虎杖中游离羟基蒽醌成分的提取和分离
不同提取方法对虎杖中蒽醌类成分及其抗氧化活性影响的研究_刘建华

药理药化收稿日期:2006-09-26; 修订日期:2006-12-26作者简介:刘建华(1977-),女(汉族),河南浚县人,现任河南农业大学牧医工程学院讲师,硕士学位,主要从事中草药活性成分物质基础研究工作.不同提取方法对虎杖中蒽醌类成分及其抗氧化活性影响的研究刘建华1,韩立强1,赵汉雨2,莫 娟1,张素梅1,潘玉善1(1.河南农业大学牧医工程学院,河南郑州 450002;2.河南农业大学机电工程学院,河南郑州 450002)摘要:目的研究不同提取方法对虎杖蒽醌类成分及其抗氧化作用的影响。
方法采用回流、索氏、微波及超声四种提取方法,测定四种提取液中的游离蒽醌和总蒽醌的含量;采用DPPH ,FRAP 两种方法测定其抗氧化活性,并分析蒽醌类成分和抗氧化活性之间的关系。
结果在对游离蒽醌的测定中以索氏法为最高(0.53%),其次为超声(0.45%),各种方法之间相比差异显著(P <0.05);在对总蒽醌的测定中,结果如下:索氏(1.16%)>超声(1.15%)>微波(1.04%)>回流(0.80%);抗氧化活性测定发现,以回流液的抗氧化能力最强,其次是微波,二者与超声和索氏的相比有显著性差异(P <0.05);相关性分析发现,蒽醌的含量与抗氧化活性呈显著的负相关(P <0.01)。
结论不同提取方法影响虎杖蒽醌类成分和抗氧化活性,蒽醌类成分和抗氧化活性之间具有负相关的关系。
关键词:提取方法; 虎杖; 蒽醌; 分光光度法; 抗氧化中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2007)04-0850-03E ffect of D ifferent Extraction M et hods on t he Content of Anthroquinone Co m pound and its Antiox i d ative Activity in Polygonu m cuspidatu m Sieb .et Zucc .L I U J ian -hua 1,HAN L i -qiang 1,ZHAO H an -yu 2,M O J uan 1,ZHANG S u -m e i 1,PAN Y u -shan1(1.Engineering Colle ge of Ani m a lHusbandry and Veterinary Scie nc e ,H e nan Agricult u ralUniversity ,Zhe ngzhou 450002,China ;2.M ec han ic a l and E lectric a l Eng i n eeri n g Colle ge ,H e nan Agricultura lU niversity ,Zhe ngzhou 450002,China )Abst ract :O b jective To explore t he eff ec t of differen t ex traction m ethods on the conten t o f ant h roquinone compound and its an -tiox i dati ve ac tiv it y in Pol ygonu m cuspi da t u m S i eb .e t Zucc ..M eth o d s A n t hroqui none co m pound w as extrac t ed re s pecti ve l y by re -fl ux m ethod ,Soxhlet ex trac tion m e t hod ultrasound w ave m ethod and m icrow ave -assist ed ex tracti on .T he free and to t a l anthroqu i -none conten t and its antioxidati ve ac ti v