结核分枝杆菌的核酸检测参考课件
合集下载
结核病实验室检查及意义PPT课件
IGRA都要检查
BCG接种者（如果也属于其 它风险人群）
推荐用IGRA
与传染性肺结核患者密切接 触
TST或IGRA
医务工作者
TST或IGRA
无法再来确认TST结果的人 群（例如，流浪汉，注射吸
毒者或交通不方便）
推荐用IGRA
TST，如果TST阴性要用 IGRA确认
没有特定的推荐
TST，用IGRA进一步确认 TST阳性 推荐用TST
非血 样本 的T-SPOT结果 很 强的话 （即 存 在大量 的结 核 效应 T 细 胞）,揭示在这个器官或部位存在活动性结核。
各国对潜伏感染风险人群的筛查指南
风险人群
美国指南Hale Waihona Puke 加拿大指南英国指南
免疫力抑制人群（例如， HIV感染者，使用强的松或
TNF-α抑制剂治疗）
TST或IGRA；如果是阴 性或高度怀疑的，TST和
与BCG的交叉反应
存在
存在的可能性较小
与NTM的交叉反应
存在
存在的可能性较小
与M.TB暴露的相关性
存在
相关性较PPD皮试大
阳性结果与随访期间罹患结核的相互关 系
可重复性
中到显著的正相关 中等，但可变
无充足的证据 较高，但证据较少
T-SPOT实验
阴性结果 提示患者体内不存在针对结核杆菌特异的效应T细胞。假阴性结 果： ①感染阶段不同；②少数免疫系统功能不全/疾病；③实验非正 常操作。
结核分枝杆菌-实验室检查
适用于多种标本；操作简便，价格低廉。 2份痰标本直接涂片抗酸杆菌镜检阳性。
结核杆菌培养
传统方法：L-J固体培养基 快速培养法: 检测细菌生长过程中代谢产生的CO2或消耗的O2， 显微镜直接观察、变色液体培养基等BACTEC MGIT960系统等。
BCG接种者（如果也属于其 它风险人群）
推荐用IGRA
与传染性肺结核患者密切接 触
TST或IGRA
医务工作者
TST或IGRA
无法再来确认TST结果的人 群（例如，流浪汉，注射吸
毒者或交通不方便）
推荐用IGRA
TST，如果TST阴性要用 IGRA确认
没有特定的推荐
TST，用IGRA进一步确认 TST阳性 推荐用TST
非血 样本 的T-SPOT结果 很 强的话 （即 存 在大量 的结 核 效应 T 细 胞）,揭示在这个器官或部位存在活动性结核。
各国对潜伏感染风险人群的筛查指南
风险人群
美国指南Hale Waihona Puke 加拿大指南英国指南
免疫力抑制人群（例如， HIV感染者，使用强的松或
TNF-α抑制剂治疗）
TST或IGRA；如果是阴 性或高度怀疑的，TST和
与BCG的交叉反应
存在
存在的可能性较小
与NTM的交叉反应
存在
存在的可能性较小
与M.TB暴露的相关性
存在
相关性较PPD皮试大
阳性结果与随访期间罹患结核的相互关 系
可重复性
中到显著的正相关 中等，但可变
无充足的证据 较高，但证据较少
T-SPOT实验
阴性结果 提示患者体内不存在针对结核杆菌特异的效应T细胞。假阴性结 果： ①感染阶段不同；②少数免疫系统功能不全/疾病；③实验非正 常操作。
结核分枝杆菌-实验室检查
适用于多种标本；操作简便，价格低廉。 2份痰标本直接涂片抗酸杆菌镜检阳性。
结核杆菌培养
传统方法：L-J固体培养基 快速培养法: 检测细菌生长过程中代谢产生的CO2或消耗的O2， 显微镜直接观察、变色液体培养基等BACTEC MGIT960系统等。
结核分枝杆菌 ppt课件
病死亡人数已达2亿。
1897年提出结核病的飞沫传染学说。 1908年C.Mantoux提出结核菌素试验方法。 1931年Seibert制成纯蛋白衍化物(PPD)。 1930年Lowenstein氏培养基的出现使结核菌培养生长
成功。
ppt课件
5
全球结核病疫情
每年有1%人口被结核杆菌感染，全球约有
(2) 试验方法：前臂掌侧皮内注射 5 个单位的 OT(0.1
ml)，或PPD-S 0.0001mg，48～72 h后观察红肿硬结直 径。 (3) 结果：红肿硬结>5mm者为阳性， ≥15mm强阳性，
ppt课件 27
