内皮祖细胞鉴定方法
大鼠骨髓内皮祖细胞SPIO标记及检测
大鼠骨髓内皮祖细胞SPIO标记及检测作者：崔碧李健丁张瑞平来源：《中国医药导报》2011年第09期[摘要] 目的：研究大鼠骨髓内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCS）的分离、培养、SPIO标记，SPIO对EPCS的标记效果及其对细胞存活、增殖以及凋亡的影响，为进一步的实验研究奠定基础。
方法：SD大鼠体重120～150 g，采用梯度密度离心法和贴壁法获取大鼠EPCS，采用25 μg/ml SPIO对其标记，比较标记和未标记的EPCS。
普鲁士蓝染色观察铁标记率，台盼蓝检测细胞活力，MTT法检测细胞增殖力，Calcein-AM/PI染色检测细胞活性及细胞膜完整性，AO/PI染色检测细胞凋亡率。
结果：分离培养EPCS 7～10 d，细胞集落相互连接，呈典型的铺路石样外观。
普鲁士兰染色显示SPIO（25 μg/ml，24 h）对细胞的标记率接近94%；比较SPIO标记及未标记的EPCS，细胞活力分别为（94.34±0.25）%和（95.33±0.31）%；MTT法检测两组间相比差异无统计意学义（P＞0.05）；Calcein-AM/PI染色检测细胞的活性和膜完整性，存活率分别为96%和97%；AO/PI染色两组细胞的凋亡率均为5%。
结论：采用梯度离心法从骨髓中分离单个核细胞，经诱导培养可实现内皮祖细胞的分离培养。
25 μg/ml浓度的SPIO细胞标记率高，对细胞毒性小，且不影响EPCS的活力、增殖及凋亡。
[关键词] 内皮祖细胞；骨髓；超顺磁性氧化铁颗粒；标记[中图分类号] R73-351[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2011）03（c）-033-04Rat bone endothelial progenitor cells labeled with superparamagnetic iron oxide particles and the detectionCUI Bi, LI Jianding, ZHANG RuipingDepartment of Radiology, the First Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China[Abstract] Objective: To study the isolation, culture, SPIO mark of the rat bone marrow progenitor cells (endothelial progenitor cells, EPCS), and observe whether there is any effect on cellular viability, proliferation and apoptosis. which lay the foundation for future experimental studies. Methods: The EPCS were collected from bone marrow of rats (weighing120-150 g) and cultured. EPCS were obtained by density gradient centrifugation and adhesive-screening methods and labeled with 25 μg/ml SPIO. Marked and unlabeled groups were compared. Prussian blue staining was used to identify labeling index, Trypan blue staining was employed to detect cell vitality, MTT assay was utilized to detect proliferation activity of stem cells, Calcein-AM/PI staining cell was detected cellactivity and membrane integrity, AO/PI staining was detected cell apoptosis. Results: Cell Colonies were connected, showing the typical cobblestone appearance on the 7-10 d. Prussian blue staining showed that SPIO(25 μg/ml, 24 h) of cells label ed rate of close to 94%; compared SPIO labeled and unlabeled EPCS, cell viability