大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养及鉴定
糖尿病大鼠骨髓内皮祖细胞的培养与鉴定

长 。培 养 第 7天细 胞 C 3 D 4和 C 13均呈 阳性 , 光共 聚焦 显 微 镜 观 察 显 示 E C可 以 同 时 吞 噬 a —L L并 结 合 U A一1 D3 激 P c D E 。 论 糖 尿 病 大 鼠 骨髓 可 以分 离 培 养 出 内皮 祖 细 胞 , 能 体 外 扩 增 , 糖 尿 病 内皮 祖 细 胞 的 移植 研 究 奠 定 了基 础 。 并 为
关键词 糖尿病 骨髓 内皮 祖 细 胞
C l r a dIe t ct no n o ea P oe i r es rm B n ro f i e c a H a g Q rn ,Y hX n jn Lu y 昭 , u ue n n f a o f d t l l r gn o l o o e t d i i i E h i t C lf Ma rw o a t t D b iR . u n i g a i u , i 0 o g
da e i a . M eho M o on ce rc l r a v se r m o e ma w fda tc r tb e i r de enrf g to n r n ib tc r t t ds n u la el we e h r e t d fo b n  ̄o o ibei a y d nst g a intc tiu ain a d we ei — s y d c d i 1 dum o ti ig VEGF a d b u e n M 99 me i c na nn n FGF. Th pe ii oen e p e so fe doh la og ni rc lsfrCD3 n e s c f prt i x r s in o n te ilpr e t el o c o 4 a d CD1 3 3 wee o s r e mmu hso h mity a d i mu o lo e e n e h oo ia u c in fe oheilprg n trc l r x mi d b r b ev d byi no itc e sr n m n fu r s e c .T e bilgc lf n to so nd t l o e io el wee e a ne y a s
新生大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞的培养分离及鉴定

新生大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞的培养分离及鉴定【摘要】[目的]探讨新生(spraguedaley,SD)大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞在体外条件下的生长情况及培养分离,以获得纯化的少突胶质前体细胞,为今后细胞移植治疗研究提供良好的种子细胞。
[方法]出生48hSD大鼠取大脑皮层进行混合胶质细胞的体外培养,原代培养第9~10d时采用水平振荡、差速贴壁的方法分离、纯化少突胶质前体细胞,继续用定向培养基传代培养。
相差显微镜观察少突胶质前体细胞在体外条件下的生长情况,免疫细胞化学技术进行细胞鉴定。
[结果]混合胶质细胞原代培养第9~10d时出现明显的细胞分层,少突胶质前体细胞散布于单层的星形胶质细胞表面,胞体呈椭圆形或圆形,具有典型的双极突起,少数呈三极突起。
经振荡分离后少突胶质前体细胞纯度达95%,少突胶质细胞特异性标记lig2反应阳性,胶质纤维酸性蛋白抗体反应阴性。
[结论]新生SD大鼠大脑皮层原代培养中少突胶质前体细胞能够维持在未成熟阶段,细胞分层后通过振荡法及差速贴壁法可以获得较高纯度的少突胶质前体细胞。
【关键词】少突胶质前体细胞;细胞培养;脱髓鞘化;脊髓损伤Keyrds:ligdendrytepreursrell;ellulture;deyelinatin;spinalrdinjury脊髓损伤是一种常见的中枢神经系统损伤,可以造成患者严重的神经功能损害。
目前,临床上尚无有效办法治疗脊髓损伤。
随着研究深入,人们对于脊髓损伤的病理过程有了更进一步的认识。
脊髓损伤不仅导致神经元丢失,同时还造成大量少突胶质细胞的死亡,从而引起残留神经轴突的脱髓鞘改变,进一步影响了脊髓神经功能的恢复。
近来不少研究显示通过髓鞘形成细胞移植治疗脊髓损伤,有利于脱髓鞘轴突的再髓鞘化,促进损伤脊髓的神经功能恢复[1,2]。
研究表明,少突胶质细胞不仅形成髓鞘包绕轴突,同时它还起着为其他神经细胞提供营养因子、促进轴突生长等作用[3]。
此外,少突胶质前体细胞是处于分化早期阶段的未成熟细胞,既能够定向分化为成熟少突胶质细胞,同时又具有一定的增殖与迁移能力[4],更加适合于细胞移植治疗。
新生大鼠心脏微血管内皮细胞原代培养

_ l J ] . L a n c e t , 1 9 9 5 , 3 4 6 ( 8 9 6 8 ) : 1 9 3 1 9 4 . E 5 ] B r i l i a C G, Ma t s u b a r a L S , We b e r KT, e t“ f .An t i —a l d o s t e r 0 n e
5 6 3—5 7 5 .