<5mm阴性，未感染过。但应考虑 ①感染初期（因感染后需4周以上才出现） ②老年人 ③严重结核患者或正患有其他传染病 ④获得性细胞免疫功能低下。 （4）应用：婴幼儿结核病的辅助诊断，检查BCG接
侵作用）；含多种酶（分解利用营养物质）；保
护（阻止有害物质的进入菌体）。
ppt课件 20
(2) 脂质： ① 索状因子→破坏细胞线粒体膜，影响细胞呼吸，抑 制白细胞游走引起慢性肉芽肿,人型结核分枝杆菌强
毒株与弱毒株的区别在于强毒株有索状因子。
② 磷脂→促进单核细胞增生，及结核结节形成。
③ 硫酸脑苷脂(Sulfatide)→抑制吞噬细胞中吞噬体与溶
耐药性结核（MDR-TB)患者增加（全世界约5000万）。
其耐药性变异由染色体突变经选择形成，与质粒无关。
研究发现对不同药物的耐药基因不相连接，可用于指
导临床联合用药治疗。
L型变异。
ppt课件
19
二、致病性
1、致病物质 不产生内、外毒素和侵袭性酶，无鞭 毛、无芽胞，致病物质主要是菌体成分。
结核分枝杆菌PPT课件
（三）结核菌素试验（ OT或PPD ） 1.原理：迟发型超敏反应 2.试剂： ① 旧结核菌素：结核杆菌蛋白
② 纯蛋白衍生物：5单位 3.方法： 前臂屈侧皮内注射，48～72h后观察结果
结果 阴性：＜5mm 阳性：≥5mm 强阳性：≥15mm
4.结果分析 ①阳性 ：注射部位硬结、红肿直径
皮肤发生水泡与坏死者，强阳性。
※若PPD-C侧红肿大于BCG-PPD侧则为结核杆菌 感染；若BCG-PPD侧红肿大于PPD-C侧，可能系 卡介苗接种所致
6. 意义 阴性需考虑以下情况： ⑴感染初期（产生抗体需3~6周）； ⑵老年人（免疫力弱）； ⑶严重结核患者或正患其他传染病导致细胞免疫力低
下，例麻疹病毒； ⑷获得性细胞免疫低下，例AIDS或免疫抑制剂的应用
分枝杆菌属（Mycobacterium）
又称抗酸分枝杆菌 (acid-fast bacillus) 种类较多（100种），可分为3类
①结核分枝杆菌； ②非结核分枝杆菌； ③麻风分枝杆菌。
20近10几年年全全国国结结核核病病疫疫情情情情况况
2013年
发病 死亡
2012年
发病 死亡
2013年
发病 死亡
0.5-1.5cm之间； ②强阳性 ：硬结直径1.5cm以上； ③阴性： 注射部位有针眼大的红点
或稍有红肿，硬结直径小于0.5cm。
结核菌素试验结果分析
阳性 强阳性 阴性
硬结、红肿直径 出现超敏反应 0.5-1.5cm之间 不表示正患结核病
硬结直径 1.5cm以上
表明可能有活动 性结核，应进一 步检查
蜡质D: 佐剂作用，引起迟发型超敏反应。
2. 蛋白质 ： 结核菌素，与蜡质D共同引起迟发型
结核菌素皮肤试验ppt课件
（假阳性）
1.其他分枝杆菌感染
2.活动性结核与潜伏感染均为阳性结果， 具体诊断需进行 综合分析后，才能区是否为活动性结核病。
钩藤
结核菌素皮肤试验全身不良反应及处理
(一)晕厥
症状：结核菌素皮肤试验注射时，极个别受试者会出现头晕、心慌、脸色苍白、出冷汗 等现象，甚至突然晕倒，失去知觉。 一般在注射后6~10分钟出现。
定义
结核病定义
结核分枝杆菌复合群 (mycobacterium tuberculosis complex,简称 结核分枝杆菌或结核菌)引起的慢性感染性疾病。
可累及全身多器官系统,最常见的部位是肺脏,占 各器官结核病总数的80~90%。
也可以累及肝、肾、脑、淋巴结等器官。
钩藤
流行病学
传染源
结核分枝杆菌(简称“结核菌”)是人 类结核病的致病菌。
钩藤
结核菌素试 剂研发历程
(二)纯蛋白衍生物(PPD)
✓ 1928年首次提得结核蛋白,1932年F.Seibert制成实验制品,称 纯结核蛋白(TPT)。
✓ 1934年实际使用的纯结核菌素是经无水乙醚脱水得晶体状纯 结核蛋白。因其中可能仍有变性蛋故称为纯蛋白衍生物 (Purified Protein Derivative, PPD)。
• 7.应激状态,如外科手术、烧伤、精神病人、移植物抗宿主反应等。
钩藤
结核菌素皮肤试验的影响因素
