大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定.
大黄中游离蒽醌的提取分离与检识
实验一大黄中游离蒽醌的提取分离与检识（一）目的要求学习羟基蒽醌类化合物的提取分离和检识，通过实验要求：1.掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。
2.掌握用pH梯度萃取法分离不同酸性的羟基蒽醌类化合物。
3.掌握蒽醌类化合物的主要检识方法。
4.熟悉蒽醌类化合物的色谱检识方法。
5.了解用柱色谱法分离蒽醌类成分。
（二）主要化学成分的结构及性质大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim. ex Reg.和药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根及根茎。
大黄中含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚及其苷，总含量约3％～5％。
1．大黄酸(rhein) 分子式C15H8O6，分子量284.21。
黄色针状结晶（升华法），mp.321～322℃，330℃分解。
能溶于碱水、吡啶，略溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚，几不溶于水。
2．大黄素(emodin)分子式C15H10O5，分子量270.23。
橙色针状结晶(乙醇)，mp.256～257℃，能升华。
易溶于乙醇、碱水，微溶于乙醚、氯仿，几不溶于水。
3．芦荟大黄素(aloe-emodin)分子式C16H10O5，分子量270.23。
橙色针状结晶（甲苯），mp.223～224℃。
易溶于热乙醇，可溶于乙醚和苯，并呈黄色；溶于碱液呈红色；氨水及硫酸中呈绯红色。
4．大黄酚(chrysophanol)分子式C15H10O4，分子量254.23。
橙黄色六方形或单斜结晶（乙醇或苯），mp.196～197℃，能升华。
易溶于沸乙醇，可溶于丙酮、氯仿、苯、乙醚和冰醋酸，极微溶于石油醚、冷乙醇，几不溶于水。
5．大黄素甲醚(physcion) 分子式C 16H 12O 5，分子量284.26。
砖红色单斜针状结晶，mp.203～207℃，溶于苯、氯仿、吡啶及甲苯，微溶于醋酸及醋酸乙酯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮。
实验5-1大黄中蒽醌的提取分离与鉴定
实验5-1大黄中蒽醌的提取分离与鉴定实验5 大黄中蒽醌的提取分离与鉴定实验目的：掌握缓冲纸色谱的基本操作技术，能根据缓冲纸色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案；掌握pH梯度萃取法的原理及操作技术；熟悉缓冲液的配制方法、如何选择萃取剂及其用量；了解蒽醌类化合物的鉴定方法。
实验原理：大黄为泻下、清热解毒、活血化瘀中药，有“推陈致新”的作用。
品种繁多，质优者为蓼科植物掌叶大黄（Rheum Palmatum L.）。
药用大黄（Rheum officinale Baill）和唐古特大黄（R·tang uticum Maxim ex Reg）的根。
大黄中具有泻下作用的成分是几种蒽醌衍生物，其中甙是主要的成分，因其泻下作用常强于相应的甙元，甙元主要包括大黄酚、大黄素、大黄酸、芦荟大黄素和大黄素甲醚共五种蒽醌甙元。
大黄的致泻效力与其中的结合性大黄酸含量成正比。
游离的蒽醌甙元几无致泻作用。
具有较强的致泻作用的蒽醌甙有以下几种：大黄酚-1-葡萄糖甙、大黄素-6-葡萄糖甙、芦荟大黄素-8-葡萄糖甙、大黄酸-8-葡萄糖甙、大黄素甲醚葡萄糖甙、还含有蒽醌衍生物的双糖甙，如：大黄素双葡萄糖甙、芦荟大黄素双葡萄糖甙、大黄酚双葡萄糖甙以及番泻甙A 和B，番泻甙C，番泻甙的泻下作用，较蒽醌甙为强，但含量远较后者为少。
近年来，日本人西冈五夫从大黄中分离出四种新的大黄泻下成分，称大黄酸甙A、B、C、D。
除此外还含有大黄鞣酸及相关物质。
如：没食子酸（一部分是游离的，一部分是结合成没食子酰葡萄糖甙），儿茶精，此类鞣质及相关物质有止泻作用与蒽醌衍生物的甙类之泻下作用恰恰相反。