然发 生 , 即使 在 使 用 最 大 剂 量 的 A C E I和 联 合 A C E I与
ARBFቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 。。 ・
L 6 J u n K. T o mo mi M, Hi t o mi S , e t a 1 . C a r d i a c a l d o s t e r o n e s y n t h e s i s
a l i n f a r c t i o n [ J ] . Ci r c u l a t i o n , 2 0 0 5 , 1 1 1 : 2 1 5 7 —2 1 6 4 .
L 7 J S t a e s s e n J , I i j n e n P , F a g a r d R, e t a 1 . Ri s e i n p l a s ma c o n c e n t r a t i o n
o f a l d o s t e r o n e d u r i n g l o n g—t e r m a n g i o t e n s i n 1 1 s u p p r e s s i o n [ J ] . J
En d o c r i no l , 1 9 8 1, 9 1 ( 3 ) : 45 7—4 6 5 .
i n a n g i o t e n s i n 1 I t y p e 1 A r e c e pt o r—kn o c k o u t mi c e a f t e r my o c a r d i —
成年大鼠心肌微血管内皮细胞的分离与培养

成年大鼠心肌微血管内皮细胞的分离与培养陈小燕;樊梦雅;李慧;蒋易楠;靖静;张海龙【摘要】目的本文建立一种简便、高效的成年大鼠心肌微血管内皮细胞分离及培养的方法.方法选取7~8周龄Wistar大鼠,麻醉后开胸取出心脏,采用离体心脏灌流和酶消化法进行心肌微血管内皮细胞的分离;取第3代细胞观察其增殖特征并绘制增殖曲线;用免疫细胞化学和免疫荧光对细胞的第Ⅷ因子相关抗原和CD31进行鉴定,利用基质胶检验其血管形成能力.结果体外培养心肌微血管内皮细胞呈多边形或梭形,具有典型的铺路石样生长特点;同时,第Ⅷ因子相关抗原和CD31呈阳性;具备血管形成能力.结论本方法培养的成年大鼠心肌微血管内皮细胞具有较高的纯度,方法简便易行,可用于心血管疾病基础及临床研究.%Objective To establish a simple and efficient method for isolation and culture of adult rat cardiac micro-vascular endothelial cells. Methods Wistar rats were anesthetized and thoracotomy was performed. Cardiac micro-vascular endothelial cells were isolated by heart perfusion and enzyme digestion. The morphology and growth curve of the third generation cells were examined by inverted microsc opy. Its molecular markers factor Ⅷ-related antigen and CD31 were detected by immunocytochemistry and immunofluoresence. The angiogenic ability was examined by matrigel. Results The primary cultured cardiac microvascular endothelial cells in vitro were polygonal or fusiform with typical paving stone-like growth characteristics. At the same time,the cells were positive stained by factorⅧ-related antigen and CD31 and showed angiogenic ability. Conclusions Cardiac microvascular endothelial cells cul-tured by this method possess high purity. The method is easy tooperate and can be used for laboratory and clinical research of cardiovascular diseases.