was 94.34%±0.25% and 95.33%±0.31%; MTT assay detected that there was no statistical difference between the groups compared with Italy in righteousness(P＞0.05); Calcein-AM/PI staining cell activity and membrane integrity, survival rates were 96% and 97%;AO/PI staining cells withered groups death rate was 5%. Conclusion: Gradient centrifugation from bone marrow mononuclear cells can be achieved by induction of endothelial progenitor cells , isolated and cultured; 25 μg/ml high concentrations of SPIO cell labeling dose not affect the EPCS viability, proliferation and apoptosis.[Key words] Endothelial progenitor cell; Bonem arrow; Superparamagnetic iron oxid; Labeling[作者简介] 崔碧（1984-），女，山西医科大学2008级在读硕士；研究方向：腹部影像。
CD31免疫磁珠分选人脂肪内皮祖细胞的培养及鉴定
CD31免疫磁珠分选人脂肪内皮祖细胞的培养及鉴定汤文燕;杨印祥;汪兆艳;栾佐【摘要】BACKGROUND:Endothelial progenitor cells are precursor cells of mature endothelial cells,which can migrate to ischemic tissues and differentiate into mature endothelial cells,and then play an important role in vascular remodeling.Endothelial progenitor cells have wide application prospects in various ischemic diseases,but the biological characteristics and identification methods are still controversial.OBJECTIVE:To investigate the methods of isolation and culture of endothelial progenitor cells from the human adipose tissue and to identify their biological features,in order to provide a sufficient source of cells for ischemicdiseases.METHODS:Stromal vascular fraction cells were isolated from the human adipose tissue by enzymatic digestion,CD31+ cells were selected using immunomagnetic beads,and then cultured in endothelial basal medium-2 supplemented with the EGM-2-MV-SingleQuots.Endothelial progenitor cells were identified through detection of morphology,cell markers and cell functions.RESULTS AND CONCLUSION:(1) CD31 + cells were selected by immunomagnetic beads and then cultured and amplified in vitro,which displayed typical cobblestone-like morphology,and they maintain their proliferative ability.(2) Flow cytometry results showed that the CD31+ cells expressed CD31 (98.84％),CD34 (97.21％),VEGRR2 (64.07％),CD146 (98.42％) and CD133 (2.55％),but hardly expressed CD45 (1.1％),a hematopoietic stem cell marker.