大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
实验5-1大黄中蒽醌的提取分离与鉴定
实验5-1大黄中蒽醌的提取分离与鉴定一、实验目的：1、了解一个天然药物中含有的主要有效成分并对其进行提取分离。
2、掌握植物中活性成分的化学检测方法，并进行初步的鉴定工作。
二、实验原理：大黄是一味天然草药，具有泻下通便之效果。
其主要活性成份是大黄素与蒽醌类物质，其中瑞贝洛Ⅱ（rustbelineⅡ）、大黄素（emodin）、芦丁（rutin）等，在医学上有广泛的应用。
大黄素与蒽醌类物质在自然状态下大多处于质子化状态，存在于与水相较弱的有机溶剂中。
为了获得高品质的大黄素与蒽醌类物质，需要对有机溶剂进行筛选，筛选出适宜的溶剂并对大黄中的主要成分进行提取与分离工作。
三、实验步骤：A. 大黄中蒽醌的提取分离1、将粉末大黄紫锥子取 1g 加入圆底烧瓶中，加入 15 mL 95% 乙醇溶液，加热回流30分钟。
2、冷却后用干净的滤纸分离上清液用热水冲涤保持颜色相同（保留水冲涤液备用）。
3、将去溶剂后的渣用 10 mL 苯醇溶解，并过滤写滤液保存，不断冲涤干净渣质。
4、将 2mL 苯醇滤液分离于干净的离心管中，在室温下慢慢加入正硫酸，足量使呈酸性.，加入 5 mL 甲醇，蒸去溶剂后，注 1mL 50%氨水，筛过活性炭或过硅酸钠脱除杂物，使溶液呈现深黄色液体。
5、以上溶液在 20ml 分液漏斗中加入 20-25 mL 丙酮，振荡混合，分离两层液体，取下蒸馏收干（可以置于干燥器或开放场地自然干燥，当感觉无水分或连续称量两次称量值一致时即可）6、将干燥沉淀取少量溶解于绝对丙酮中成特邻醌的溶液。
7、分别进行下列试验来分离纯特邻醌：（1）纯特邻醌呈现红色；（2）用极少量生石灰进行检测，呈现橙色。
B. 大黄中大黄素含量的色谱定量测定色谱图谱图峰形面积法进行测定。
1、用同上操作，按“ A ”-“ E ”方法操作，取所得特邻醌溶液 1-5 mL 再加入丙酮使其溶解（溶液的浓度以能出现三个吸光峰为适宜，可调配NaOH溶液调节pH 值，使吸光峰相对集中于三个波长摆荡之一）。
实验八大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
留存的乙醚液，置圆底烧瓶中，回收乙醚，放置。抽滤收 集沉淀，经水洗，抽干移至表面皿上，干燥后称重。 4．鉴定 （1）碱液试验：分别取蒽醌化合物结晶少许，置试管中，加 1ml乙醇溶解，加数滴5%氢氧化钾试剂振摇，溶液呈红色 （2）醋酸镁试验：分别取各蒽醌化合物结晶少许，置试管中， 加1ml乙醇溶解，加数滴0.5%醋酸镁试剂，产生橙、红、紫等颜色
③
芦荟大黄素的分离
留存在分液漏斗中的乙醚液，用0.5%NaOH水溶液 每次15ml萃取3～4次。乙醚溶液再以蒸馏水萃取 2～3次，以洗去碱液。合并NaOH和水的提取液， 加盐酸调pH2~3，放置。抽滤析出沉淀，收集沉淀， 经水洗，抽干移至表面皿上，干燥后称重。
（三） 蒽醌类化合物的提取与分离
蒽 醌 的 提 取 与 分 离
蒽苷的分离 比苷元困难 ，分离前一 般先用溶剂 法除去大部 分杂质，得 较纯的总苷 后，再用柱 色谱分离。
（3）薄层检识
（4）纸色谱检识
支持剂：新华色谱滤纸（中速、20cm×7cm） 样品：各蒽醌成分1%三氯甲烷溶液
对照品：1%大黄酸三氯甲烷溶液；1%大黄素三氯甲烷溶液； 1%芦荟大黄素三氯甲烷溶液
展开剂：甲苯 显色剂：0.5%醋酸镁甲醇溶液
四、思考题
1．在实验过程中采用pH梯度萃取法分离游离蒽醌，萃取过程中 若出现乳化现象，应如何处理？ 2．大黄酚和大黄素甲醚结构相似，怎样分离？
②
大黄素的分离
留存在分液漏斗中的乙醚液，用5%Na2CO3水溶液每次 15～20ml如上法相同萃取数次，直至提取液呈色较浅时为止， 约需6～7次，合并Na2CO3提取液，小心滴加盐酸酸化至pH2~3， 放置待沉淀析出，抽滤收集析出物经水洗涤，抽干移至表面皿上， 干燥后称重。