1、大黄酚（chrysopanol）金黄色片状结晶。
Mp196℃（乙醇或苯），能升华，可溶于丙酮、醋酸、氯仿、甲醇、乙醇、热苯，微溶于石油醚、乙醚，不溶于水，NaHCO3和Na2CO3水溶液，可溶于NaOH溶液。
2、大黄素（Emodin）橙黄色针状结晶，mp256～257℃（乙醇或冰醋酸）能升华，其溶解度：乙醚0.14%，苯0.041%, 氯仿0.0718%，几不溶于水，易溶于乙醇，可溶于稀氨水，Na2CO3水溶液。
实验六大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定(二)
实验目的
1. 通过大黄酚及大黄素甲醚的分离试验，掌 握硅胶柱色谱的操作技术。 2. 掌握蒽醌类化合物的化学鉴定及色谱鉴定 技术。
实验原理
大黄中游离蒽醌的极性大小顺序为：大黄酸>大黄 素>芦荟大黄素>大黄素甲醚>大黄酚。前三种可用 pH梯度萃取法分离。 大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用 硅胶柱色谱法进行分离。 总蒽醌及各种分离成分可用色谱法进行鉴别。同时 硅胶柱色谱洗脱液可用色谱法鉴别后，合并单一成 分的洗脱液。来自注意事项
①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在 于植物组织中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可 溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂，用苯时应注意苯蒸气的挥 发，严防中毒； ②所得的氯仿液中如带有酸水液，应该用分液漏斗分出弃去， 并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。氯仿提取 液放置中如有沉淀析出，可滤取之，该沉淀多为大黄素，余 液进行下一步分离试验用。 ③ 分离萃取时一定注意乳化层的分出，不要混入，并且每步 最好用新鲜CHCl3，回洗碱水液。回洗液应弃去，可除去混 入碱液中的大黄素甲醚和大黄酚。 留取5ml的三氯甲烷提取液做总样，供最后层析鉴定用。
仪器、材料与试剂
实验试剂及试药： 大黄药材粗粉2Kg，氯仿500ml 10瓶，浓硫酸2瓶，浓盐酸2 瓶，冰醋酸，苯，乙酸乙酯，碳酸钠（5% Na2CO3溶液 3000ml），碳酸氢钠（5% NaHCO3溶液3000ml），氢氧 化钠（5% NaOH溶液1000ml），氢氧化钾，醋酸镁试剂等。 实验仪器设备： 500ml圆底烧瓶10个，冷凝回流管10只，500ml分液漏斗10 只，500ml烧杯20只，100-250ml量筒10只，常压漏斗（510cm斗径10只），定性滤纸（10cm）2盒，毛细管点样器1 盒，玻璃喷瓶4套，广谱PH试纸5盒，纱布一卷，多孔水浴 锅5台，旋转蒸发仪2台。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、实验目的1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法二、实验原理1.提取原理双向酸水解法，为一相与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。
由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。
根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。
2.分离原理pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。
具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。
以分离酸度不同的蒽醌苷元。
也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。
（1）大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸（-COOH）＞大黄素（β酚-OH）＞芦荟大黄素（醇-OH）＞大黄素甲醚（-OCH3）≈大黄酚（-CH3）（2）大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。