(3) The CD31 + cells were alsofound to incept Dil-ac-LDL and exhibit lectin bindingcapability.Furthermore,a lumen-like structure was formed in Matrigel,which has the ability of angiogenesis in vitro.To conclude,these results suggest that it is feasible to isolate and culture endothelial progenitor cells fromthe human adipose tissue by enzymatic digestion combined with immunomagnetic bead sorting.%背景:内皮祖细胞是成熟内皮细胞的前体细胞,可迁移到缺血组织,分化为成熟内皮细胞,发挥血管新生作用.在各种缺血性疾病具有广阔的应用前景,但其生物学特性及鉴定方法仍存在争议.目的:探讨从人脂肪组织中分离培养内皮祖细胞的方法,并进行鉴定,为移植治疗缺血性疾病提供足量的细胞来源.方法:采用酶消化法从人脂肪组织中分离培养出脂肪基质血管细胞(stromal vascular cells,SVF),再通过免疫磁珠分选出CD31+细胞,体外扩增培养得到内皮祖细胞,并通过细胞形态、细胞生长增殖能力,细胞表型及细胞的功能多方面来完成鉴定.结果与结论:①免疫磁珠分选后的CD31+细胞,体外扩增培养呈典型的铺路石样形态,且其保持一定的生长增殖潜能;②第5代CD31+细胞流式分析结果显示:CD31、CD34、VEGRR2、CD146和CD133表达量分别为98.84％、97.21％、64.07％、98.42％和2.55％,但几乎不表达造血干细胞表面标志CD45(1.1％);③免疫荧光染色结果表明:CD31+细胞可摄取乙酰化低密度脂蛋白(Dil-ac-LDL)并可结合荆豆凝集素(FITC-UEA-Ⅰ).并且,CD31+细胞在Matrigel基质胶中可形成管腔样结构,具有体外成血管能力;④结果提示,通过酶消化法结合免疫磁珠分选法从人脂肪组织中分离培养内皮祖细胞是可行的.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2017(021)029【总页数】6页(P4722-4727)【关键词】干细胞;培养;脂肪组织;免疫磁珠分选法;脂肪基质盘管细胞(SVF);体外成血管能力【作者】汤文燕;杨印祥;汪兆艳;栾佐【作者单位】解放军海军总医院,北京市100048;南方医科大学第三临床医学院,广东省广州市510515;解放军海军总医院,北京市100048;解放军海军总医院,北京市100048;解放军海军总医院,北京市100048;南方医科大学第三临床医学院,广东省广州市510515【正文语种】中文【中图分类】R394.20 引言 lntroduction1997年，日本学者Asahara等[1]首次应用免疫磁珠分选法从人外周血中分离出CD34+的内皮祖细胞，并证实了内皮祖细胞可迁移到缺血组织，并能分化成为成熟的内皮细胞，发挥血管新生作用。
人循环血管内皮祖细胞的分离培养和诱导分化
（ 江苏省 苏北人 民医院 心 内科 ， 江苏扬州 ，２ ０ １ ２ ５０ ）
摘 要 ：目的 研究外周血来 源的血管 内皮祖细胞 （ Ｐ ｓ的分离 、 Ｅ Ｃ） 培养、 分化及鉴定方法 ， 探索 Ｅ Ｃ 体 外扩增所需 的条 Ｐｓ 件 。方法 采集健康成人外周血 ， Ｆ ｏ 密度梯度离心法获取单个核细胞（ Ｃ ， 经 ｉｌ ｃｌ ＭＮ ） 接种在纤 维连接蛋 白包被 的培养板上 。 在 加有 Ｅ Ｍ－ ＭＶ Ｓ ｇ Ｑ ｏｓ Ｇ ２ －ｉ ｌ ｕｔ 的培养 液中培养和扩增。于培养第 ７天选择免疫荧 光（ ｉ ｃ Ｌ ＦＴ ＿ Ｅ 一） 一 ｎｅ Ｄ ｌ ｕ） ／ １ ｃＩ Ａ １ 鉴定培养所得 的 — ａ Ｊ 细胞是否具有 Ｅ Ｃ 的特征。结果 Ｐｓ 培养 ， 完全可 以分化成 Ｅ Ｃ 。 Ｐｓ
Ａ ｔ Ｃ ｏｂｅｔ ｅ Ｔ ｖｓｉ ｔ ｔｅｓｌ ｉ ， ｕｔｒ ， ｉｅｅ ｔ ｔ ｎａ ｄｉ ｎｉｃｔ ｎ Ｂ Ａ Ｔ： ｊｃ ｖ ｏｉ ｅｔ ａｅ ｈ ｏａ ｏ ｃ ｌ ｅ ｄｆ ｒｎｉ ｉ ｎ ｅ ｔ ｉ ｉ ｉ ｎ ｇ ｉ ｔｎ ｕ ｆ ａｏ ｒｃｌ （ Ｐ ｓ ｒｍ ｕ ｎ ｐ ｒ ｈ ｒｌ ｌ ｄ ｉ ｖｔ ．Ｍｅ ｏ ｓ ＭＮ ｓ ｆ ｄ ｔｅａ ｐｏ ｅ ｉ ｅｌ Ｅ Ｃ ）ｆ ｅ ｉ ｏ ｓ ｏ ｈ ｍａ ｅｉ ｅａ ｂｏ ｎ ｉ ｏ ｐ ｏ ｒ ｔ ｄ ｈ Ｃ ｍｏ ｏ ｕｌ ｒｃｌ ）ｗ ｒ ｌ ｅ ｏ ｔｅｈ ｍａ ｅｉｈ ｒｌ ｎ ｉ ａ ｕａ ｔ ｌ ｄ ｓｍｐｅｂ ｉ ｌ ｎ ｎ ｃ ａ ｅ ｓ ｅｅｉ ａ ｄｆ ｍ ｕ ｎ ｐｒ ｅａ ａ ｔ ｏ ｇ ｌ ｏ ａ ｌ ｙＦｃ 卜 ｅ ｌ ｏ ｓ ｔ ｒ ｈ ｐ ｃ ｎ ｂｏ ０