大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定大黄是一种广泛应用的中药材，含多种活性成分，其中最重要的是蒽醌类化合物。
这些化合物具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性，因此成为广泛应用的化合物之一。
本文将介绍大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定过程。
大黄通常通过醇提、水提、超声波提取等方式提取蒽醌类成分。
醇提法是最常用的提取方法之一。
一般可以采用乙醇、甲醇或酒精等有机溶剂进行提取。
以乙醇为例，其提取过程如下：（1）将大黄切碎，加入适量的96%的乙醇。
（2）加热回流提取1小时。
（3）过滤，滤去残渣。
（4）将过滤液浓缩至干燥。
（5）得到蒽醌类化合物粗提取物。
大黄中的蒽醌类成分通常需要通过柱层析、薄层层析、高效液相色谱等多种色谱技术进行分离。
其中，高效液相色谱技术最常用。
根据不同的色谱柱填料、移相系统、检测器等条件的不同，可以对获得的粗提取物进行进一步分离。
以高效液相色谱为例，其分离过程如下：（1）将粗提取物溶于少量甲醇中。
（2）进行反相或正相高效液相色谱分离。
大黄中蒽醌类成分的鉴定主要采用紫外分光光度法、质谱分析法和红外光谱法等技术。
其中，以紫外分光光度法为例，其鉴定过程如下：（1）使用UV特征峰进行鉴定。
（2）将标准品或纯品溶于适量的甲醇中，按比例稀释。
（3）将样品溶液置于紫外分光光度计检测器中。
（4）记录在特定波长下的吸光度。
（5）通过计算溶液中所含的蒽醌类成分的浓度来鉴定蒽醌类化合物。
总之，大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定可以采用多种技术进行。
通过这些技术的应用，可以得到单纯、纯度高的化合物，为下一步的药理、毒理研究提供了保障。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
药渣（弃）
氯仿提取液
实 验 内 容（二）
蒽醌苷元的分离和精制（1）
蒽醌类成分的缓冲纸色谱
层析材料：3×12㎝滤纸 样 品：大黄氯仿提取液 展 开 剂：氯仿（水饱和） 显 色：自然光下观察
3%NaOH 5%Na2CO3:5%NaOH(9:1) PH9.9 pH8 pH3
实 验 内 容（二）
蒽醌苷元的分离和精制（2）
思
考
题
1.大黄中5种羟基蒽醌的酸性和极性大小应如何 排列？为什么？ 2.pH梯度法的原理是什么？适用于哪些中药成 分的分离？
蒽醌类成分的鉴定
实验原理
提取： 蒽醌苷
酸 水 解
氯仿提取
苷元(溶于热氯仿)
总蒽醌苷元
实验原理
分离：
OH O OH
R1 O
R2
由于各羟基蒽醌结构上的不同所 表现的酸性不同，用pH梯度萃 取法分离他们；大黄酚和大黄素 甲醚酸性相近，利用其极性的差 异，用柱色谱分离之。
R2= CH3 R2= CH3 R2= CH3 R2=CH2OH R2=COOH
实 验 内 容（二）
蒽醌苷元的分离和精制（3）
柱层析法分离大黄酚、大黄素甲醚
装柱（湿法装柱） 上样（干法上样）
洗脱剂1 石油醚-乙酸乙酯（98：2）
洗脱
洗脱剂2 石油醚-乙酸乙酯（95：5）
流份检查（合并相同流份）
实 验 内 容（三）
大黄蒽醌类成分的鉴定
（1）化学鉴定 （2）色谱鉴识
实 验 内 容（三）
A大黄酚（chrysophanol） R1=H B大黄素（emodin） R1= OH C大黄素甲醚（physcion） R1=OCH3 D芦荟大黄素（aloe-emodin） R1=H E大黄酸（rhein） R1=H
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定.