【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2018(038)004【总页数】5页(P530-534)【关键词】细胞培养;内皮细胞;成年大鼠;心肌微血管【作者】陈小燕;樊梦雅;李慧;蒋易楠;靖静;张海龙【作者单位】河南大学医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室细胞与分子免疫重点实验室,河南开封475004;河南大学医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室细胞与分子免疫重点实验室,河南开封475004;河南大学医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室细胞与分子免疫重点实验室,河南开封475004;郑州大学基础医学院,河南郑州450001;河南大学医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室细胞与分子免疫重点实验室,河南开封475004;河南大学医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室细胞与分子免疫重点实验室,河南开封475004【正文语种】中文【中图分类】R331心肌微血管是深入心脏内的终末细小分支,在心脏内分布广泛,结构上与其他血管不同,由单层内皮细胞和细胞外基质组成;微血管内皮细胞在表型与功能上均表现出不同于大血管内皮细胞的异质性,且其性质与功能在不同组织器官之间也具有显著差异[1]。
大鼠血管平滑肌细胞的培养

精品医学ppt
26
平滑肌细胞传代
传代时间:大部分组织块长出细胞晕, 并与相邻细胞晕相接触时就可以传代
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传代步骤:
倒掉培养瓶中的培养液
用D-Hank’s液洗两遍
加2-3滴0.25%胰蛋白酶消化液,平 放培养瓶,在倒置纤微镜下观察细胞 消化情况,可见到细胞质回缩,细胞 间隙增大时迅速翻转培养瓶,使细胞 脱离消化液
大鼠血管平滑肌细胞的 培养
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相关帮助
需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全 球抗体搜索引擎
fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共 检索的抗体数据库,其抗体信息数据来源于 全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由 商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两 部分组成,以帮助研究者更高效的寻找并评 估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基 因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索 平台
0.10
NaCl
8.0
NaHCO3 Na2HPO4.12H2O D-glucose
0.35 0.12 1.0
Phenol red
0.01
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13
将 CaCl2先溶解在100mL的ddH2O中, 其它成分溶在750 mL的ddH2O中,混 匀(用磁力搅拌器搅拌至溶解),定
容至1000mL。高压蒸气消毒10分钟, 4℃冰箱保存。
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30
血管平滑肌细胞的冻存和复 苏
冻存时间:较早期传代,以防细胞因 为传代次数过多而造成细胞衰老或发 生改变,以保持实验条件的一致性。
冻存方法:冻存前24小时更换培养液, 冻存时要将密闭好的冻存管依次放于:
4ºC
2小时
-20ºC 2.5小时
354.大鼠肺微血管内皮细胞的培养

基金项目:国家自然科学基金资助项目(No .30370561);河北省自然科学基金资助项目(No .C2004000639)作者单位:075029 河北张家口,河北北方学院病理生理教研室第一作者简介:陈瑞华(1966-),男,汉族,张家口人,副教授。
主要从事危重病的病理生理学研究。
△通信作者:ncylxf@s ohu .com文章编号:100728568(2007)0120016204・实验研究・大鼠肺微血管内皮细胞的培养陈瑞华,赵自刚,牛春雨△,张 静,张玉平【摘要】 目的 建立简单有效地获取大鼠肺微血管内皮细胞(P MVEC )的培养方法。
方法 从实验动物、培养基、植块方法、胎牛血清浓度等方面对植块培养法进行改进,应用W istar 雄性大鼠的肺组织,进行P MVEC 的原代培养并传代培养;通过倒置显微镜、扫描、透射电镜观察其形态,并进行免疫组织化学鉴定。