it y w as de t e r m ined by spec tropho t om etry.T he correla tion be t w een ant hroquinone compound and anti ox i da tive activ ity wa s ana l y zed .Resu lts There w ere si gnificant difference s i n the ex tracti on conten t of free anthroquinone content a m ong t he four extracti on m e t hod sta t ed (P <0.05),Soxhlet ex trac tion me t hod w as t he h i ghest (0.53%),u ltra sound w ave m ethod w as be tter (0.45%).In t he de t e r m ina tion o f tota l an t hroquinone ,t he re s u lt w as :Soxhlet ex tracti on me t hod (1.16%)>u ltrasound wave me t hod (1.15%)m icro w ave -assisted >refl ux m ethod >ex traction .The re flux m e t hod w as be tter t han m icro -w ave -assist ed extrac ti on ,compared w it h Soxhlet ex traction me t hod and ultra s ound w ave m e t hod .T he re w e re significan t differ -ence s i n t he de ter m ination of its antiox i dan t ac tivit y (P <0.05).There w as sign ificant nega tive co rre l a tion be t ween anthroquinone compound and its anti ox i da tive acti v ity (P <0.01).Con cl u si on A nt h roquinone co m pound and antiox i dati ve acti v ity in Pol ygo -nu m cuspida t u m S ieb .e tZ ucc .w as aff ec ted by d iffe rent ex tracting me t hods ,t here wa s neg ative co rre lati on bet ween anthroquinone compound and antioxidative ac tivit y .K ey w ords :Ex tracti on m ethod ; Pol ygonu m cus pi da t um S ieb .e t Zucc .; A throquinone compound ; Spec trophotome try ; A nti ox i da tive acti v ity 虎杖系蓼科蓼属植物虎杖Polygonu m cus pi datu m S ieb .e t Zucc .的根茎和根,具有抗菌、抗病毒等广泛的治疗作用[1]。
虎杖蒽醌实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 学习和掌握虎杖蒽醌的提取和鉴定方法。
2. 了解虎杖蒽醌的药理作用及其在中药中的应用。
3. 提高实验室操作技能和实验数据分析能力。
二、实验原理虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc.)是蓼科蓼属植物,其根茎和茎叶中含有丰富的蒽醌类化合物,其中以虎杖蒽醌为主。