试验三 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定（一）概述大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。
自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所收载的世界性生药。
大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L ），大黄（R. officinale Baill ）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim.et Regll ）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。
已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种：OOHR 2OHR 112-H -COOH 大黄酸(Rhein) 黄色针晶 318~320℃ -CH 3 -OH大黄素(Emodin)橙色针晶 256~257℃ -H-CH 2OH 芦荟大黄素(Aloe-emodin)橙色细针晶 206~208℃ -CH 3 - 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶 207℃ -H-CH 3大黄酚(Chyrsophanol)金色片状结晶196℃大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。
大黄酸连有-COOH ，酸性最强；大黄素连有β-OH ，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH ，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH 3和-CH 3，后者只连有-CH 3，因而后者酸性排在第四位。
（二）实验目的和要求1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案。
2．掌握PH 梯度法的原理及操作技术。
3．通过磷酸氢钙柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚的试验，进一步熟悉柱色谱操作技术。
4．学习蒽醌类化合物鉴定方法。
（三）实验方法1．大黄总蒽醌苷元的提取大黄粗粉（100g）加20%H2SO4水溶液200ml，氯仿500ml，水浴回流4hr，过滤，测量滤液体积。
残渣氯仿提取液（约450ml）注意：①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织中。
大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定
大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定大黄蒽醌类成分是一类具有重要药用和工业价值的化合物，广泛应用于医药、染料和化学工业等领域。
提取、分离和鉴定大黄蒽醌类成分的方法对于进一步研究其生物活性和应用具有重要意义。
本文将介绍一种常用的大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定方法。
我们需要准备待提取的植物材料。
大黄是一种常见的含有蒽醌类成分的植物，可以作为提取的原料。
为了提高提取效果，可以将大黄切碎或研磨成较小的颗粒。
接下来，我们可以选择合适的提取剂。
一般来说，乙醇、甲醇或乙醚等有机溶剂是常用的提取剂。
将大黄与提取剂充分混合并浸泡一定时间，以促进目标成分的溶解和转移。
提取完成后，我们需要对提取液进行分离。
通常使用离心、过滤或萃取等方法，将固体颗粒和溶液分离开。
这样可得到含有目标成分的溶液。
为了进一步纯化目标成分，我们可以使用柱层析、薄层层析或高效液相色谱等分离技术。
这些技术可以根据成分的物化性质，如极性、分子大小和亲水性等进行选择。
通过不断进行分离和收集，我们可以得到纯度较高的目标成分。
在分离得到目标成分后，我们需要进行鉴定。
常用的鉴定方法包括红外光谱、质谱和核磁共振等技术。
红外光谱可以用来确定分子的官能团和结构特征。
质谱可以提供分子的相对分子质量和结构信息。
核磁共振可以用来确定分子的空间结构和化学环境。
还可以通过比较样品与标准物质的色谱保留时间和质谱图谱等数据，来确定目标成分的纯度和结构。
如果有条件，还可以进行生物活性实验，评估目标成分的药理活性和毒理学特性。
大黄蒽醌类成分的提取、分离和鉴定是一项复杂而重要的工作。
通过合理选择提取剂、分离技术和鉴定方法，我们可以得到高纯度的目标成分，并进一步研究其应用前景和药理学特性。
这对于推动大黄蒽醌类成分的研究和开发具有重要意义。
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定是一项重要的分析化学工作。
通常采用溶剂提取法将大黄中的蒽醌类成分分离。
首先将大黄粉末用60目筛过筛，然后用乙醇将大黄粉末浸泡2~3次，每次浸泡时间为1小时，离心分离液体，将沉淀收集并用肉桂酸重结晶法纯化获得大黄中的蒽醌类成分。
对所提取的大黄蒽醌类成分进行鉴定时，需采用高效液相色谱和质谱联用技术。
高效液相色谱条件为：色谱柱为C18（250mm×4.6mm，5μm），流速为1.0mL/min，检测波长为254nm，梯度洗脱方式：A相为甲醇，B相为水，梯度程序：0~12min，A相从30%逐渐升高到98%，12~15min，A相维持在98%。
通过高效液相色谱检测，可以得到大黄中蒽醌类成分的相对保留时间和峰面积，并使用质谱联用技术对其分子式进行鉴定。
同时，通过实验数据对大黄中蒽醌类成分的含量进行确定，并与国家药典规定的标准相比较，以确保其质量符合相应的药品标准。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定（实验报告）.