(二)结核菌素试剂的影响 • 1.试剂生产质量不符合要求,稀释不当、污染； • 2.没有在冷藏条件运输和保存,化学变性。
钩藤
结核菌素皮肤试验的影响因素
(三)注射和查验反应的影响 • 1.抗原注入剂量不足； • 2.PPD试剂开瓶后放置时间过长试剂吸入针管后放置时间过长； • 3.查验反应与记录错误。如查验反应的技术不熟练、不标准或记录错误等。
1.其他分枝杆菌感染
2.活动性结核与潜伏感染均为阳性结果， 具体诊断需进行 综合分析后，才能区是否为活动性结核病。
钩藤
结核菌素皮肤试验全身不良反应及处理
(一)晕厥
症状：结核菌素皮肤试验注射时，极个别受试者会出现头晕、心慌、脸色苍白、出冷汗 等现象，甚至突然晕倒，失去知觉。 一般在注射后6~10分钟出现。
定义
结核病定义
结核分枝杆菌复合群 (mycobacterium tuberculosis complex,简称 结核分枝杆菌或结核菌)引起的慢性感染性疾病。
可累及全身多器官系统,最常见的部位是肺脏,占 各器官结核病总数的80~90%。
也可以累及肝、肾、脑、淋巴结等器官。
钩藤
流行病学
传染源
结核分枝杆菌(简称“结核菌”)是人 类结核病的致病菌。
钩藤
结核菌素试 剂研发历程
(二)纯蛋白衍生物(PPD)
✓ 1928年首次提得结核蛋白,1932年F.Seibert制成实验制品,称 纯结核蛋白(TPT)。
✓ 1934年实际使用的纯结核菌素是经无水乙醚脱水得晶体状纯 结核蛋白。因其中可能仍有变性蛋故称为纯蛋白衍生物 (Purified Protein Derivative, PPD)。
• 7.应激状态,如外科手术、烧伤、精神病人、移植物抗宿主反应等。
钩藤
结核菌素皮肤试验的影响因素
(二)结核菌素试剂的影响 • 1.试剂生产质量不符合要求,稀释不当、污染； • 2.没有在冷藏条件运输和保存,化学变性。
钩藤
结核菌素皮肤试验的影响因素
(三)注射和查验反应的影响 • 1.抗原注入剂量不足； • 2.PPD试剂开瓶后放置时间过长试剂吸入针管后放置时间过长； • 3.查验反应与记录错误。如查验反应的技术不熟练、不标准或记录错误等。
结核分枝杆菌PPT课件
❖ 治疗
▪ 白喉抗毒素---皮肤试验、早期使用 ▪ 抗生素
-
第二节 其他棒状杆菌
❖ 大多不产生外毒素 ❖ 很少有异染颗粒 ❖ 大多正常寄生于人体，为条件致病菌
-
分枝杆菌属
(Mycobacterium)
27
-
❖ 一类细长弯曲的杆菌，因有分枝生长的趋势而命名 ❖ 主要特点
▪ 细长弯曲，分枝状生长 ▪ 细胞壁含有大量脂质（分枝菌酸） ▪ 常用抗酸染色鉴定，呈抗酸染色阳性 ▪ 引起疾病都呈慢性，并伴肉芽肿
胞 ❖ 多为条件致病菌 ❖ 致病菌：白喉棒状杆菌
-
第一节 白喉棒状杆菌
(Corynebacterium diphtheriae)
12
-
一、 生物学性状
形态与染色
❖ 菌体细长微弯，一端或两端膨大呈棒状, 常排列呈V、L形
❖ Albert 染 色 ， 可 出 现 异 染 颗 粒 metachromatic granule，在鉴定时有重 要意义
-
第一节 结核分枝杆菌 (Mycobacterium tuberculosis)
31
-
结核分枝杆菌
❖ 俗称结核杆菌，引起人类结核病 ❖ 致病菌主要为结核分枝杆菌（M. tuberculosis)、牛
分枝杆菌(M. bovis) ❖ 世界上1/3人感染，70%在亚洲 ❖ 世界防治结核病日：3月24日
声带麻痹--声音嘶哑
软颌麻痹--吞咽困难
• 心肌---心肌炎
-
白喉假膜
-
三、免疫性
抗毒素免疫
❖感染后机体可获得牢固的免疫力
❖机体还可通过其它方式获得免疫力：
▪ 六月以下婴儿---------母亲 ▪ 成人---------------------隐性感染、疫苗
▪ 白喉抗毒素---皮肤试验、早期使用 ▪ 抗生素
-
第二节 其他棒状杆菌
❖ 大多不产生外毒素 ❖ 很少有异染颗粒 ❖ 大多正常寄生于人体，为条件致病菌
-
分枝杆菌属
(Mycobacterium)
27
-