三、实验方法四、 1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程大黄药材（粗粉）50g乙酸乙酯提取液药渣去除下层酸水层，再用蒸馏水水洗2次（50ml/次）直至乙酸乙酯层pH值呈中性乙酸乙酯提取液碱水层乙酸乙酯层滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次）沉淀物（黄色结晶或黄色絮状沉淀）碱水层沉淀过滤，冰醋酸精制滴加浓盐酸，调节溶液萃黄色结晶（大黄酸）沉淀物（橙色结晶或40ml/次）橙色絮状沉淀）沉淀过滤，碱水层丙酮精制橙色结晶（大黄素）节pH=2沉淀物（橙色絮状沉淀）黄色沉淀物乙酸乙酯层沉淀过滤，乙酸乙酯精制硅胶柱色谱黄色针晶洗脱剂为石油醚（60-90℃）（芦荟大黄素）-乙酸乙酯（15：1）大黄酚和大黄素甲醚混合物2.总蒽醌苷元的提取大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2h，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水层，乙酸乙酯提取液用蒸馏水洗2次（20ml/次），将乙酸乙酯放置在锥形瓶中，密封。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定一、实验目的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法二、实验器材材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。
仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。
三、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。
其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。
其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
大黄酸R1=H R2=COOH大黄素R1=CH3R2=OH芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3大黄酚R1=CH3R2=H四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉10g20%H2SO4 150 ml加热1h, 抽滤、干燥滤饼150ml乙醚回流提取1 h乙醚层水层（紫红色）乙醚层HCl 3大黄酸沉淀（粗品）水层（红色）乙醚层HCl 0.25% NaOH大黄素沉淀（粗品）水层（红色）芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚沉淀（混合物）具体操作步骤1. 游离蒽醌的提取（1）酸水解：称取大黄粗粉10g，加20%H2SO4水溶液150mL，在水浴上加热1小时，放冷，抽滤，滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎，置250mL 圆底烧瓶中，加入乙醚150mL回流提取1小时（调45℃，回流即可），得到乙醚提取液。
大黄游离蒽醌实验报告
一、实验目的1. 掌握大黄游离蒽醌的提取方法。
2. 熟悉大黄游离蒽醌的分离与鉴定技术。
3. 了解大黄游离蒽醌的药理作用及临床应用。
二、实验原理大黄为蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄的干燥根及根茎。
大黄中含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚及其苷等成分，其中大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚等游离蒽醌类成分具有显著的生物活性。