虎杖蒽醌具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种药理作用。
本实验采用溶剂提取法提取虎杖中的蒽醌类化合物,并通过薄层色谱法进行鉴定。
三、实验材料与仪器材料:1. 虎杖根茎(干燥)2. 乙醇3. 氯仿4. 硅胶薄层板5. 香草醛6. 浓硫酸7. 氢氧化钠溶液8. 水合氯醛9. 无水硫酸钠10. 氢氧化钠乙醇溶液仪器:1. 水浴锅2. 热风干燥箱3. 薄层色谱仪4. 分析天平5. 离心机6. 电子显微镜7. 滴定管四、实验方法与步骤1. 提取(1)称取干燥的虎杖根茎10g,用乙醇浸泡过夜。
(2)将浸泡后的虎杖根茎放入索氏提取器中,用乙醇回流提取4小时。
(3)提取液过滤,滤液浓缩至近干,加入氯仿溶解。
(4)将氯仿溶液转移至分液漏斗中,用氢氧化钠溶液萃取,分取有机层。
(5)有机层用无水硫酸钠干燥,过滤,滤液浓缩至近干。
(6)残渣用乙醇溶解,定容至10ml,得到虎杖蒽醌提取液。
2. 鉴定(1)薄层色谱法① 点样:取虎杖蒽醌提取液、香草醛溶液和对照品溶液,分别点于硅胶薄层板上。
② 展开:将薄层板置于展开缸中,用氯仿-甲醇-醋酸(体积比8:1:1)为展开剂,展开至前沿。
③ 显色:取出薄层板,晾干,喷以浓硫酸-水合氯醛(体积比1:1)溶液,加热至斑点显色。
④ 比较鉴定:将展开后的薄层板与对照品进行比移值(Rf值)比较,鉴定虎杖蒽醌的存在。
五、实验结果与分析1. 通过薄层色谱法,在展开后的薄层板上观察到与对照品相同的斑点,说明虎杖中存在蒽醌类化合物。
2. 通过实验,成功提取并鉴定了虎杖中的蒽醌类化合物,为虎杖的药理作用研究提供了实验依据。
虎杖中蒽醌类成分的提

虎杖中蒽醌类成分的提取与分离的实验原理及产物得率的因素演讲者:张世雄+虎杖为蓼科植物虎杖的干燥根及根茎。
+中药化学成分++虎杖+根和根茎含游离蒽醌及蒽配甙,主要为大黄素(emodin),大黄素甲醚(Physcion)[1‐3],大黄酚(chrysopha-nol)[1,2],蒽甙(anthraglycside)A即大黄素甲醚(8-O‐β‐D‐葡萄糖甙(Physcion‐8-O‐β‐D‐glucoside)[4],蒽甙(anthraglycoside)B即大黄素8-O‐β‐D‐葡萄糖甙(emodin-8-O‐β‐D‐glucoside)[3,4],迷人醇(fallacinol),6‐羟基芦荟大黄素(citreorsein),大黄素‐8‐甲醚(questin),6‐羟基芦荟大黄素‐8‐甲醚(questinol)[5]等。
还含芪类化合物:白藜芦醇(resveratrol)即是3,4’,5‐三羟基芪(3,4’,5-tri-+hydroxystilbene),虎杖甙(Polydatin)即白藜芦醇3‐O‐β‐D‐葡萄糖甙(rerveratrol‐3‐O‐β‐D‐glucoside)[3,6],又含原儿茶酸(Protocate-chuic acid),右旋儿茶精(catechin),2,5-二甲基‐7‐羟基色酮(2,5-dimethyl‐7‐hydroxychromone),7‐羟基‐4‐甲氧基‐5‐甲基香豆精(7‐hydroxyl‐4‐methoxy‐5‐methyl coumarin),2‐甲氧基‐6‐乙酰基‐7‐甲基胡桃配(2-methoxy-6-acetyl-7-methyljuglone),决明蒽酮‐8‐葡萄糖甙(torachrysone-8-O‐D-glucoside)[5],β‐谷甾醇葡萄糖甙(β-sitosterol glucoside)[3]以及葡萄糖(glucose),鼠李糖(rhamnose)[1],多糖[7],氨基酸12.99%和铜、铁、锰、锌、钾及钾盐[8]等。
中药中蒽醌类化学成分的提取分离技术

•熟练进行大黄中 蒽醌类化合物的 提取、分离及鉴 定操作。
•学会大黄中大蒽 醌类化合物的色 谱鉴定技术。
•学习目的 •知识要求 •能力要求
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中药中蒽醌类化学成分的提取分离技 术
