三七HPLC指纹图谱的建立
不同规格三七的^1HNMR指纹图比较
不同规格三七的^1HNMR指纹图比较
袁卫梅;司立鲜
【期刊名称】《中国实验方剂学杂志》
【年(卷),期】2003(9)4
【总页数】1页(P63-63)
【关键词】三七;^1HNMR;指纹图;比较;鉴定
【作者】袁卫梅;司立鲜
【作者单位】新乡市药品检验所;新乡佐今明制药股份有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】R282.71
【相关文献】
1.不同产地三七皂苷的HPLC指纹图谱与含量的比较研究 [J], 乔春玲;官金梅;丁艳芬;杨崇仁
2.不同规格的三七饮片活血、抗炎和镇痛作用比较研究 [J], 刘淑杰
3.三七不同药用部位及规格所含皂苷总量比较 [J], 王其华;唐爱国;濮存海
4.不同生长年限三七花的指纹图谱建立及其人参皂苷的含量比较研究 [J], 黄再强; 朱琳; 高明菊; 冯光泉; 马小双; 常征
5.三七不同来源指纹图谱数字化研究 [J], 童湘伟;石坤连;梁业婷;沈颖;周蓓;易延逵因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
中药指纹图谱的原理与应用
气相色谱(GC)以气体为流动相，对于含挥发性 成分中药的鉴别具有一定优势。由于裂解气相 色谱具有操作简便、样品无须化学前处理、提 供信息量大等优点而格外引人注目。该方法将 样品故人裂解器内，在一定的条件下将样品加 热使其瞬间裂解，生成可挥发性的小分子物质， 立即被载气带人气相色谱系统的分析柱上，分 离后得到具有指纹性质的裂解气相色谱图。如 果将气相色谱与质谱、傅立叶变换红外光谱联 用，则不但可以知道不同中药中挥发性成分的 差别，而且可以对这些成分进行鉴定。
高速逆流色谱指纹图谱(HSCCC fingerprintspectrum， 即调整逆流色谱法) HSCCC利用动态液-液分配原理分 离样品，其分离度和重现性与HPLC类似，但样品前处 理简单。具体地说它是一种基于液-液多级逆流萃取建 立的色谱体系，以轻巧的聚四氟乙烯螺旋管作分离柱，
在行星式运动中连续地完成整个分配、传递、分离过
中药指纹图谱，即中药身份证，主要指中 药化学指纹图谱，实际上是一种保证中药质量 的措施，是指对某种中药材或中成药等运用现 代分离分析科学的手段，得到能够标示该中药 的色谱或光谱的图谱，最终用来对中药质量评 价的科学性方式。它有两个显著特点，一是通 过指纹图谱的特征性，能有效鉴别样品的真伪 或产地。二是通过指纹图谱主要特征峰的面积 或比例的制定，能有效控制产品的质量，确保 产品质量的相对一致。
对这种中药材的分子遗传标记的研究，找到具有该种高度特异性
的片段，便可以此为基础，制备出对该种高度特异性的寡核苷酸 探针，再经分子杂交进行指纹分析，即可达到鉴别目的。DNA指 纹图具有高度的个体特异性。DNA指纹图谱技术包括AP-PCR(arb itrary primer PCR，任意引物聚合酶链式反应)和RAPD(随机扩增 多态性DNA，randomly amplified polymorphic DNA)两种指纹图谱 技术。RFLP (限制性[内切酶]片段长度多态性，restriction fragment length polymorphism)是最常用的构建DNA指纹图的方法，但该法 费时费力，使应用受到限制。随机扩增多态DNA(RAPD)标记，可 以在特异DNA序列尚不清楚的情况下，检测DNA的多态性，这是
中药指纹图谱(课件)
分离效果好
GC利用气体作为流动相，能够实现中药中挥发性成分的快速、 有效分离。
分析速度快
GC分析周期短，适用于中药中大量样品的快速分析。
灵敏度高
GC检测器灵敏度高，能够检测到中药中微量的挥发性成分。
薄层色谱法（TLC）
操作简便
TLC操作简便易行，无需特殊设备，适用于中药指纹图谱的初步 分析。
分离效果好
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色谱柱选择