本实验采用pH梯度萃取法提取大黄中的游离蒽醌类成分，并通过高效液相色谱法（HPLC）对其进行分离和鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、氯仿、甲醇、乙腈、0.1%磷酸水、Diamonsil C18色谱柱等。
2. 实验仪器：高效液相色谱仪、超声波清洗器、电子天平、旋转蒸发仪、电热恒温水浴锅、紫外可见分光光度计等。
四、实验方法1. 大黄游离蒽醌的提取（1）称取大黄粗粉10g，加入100mL甲醇，超声提取30min。
（2）过滤，滤液浓缩至约10mL。
（3）向浓缩液中加入5mL浓硫酸，搅拌均匀，室温放置过夜。
（4）加入5mL氯仿，剧烈振荡，静置分层。
（5）吸取氯仿层，重复步骤（3）和（4）至氯仿层颜色变浅。
（6）合并氯仿层，无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪浓缩至干。
（7）用甲醇溶解残渣，定容至10mL，得大黄游离蒽醌提取液。
2. 大黄游离蒽醌的分离与鉴定（1）色谱条件：Diamonsil C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸水（75:25）；流速：1mL·min-1；柱温：35℃；检测波长：254nm。
（2）样品处理：取大黄游离蒽醌提取液，过0.22μm微孔滤膜，进样。
（3）数据分析：根据保留时间、峰面积等数据，对大黄游离蒽醌进行鉴定。
五、实验结果与分析1. 大黄游离蒽醌的提取通过pH梯度萃取法，从大黄中成功提取出游离蒽醌类成分。
实验结果显示，大黄中主要含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚等成分。
实验一 大黄中游离蒽醌的提取分离与检识【精选-PPT】
实验一大黄中游离蒽醌的提取分离与检识【精选-PPT】实验一大黄中游离蒽醌的提取分离与检识一. 实验目的1. 熟悉并掌握大黄中游离蒽醌的提取分离与检识的基本原理和方法；2. 学会用硅胶柱层析法分离大黄提取物中的游离蒽醌；3. 学会用TLC法检测游离蒽醌的纯度和确定游离蒽醌的Rf值；4. 了解游离蒽醌的酸碱性质。
二. 实验原理游离蒽醌：是大黄素（还有大黄酸、甙）的主要成分之一。
它是一种有机物，结构中有两个官能团——酮基和芳环。
它的化学性质是一种具有两个官能团的酮类化合物，也是一种大环芳香族化合物，具有吸氧性，容易被还原为蒽醌酚，具有明显的紫外吸收，所以在一般试验室条件下，易被检测到。
大黄提取物中游离蒽醌的提取分离与检识方法：①提取：将大黄粉末催化加热于浓H2SO4溶液中，经水蒸气蒸馏、提取、分液提取游离蒽醌。
②分离：用硅胶柱层析法分离游离蒽醌。
硅胶柱层析法的原理是根据不同的化学性质，通过分配系数，用不同的溶剂作为流动相，将混合物的成分逐一分离出来，从而达到分离的目的。
③检测：用TLC法检测游离蒽醌的纯度和确定游离蒽醌的Rf值。
三. 实验仪器与药品仪器：天平、电热板、恒温水浴、溶液振荡器、玻璃试管、吸滤瓶、硅胶柱、白瓷漏斗、蒸馏器、滴定管、吸管、刮刀、紫外分光光度计等。
药品：大黄提取物、浓H2SO4、90%乙醇、十氢蒽醌、石英硅胶等。
四. 实验步骤1. 提取游离蒽醌取2g大黄粉末加入25ml浓H2SO4液中，加少量的多元醇作为催化剂，保持温度在98℃左右，反应2.5小时。
冷却后将混合液加入烧杯中，加入50ml蒸馏水振荡搅拌。
放置沉淀，用滤纸过滤得到粗品，洗涤过滤渣用水，过滤液集中。
去除多余的水分，用90%乙醇提取游离蒽醌。
2. 硅胶柱层析分离在硅胶柱中装入3g石英硅胶，用去离子水洗涤柱，然后用90%乙醇填充柱床5-10ml，使之不能流出。
将上述提取物均匀地吸入硅胶柱中，柱头用90%乙醇堵住，用90%乙醇洗涤柱。
利用pH梯度萃取法提取中药大黄中的游离蒽醌组分
利用pH梯度萃取法提取中药大黄中的游离蒽醌组分引言中药大黄是一种常用中药材，具有泻下、清热、通经、消肿等功效，被广泛用于中医临床治疗中。
其主要有效成分是蒽醌类化合物，包括大黄素、大黄酚和大黄酸等。
这些蒽醌类化合物具有抗炎、抗菌、抗肿瘤、抗氧化等多种药理活性，因此受到了广泛关注和研究。
为了更好地研究和利用大黄中的蒽醌组分，我们进行了利用pH梯度萃取法提取中药大黄中的游离蒽醌组分的研究。