•二 大黄中游离蒽醌的提取分离技术
• 大黄为蓼科多年生草本植物掌叶大黄(Rheum palmatum L.)、(植物 拉丁名按药典要求输入)唐古持大黄(Rheum tanguticum Maxim. ex Balf.)、药用大黄(Rheum officinale Baill)的干燥根及根茎。具有清热泻 下、活血化瘀等多种作用。
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•仪器的选择Βιβλιοθήκη •溶剂的选择•萃 •提取的适用范围 取
法
•操作过 程
•优缺点
•基本原则 •萃取技术的操作
•萃取剂的选择
中药中蒽醌类化学成分的提取分离技 术
•回流提取法
• (1)常用溶剂 有机溶剂。 • (2)仪器装置 回流加热装置。 • (3)操作过程 将药材粗粉装于圆底烧瓶中→加入适量溶剂→水 浴中加热回流提取1h→过滤(残渣重复提取2次,合并提取液)→ 提取液。 • (4)提取范围 不适用于对热不稳定及易分解的成分的提取。 • (5)提取优缺点 提取效率比冷浸法高。但装置较复杂。
(四) 蒽醌的层析检识
可用
•1.纸层析
•• 游离羟基蒽醌类的纸层析一般在中性溶剂系统中进行,可用水、乙醇、丙酮等
与石油醚、苯等混合,使达到饱和后取极性小的有机溶剂层进行展开。
•几种蒽醌类化合物纸层析的比移值
Rf值 种类
展开剂 丙酮:石油醚:水(1:1:3)混合 石油醚(36~60℃):97%甲醇
液的上层
•到般加来说入,的天溶然药剂物中化,学成而分其在它常温成下分多仍半是留固在体原物提质,取常液具中有结。晶如的此通性反,复因多此,次可,根 据分将溶纯所解化需度方成得法不。分同但萃并,取不用能结出利晶来用法的结来分晶达法到离直分方接离法进、行纯。提化取、液精的制分的离目和的纯。化结晶,法因是为过实多验的室杂常质用会的干成
虎杖鞣质的提取分离

乙醇冷浸
乙醇浸液
减压浓缩
浸膏
加水后,用氯仿回流
水液氯仿液(羟基蒽醌类化合物)
醋酸乙酯萃取,滤除萃取
过程产生的沉淀
水层(弃去)醋酸乙酯层
减压浓缩后,水溶,再用乙醚萃取
乙醚层水层
(杂质弃去)活性碳处理后,滴加咖啡碱
溶液静置,倾滤胶状沉淀
沉淀
用少量甲醇溶解后,加水稀释,
加入等体积氯仿萃取数次
氯仿层水层
(咖啡碱)
(1)法(2)法
冷冻干燥醋酸乙酯萃取
粗虎杖鞣质醋酸乙酯液
(含量约68%)脱水,减压浓缩
粗虎杖鞣质
虎杖中蒽醌类的提取分离及鉴定.PPT文档共21页

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26、我们像鹰一样,生来就是自由的 ,但是 为了生 存,我 们不得 不为自 己编织 一个笼 子,然 后把自 己关在 里面。 ——博 莱索
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27、法律如果不讲道理,即使延续时 间再长 ,也还 是没有 制约力 的。— —爱·科 克
பைடு நூலகம்
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28、好法律是由坏风俗创造出来的。 ——马 克罗维 乌斯
谢谢!
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29、在一切能够接受法律支配的人类 的状态 中,哪 里没有 法律, 那里就 没有自 由。— —洛克
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30、风俗可以造就法律,也可以废除 法律。 ——塞·约翰逊
61、奢侈是舒适的,否则就不是奢侈 。——CocoCha nel 62、少而好学,如日出之阳;壮而好学 ,如日 中之光 ;志而 好学, 如炳烛 之光。 ——刘 向 63、三军可夺帅也,匹夫不可夺志也。 ——孔 丘 64、人生就是学校。在那里,与其说好 的教师 是幸福 ,不如 说好的 教师是 不幸。 ——海 贝尔 65、接受挑战,就可以享受胜利的喜悦 。——杰纳勒 尔·乔治·S·巴顿