根据中药样品的成分特点，选择合适的色谱柱类 型及规格，确保各成分在色谱柱上得到良好的分 离。
流动相选择
根据样品的溶解性和色谱柱的特性，选择合适的 流动相组成及比例，以获得良好的色谱峰形和分 离效果。
色谱条件优化
通过调整流动相的流速、柱温等色谱条件，进一 步优化色谱分离效果，提高指纹图谱的准确性和 稳定性。
03
常见中药指纹图谱类型及 特点
高效液相色谱法（HPLC）
分离效能高
重复性好
HPLC采用高效微粒固定相，能够实现 中药复杂体系中各组分的有效分离。
HPLC方法稳定可靠，重复性好，能够 满足中药指纹图谱的批量化分析需求。
灵敏度高
采用高灵敏度的检测器，能够检测到 中药中微量甚至痕量的有效成分。
气相色谱法（GC）
指导工艺改进
根据生产工艺稳定性评 价结果，可以指导工艺 改进和优化，提高生产 效率和产品质量。
05
中药指纹图谱在真伪鉴别 中应用
伪品识别与防范策略
伪品定义及危害
阐述伪品概念，分析伪品对 中药市场及患者用药安全造 成的严重影响。
常见伪品类型
列举常见的中药伪品，如以 次充好、掺杂使假、品种混 淆等。
三七检验方法确认方案
三七检验方法确认方案一、背景介绍三七是一种珍贵的中草药材，具有广泛的药用价值。
为了保证三七制药工艺的质量和药材的安全性，需要建立一套可靠的检验方法来确认三七的质量和成分。
本方案旨在探讨三七检验方法的确认步骤和具体操作流程，确保检验结果的准确性和可靠性。
二、三七检验方法的确认步骤1. 制定确认方案首先，需要明确确定三七的关键质量指标，如有效成分含量、重金属和农药残留等。
根据这些指标，制定特定的确认方案，包括实验设计、仪器设备的选择和样品处理等。
2. 确定准则和标准物质在确认方案中，需要明确确定三七检验方法的准则和参考标准。
对于有效成分含量的确认，可以选择已有成熟的药典方法，如HPLC、UV或质量指纹图谱等。
同时，选择适当的标准物质来建立定量分析方法，并进行相应的验证试验。
3. 设计实验并执行根据确认方案，设计实验并执行。
确保实验中所使用的仪器设备符合相应要求，样品的采集和保存符合规范。
对于有效成分含量的检验，可以采用盲样和对照样的方法进行验证，确保结果的可重复性和准确性。
4. 数据处理和分析完成实验后，需要对实验数据进行处理和分析。
使用统计学方法判断数据的显著性，并对实验结果进行合理解释。
同时，对无效的检验方法进行修正或重新设计，以提高方法的可靠性和准确性。
5. 方法验证和应用对确认得到的三七检验方法进行验证，包括准确性、精密度和特异性等方面的验证。
确保该方法可以准确、可靠地用于三七的日常检验。
同时，对该方法在实际生产中的应用进行评估和总结。
三、三七检验方法的具体操作流程1. 样品采集与准备在采集三七样品时，应根据确认方案的要求选择合适的采样点和采集时间，并保证样品的代表性。
样品采集后，应先进行外观检查和质量评估，取出样品的适量部分进行后续处理和检验。
2. 药材预处理根据验证方法的要求，对样品进行必要的预处理。
比如，可以对样品进行干燥、粉碎、筛选等处理，以便后续的实验分析。
3. 有效成分含量的测定根据验证方法的要求，选择合适的仪器设备和分析方法。
基于特征图谱的人参属药材西洋参、人参、三七的比较
世界中医药 ２０２１年 ３月第 １６卷第 ６期·８８７·基于特征图谱的人参属药材西洋参、人参、三七的比较严 华１ 张慧秀２ 白宗利２ 乐智勇２ 魏 锋１ 马双成１（１中国食品药品检定研究院，北京，１０００５０；２康美药业股份有限公司，北京，１０２６２９）摘要 目的：建立同时适用于五加科人参属西洋参、人参和三七药材高效液相色谱（ＨＰＬＣ）特征图谱鉴别和含量测定方 法，为同属药材的鉴定及质量评价提供科学依据。
方法：西洋参、人参、三七均以甲醇提取，特征图谱及含量采用同一液相 色谱条件：Ｃ８色谱柱，乙腈水为流动相，梯度洗脱，紫外光（２０３ｎｍ）检测，特征图谱采用 Ｃｈｅｍｐａｔｔｅｒｎ化学计量学软件进行 数据处理、计算相似度、主成分分析。
结果：西洋参特征图谱有 １１个共有峰相似度为 ０８６～０９９，特征成分为人参皂苷 Ｒｃ、人参特征图谱有 ９个共有峰，相似度为 ０９８～０９９，特征成分为人参皂苷 Ｒｆ，三七特征图谱有 ８个共有峰，相似度为 ０９６～１０，特征成分为三七皂苷 Ｒ１，品种内相似度均很高，品种间相似度低为 ０５４。