❖ 一类细长弯曲的杆菌，因有分枝生长的趋势而命名 ❖ 主要特点
▪ 细长弯曲，分枝状生长 ▪ 细胞壁含有大量脂质（分枝菌酸） ▪ 常用抗酸染色鉴定，呈抗酸染色阳性 ▪ 引起疾病都呈慢性，并伴肉芽肿
胞 ❖ 多为条件致病菌 ❖ 致病菌：白喉棒状杆菌
-
第一节 白喉棒状杆菌
(Corynebacterium diphtheriae)
12
-
一、 生物学性状
形态与染色
❖ 菌体细长微弯，一端或两端膨大呈棒状, 常排列呈V、L形
❖ Albert 染 色 ， 可 出 现 异 染 颗 粒 metachromatic granule，在鉴定时有重 要意义
-
第一节 结核分枝杆菌 (Mycobacterium tuberculosis)
31
-
结核分枝杆菌
❖ 俗称结核杆菌，引起人类结核病 ❖ 致病菌主要为结核分枝杆菌（M. tuberculosis)、牛
分枝杆菌(M. bovis) ❖ 世界上1/3人感染，70%在亚洲 ❖ 世界防治结核病日：3月24日
声带麻痹--声音嘶哑
软颌麻痹--吞咽困难
• 心肌---心肌炎
-
白喉假膜
-
三、免疫性
抗毒素免疫
❖感染后机体可获得牢固的免疫力
❖机体还可通过其它方式获得免疫力：
▪ 六月以下婴儿---------母亲 ▪ 成人---------------------隐性感染、疫苗
结核分枝杆菌PPT课件
全球总疫情 20亿人口感染了结核菌，现症结核病人2000
万，每年新发病人数800－1000万，每年 300万人死于结核病。 我国疫情 现有活动性肺结核病人600万人，传染性 肺结核病人200万人，每年因结核病死亡25 万人。我国曾感染过结核杆菌的人数超过 5亿。
2000年估算结核发病情况
结
章
核 分 枝 杆 菌
CHAPTER
节
ONE
一
结核分枝杆菌的发现
结核分枝杆菌是结核病的病原菌，俗名结核杆菌。 肺结核俗称“肺痨”，是一个古老的疾病。在几千年前的埃及、印度等文明 古国的文献里就有结核病记载，世界各国的文学经典作品中也有描述。 1882年3月24日，德国人科霍（Koch）在柏林生理学会宣布发现结核分枝 杆菌，距今已有124年，结核病这种“白色瘟疫”仍在严重地威胁人类的健 康。
国家 印度 中国 印度尼西亚 尼日利亚
病人数（百 万） (%
1.86 (21)
1.37 (16)
0.60 (7)
0.35
CHAPTER
一
章
、 生 物 学 特 性
节
ONE
二
三
章 个
方
节 面
：
三
抵培形 抗养态 力特与
性染 色
形态与染色：
细长略带弯曲 无荚膜、无鞭毛，
不形成芽胞 抗酸染色阳性
免疫性（三个“同 时”）
1
同时有迟发型超敏反 应（Ⅳ型变态反应）
5
同时有抗结核的细胞 免疫
4
2
结核病病人发病时机 体：
3
同时有结核分枝杆菌 的感染
有 毒 TB菌
CHAPTER
以前感染过或免疫豚鼠 局部红肿、浅溃疡 不扩散
临床常见细菌—分枝杆菌(病原生物学课件)
生长缓慢
人型结核分枝杆菌、牛型分枝杆菌
非典型分枝杆菌
Ⅰ组
生长缓慢、光产色
堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌
Ⅱ组
生长缓慢、暗产色
瘰疠分枝杆菌
Ⅲ组
生长缓慢、不产色
鸟-胞内分枝杆菌
Ⅳ组
生长快速、
偶发分枝杆菌
麻风分枝杆菌
人工培养基上不生长
第一节 结核分枝杆菌
一、生物学性状1.形态与染色细长略弯，分枝状排列或聚集成团。抗酸染色阳性，菌体染成红色，非抗酸菌染成蓝色。G+，不易着色
＋
100个视野内发现1~9条抗酸菌
2＋
10个视野内发现1~9条抗酸菌
3＋
每个视野内发现1~9条抗酸菌
4＋
每个视野内发现9条以上抗酸菌
(三)临床意义1.致病物质：主要与菌体成份有关。（1）脂质索状因子:引起慢性肉芽肿分枝菌酸：与抗酸性有关蜡质D:具有佐剂作用硫酸脑苷脂:阻碍吞噬磷脂:促类上皮细胞形成，与结核结节形成有关（2）蛋白质：诱发超敏反应（3）糖类：抵抗吞噬作用
分枝杆菌及检验