虎杖中蒽醌类成分及白

实验方法
1.乙醇总提取 液的制备 2.总游离蒽醌 的分离
5.鉴识 3.游离蒽醌的 分离 4.白藜芦醇苷 的分离
总游离蒽醌的分离
将提取物加入15ml水稀释至分 液漏斗中,用乙醚萃取 (25ml×2.20ml×4)合并乙醚 为总游离蒽醌,取25ml乙醚至 分液漏斗中,来回摇晃,分层, 下层为水液,从下口放至小三 角瓶中,从上口到出乙醚至大 三角瓶中;将水液再倒入分液 漏斗中,再加入新的乙醚25ml 来回摇晃分层,同法操作6次。 得到两个三角瓶,小三角瓶贴 上标签,写上名字,放冰箱中, 大三角瓶里为乙醚液。
中性脂溶性成分的分离
2%NaOH萃取过的 乙醚液,用水洗至 中性,取20ml蒸馏 水,萃取乙醚,3 次以上,至乙醚为 中性,合并乙醚液, 以无水Na2SO4脱水, 回收乙醚得残留物, 即得中性脂溶性成 分。
白藜芦醇苷的分离
将总游离蒽醌中的乙醚萃取后的水层, 置250ml烧杯中,用水润洗至150ml, 放水浴锅中加热至无乙醚味,搅拌混 合后,电炉上加热10min,放冷过滤。 滤液放冷后置分液漏斗中,家活性炭 2g电炉煮沸20min趁热过滤。滤液放冷 后移至分液漏斗中,用乙酸乙酯萃取7 次(40×3,30×4),合并乙酸乙酯萃 取液,安装回收装置,回收溶剂至干, 残留物用适量10ml,80%乙醇溶解,经
游离蒽 醌的分 离 2.大黄素 -6-甲醚 的分离 1.大黄素 的分离 3.中性脂 溶性
大黄素的分离
将乙醚液移至分液漏斗中,用5%NaHCO₃水 溶液取4次(20ml×2,15ml×2)弃去NaHCO₃ 液。 乙醚液移至分液漏斗中,取20ml 5%NaHCO₃ 水溶液至分液漏斗中,同法操作。小烧瓶 中溶液弃去。 乙醚液再用5%Na2CO3水层液萃取9次 (25ml×3,20ml×3,15ml×4)。下层为水 层,从下口放出至500ml烧瓶中,上层为乙 醚液,不动: 合并碱液,水浴锅上挥去烧瓶碱液中的乙 醚,边搅拌边加热,挥至无乙醚味,放凉, 滴加6NHCL调PH=2(溶液颜色变黄)稍放置, 抽滤(抽滤纸加布氏漏斗),要沉淀,沉 淀水洗至中性,干燥,称重,用8 ~12倍 量95%乙醇中结晶,得大黄素结晶。
说明虎杖中葱醌类成分的提取与分离流程

说明虎杖中蔥醌类成分的提取与分离流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成,希望大家下载以后,能够帮助大家解决实际的问题。
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<实验> 虎杖中游离羟基蒽醌成分的提取和分离
虎杖为蓼科植物虎杖(Polygonumcus pidatum siedet Zucc)的根及根茎。别名阴阳莲,
花斑竹。味苦、性微寒。能清热解毒、祛风利湿、利尿通淋、祛痰、止咳、通经等。主要用
于湿热黄疸、风湿痹痛、淋浊带下、经闭、烫伤。
虎杖中含有较多的羟基蒽醌类成分及二苯乙烯类成分。其中主要有大黄素、大黄、大
黄素-6-甲醚、大黄素3-D-葡萄糖苷及β-谷甾醇、鞣质等。虎杖得主要药理作用有抗菌、抗
病毒及镇咳平喘、常用来治疗急性炎症、烧烫伤、肝炎、气管炎等。
一、虎杖中主要成分的结构与性质
1.大黄素(Emodin):橙黄色长针晶(丙酮中结晶为橙色,甲醇中结晶为黄色),
mp256-257℃。几不溶于水,对于下列溶剂的溶介度分别为:四氯化碳0.01%,氯仿0.0718%,
二硫化碳0.009%,乙醚0.14%,苯0.0415。易溶于乙醇,可溶于氨水,碳酸钠和氢氧化钠
水溶液。
OHHOOHCH3O
O
2.大黄酚(Chrysophanol):金黄色六角型片状结晶(丙酮中结晶)或针状结晶(乙醇
中结晶)。mp 196℃,能升华。易溶于乙醚、氯仿、苯、冰乙酸、乙醇, 稍溶于甲醇,难溶
于石油醚,不溶于水、碳酸氢钠和碳酸钠水溶液。可溶氢氧化钠水溶液及热碳酸钠水溶液。
OHOHCH3O
O
3.大黄素6-甲醚,(Emodinmonomethl ether):金黄色针晶,mp207℃,能升华。可溶