维普资讯
大鼠肺微血管内皮细胞培养及鉴定
大鼠肺微血管内皮细胞培养及鉴定*谢 崧 杨晓静 钱桂生 王关嵩(第三军医大学新桥医院, 重庆 630037)摘要 取大鼠周边肺组织进行肺微血管内皮细胞培养。
将肺组织切成小块,用含有20%新生牛血清、肝素90L g/ ml、L-谷胺酰胺4mmol、青霉素100U/ml和链霉素100L g/m l的R PM I-1640培养基培养。
血细胞立即从肺组织周围游出。
继而是肺微血管内皮细胞。
成纤维细胞及其他细胞72h才游出。
培养60h后取出肺组织块,培养瓶中只有微血管内皮细胞和血细胞。
后者可通过传代除去。
获得的肺微血管内皮细胞具有规律的鹅卵石样形态和对异植物血凝素结合试验及八因子相关抗原免疫荧光染色均阳性。
关键词 大鼠 肺循环 微循环 内皮细胞 细胞培养 肺微血管在生理和病理情况下都起着重要作用,如与成人呼吸窘迫综合征、肺动脉高压[1]等的发生有关。
目前仅限于肺动脉内皮细胞的研究,而肺微血管和大血管之间据文献报道在表型和功能有着显著的不同[2]。
故有培养和研究肺微血管内皮细胞的必要。
虽然肺有大量的血管内皮细胞,但同时存在40多种类型的细胞尤其成纤维细胞和平滑肌等细胞的迅速生长,使内皮细胞生长受抑制。
分离和培养纯的肺微血管内皮细胞较为困难。
国内未见肺微血管内皮细胞培养的报道。
本文采用简单的方法成功地分离和培养出大鼠肺微血管内皮细胞。
1 材料和方法1.1 主要试剂 RPM I-1640培养基为美国Gibco 公司产品。
新生牛血清由华西医科大学公共卫生学院生产。
兔抗人八因子相关抗原抗血清为DAKO公司产品,华美分装。
荧光标记异植物血凝素为Sigm a 公司产品。
荧光标记羊抗兔1gG由卫生部上海生物制品研究所生产。
抗菌素为青霉素钠盐和硫酸链霉素。
L-谷氨酰胺为第二军医大学分装。
胰蛋白酶和肝素钠均为上海生化试剂商店提供。
大鼠肺动脉内皮细胞按本研究所建立的方法[3]培养。
1.2 取材 选重200-300g健康雄性Wistar大鼠,10%乌拉坦(10L l/mg)腹腔麻醉。
人脐血来源CD34~+内皮祖细胞的分离、培养、鉴定及集落形成特性
Ｃ Ｄ１ ４在两者 的表达存 在差异 ， Ｃ Ｆ Ｕ ． Ｅ Ｃ ｓ 表面强表达 ， Ｅ Ｃ Ｆ Ｃ ｓ 表面几乎检测不到 。另外两者在集落形态 、 细胞 增殖 能力 、 Ｄ ｉ ｌ ． Ａ ｃ ．
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大鼠骨髓内皮祖细胞SPIO标记及检测
大鼠骨髓内皮祖细胞SPIO标记及检测崔碧;李健丁;张瑞平【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2011(8)9【摘要】目的:研究大鼠骨髓内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCS)的分离、培养、SPIO标记,SPIO对EPCS的标记效果及其对细胞存活、增殖以及凋亡的影响,为进一步的实验研究奠定基础.方法:SD大鼠体重120～150 g,采用梯度密度离心法和贴壁法获取大鼠EPCS,采用25μg/ml SPIO对其标记,比较标记和未标记的EPCS.普鲁士蓝染色观察铁标记率,台盼蓝检测细胞活力,MTT法检测细胞增殖力,Calcein-AM/PI染色检测细胞活性及细胞膜完整性,AO/PI染色检测细胞凋亡率.结果:分离培养EPCS 7～10 d,细胞集落相互连接,呈典型的铺路石样外观.普鲁士兰染色显示SPIO(25 μg/ml,24 h)对细胞的标记率接近94%;比较SPIO标记及未标记的EPCS,细胞活力分别为(94.34±0.25)%和(95.33±0.31)%;MTT法检测两组间相比差异无统计意学义(P>0.05);Calcein-AM/PI染色检测细胞的活性和膜完整性,存活率分别为96%和97%;AO/PI染色两组细胞的凋亡率均为5%.结论:采用梯度离心法从骨髓中分离单个核细胞,经诱导培养可实现内皮祖细胞的分离培养.25 μg/ml浓度的SPIO细胞标记率高,对细胞毒性小,且不影响EPCS的活力、增殖及凋亡.