该研究旨在探索一种简便、高效的提取方法，以便更好地获取中药大黄中的活性成分，并为其在药物开发和临床运用中提供参考。
实验方法1. 药材样品的准备：选取优质的中药大黄作为实验样品，研磨成细粉备用。
2. pH梯度溶液的制备：将不同浓度的盐酸和氢氧化钠溶液配制成pH为2、4、6、8和10的梯度溶液，用于构建pH梯度。
3. pH梯度萃取法提取蒽醌组分：取适量的大黄细粉与不同pH值的溶液混合，并在恒温振荡器中以一定的速率振荡一定时间，使蒽醌组分充分溶解在溶液中。
4. 萃取液的分离与浓缩：将萃取液通过离心或过滤等方法分离出固体颗粒，然后对溶液进行浓缩，得到游离蒽醌组分的浓缩样品。
5. 游离蒽醌组分的分离与鉴定：对浓缩样品进行色谱、质谱等分析，确定其中的蒽醌组分的种类和含量。
实验结果通过pH梯度萃取法提取中药大黄中的游离蒽醌组分，我们得到了如下实验结果：1. 游离蒽醌组分的提取率随pH值的变化呈现不同的趋势。
在pH为2-4的条件下，提取率较低；在pH为6-8的条件下，提取率较高；而在pH为10的条件下，提取率有所下降。
这表明在不同pH条件下，游离蒽醌组分的溶解度和提取效果存在显著差异。
2. 游离蒽醌组分的分析表明，主要包括大黄素、大黄酚和大黄酸等成分。
大黄素的含量较高，占据了游离蒽醌组分的主要成分。
讨论与展望本研究利用pH梯度萃取法成功实现了对中药大黄中游离蒽醌组分的提取，为中药大黄的活性成分研究提供了一种简便、高效的方法。
这一方法仍存在一定的局限性和不足之处，例如提取条件的选择、提取效率的提高、提取液的后处理等方面仍需要进一步优化和改进。
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实验一大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定实验编号:1日期:学时数: 6学时地点:任课教师:实验目的:掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法实验原理:大黄中有多种游离蒽醌及其苷类,总含量约2-5%。
主要有大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚以及它们的葡萄糖苷等。
从大黄中提取分离游离蒽醌时,先用20%硫酸加热使苷类水解，保留滤饼，滤饼用乙醚加热回流提取总蒽醌苷元（游离蒽醌），提取液作TLC鉴识。
实验对象:大黄主要仪器、试剂:电热套、烧杯、20%硫酸、薄层硅胶G 、0.5%CMC-Na。
实验操作步骤:酸水解：取大黄10g ,粉碎，加20%硫酸水溶液100ml，水浴上加热3-4小时,抽滤,滤饼水洗后自然干燥。
铺薄层硅胶G板: 薄层硅胶G :0.5%CMC-Na(1:3)实验注意事项:①加热温度不要太高。
②溶液保持微沸，防止药渣炭化。
③不断搅拌。
后记:实验一大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定实验编号:2日期:学时数: 6学时地点:任课教师:实验目的:1.掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。
2.掌握蒽醌类的色谱鉴别方法。
实验原理:大黄中有多种游离蒽醌及其苷类,总含量约2-5%。
主要有大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚以及它们的葡萄糖苷等。
从大黄中提取分离游离蒽醌时,先用20%硫酸加热使苷类水解，保留滤饼，滤饼用乙醚加热回流提取总蒽醌苷元（游离蒽醌），提取液作TLC鉴识。
实验对象:大黄滤饼主要仪器、试剂:电热套、圆底烧瓶、冷凝管、乙醚、硅胶薄层板、石油醚、乙酸乙酯实验操作步骤:总羟基蒽醌苷元的提取：取干燥滤饼，放入100ml圆底烧瓶中，加入乙醚50ml,回流提取3－4小时，得乙醚提取液。
乙醚提取液经薄层层析检查有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚。
薄层板为硅胶G-CMC-Na,展开剂为石油醚（60-90℃）－乙酸乙酯（７：３），直立展开。
实验注意事项:①加热回流时电热套电压小于50v。
②取石油醚（60-90℃）7ml,乙酸乙酯3ml,混合均匀。