主成分分析可将 ３种药材显著区 分，并显示特征成分及共有成分人参皂苷 Ｒｇ１、Ｒｅ、Ｒｂ１和 Ｒｄ峰对区分 ３种药材累积贡献权重值为 ８７％，其中人参皂苷 Ｒｇ１与人参皂苷 Ｒｅ峰面积比值在 ３个药材中的差异有统计学意义，比值范围稳定，三者比值依次为 ０１３±００８、１２０± ０６０、８３０±３０，对于药材的鉴定有重要意义。
各共有成分的单体含量及其总含量均以三七为最高，西洋参次之，人参最 低，人参皂苷 Ｒｇ１在西洋参与人参中的含量基本一致。
结论：新建立的 ＨＰＬＣ特征图谱方法在鉴别同属药材品种的同时 测定了主要皂苷成分的含量测定，方法的专属强，稳定性高，重复性好，且大幅缩短了分析时间，提高分析效率，为药材的 质量评价提供科学便捷的方法和依据。
HPLC同时测定何首乌中5种成分及指纹图谱的建立
HPLC同时测定何首乌中5种成分及指纹图谱的建立何首乌是一种常见的中药材，主要用于滋养肝肾、益气活血、补肝肾以及黑发。
为了保证何首乌的质量，必须对其中有效成分进行准确测定。
建立何首乌的指纹图谱也是评价其质量的重要手段。
本文将利用高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）技术同时测定何首乌中5种主要成分的含量，并建立其指纹图谱。
为了保证实验的准确性和可靠性，选择合适的HPLC条件是非常关键的。
对于何首乌中的5种成分，经过文献调研和实验探索，确定了以下HPLC条件：使用C18色谱柱，流动相为甲醇-水（含0.1%磷酸调节pH至3.0），流速为1.0 mL/min，检测波长为254 nm。
这些条件在实验前需要进行优化和验证，以保证测得的结果准确可靠。
收集一批优质何首乌样品，并进行样品的处理。
将何首乌样品粉碎成细粉，然后精确称取一定量的样品，并加入适量的甲醇进行超声提取。
待提取液离心沉淀后，将上清液取出，过滤后即可进行HPLC分析。
在测定何首乌中5种成分的含量时，首先需要准备好5种成分的标准品。
根据前期的研究和文献报道，选择广性向量曲线法（Wide Linear Range Calibration Curve, WLRC）进行定量分析。
即分别准备5个浓度不同的标准品溶液，通过HPLC测定其峰面积，并绘制标准曲线。
然后，测定何首乌样品中5种成分的峰面积，并通过标准曲线反推其含量。
在建立何首乌的指纹图谱时，需要将一批何首乌样品进行HPLC分析，获得它们的色谱图。
然后，根据样品的峰面积和保留时间，通过计算相似度和聚类分析等方法建立指纹图谱。
相似度由0到1，数值越大表示两个样品的相似度越高，说明它们的成分越相近。
对测定结果进行统计分析和评价。
根据测定样品的含量和指纹图谱的相似度，可以对何首乌的质量进行评价。
可以对不同产地、不同加工工艺或不同储藏条件下的何首乌样品进行比较，以找出质量的差异和原因。
HPLC同时测定何首乌中5种成分及指纹图谱的建立
HPLC同时测定何首乌中5种成分及指纹图谱的建立近年来，随着中药现代化的发展和质量控制的重要性日益受到关注，高效液相色谱（HPLC）成为一种常用的药物质量控制方法。
何首乌是常用中草药之一，具有抗衰老、抗氧化、降血脂、抗肿瘤等多种生物活性，因此受到广泛关注。
本研究旨在建立一种HPLC方法，同时测定何首乌中5种成分及指纹图谱，为何首乌的质量控制和药理研究提供有力支持。
1. 实验材料和设备何首乌样品：从中国云南省采集的何首乌干燥根茎，粉碎成细粉；标准品：纳巴卡平、芦丁、花青素、大黄酚甙、大黄素（均为国家药典标准品）；色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（4.6mm×250mm，5μm）；HPLC系统：Agilent 1260；检测波长：254nm（除菊苣素外）和350nm（菊苣素）；流动相：A相为乙腈，B相为0.1%磷酸水溶液；洗涤条件：0-10min A相从10%到20%，10-30min A相从20%到40%，30-35min A相从40%到50%，35-45min A相从50%到70%，45-55min A相从70%到90%；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。