分枝杆菌（Mycobacterium） 一类细长弯曲的杆菌，因有分枝生长的趋势而得名主要特点细长弯曲，细胞壁含有大量脂质，分枝状生长。常用抗酸染色鉴定（抗酸阳性呈红色）。引起疾病多呈慢性，且伴肉芽肿。
分枝杆菌的分类
分类
生长特性
主要对人致病的分枝杆菌
结核分枝杆菌
犰狳
2.临床意义:1.传播途径：主要是密切接触2.所致疾病：麻风（侵害皮肤、粘膜和神经系统）3.临床分型：瘤型（占20%～30%，传染性强）结核样型（占60%～70%，传染性弱）界线类（可转化为以上两型）
3.防治原则：早发现（检验时，标本通常采用刮片），早隔离、早治疗治疗药物主要有砜类（氨苯砜、苯丙砜、醋氨苯砜）、利福平、氯苯吩嗪及丙硫异烟胺。
人型结核分枝杆菌、牛型分枝杆菌
非典型分枝杆菌
Ⅰ组
生长缓慢、光产色
堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌
Ⅱ组
生长缓慢、暗产色
瘰疠分枝杆菌
Ⅲ组
生长缓慢、不产色
鸟-胞内分枝杆菌
Ⅳ组
生长快速、
偶发分枝杆菌
麻风分枝杆菌
人工培养基上不生长
第一节 结核分枝杆菌
一、生物学性状1.形态与染色细长略弯，分枝状排列或聚集成团。抗酸染色阳性，菌体染成红色，非抗酸菌染成蓝色。G+，不易着色
＋
100个视野内发现1~9条抗酸菌
2＋
10个视野内发现1~9条抗酸菌
3＋
每个视野内发现1~9条抗酸菌
4＋
每个视野内发现9条以上抗酸菌
(三)临床意义1.致病物质：主要与菌体成份有关。（1）脂质索状因子:引起慢性肉芽肿分枝菌酸：与抗酸性有关蜡质D:具有佐剂作用硫酸脑苷脂:阻碍吞噬磷脂:促类上皮细胞形成，与结核结节形成有关（2）蛋白质：诱发超敏反应（3）糖类：抵抗吞噬作用
分枝杆菌及检验
分枝杆菌（Mycobacterium） 一类细长弯曲的杆菌，因有分枝生长的趋势而得名主要特点细长弯曲，细胞壁含有大量脂质，分枝状生长。常用抗酸染色鉴定（抗酸阳性呈红色）。引起疾病多呈慢性，且伴肉芽肿。
分枝杆菌的分类
分类
生长特性
主要对人致病的分枝杆菌
结核分枝杆菌
犰狳
2.临床意义:1.传播途径：主要是密切接触2.所致疾病：麻风（侵害皮肤、粘膜和神经系统）3.临床分型：瘤型（占20%～30%，传染性强）结核样型（占60%～70%，传染性弱）界线类（可转化为以上两型）
3.防治原则：早发现（检验时，标本通常采用刮片），早隔离、早治疗治疗药物主要有砜类（氨苯砜、苯丙砜、醋氨苯砜）、利福平、氯苯吩嗪及丙硫异烟胺。
结核分枝杆菌实验室检测方法(共30张PPT)
确定是否为结核菌．需结合分枝杆菌菌种鉴定和药物敏感 性试验。
灵 敏：21、0 个菌分/反响枝〔TB杆〕； 菌快速液体培养技术
• BD公司推出的BACTEC—MGIT 960全自动 抗酸染色对分枝杆菌非特异，其他如Nocardia〔奴卡〕、Rhodococcus〔红球菌属〕、Legionella micdadei〔军团菌〕、cryptosporidium〔
呈泡沫状，称麻风细胞。 分枝状，无芽孢和鞭毛，因衰老或抗结核药物的
近年来核酸扩增技术和杂交分析技术的开展，为分枝杆菌的检测、鉴定和药敏实验提供了极大的方便，可将诊断时间从几周降低到几天。 萋尼染色法—红色—普通显微镜〔高倍〕 γ干扰素释放试验能较好地为临床效劳 发光二极管荧光显微镜〔LED〕 灵敏度：103 个菌/反响 荧光染色—黄或橘色—荧光显微镜〔低倍〕
检测范围：结核、胞内、鸟、戈登、堪萨斯、偶然、瘰疬、浅黄、土、龟-脓 肿、草、不产色、海-溃疡、金色、苏尔加、蟾蜍、耻垢。
➢ 高 效： 同时检测 17 种分枝杆菌〔包括TB〕 ➢ 快 速：＞4周〔菌种鉴定〕 6 小时 ➢ 灵 敏： 103 个菌/反响
23
结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒
基于rpoB〔利福平〕和katG/inhA〔异烟肼〕的基因突变，对耐多药结核病做 出快速诊断。
• 敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000条菌 时可检出，而培养可检出>10-100条菌.