于氢氧化钠水溶液,溶解度与大黄酚相似。
OHOH
CH3OCH
O
O
3
4.大黄素6-甲醚6-D-葡萄糖苷(Anthraglycosibe A):黄色针晶(稀甲醇中结晶)
mp230-232℃。
OCH3OOHO
O
CH
3
glu
5.大黄素3-D-葡萄糖苷(Anthraglycoside B):浅黄色针晶(稀乙醇中结晶含1分子水
mp190-191℃。
O
HOCH
glu O
O
OH
3
6.白藜芦醇(Resveratrol):无色针状结晶,mp256-257℃,216℃升华,易溶于乙醚、
氯仿、甲醇、乙醇、丙酮等。
CHCHOHOHHO
7.白藜芦醇葡萄糖苷(polydotinpeceid):无色颗粒状结晶,双熔点分别为130-140℃225~
226℃,易溶于甲醇、乙醇、丙酮、热水,可溶于乙酸乙酯、可溶于碳酸钠和氢氧化钠水溶
液中,稍溶于冷水,难溶于乙醚。
CHCHOHOHO
glu
8.β-谷甾醇
9.鞣质:属缩合鞣质,可溶于醇及水,不溶于苯、乙醚、氯仿等。
另外,虎杖叶、茎中含少量羟基蒽醌类化合物、有机酸、槲皮苷、异槲皮苷、虎杖黄酮
苷、扁蓄苷、金丝桃苷及芸苷、Vtio等。
二、实验原理:
羟基醌类化合物及二苯乙烯类成分,均可溶于乙醇中,故可用乙醇将它们取出来。羟基
蒽醌类易溶于乙醚等弱极性溶剂,白藜芦醇苷在乙醚中溶解度很小,利用它们对乙醚的溶解
性差异使羟基蒽醌类与白藜芦醇苷分离,再利用各羟基蒽醌类结构上的不同所表现酸性不
同,用PH梯度萃取法分离它们。
三、实验方法:
(一)提取
乙醇总提取物的制备:取虎杖粗粉200g,于1000ml圆底烧瓶中回流,第一次加500ml
乙醇回流一小时,第二次加300ml乙醇回流30分钟,第三次加250ml乙醇回流30分钟,
合并三次乙醇提取液,放置,如有沉淀可过滤一次,滤液减压回收乙醇至干,得膏状物。
(二)分离
1.亲脂性成分与亲水性成分的分离:
将上述膏状物加水10ml,乙醚100ml充分振摇后放置,将乙醚液倾于500ml三角瓶中
(水层不可倒出),再于烧瓶中加50ml乙醚振摇,放置,倾出乙醚液,同法操作六次,合
并乙醚液即为亲脂性成分——总游离蒽醌,乙醚提取过的剩余物中含水溶性成分。
2.游离蒽醌分离:
(1)强酸性成分的分高:将上述含总游离蒽醌的乙醚液置100ml分液漏斗中,加5%碳
酸氢钠水溶液40ml萃取(测5%碳酸氢钠PH值),放置使充分分层,若提取过程中乙醚挥
发可补充,分出碱水溶液同法提取二次,合并碱水提取液,在搅拌下缓缓滴加6N盐酸调至
pH=2,注意观察颜色变化,稍放置即可析出沉淀,抽滤,用水洗涤沉淀中性,将沉淀置蒸
发皿上干燥,得强酸性成分。
(2)中等酸性成分——大黄素的分离:碳酸氢钠萃取过的乙醚液用5%碳酸钠溶液(测
5%碳酸钠水溶液的pH值)萃取5~9次,每次40ml,直至萃取液较浅为止。合并碳酸钠提
取液,小心加盐酸调pH3,放置,抽滤,水洗沉淀至中性,抽干,干燥称重。以甲醇一氯仿
或苯一氯仿(1:1)重结晶,得大黄酚和大黄素6-甲醚混合物。
注:大黄酚和大黄素6-甲醚二者相互分离比较困难,在本实验薄层条件下为同一斑点,
可用层析用磷酸氢钙进行柱层析,以石油醚洗脱,下层黄色带洗脱后,以甲醇重结晶可得大
黄酚,上层黄色带洗脱后以甲醇重结晶可得大黄素6-甲醚。
(3)中性成分——甾醇类化合物分离:氢氧化钠萃取过的乙醚液,用水洗至中性,以
无水硫酸钠脱水,回收乙醚得残留物,以甲醇热溶二次(10ml,5ml)过滤合并甲醇液,浓
缩,放置结晶,滤取沉淀并用少量石油醚洗涤,再用甲醇重结晶,得β-谷甾醇,mp136~137℃,
取少许结晶,做醋酐——浓硫酸反应,观察现象。
(三)鉴定
化学检识:分别取大黄素、大黄酚等少许,用乙醚溶解,做如下反应:
A:碱液试验:取试液1ml,加20%NaOH数滴,观察颜色。
B.醋酸镁反应:取试样1ml,加醋酸镁试剂数滴,观察现袋。
2.薄层鉴定:
吸附剂:硅胶—CMC
展开剂:C6H
6
—EtoAc(3:2或97:9)。
显色剂:(1)氨蒸气熏。(2)5%KOH喷雾。