⼤黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定（实验报告）.⼤黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定⼀、实验⽬的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离⽅法（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术（3）学习蒽醌类化合物鉴定⽅法⼆、实验器材材料及试剂：⼤黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、⼄酸⼄酯、⽯油醚、⼄醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、⼴泛PH试纸、剪⼑、铅笔、尺⼦、点样⽑细管、样品管等。
仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡⽪管、烧杯、滴管、层析缸（⼴⼝瓶）、250mL分液漏⽃、布⽒漏⽃、抽滤瓶、⽔浴锅、集热式磁⼒搅拌器、磁⼦、循环⽔式多⽤真空泵、铁架台等。
三、实验原理⼤黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉⾎解毒、逐瘀通经等功效。
其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，⼤部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有⼤黄酸、⼤黄素、芦荟⼤黄素、⼤黄酚、⼤黄素甲醚等。
其中，⼤黄酸具有羧基，酸性最强；⼤黄素具有β-酚羟基，酸性第⼆；芦荟⼤黄素连有羟甲基，酸性第三；⼤黄素甲醚和和⼤黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异，可⽤碱性强弱不同的溶液进⾏梯度萃取分离。
⼤黄酸R1=H R2=COOH⼤黄素R1=CH3R2=OH芦荟⼤黄素R1=CH2OH R2=H⼤黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3⼤黄酚R1=CH3R2=H四、实验内容⼤黄素的提取、分离流程图⼤黄粗粉10g20%H2SO4 150 ml加热1h, 抽滤、⼲燥滤饼150ml⼄醚回流提取1 h⼄醚层⽔层（紫红⾊）⼄醚层HCl 3⼤黄酸沉淀（粗品）⽔层（红⾊）⼄醚层HCl 0.25% NaOH⼤黄素沉淀（粗品）⽔层（红⾊）芦荟⼤黄素、⼤黄酚、⼤黄素甲醚沉淀（混合物）具体操作步骤1. 游离蒽醌的提取（1）酸⽔解：称取⼤黄粗粉10g，加20%H2SO4⽔溶液150mL，在⽔浴上加热1⼩时，放冷，抽滤，滤饼⽤NaOH溶液洗⾄近中性（pH约为6），于70℃⼲燥后，研碎，置250mL 圆底烧瓶中，加⼊⼄醚150mL回流提取1⼩时（调45℃，回流即可），得到⼄醚提取液。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定一、实验目的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法二、实验器材材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。
仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL 分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。
三、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。
其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。
其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
大黄酸 R1=H R2=COOH大黄素 R1=CH3 R2=OH芦荟大黄素 R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3大黄酚 R1=CH3 R2=H四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉10g20%H2SO4 150 ml加热1h, 抽滤、干燥滤饼150ml乙醚回流提取1 h乙醚层水层（紫红色）乙醚层HCl 5%Na大黄酸沉淀（粗品）水层（红色）乙醚层HCl % NaOH大黄素沉淀（粗品）水层（红色）芦荟大黄素、大黄素甲醚沉淀（混合物）具体操作步骤1. 游离蒽醌的提取（1）酸水解：称取大黄粗粉10g，加20%H2SO4水溶液150mL，在水浴上加热1小时，放冷，抽滤，滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎，置250mL圆底烧瓶中，加入乙醚150mL回流提取1小时（调45℃，回流即可），得到乙醚提取液。