2. 指纹图谱的建立将何首乌20g分别加入100mL乙醇和100mL水中，超声提取1h后过滤，将提取液浓缩到2mL，用0.45μm微孔过滤器过滤，取10μL进样。
指纹图谱的建立采用相同的HPLC系统和流程。
3. 结果与分析3.1 成分的HPLC分析各标准品浓度分别为：纳巴卡平50μg/mL，芦丁10μg/mL，花青素10μg/mL，大黄酚甙10μg/mL，大黄素10μg/mL。
各成分的保留时间分别为：纳巴卡平6.775min，芦丁14.227min，花青素17.321min，大黄酚甙23.108min，大黄素30.966min。
各成分的峰面积与浓度呈良好线性关系（R2>0.999），检测限和定量限分别为：纳巴卡平0.02μg/mL和0.06μg/mL，芦丁0.09μg/mL和0.28μg/mL，花青素0.06μg/mL和0.17μg/mL，大黄酚甙0.11μg/mL和0.33μg/mL，大黄素0.08μg/mL和0.24μg/mL。
中药三七及其常见混伪品鉴别
中药三七及其常见混伪品鉴别目的：分析三七及其混伪品的鉴别方法，确保临床中药饮片质量。
方法：对比分析三七及其混伪品在来源、性状、理化等方面的差异。
结果：三七及其混伪品均有不同的性状和理化特征。
结论：注重三七及伪品的特征差异，从性状、理化特征等多方面综合鉴定，为饮片鉴别提供参考依据。
标签：三七；混伪品；鉴别三七为五加科植物三七Panax notoginseng（Burk）FHChen的根和根茎，广泛应用于各种出血性疾病、瘀血阻滞及跌打损伤、冠心病、心绞痛、慢性肝病、偏头痛等。
三七主产于云南、广西，而云南文山的三七历史悠久、产量大、质量好，为著名的道地药材。
各地以三七命名的植物众多，据参考文献[1]统计，除五加科三七外，药用植物以三七命名者多达20种，分属11科，加之同物异名、同名异物、人为伪造、以伪冒真，以“土”代正，致使三七的真伪难辨。
三七从种植到采收至少需要三年，加之用量大，资源紧缺，价格比较昂贵，市场上常有一些形态相似的伪品出现，给药材市场造成混乱，对临床用药带来危害。
现将三七及市场常见伪品从来源、性状、理化等方面加以比较，从而为正确使用三七提供参考。
1三七与伪品来源、性状、功效鉴别2其他鉴别方法21溶血鉴别把三七粉放入少量猪血或鸡血中，可将猪血或鸡血化成水状，这是三七所含皂苷成分的溶血作用，伪品无此功效[2]。
22荧光鉴别分别取三七、藤三七粉末2g，加甲醇15ml温浸30min提取，取提取液1ml蒸干，加醋酐1ml、硫酸1～2滴，原三七滤液显红色，后渐变为青色、污绿色（甾醇反应）；另各取两种滤液点于滤纸上，待晾干后置紫外光（465nm）灯下观察，滴加三七滤液的显现淡蓝色荧光，滴加藤三七滤液的显现蓝色荧光，再在两种滤液中滴加硼酸饱和的丙酮溶液与10%枸橼酸溶液各1滴，待晾干后置紫外光灯下观察，滴加三七滤液的显现强烈黄绿荧光，滴加藤三七滤液的显现棕紫色荧光[3]。
23[JP3]薄层鉴别三七和藤三七的正丁醇提取物，蒸干，加甲醇1ml溶解后，作为试验的供试品溶液。
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第２８卷第４期 ２００３年４月
中国中药杂志
Ｃｈｉｎａ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍａｔｅｒｉａ Ｍｅｄｉｃａ Ｖ０１．２８．Ｎｏ．４
Ａｐｔ．，２００３
ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎＭ ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ跏ｐ 划ｐｅｃｕｌｉａｒ ｐｒｉｍｅｒ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔＯ ａｍｐｌｉｆｙ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ ｓｐａｅｅｒｌ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒＲＮＡ ｇｅｎｅ，ａｎｄｔｈｅ ｂａｓｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｔｈｅ ａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓｂｙ ｓｔｏｐｐｉｎｇｔｈｅ ｃｉｒｃｌｅｏｆｔｈｅ ｅｎｄｏｆｄｏｕｂｌｅｄｅｏｘｉｄａｔｉｏｎｏｆｆｏｕｒ ｃｏｌｏｒ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｍａｒｋ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｉｔ ｗａｓ ｐｒｏｖｅｄ ｂｙ ａｇｅｒ ｓｕｇａｒ ｇｅｌ ｅｌｅｅｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒ· ｎａｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ ｓｐａｅｅｒｌ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒＲＮＡ ｇｅｎｅ ｅｘｉｓｔｅｄ．Ｔｈｅ ｂａｓｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｅｄｓ ｏｆ Ｇ．ｄａｈｕｒｉｃａ’Ｓ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ ｓｐａｃ— ｅｒｌ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒＲＮＡ ｇｅｎｅ ＷａＳ ｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔ０ ｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ ｂａｓｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ ｓｐａｃｅｄ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒＲＮＡ ｇｅｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｅｄｓ ｏｆ Ｇ．ｄａｈｕｒｉｃａ’Ｓ ｉｓ ａ ｍｅｔｈｏｄ ｔＯ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｖｅｇｅｔａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｏｎ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌｅ． ［ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ Ｇｅｎｔｉａｎａ ｄａｈｕｒｉｃａ；ｎＰＣＲ；ｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ＤＮＡ；ｒＲＮＡ ｇｅｎｅ；ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ 【责任缩辑寰桂京】
三七ＨＰＬＣ指纹图谱的建立
王雁 ，毕开顺２ （１．辽宁省盘锦市药品检验所，辽宁盘锦 １２４０１０； ２．沈阳药科大学，辽宁沈阳 １１００１５）