结果 体外培养的大鼠P MVEC 呈梭形或多角形,形成单层后呈典型的鹅卵石样或铺路石样排列,获得的血管内皮细胞纯度较高,抗Ⅷ因子阳性反应,成功建立了P MVEC 的原代培养方法。
结论 改进的植块培养法简便、可靠,获得的P MVEC 纯度高,生长状态良好,保持了内皮细胞的结构和功能,可用于其功能特性的进一步研究。
【关键词】 肺微血管;内皮细胞;细胞培养中图分类号:Q25 文献标识码:BCulture of Pul m onary M i crova scul ar Endotheli a l Cells i n Ra ts CHEN R u i 2hua,ZHAO Z i 2gang,N I U Chun 2yu,ZHAN J ing,ZHAN G Yu 2ping .D epa rt m en t ofPa thophysiololgy,Hebei N orth U n iversity,Z hang jiakou 075029,China【Abstract 】 O bjecti ve T o devel op a si m p le and rep r oductable method for the is olati on and p ri m aryculture of pul m onary m icr ovascular endothelial cells (P MVECs )of rats .M ethods The tissue bl ock pasted culture method was i m p r oved in experi m ent ani m al,culture -mediu m,tissue bl ock method,fetal bovine ser 2u m (F BS )and s p reading slide method .Rats P MVECs were p ri m ary cultured with lung tissue bl ock pasted methods using lung tissue of male W istar rats,and the cell mor phol ogy was observed using inverted m icr oscope and electr on m icr oscope,and identified using i m munohist oche m ical methods .Results The cultured P MVECs of rats in vitr o showed fusif or m shape or polygon,and the monolayer cultures dis p layed a typ ical cobblest one or pavingst one mor phol ogy and were inhibited when contacted each other,the P MVECs exp ressed fact or Ⅷass o 2ciated antigen.And the p ri m ary culture of P MVEC was established successfully .Conclusi on The pure pul 2monaryMVECs of rats can be attained rap idly and easily by the described method .The method is si m p le,eco 2nom ic and reliable,availability of these cells will facilitate further functi onal character studies .【Key words 】 Pul m onary m icr ovessel;Endothelial cell;Cell cultivati on 微血管内皮细胞衬附于血管内壁,定位于进行血液-组织交换的微血管,它不仅是构成血管组织间屏障的重要成分,而且在调节机体内环境的稳定、维持正常生理和免疫功能,以及介导疾病的发生、发展和转归等方面都发挥主要的作用。
天麻素对体外模拟脑缺血损伤大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用_胡京红

中华中医药杂志(原中国医药学报)
2007 年第 22 卷第 2 期
·脑微血管内皮细胞的保护作用 *
胡京红 司银楚 洪庆涛 黄翔 唐一鹏 青雪梅 李澎涛
(北京中医药大学基础医学院 , 北京 100029)