发光二极管荧光显微镜〔LED〕
• 荧光显微镜本钱高、易损坏、耗电量大、光源寿 命短、显微镜价格昂贵且需要在暗室内工作等， 荧光染色法一直没有在结核病痰涂片诊断中得到 广泛的应用。
• 只需将二极管替换普通光学显微镜的目镜就 相当于一台荧光显微镜，组装的“荧光显微 镜〞结合金胺O染色在结核病痰涂片检查中 有一定的应用价值。
灵 敏：21、0 个菌分/反响枝〔TB杆〕； 菌快速液体培养技术
• BD公司推出的BACTEC—MGIT 960全自动 抗酸染色对分枝杆菌非特异，其他如Nocardia〔奴卡〕、Rhodococcus〔红球菌属〕、Legionella micdadei〔军团菌〕、cryptosporidium〔
呈泡沫状，称麻风细胞。 分枝状，无芽孢和鞭毛，因衰老或抗结核药物的
近年来核酸扩增技术和杂交分析技术的开展，为分枝杆菌的检测、鉴定和药敏实验提供了极大的方便，可将诊断时间从几周降低到几天。 萋尼染色法—红色—普通显微镜〔高倍〕 γ干扰素释放试验能较好地为临床效劳 发光二极管荧光显微镜〔LED〕 灵敏度：103 个菌/反响 荧光染色—黄或橘色—荧光显微镜〔低倍〕
检测范围：结核、胞内、鸟、戈登、堪萨斯、偶然、瘰疬、浅黄、土、龟-脓 肿、草、不产色、海-溃疡、金色、苏尔加、蟾蜍、耻垢。
➢ 高 效： 同时检测 17 种分枝杆菌〔包括TB〕 ➢ 快 速：＞4周〔菌种鉴定〕 6 小时 ➢ 灵 敏： 103 个菌/反响
23
结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒
基于rpoB〔利福平〕和katG/inhA〔异烟肼〕的基因突变，对耐多药结核病做 出快速诊断。
• 敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000条菌 时可检出，而培养可检出>10-100条菌.
发光二极管荧光显微镜〔LED〕
• 荧光显微镜本钱高、易损坏、耗电量大、光源寿 命短、显微镜价格昂贵且需要在暗室内工作等， 荧光染色法一直没有在结核病痰涂片诊断中得到 广泛的应用。
• 只需将二极管替换普通光学显微镜的目镜就 相当于一台荧光显微镜，组装的“荧光显微 镜〞结合金胺O染色在结核病痰涂片检查中 有一定的应用价值。
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3
常用技术
传统实时荧光定量PCR检测 半巢式全自动实时荧光定量PCR检测 环介导等温扩增检测 实时荧光核酸恒温扩增检测 交叉引物恒温扩增检测 基因探针检测
3/31/2020
4
抗酸染色
1.阳性率30% 2.无法区分TB or NTB
每张检查3-5min或更长时间→阳性率低因素之一
1.假阳性率高 2.结合抗酸染色
Xpert MTB/RIF
一种半巢式实时荧光PCR体外诊 断技术，可以检测结核分枝杆菌以 及利福平耐药性；
针对rpoB基因81bp利福平耐药 核心区间（RRDR）设计引物、探针 。5个探针结合到野生型，而不是突 变体目标。每个探针用不同的荧光 染料标记，允许同时检测。
3/31/2020
8
痰标本与处理液 1：2混合
吸取2ml处理样品 到反应盒
系统内自动完成
标本自动 清洗过滤
超声裂解 DNA提纯
DNA和PCR反应 试剂混合
半巢式实时荧光 定量核酸扩增检
测
打印检 测报告
将反应盒放入检测模块 （手工操作完成）
3/31/2020
获得检测结果时间：1小时50分钟
9
MTB/RIF检测对MDR-TB的防控
“结核+利福平耐药”对多耐结核控制产生的效果最 为显著。即便补充异烟肼耐药，能提升的效果有限。
荧光染色
3/31/2020
5
结核菌需要先培养出来（2-6周） 再加入不同浓度抗菌药物的培养基中继续培养4-8周报告药敏结果
3/31/2020
6
2014年WHO关于结核诊断的标准
肺结核 ✓所有患者，包括儿童，当疑似肺结核并可咳痰时，应送2份痰做 涂片镜检 或 1份痰做Xpert MTB/RIF检测 ✓对于涂阴疑似肺结核患者，应当使用Xpert MTB/RIF 或培养 进行 诊断
结核分枝杆菌的核酸检测：
痰液、支气管灌洗液、支气管抽吸物、肺穿刺物、肺 活检标本、胃灌洗液、体液、组织、脓肿物、吸出的脓液 、创伤标本、大便标本、血液（GeneXpert除外）、病理切 片
3/31/2020
14
样本类型（二）
分枝杆菌菌种鉴定 临床分枝杆菌分离培养物
▪ INH单耐药的患者通常不会考虑立即改变治疗方案，与此相反，对RIF单耐药的患者，无 论INH是否耐药，都会采取与耐多药患者相同的治疗方案1。
▪ 约90%利福平耐药的结核患者同时异烟肼耐药，也就是耐多药结核患者2。
1. Sven O. Friedrich et al,. Suitability of Xpert MTB/RIF and Genotype MTBDRplus for Patient Selection for a Tuberculosis Clinical Trial. Journal of Clinical Microbiology. 2011/31/2020
13
样本类型（一）
抗酸杆菌涂片镜检：