【摘要】 目的：建立三七药材的高效液相指纹图谱（ＨＰＬＣ－ＦＰ），在量上为三七的鉴定与合理应用提供依据。 方法：Ｌｕｎａ Ｃｌ８（２）色谱柱，流动相：（Ａ）乙腈．（Ｂ）０．０５％磷酸梯度洗脱，０～８ｒａｉｎ（２０％Ａ，８０％Ｂ），８～２０ｍｉｎ（２０％ Ａ～４０％Ａ，８０％Ｂ～６０％Ｂ），２０～３０ ｍｉｎ（４０％Ａ～２０％Ａ，６０％Ｂ～８０％Ｂ），３０～３６ｍｉｎ（２０％Ａ～１００％Ａ，８０％Ｂ～ ０），３６～５０ ｍｉｎ（１００％Ａ），５０～６５ ｒａｉｎ（１００％Ａ～２０％Ａ，０～８０％Ｂ），流速１．０ ｍＬ·ｍｉｎ－。，检测波长２０３ ｍ。咖啡 因为内标物。结果：通过聚类分析，２１个不同产地、不同规格的三七样品被聚为４类：地道药材优级品、地道药材、 市售一般品和次品。通过相似度计算，２１个三七样品的相似度均在０．９～１．０之间，８个常见伪品的相似度均小于 ０．９。结论：该色谱图可作为三七的｝玎ＰＬＣ—ＦＰ，用于三七的真伪鉴别和质量评价。 ［关键词】 三七；指纹图谱 【中图分类号】Ｒ ２８２．５【文献标识码】Ａ【文章缩号】１００１—５３０２（２００３）０４．０３１６—０５
指纹图谱＿ｌ 作为中药材及中成药的一种新的 质量控制技术，正得到普遍关注。三七＿２ Ｊ，性味甘、 微苦、温。主要用于治疗咯血、衄血、外伤出血、跌打 肿痛。药理资料证明＿３．４ Ｊ，三七具有抗血栓、改善心 血管功能和很强的止血作用。中国中医研究院中药 研究所与云南文山州科委合作进行的开发应用三七 的基础研究结果表明：在耐缺氧、抗衰老、提高机体 免疫力方面，在相同剂量下，三七皂苷的作用大于人 参皂苷。因此，三七成为目前最为常用的贵重中药 材。血塞通、血栓通注射液为三七总皂苷的水溶液 制剂，同时三七也是多种中成药复方丹参片、三七 片、脑得生片等的主要组成成分＿５ Ｊ，因而，市场上三 ［收稿日期】２００２．０９ ２０ ［通讯作者】Ｔｅｌ：（０４２７）２８０８６０３ ｍａｉｌ：ｓｄｋ５５９＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｎ．ｃｎ ３１６· 七掺杂使假的现象时有发生。为了有效打击假劣药 品，保证药品质量，同时为了实现中药标准标准化， 推动中药材ＧＡＰ的实施。本实验建立了三七的 ＨＰＬＣ指纹图谱并对该指纹图谱的特征峰数据进行 系统聚类分析和相似度计算，同时比较了三七与其 常见的伪品＿６．７ｊ——姜黄、高良姜、郁金、三棱、白 术、白芷、白及、莪术的高效液相色谱的差异。 １ 仪器与试剂 ＳＳＩ ＳＥＲＩＥＳ ＩＶ双泵高效液相色谱仪，ＳＳＩ ５００ 紫外检测器，Ａｎａｓｔａｒ色谱工作站。 乙腈（色谱纯），磷酸（分析纯），内标咖啡因（ 熔点标准品，批号１０１—８４０３，中国药品生物制品检 定所提供）。 对照品 三七皂苷Ｒ．（批号０７４５—２００００７）、人 参皂苷Ｒｇ１（批号０７０３—２００１１７）、人参皂苷Ｒｂ１（批 号７０４—２００１１４），均为化学对照品、含量测定用，中 国药品生物制品检定所提供。
『１ｒ
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中国中药杂志
Ｃｈｉｎａ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍａｔｅｒｉａ Ｍｅｄｉｃａ Ｖ０Ｉ．２８。Ｎｏ．４
Ａｐｔ．，２００３
注：①样品生药学鉴定由辽宁省盘锦市药品检验所王桂萍完成②样品编号表２。图６同 ２ 实验方法与结果 ２．１ 色谱分析条件［０］ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）分析柱（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ，５ ｍ）， 流动相（Ａ）乙腈一（Ｂ）０．０５％磷酸梯度洗脱，０～８ ｍｉｎ （２０％Ａ，８０％Ｂ），８～２０ｍｉｎ（２０％Ａ～４０％Ａ，８０％ Ｂ～６０％Ｂ），２０～３０ ｍｉｎ（４０％Ａ～２０％Ａ，６０％Ｂ～ ８０％Ｂ），３０～３６ ｍｉｎ（２０％Ａ～１００％Ａ，８０％Ｂ～０）， ３６～５０ ｍｉｎ（１００％Ａ），５０～６５ ｍｉｎ（１００％Ａ～２０％ Ａ，０～８０％Ｂ），流速１．０ ｍＬ·ｍｉｎ～，检测波长２０３ ｎｍ。