③控制点样量，注意点样斑点位置。
④仔细观察斑点、溶剂前沿移动距离。
后记:结论：在可见光下可看到4个斑点，Rf最大的黄色斑点为大黄酚和大黄素甲醚的混合物，其余3个斑点依Rf由大到小分别为大黄素（橙色斑点），芦荟大黄素（黄色斑点），大黄酸（黄色斑点【实训目的】1、能够运用回流提取法对大黄中总蒽醌类化合物进行提取2、能够熟练运用pH梯度萃取法对大黄中游离蒽醌进行分离.3、正确判断显色反应、薄层色谱的结果【实训原理】大黄中含有大黄素型游离蒽醌及其苷类,本实训利用大黄中的蒽醌类化合物均可溶于乙醇而提取,根据游离蒽醌及蒽醌苷在水和乙醚中溶解度的不同采用萃取方法分离.游离蒽醌的分离是利用各羟基蒽醌类化合物酸性不同,采用pH梯度萃取法进行.【实训材料】圆底烧瓶、冷凝管、研钵、水浴锅、分液漏斗、烧杯、三角瓶、表面皿、试管、层析缸、pH试纸薄层硅胶、CMC-Na、大黄粗粉、95%乙醇、乙醚、盐酸、三氯甲烷、5%KOH、5%Na2CO3、5%NaHCO3、0.5%NaOH、新华色谱滤纸(20cm×7cm)、苯-醋酸乙酯(8∶2)、苯-甲醇(8∶1)、甲苯、氨0.5%醋酸镁、1%大黄酸三氯甲烷溶液、1%大黄素三氯甲烷溶液、1%芦荟大黄素三氯甲烷溶液【实训步骤】1、乙醇总提取物的制备游离蒽醌的提取取大黄粗粉50g,置于500ml圆底烧瓶中,加95%乙醇以约高出生药面为度,置水浴加热回流2～3小时,趁热抽滤.滤渣再以95%乙醇热提二次,趁热抽滤后合并三次乙醇提取液.浓缩乙醇提取液,得到乙醇总提取物.2、总游离蒽醌的提取,亲脂性成分与亲水性成分分离将乙醇总提取物浸膏加水适量混悬,加乙醚150ml于500ml分液漏斗中萃取,充分振荡后放置,倾出醚层,再加50ml乙醚振摇,放置,倾出醚层,同法操作6次,直至乙醚液呈色较浅时为止,合并乙醚液,乙醚溶液含总游离蒽醌.3、蒽醌单体的分离①大黄酸的分离将含有游离蒽醌的乙醚溶液移至250ml的分液漏斗中,加5%NaHCO3水溶液20ml,振摇.放置分层,放出下层NaHCO3溶液,置于另一三角瓶中,上层乙醚溶液留存于分液漏斗中,再加5%NaHCO3溶液15ml萃取一次,每次振摇提取后,放置分层时间应稍久,以免乙醚溶液混在下层水液中,影响分离效果.提取过程中,如乙醚挥发,可酌量补加.合并NaHCO3提取液,注意其呈色,在搅拌下小心滴加盐酸调pH2~3,观察酸化过程中的呈色变化,析出物抽滤收集,干燥后称重.②大黄素的分离留存在分液漏斗中的乙醚液,用5%Na2CO3水溶液每次15～20ml如上法相同萃取数次,直至提取液呈色较浅时为止,约需6～7次,合并Na2CO3提取液,小心滴加盐酸酸化至pH2~3,放置待沉淀析出,抽滤收集析出物经水洗涤,抽干移至表面皿上,干燥后称重.③芦荟大黄素的分离留存在分液漏斗中的乙醚液,用0.5%NaOH水溶液每次15ml萃取3～4次.乙醚溶液再以蒸馏水萃取2～3次,以洗去碱液.合并NaOH和水的提取液,加盐酸调pH2~3,放置.抽滤析出沉淀,收集沉淀,经水洗,抽干移至表面皿上,干燥后称重.④大黄酚和大黄素-6-甲醚的分离留存的乙醚液,置圆底烧瓶中,回收乙醚,放置.抽滤收集沉淀,经水洗,抽干移至表面皿上,干燥后称重.4、鉴定(1)碱液试验:分别取蒽醌化合物结晶少许,置试管中,加1ml乙醇溶解,加数滴5%氢氧化钾试剂振摇,溶液呈红色.(2)醋酸镁试验:分别取各蒽醌化合物结晶少许,置试管中,加1ml乙醇溶解,加数滴0.5%醋酸镁试剂,产生橙、红、紫等颜色.(3)薄层检识吸附剂:硅胶CMC-Na薄层板.样品:各蒽醌成分的1%三氯甲烷溶液对照品:1%大黄酸三氯甲烷溶液;1%大黄素三氯甲烷溶液;1%芦荟大黄素三氯甲烷溶液展开剂:苯-醋酸乙酯(8∶2);苯-甲醇(8∶1)显色:氨熏后观察或喷5%氢氧化钾溶液后观察(4)纸色谱检识支持剂:新华色谱滤纸(中速、20cm×7cm)样品:各蒽醌成分1%三氯甲烷溶液对照品:1%大黄酸三氯甲烷溶液;1%大黄素三氯甲烷溶液;1%芦荟大黄素三氯甲烷溶液展开剂:甲苯显色剂:0.5%醋酸镁甲醇溶液【实训思考】1、在实训过程中采用pH梯度萃取法分离游离蒽醌,萃取过程中若出现乳化现象,应如何处理?2、大黄酚和大黄素甲醚结构相似,请设计分离方法.3、实训中应注意哪些安全问题?实验二芦丁的提取及鉴定实验编号:1日期:学时数: 8学时地点:新校区F楼6楼天然药物化学实验室任课教师:实验目的:学习和掌握用碱提取—酸沉淀提取黄酮苷的原理和方法。