摘要 :目的 :观察中药天麻素对培养的正常及缺血大鼠脑微 血管内皮细胞(BMEC)的影响 , 以 探讨天麻 素对 BMEC 的作用 。 方法 :采用体外培养的 BM EC , 模拟脑缺血损伤 , 观察天麻素对其活性 、 生存率和一氧 化氮(NO)的影响 。 结果 :缺血损伤模型 BMEC 活性及生存 率较正常对照组 明显降低 ;不 同剂量天 麻素对正 常对照组 BMEC 活性 、 生存率及 NO 含量有升高趋势 ;正常对照组不同剂量天麻素 BMEC 活性较缺血损伤模 型组活性有明显升高 (P <0.05);天麻素高剂 量可明显提 高缺血损 伤 BMEC NO 含量(P <0.05)。 结论 :天 麻素各实验剂量可增强缺血损伤 BMEC 活力 , 提高受损内皮细胞(EC)的生存 率 ;促使 EC NO 分 泌增加 。 提 示天麻素对体外培养的大鼠 BMEC 缺血损伤具有一定的保护作用 。
3.脑缺 血损 伤 模型 的建 立 BMEC 培养 至 第 3 代 时 , 接种于 96 孔板(COSTAR 公 司), 培 养 24h 后 , 采 用糖 氧剥 夺模型 , 用 无糖的 Kreb′s 液置 换原培养基 , 放入缺氧罐 中 , 通入 93 %N2 和 7% CO2 的 混合气体 , 40min 后夹闭进出 口 , 37 ℃培养箱继续培养 6h 。
· 125 ·
材料与方法
1.药品 与试 剂 DMEM(Gibico 公 司 , 批号 :1255136); 内皮细胞 生 长 因 子(ECGS)(Sigma 公 司, 批号 :056K6020); 胎牛血清(杭州四季青 生物工程公司 , 批号 :050128);肝素 钠(上海康捷生物 科技公司 , 批号 :040928);明胶 、 胶原酶 Ⅱ 型(Sigma 公司 ;批号 :014K0077 和 036K6020);兔抗人Ⅷ 因 子相关抗原(Santa Crous 公 司);MTT 、 DMSO(Amresisco 公司 ; 批号 :3314b89 和 3135B22);一氧化氮试剂盒(南京建成生物 工程研究所 , 批号 :A012);天麻素(北京中 医药大学中药学 院提供)。
大鼠股动脉血管原代内皮细胞的分离与培养

-596•安徽医科大学学报Ada Unwersitatis Medicinalis Anhut2621Apr;56(4)网络出版时间:2621-3-116:50网络出版地址:https://k/ki.3W/kcms/dwPH34.1025.R.26216317.1521.html大鼠股动脉血管原代内皮细胞的分离与培养刘倩,韩陈陈,罗婷婷,张雨,李浩,马场,魏伟摘要目的体外分离、培养并鉴定大鼠股动脉血管原代内皮细胞,为相对较小血管来源的原代内皮细胞功能研究提供细胞模型。
方法无菌取大鼠股动脉血管,胶原酶消化大鼠股动脉血管内皮细胞使其分离,流式细胞术检测内皮细胞纯度;流式分选出CD30阳性细胞,并用激光共聚焦鉴定内皮细胞;以CCK-C法、高内涵细胞成像法检测内皮细胞增殖能力,以法、Mv/gW胶法检测其迁移和成管功能。
结果胶原酶消化分离所得股动脉血管原代内皮细胞在2627-29-17接收基金项目:国家自然科学基金(编号:51562123、51330051、51273444)作者单位:安徽医科大学临床药理研究所,合肥230234作者简介:刘倩,女,硕士研究生;魏伟,男,博士,教授,博士生导师,责任作者,E-mVi:wwei@ahmu.efu.ch;马场,女,博士,副教授,责任作者,E-mail:mayane_ahmu@ 14~16d细胞覆盖培养瓶面积的2/3以上,细胞呈现典型铺路石状。
流式检测其纯度为3&34%,分选后利用CD30进行荧光染色鉴定,细胞均为CD30阳性;PGE3可显著上调CD30阳性内皮细胞增殖、迁移、成管功能。
结论该研究采 用简便的方法成功分离得到股动脉血管原代内皮细胞,为研究相对较小血管来源的原代内皮细胞功能提供体外细胞模型。
关键词大鼠;股动脉;原代血管内皮细胞;分离培养;鉴定中图分类号R394.26;R322.120文献标志码A文章编号1000-1492(2620)04-0566-05 doi:r6.19465/p cnki.isspl000-0492.2621.04.hl7根据血管的结构、功能和运输方向差异,分为动脉、静脉和毛细血管。
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ie t e y i d n i d b mmu o u rs e c .W e as ee mi e h rwt u" f B i f n f oec n e l lo d tr n d t e g o h c I e o ME y MT sa .T e c l o k d 1 e sa s n ” v Cs b r a s y h el lo e i ”lb t e . s k o
(. o e e o nma S in e a d V t iay Me i n , i n U ies y C a g h n 1 0 6 , hn ; . e a me to nma S in e a d 1 C l g fA i l c c n ee n r dc e J i n v r t, h n c u 3 0 2 C ia 2 D p r n fA i l ce c n l e r i l i t