所有组分均在７０ ｍｉｎ内洗脱出柱，见图１～图 ３。 ’ ２．２ 溶液制备 供试品溶液的制备 精密称取三七药材粉末 （过１００目筛）０．２５ ｇ置５０ ｍＬ具塞锥形瓶中，精密 加入甲醇２５ ｍＬ，精密称定，超声３０ ｍｉｎ，放冷，精密 称定，用甲醇补足减失重量，精密加入咖啡因内标液 ０．５ ｍＬ，混匀，滤过。取续滤液，经０．４５肚ｍ有机系 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。 内标液制备 精密称取咖啡因０．０２５ ７１ ｇ，置 １００ ｍＬ量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
， ＾‘ ０ ２５ ５０ ｔ ｉｎ
图１ 对照品溶液的唧ＬＣ
Ｓ．咖啡因 ２．三七皂苷ＲＩ ３．人参皂苷ＲｇＩ ６．人参皂苷ＲｂＩ（圈２，圈３同）
３１７·
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Ｃｈｉｎａ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍａｔｅｒｉａ Ｍｅｄｉｃａ Ｖｏ１．２８，Ｎｏ．４
＆ｏｒ．，２００３
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图２ 三七样品溶液的ＨＰＬＣ－ＦＰ（全图）
图３三七样品溶液的ＨＰＬＣ－ＦＰ（局部图） 对照品溶液的制备 精密称取对照品三七皂 苷Ｒ１ ３．９４ ｍｇ、人参皂苷Ｒｇｌ １２．７３ ｍｇ、人参皂苷 Ｒｂ １３．８２ ｍｇ置２５ ｍＬ量瓶中，精密加入咖啡因内 标液１．０ ｍＬ加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精 密吸取５ ｍＬ置１０ ｍＬ量瓶中，加甲醇稀释至刻度， 摇匀，经０．４５ ｍ有机系微孔滤膜滤过，取续滤液， 即得。 ２．３ 系统适用性实验与精密度考察 取对照品溶液进样分析，色谱图见图１～图３， 分离效果好，以人参皂苷Ｒｇ１峰计算，理论塔板数大 于２７００００，连续重复进样６次，计算峰面积的精密 度：三七皂苷Ｒ】为１．１％、人参皂苷Ｒｇ】为１．１％、 人参皂苷Ｉ １为１．０％。 ２．４ 三七ＨＰＬＣ—ＦＰ的重现性与稳定性试验 Ｊ 取同一批药材（购于云南昆明，３年生，４０头）５ 份，按上述２．２方法制备供试品溶液，进样并记录色 谱图，见图２，３，计算１，２，３，６，１０，１２，１３号峰相对 于内标峰Ｓ的相对保留时间和相对峰面积，结果显 示各峰相对保留时间的ＲＳＤ均在１．０％以下，相对 峰面积的ＲＳＤ为１．０％～３．８％。取重现性试验第 １份样品溶液相隔０，２，４，８，２４ ｈ分别进样检测，计 算相对保留时间和相对峰面积，结果显示供试品的 指纹图谱在２４ ｈ内基本稳定，各峰相对保留时间的 ＲＳＤ均在１．０％以下，相对峰面积的ＲＳＤ为０．８％ ３】８·
３．７％。 。 ２．５ 三七药材的ＨＰＬＣＦＰ的建立 取不同产地、不同规格的三七样品及其常见伪 品，分别按上述２．２方法制备供试品溶液，进样并记 录指纹图谱（见图４，５）。结果２１批药材均显示与
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图４不同产地三七样品的ＨＰＬＣ－ＦＰ 自下而上：混合对照品溶液（咖啡因、三七皂苷Ｒｌ、 人参皂苷ＲｇＩ、人参皂苷Ｒｂ１），１～２１号样品溶液
参考指纹图谱有相同的特征峰，其１３个共有特征峰 的相对保留时间的ＲＳＤ均低于１．０％，说明参考指 纹图谱中各特征峰为三七药材的共有成分。采用 ＳＰＳＳ软件对２１批三七药材的ＨＰＬＣ－ＦＰ中各特征 峰的相对峰面积进行聚类分析，以夹角余弦为测度 的聚类图结果见图６，利用Ｅｘｃｅｌｌ软件，分别采用欧 氏距离、相关系数和夹角余弦作测度，以１，６，２，４， ８，２１，１ｌ，９，５号样品为标准样本，计算所有样品的 相似度。结果见表２。 公式：
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