%Objective: To study the isolation, culture, SPIO mark of the rat bone marrow progenitor cells (endothelial progenitor cells, EPCS), and observe whether there is any effect on cellular viability, proliferation and apoptosis. which lay the foundation for future experimental studies. Methods: The EPCS were collected from hone marrow of rats (weighing120-150 g) andcultured. EPCS were obtained by density gradient centrifugation and adhesive-screening methods and labeled with 25 μg/ml SPIO. Marked and unlabeled groups were compared. Prussian blue staining was used to identify labeling index, Trypan blue staining was employed to detect cell vitality, MTT assay was utilized to detect proliferation activity of stem cells, Calcein-AM/PI staining cell was detected cell activity and membrane integrity, AO/PI staining was detected cell apoptosis. Results: Cell Colonies were connected, showing the typical cobblestone appearance on the 7-10 d.Prussian blue staining showed that SPIO(25 μg/ml, 24 h) of cells labeled rate of close to 94％; compared SPIO labeled and unlabeled EPCS. cell viability was 94.34％±0.25％ and 95.33％±0.31％; MTT assay detected that there was no statistical difference between the groups compared with Italy in righteousness (P＞0.05); Calcein-AM/PI staining cell activity and membrane integrity, survival rates were 96％ and 97％; AO/PI staining cells withered groups death rate was 5％. Conclusion:Cradient centrifugation from bone marrow mononuclear cells can be achieved by induction of endothelial progenitor cells ,isolated and cultured; 25 μg/ml high concentrations of SPIO cell labeling dose not affect the EPCS viability, proliferation and apoptosis.【总页数】4页(P33-35,63)【作者】崔碧;李健丁;张瑞平【作者单位】山西医科大学第一医院影像科,山西太原,030001;山西医科大学第一医院影像科,山西太原,030001;山西医科大学第一医院影像科,山西太原,030001【正文语种】中文【中图分类】R73-351【相关文献】1.大鼠脑创伤SPIO标记骨髓间充质干细胞磁共振成像活体示踪研究 [J], 彭德新;陈自谦;倪萍;白伟2.3.0T MR多序列示踪SPIO标记骨髓间充质干细胞在SCI大鼠模型中的对比研究[J], 陈乐;张德清;王俭;姜春晖;依巴努·阿不都热合曼;马艳;江明3.Molday IONTM EverGreen标记大鼠骨髓内皮祖细胞及体外磁共振成像研究[J], 杨荣;尧林鹏;张思影;陈峰4.SPIO标记下大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性及多向分化潜能及体外MR成像[J], 许杰华;李丹;于春鹏;周斌;颜荣华;王劲;朱康顺;单鸿5.SPIO标记大鼠骨髓基质干细胞及体外磁共振成像研究 [J], 杨华;张小明;邵阳;蒋红;翟昭华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
血管内皮细胞检验技术
血管内皮细胞检验技术一、血管性血友病因子抗原测定血管性血友病因子抗原（von willebrand factor antigen，vWF：Ag）测定主要用于血管性血友病的诊断与分型。
（一）检验原理免疫火箭电泳法。
在含vWF：Ag的琼脂板中加入定量的受检血浆（抗原）后，在电场作用下，定量的抗原在含抗体的琼脂板上泳动。
