
10.1.2验证实施过程中对验证方案有无修改？修改原因、依据以及是否经过批准？
10.1.3验证记录是否完整？
10.1.4验证试验结果是否符合标准要求？是否需要进一步补充试验？
附表1
人员确认记录表
备注：
偏差处理：
结论：
确认人：复核人：确认日期：复核日期：
附表2
SOP确认记录表
备注：
偏差处理：
结论：
确认人：复核人：确认日期：复核日期：
附录3
实验依据确认表
备注：
偏差处理：
结论：
确认人：复核人：确认日期：复核日期：
附录4
实验仪器确认表
备注：
偏差处理：
结论：
确认人：复核人：确认日期：复核日期：
附表5
实验试剂确认表
备注：
偏差处理：
结论：
确认人：复核人：确认日期：复核日期：
附表6
实验样品确认表
备注：
偏差处理：
结论：
确认人：复核人：确认日期：复核日期：
附表7
实验方法确认表
备注：
偏差处理：
结论：
确认人：复核人：确认日期：复核日期：。