T cnlg, e igA r utr olg, eig1 20 ,C ia .Cl g fA i lS i c n tr ayMeiie hna gh 6 utr eh o y B in gi l a C l e B in 0 2 6 hn;3 ol eo nma ce eadVe i r dcn,S eyn g cl a o j c ul e j e n en ul U ie i , hn ag 10 6,C ia 4 C l g fB s dclS i cs C pi dclU ie i , e ig1 0 6,C ia nvr t S eyn 8 6 hn . ol eo ai Meia ce e, at a Meia nvr t B in 00 8 hn) sy 1 ; e c n c l sy j Ab ta t T e meh d fc l rn a ri coa c lr e d teilc i BMEC )w r tde o b i p te b s o h sr c : h to s o uti g rtb an mirv s ua n oh l el f u a s s ee su id t ul u h ai fr te d s
沈 阳农业 大学 学报 ,0 0 0 , 1 )1 0 14 2 1— 4 4 ( :7 — 7 2
J u nalo h n a g Agi l rlUnv ri , 0 0 0 4 () 1 0 1 4 o r fS e y n r ut a c u iest 2 1 — 4, 12 :7 — 7 y
建 立 了大 鼠 脑 微血 管 内皮 细 胞 的 体 外 培养 方法 。
关 键 词 : 鼠 ; ; 血 管 内皮 细 胞 ; 养 ; 定 大 脑 微 培 鉴 中图 分 类号 :882 ¥5. 8 文 献 标 识码 :A 文 章 编 号 :10 - 70 2 1 )2 0 7 — 5 0 0 10 (0 0 0 — 10 0
筛 及 酶 消化 技 术 分 离 大 鼠脑 微 血 管 段 , 分 离 的 脑 微 血 管 内皮 细 胞 进 行 了 体 外 培 养 、 态 学 观 察 、 疫 荧 光 鉴 定 及 生 长 曲线 的 对 形 免
M T 法 测定 。 果 表 明 : 置 显 微 镜 下 , 1r 结 倒 细胞 具 有 单 层 “ 路 石 样 ” 列 的典 型 特 征 , 铺 排 免疫 荧 光 检 测 第 Ⅷ 因子 相 关 抗 原呈 阳性 , 功 成
— —
大 鼠脑微血管 内皮细胞 的体外培养及鉴定
郭 洋 , 伊鹏 霏 1 吕钊君 2白慧云 , , 2 , 韦旭 斌 , 绍 范 。穆 祥 杜 , 术
( .吉 林 大 学 畜牧 兽 医学 院 , 春 1 0 6 2 1 长 3 0 2 .北 京农 学院 兽 医学 ( 医药) 京 市 重 点 实验 室 , 中 北 北京 1 2 0 ; 0 2 6
s d e o ah g n s o nn i s a s d y t p o o c s u s t is f p t o e e i f me i gt c u e b Sr tc c u s i.W e u e t e o g n z t n, l a in n e z me ie t n u s i e s d h h mo e i i f t t a d n y dg si a o ir o o tc n q e o s lt mir v s es r m r t r i . T e s lt d n o h l l el e h iu t ioae co e sl f o a b an h ioa e e d t ei c l wee u u e . o s r e mop o o ial a d a s r c t r d b ev d r h l gc l y n
3沈 阳农 业 大 学 畜牧 兽 医学 院 , 阳 10 6 . 都 医科 大 学 基 础 医学 院 , 京 10 6 ) . 沈 1 86 4首 北 0 08 摘 要: 探讨 大 鼠脑 微 血 管 内皮 细胞 的体 外 培 养 方 法 , 为研 究 猪 链 球 菌 引 起 脑 膜 炎 的致 病 机 理 打 下 基 础 。采 用 脑 组 织 匀 浆 、 次 过 二
Cu t r n d n tf a in o t Br i i r v s u a d t ei l l e a d I e d i c to f Ra a n T c 0 a c l r En o h l u i a
Cel n vto ls i i r
G O Y n  ̄ Y e gfi, t Z a-u 2B I u- u z WE u bn.-e ̄ L) h ojn A iy n4 , H , I - i D h ofn, i 2 X n