痰液、支气管灌洗液、支气管抽吸物、肺穿刺物、肺 活检标本、胃灌洗液、体液、组织、脓肿物、吸出的脓液 、创伤标本、大便标本
分枝杆菌分离培养：
痰液、支气管灌洗液、支气管抽吸物、肺穿刺物、肺 活检标本、胃灌洗液、体液、组织、脓肿物、吸出的脓液 、创伤标本、大便标本、血液
实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进 行定量分析的办法。
3/31/2020
12
目的基因片段 方法
时间 检测敏感度 优点
缺点
Xpert MTB/RIF
rpoB 半巢式实时荧光PCR
TB-LAMP
gryB及IS6110 环介导恒温扩增
结核杆菌DNA
IS6110 实时荧光定量PCR
2小时
3/31/2020
2
3/31/2020
结核分枝杆菌核酸检测
增加分子生物学阳性可以作为确诊标
准，及强调病原学检查的重要性。
3.4.2 分子生物学检查 结核分枝杆菌核酸检测阳性。 4 诊断原则 肺结核的诊断是以病原学（包括细菌学 、分子生物学）检查为主，结合流行病 史、临床表现、胸部影像、相关的辅助 检查及鉴别诊断等，进行综合分析做出 诊断。以病原学、病理学结果作为确诊 依据。 5.3 确诊病例 结核分枝杆菌核酸检测阳性，及胸部影 像学检查支持即可确诊。
耐药结核 ✓当患者具有耐药结核的风险，或者合并HIV感染，或者病情严重 时，应使用Xpert MTB/RIF做初始诊断；
肺外结核 ✓所有患者，包括儿童，怀疑有肺外结核时，应当采集相应的样本 进行微生物学和组织学检查；优先推荐使用Xpert MTB/RIF 做初 始诊断
3/31/2020
7
GeneXpert
2. Xichao Ou et al. A feasibility study of Xpert MTB/RIF test at the peripheral level laboratory in China. International Journal of Infectious Diseases. 2015 (31):41-46.
环介导等温扩增仪（TB-LAMP）
体外定性检测结核分枝杆菌复合群； 在恒温条件下进行基因扩增反应； 4种引物识别6个区域，特异性高； 扩增反应效率高，67℃，40min。 主要优点在于对实验室仪器的依赖程度较 小，而且试剂成本较低。
3/31/2020
11
传统实时荧光定量PCR检测
目的：定量检测人标本中的结核分枝杆菌核酸 原理：PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累计
结核分枝杆菌核酸及 血清学检测
唐媛媛 潍坊市第二人民医院 检验科
2
1
结核分枝杆菌核酸检测是检测结核分枝杆菌特异的核酸 序列；
阳性结果提示该检测结核分枝杆菌核酸的存在，在排除 核酸污染的情况下，可确定该检测标本中存在结核分枝 杆菌。
结核分枝杆菌核酸检测较常采用的目的片段有16SrRNA、 IS6110、MBP64、rpoB、hsp65等
1小时
131菌条/ml
100菌条/ml
全自动、同时检测利福 67℃恒温扩增，扩增
平耐药基因、特异性高，时间短，特异性高，生
生物安全性高
物安全性高
2.5小时
1000～10000菌条/ml
适合大批量筛查，低费 用
最多一次同时检测八个 标本用量较少，除痰标 假阳性，易污染，需专
样本
本以外的标本需进一步 业人员操作
常用技术
传统实时荧光定量PCR检测 半巢式全自动实时荧光定量PCR检测 环介导等温扩增检测 实时荧光核酸恒温扩增检测 交叉引物恒温扩增检测 基因探针检测
3/31/2020
4
抗酸染色
1.阳性率30% 2.无法区分TB or NTB
每张检查3-5min或更长时间→阳性率低因素之一
1.假阳性率高 2.结合抗酸染色
Xpert MTB/RIF
一种半巢式实时荧光PCR体外诊 断技术，可以检测结核分枝杆菌以 及利福平耐药性；
针对rpoB基因81bp利福平耐药 核心区间（RRDR）设计引物、探针 。5个探针结合到野生型，而不是突 变体目标。每个探针用不同的荧光 染料标记，允许同时检测。
3/31/2020
8
痰标本与处理液 1：2混合
吸取2ml处理样品 到反应盒
系统内自动完成
标本自动 清洗过滤
超声裂解 DNA提纯
DNA和PCR反应 试剂混合
半巢式实时荧光 定量核酸扩增检
测
打印检 测报告
将反应盒放入检测模块 （手工操作完成）
3/31/2020
获得检测结果时间：1小时50分钟
9
MTB/RIF检测对MDR-TB的防控
“结核+利福平耐药”对多耐结核控制产生的效果最 为显著。即便补充异烟肼耐药，能提升的效果有限。
荧光染色
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结核菌需要先培养出来（2-6周） 再加入不同浓度抗菌药物的培养基中继续培养4-8周报告药敏结果
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2014年WHO关于结核诊断的标准
肺结核 ✓所有患者，包括儿童，当疑似肺结核并可咳痰时，应送2份痰做 涂片镜检 或 1份痰做Xpert MTB/RIF检测 ✓对于涂阴疑似肺结核患者，应当使用Xpert MTB/RIF 或培养 进行 诊断