实验原理:槐米中有黄酮苷—芸香苷（芦丁）, 芸香苷（芦丁）是由槲皮素与芸香糖连接而成的二糖苷，能溶于热水。
本试验采用碱提取—酸沉淀提取芸香苷。
实验对象:槐米主要仪器、试剂:电热套、烧杯、石灰水、PH试纸、抽滤瓶。
实验操作步骤:1.提取：槐花米—粉碎—碱水提取—加酸沉淀-—放置—粗品芦丁—精制—芦丁(纯品)。
2.粉碎:称槐米40克，粉碎。
3.碱提:在1000ml烧杯中加入500ml蒸馏水，加热煮沸后，将槐米粗粉投入，继续直火煮沸2-3分钟，在搅拌下，加入石灰乳，调PH8-9，加热保持微沸30分钟，趁热过滤收集，滤渣加160ml蒸馏水, 加入石灰乳，调PH8-9，同上操作再提一次，滤液合并，滤渣弃去。
4.酸沉:将滤液在60-70℃，小心加浓HCL，调PH3-4，放6小时以上，析出沉淀。
实验注意事项:①碱提时加入石灰乳调PH8-9，不要太高。
②溶液保持微沸。
③酸化时将滤液在60-70℃，小心加浓HCL，调PH3-4，不要太低。
后记:实验二芦丁的提取及鉴定(精制)实验编号:2日期:学时数: 8学时地点:新校区F楼6楼天然药物化学实验室任课教师:实验目的:粗品芦丁的精制实验原理:粗品芦丁能溶于热水，去除不溶性杂质，最后用甲醇重结晶。
实验对象:粗品芦丁主要仪器、试剂:电热套、圆底烧瓶、冷凝管、甲醇实验操作步骤:精制：粗品芦丁放在1000ml烧杯中，加500ml蒸馏水，加热煮沸，至全部溶解，趁热抽滤，滤液放冷，即析出黄色沉淀，待沉淀完全后，抽滤，收集沉淀，干燥。
用甲醇重结晶，得精品芦丁。
实验注意事项:（1）用甲醇重结晶时加热回流时电热套电压小于50v。
（2）粗品芦丁全部溶解，趁热抽滤。
（3）重结晶时甲醇的用量应适当，用量过多，则结晶不易析出；用量过少，又会带入较多的杂质。
后记:实验二芦丁的提取及鉴定实验编号:3日期:学时数: 8学时地点:新校区F楼6楼天然药物化学实验室任课教师:实验目的:（1）芦丁的水解，鉴定；（2）掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷、苷元和糖的鉴定方法。
实验原理:，实验对象:精品芦丁主要仪器、试剂:电热套、圆底烧瓶、冷凝管、甲醇、正丁醇、醋酸、葡萄糖、鼠李糖、盐酸、镁粉、醋酸镁、醋酸铅、氧氯化锆、三氯化铝实验操作步骤:1.水解：取1克芦丁加1%H2SO4100ml与烧杯中，加热微沸，30分钟，开始为澄清，逐渐析出黄色针状结晶，待沉淀完全后，抽滤，收集沉淀，水解母液留作糖的纸层析鉴定。
2. 芦丁、槲皮素的鉴定：（1）糖的检出——圆形滤纸层析取水解芦丁的滤液20ml，加Ba(OH)2细粉中和至pH7，滤除生成的BaSO4白色沉淀，滤液在水浴上小心浓缩近干（约1ml）注意防止炭化，加甲醇5ml,作为检识糖的样品溶液。
展开剂：正丁醇-醋酸-水（4-1-5上层）。
对照品：葡萄糖、鼠李糖（各2mg，分别溶于2ml甲醇中）展开方式：径向展开显色剂：苯胺邻苯二甲酸盐试剂（或，邻苯甲酸苯胺），喷雾后，105℃加热3～5分钟，有糖处显棕色或棕红色斑点。
（2）化学方法鉴别黄酮类成分a.盐酸-镁粉反应b.醋酸镁反应c.醋酸铅沉淀反应d.氧氯化锆e.点滴反应实验注意事项:①糖的检出——圆形滤纸层析点样量不要太多。
后记:实验三氧化苦参碱的提取分离与纯制实验编号：1实验日期：实验地点：任课教师：学时数：2+8实验目的：掌握渗漉法和离子交换法提取生物碱的方法和原理实验原理：1.生物碱溶于酸水2.阳离子交换树脂提取、分离生物碱实验对象：苦参主要仪器、试剂：渗漉筒、烧杯、玻璃棒阳离子交换树脂柱、阳离子交换树脂、pH试纸、培养皿 0.5%盐酸、碘化铋钾、蒸馏水主要操作步骤：总碱的提取：（1）酸水提取：称取250g风干粉碎的苦参中加入适量0.5%的盐酸液，使其浸没药料，充分湿润，放置一小时。
将如上酸水浸泡好的药材及溶液装入渗漉筒，待全部加完，继续补充加入0.5%的盐酸液，浸过药面，放置过夜（此步骤在实验前一天提前完成）。
继续加入0.5%的盐酸液或蒸馏水，（当渗漉液的酸性过大，改加蒸馏水渗漉，将渗漉液的pH控制在3-4之间）以1mL/min的流速进行渗漉，收集渗漉液约3750Ml,到渗漉液生物碱反应微弱为止。