在一定的时间内出现抗原抗体反应形成的火箭样沉淀线，沉淀线的高度与抗原的浓度成正比，根据沉淀线的高度计算出血浆vWF：Ag的含量。
（二）检验方法学1.试剂与器材（1）Tris巴比妥缓冲液（pH 8.8）。
（2）琼脂糖凝胶的制备：取琼脂0.9g，加Tris巴比妥缓冲液100ml，加热至沸点，待琼脂完全溶解置50～56℃水浴。
（3）琼脂板的制备：取人血浆vWF：Ag抗血清16.5μl于50ml 烧杯中，置50～56℃水浴。
取50～56℃水浴中的琼脂糖凝胶10ml加入烧杯中（稀释600倍），充分混合后迅速倒入8cm×8cm内径的玻璃槽内。
当凝胶凝固后，除去一块玻片，打孔共10～12个，孔径为2.5mm，间距约为5mm。
（4）标准标本制备：用Tirs巴比妥缓冲液稀释正常混合血浆，比例为原倍∶1∶2、1∶4、1∶8、1∶16，于1、2、3、4、5孔中各加样10μl。
（5）待检标本的制备：将患者全血用0.109mol/L枸橼酸钠作9∶1抗凝，1500r/min离心10分钟，分离血浆，然后用Tris巴比妥缓冲液将标本作1∶2稀释。
按编号，依次加入相应的测定孔中。
2.操作方法（1）每侧电泳槽内加Tris巴比妥缓冲液1000ml。
在加抗原之前，先将打好小孔的琼脂板置于电泳槽内，孔朝阴极，火箭方向为阳极。
用8cm宽的双层滤纸作桥，接通电源，用50V左右的电压。
然后顺序加入标准标本和受检标本。
关闭电泳槽盖，调节电压至110～115V，电流为10～14mA，电泳18小时。
电泳槽温度以小于15℃为宜。
（2）电泳完毕后，取出凝胶板置生理盐水中，然后再浸入1%磷钼酸溶液中（1g磷钼酸加蒸馏水100ml，过滤后使用）20～60分钟，可见火箭样沉淀线，也可用氨基黑染色保存。
实验室抗内皮细胞抗体检测方法
实验室抗内皮细胞抗体检测方法大家好，今天我们来聊一聊一个稍微有点复杂，但又特别重要的话题——实验室抗内皮细胞抗体检测方法。
别被名字吓到，听起来好像很高大上，其实就是通过一些实验手段，看看你身体里面有没有一些小小的“坏分子”，这些分子可以攻击你的血管内皮细胞，搞得你身体内部一团乱。
听到这里，大家可能会问，这到底是什么情况？别急，慢慢跟着我一块儿了解一下。
首先呢，我们得先搞清楚什么是内皮细胞。
简单来说，内皮细胞就像是血管内壁的小小“清道夫”，它们不仅帮助维持血管的结构，还管着血管的通畅，控制着血液流动。
所以，血管内皮细胞一旦出了问题，后果可就不太妙了，可能会导致一系列的心血管疾病。
最常见的，比如说高血压、动脉硬化之类的麻烦。
而那些抗内皮细胞的抗体，就像是你身体里面多出来的“小坏蛋”，它们会误打误撞地把这些内皮细胞当成敌人攻击，结果一来二去，血管就会出问题，健康自然也就受到了威胁。
说到这里，大家可能就要问了：“那我们怎么知道自己体内有没有这些抗体呢？”嗯，别担心，实验室里有办法检测的！这个检测方法并不复杂。
通过抽血，拿到血液样本之后，实验室的工作人员就可以进行一系列的操作，看看你体内是否含有抗内皮细胞抗体。
这种抗体的存在呢，通常和一些自体免疫病有关，比如系统性红斑狼疮（SLE）啊、类风湿关节炎啊，甚至一些心血管疾病。
所以，做这个检测，往往是为了排查或确诊这些潜在的健康问题。
接下来的问题就是，检测的方法到底是怎么做的呢？这里面有几种常见的检测手段。
大家先别着急，咱们一个个来说。
第一种方法叫“间接免疫荧光法”。
这个名字听起来有点吓人，但其实不难理解。
简单来说，实验室的工作人员会拿一片带有内皮细胞的玻片，然后加上你的血清，看一下有没有抗体与这些细胞结合。
如果抗体和细胞结合了，就说明你体内有抗内皮细胞抗体，而这个反应还会在显微镜下呈现出荧光，像极了你在看夜空中的星星一样明亮。
就是这么神奇。
另外一种方法呢，就是“酶联免疫吸附法”（ELISA），它的名字可能更复杂，但操作起来其实就像是做一道简单的实验题。
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大鼠骨髓EPC的鉴定：①EPC培养约2周后达到80% ～90%融合，以0.25 %胰酶+0.01%EDTA消化，传代至24孔板中，待细胞贴壁完全后用Dil-ac-LDL和FITC-UEA-1双荧光染色鉴定。
细胞在含Dil-ac-LDL(10μg/mL)的培养液中避光孵育10 h，然后以2% 的中性甲醛固定10min，PBS液漂洗后再加FITC-UEA-1(10μg/mL)避光孵育1 h。
PBS液漂洗后在荧光显微镜下观察，显示红色荧光的为ac-LDL阳性细胞，显示绿色荧光的为UEA-1阳性细胞，显示双荧光阳性(黄色)的细胞被认为是EPC，随机计数10个非重叠视野，计算双阳性细胞比例。
同时以大鼠主动脉内皮细胞为阳性对照，大鼠主动脉平滑肌细胞为阴性对照。
2、流式细胞仪检测细胞表型。
取培养14天的EPC细胞1×10的6次方进行流式细胞仪检测，分别检测CD34+、CD133+、vWF+、Flk-1+细胞所占的比例。
需要一定数量培养EPC过程中EPC的显微镜下照片。