结核分枝杆菌的核酸检测：
痰液、支气管灌洗液、支气管抽吸物、肺穿刺物、肺 活检标本、胃灌洗液、体液、组织、脓肿物、吸出的脓液 、创伤标本、大便标本、血液（GeneXpert除外）、病理切 片
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样本类型（二）
分枝杆菌菌种鉴定 临床分枝杆菌分离培养物
▪ INH单耐药的患者通常不会考虑立即改变治疗方案，与此相反，对RIF单耐药的患者，无 论INH是否耐药，都会采取与耐多药患者相同的治疗方案1。
▪ 约90%利福平耐药的结核患者同时异烟肼耐药，也就是耐多药结核患者2。
1. Sven O. Friedrich et al,. Suitability of Xpert MTB/RIF and Genotype MTBDRplus for Patient Selection for a Tuberculosis Clinical Trial. Journal of Clinical Microbiology. 2011/31/2020
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样本类型（一）
抗酸杆菌涂片镜检：
痰液、支气管灌洗液、支气管抽吸物、肺穿刺物、肺 活检标本、胃灌洗液、体液、组织、脓肿物、吸出的脓液 、创伤标本、大便标本
分枝杆菌分离培养：
痰液、支气管灌洗液、支气管抽吸物、肺穿刺物、肺 活检标本、胃灌洗液、体液、组织、脓肿物、吸出的脓液 、创伤标本、大便标本、血液
实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进 行定量分析的办法。
3/31/2020
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目的基因片段 方法
时间 检测敏感度 优点
缺点
Xpert MTB/RIF
rpoB 半巢式实时荧光PCR
TB-LAMP
gryB及IS6110 环介导恒温扩增
结核杆菌DNA
IS6110 实时荧光定量PCR
2小时
3/31/2020
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3/31/2020
结核分枝杆菌核酸检测
增加分子生物学阳性可以作为确诊标
准，及强调病原学检查的重要性。
3.4.2 分子生物学检查 结核分枝杆菌核酸检测阳性。 4 诊断原则 肺结核的诊断是以病原学（包括细菌学 、分子生物学）检查为主，结合流行病 史、临床表现、胸部影像、相关的辅助 检查及鉴别诊断等，进行综合分析做出 诊断。以病原学、病理学结果作为确诊 依据。 5.3 确诊病例 结核分枝杆菌核酸检测阳性，及胸部影 像学检查支持即可确诊。
耐药结核 ✓当患者具有耐药结核的风险，或者合并HIV感染，或者病情严重 时，应使用Xpert MTB/RIF做初始诊断；
肺外结核 ✓所有患者，包括儿童，怀疑有肺外结核时，应当采集相应的样本 进行微生物学和组织学检查；优先推荐使用Xpert MTB/RIF 做初 始诊断
3/31/2020
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GeneXpert
2. Xichao Ou et al. A feasibility study of Xpert MTB/RIF test at the peripheral level laboratory in China. International Journal of Infectious Diseases. 2015 (31):41-46.
环介导等温扩增仪（TB-LAMP）
体外定性检测结核分枝杆菌复合群； 在恒温条件下进行基因扩增反应； 4种引物识别6个区域，特异性高； 扩增反应效率高，67℃，40min。 主要优点在于对实验室仪器的依赖程度较 小，而且试剂成本较低。
3/31/2020
11
传统实时荧光定量PCR检测
目的：定量检测人标本中的结核分枝杆菌核酸 原理：PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累计
结核分枝杆菌核酸及 血清学检测
唐媛媛 潍坊市第二人民医院 检验科
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结核分枝杆菌核酸检测是检测结核分枝杆菌特异的核酸 序列；
阳性结果提示该检测结核分枝杆菌核酸的存在，在排除 核酸污染的情况下，可确定该检测标本中存在结核分枝 杆菌。
结核分枝杆菌核酸检测较常采用的目的片段有16SrRNA、 IS6110、MBP64、rpoB、hsp65等
1小时
131菌条/ml
100菌条/ml
全自动、同时检测利福 67℃恒温扩增，扩增
平耐药基因、特异性高，时间短，特异性高，生
生物安全性高
物安全性高
2.5小时
1000～10000菌条/ml
适合大批量筛查，低费 用
最多一次同时检测八个 标本用量较少，除痰标 假阳性，易污染，需专
样本
本以外的标本需进一步 业人员操作