大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定
大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定大黄蒽醌类成分是指一类存在于大黄根茎中的化学成分，主要成
分包括大黄素、大黄酸与大黄蒽醌等。
提取分离与鉴定这些化学成分
需要以下几个步骤：
1. 样品的准备：采集大黄根茎样品，削去外皮和细根，切碎成小
块或粉碎成粉末状。
2. 提取：将样品加入适量的有机溶剂中进行提取，常用的有机溶
剂有乙醇、乙醚、丙酮等。
提取可以采用不同的方法，比如浸泡提取、超声波提取等。
3. 结晶：将提取得到的药材颗粒溶解在有机蒸馏水中，然后用双
水浴器加热到一定温度，待溶液浓缩到一定程度时，停止加热，继续
搅拌至其冷却结晶。
4. 分离：用过滤或分离漏斗等方法将结晶物分离出来，再用洗涤
剂或其他方法对其进行提纯。
5. 鉴定：利用色谱法、红外光谱法、核磁共振法等手段对所提纯
的化合物进行鉴定，确定其结构和成分。
以上是大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定的基本步骤，可以根据
实际情况进行调整和优化。
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大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定
一、实验目的
1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法
2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法
3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法
二、实验原理
1.提取原理
双向酸水解法，为一相与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。
由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。
根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。
2.分离原理
pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。
具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。
以分离酸度不同的蒽醌苷元。
也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。
（1）大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸（-COOH）＞大黄素（β酚-OH）＞芦荟大黄素（醇-OH）＞大黄素甲醚（-OCH3）≈大黄酚（-CH3）
（2）大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚
大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。
三、实验方法
四、 1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程
大黄药材（粗粉）50g
乙酸乙酯提取液药渣去除下层酸水层，再用蒸馏水水洗2次（50ml/次）
直至乙酸乙酯层pH值呈中性
乙酸乙酯提取液
碱水层乙酸乙酯层
滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次）
沉淀物（黄色结晶或
黄色絮状沉淀）碱水层
沉淀过滤，冰醋酸精制滴加浓盐酸，调节溶液萃黄色结晶（大黄酸）沉淀物（橙色结晶或40ml/次）
橙色絮状沉淀）
沉淀过滤，碱水层
丙酮精制
橙色结晶（大黄素）节pH=2
沉淀物
（橙色絮状沉淀）黄色沉淀物乙酸乙酯层
沉淀过滤，乙酸乙酯精制硅胶柱色谱
黄色针晶洗脱剂为石油醚（60-90℃）
（芦荟大黄素）-乙酸乙酯（15：1）
大黄酚和大黄素甲醚混合物2.总蒽醌苷元的提取
大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2h，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水层，乙酸乙
酯提取液用蒸馏水洗2次（20ml/次），将乙酸乙酯放置在锥形瓶中，密封。
3.游离蒽醌的分离和精制
（1）将乙酸乙酯提取液置500ml分液漏斗中，用5%NaHCO3溶液萃取三次（80ml，60ml，40ml），合并碱液，在搅拌下滴加浓盐酸，调节pH=2，放置，待沉淀析出完全后，过滤，并用少量水洗沉淀物至洗出液呈中性，60℃干燥，得深褐色粉末，主为大黄素。
沉淀干燥后，样品加冰醋酸10ml加热溶解，趁热过滤，滤液放置析晶，过滤，用少量冰醋酸淋洗结晶，得黄色针晶为大黄酸。
（2）大黄素的分离和精制
经NaHCO3 溶液提取的乙酸乙酯液，继用5%NaHCO3 萃取三次，每次用量40ml，合并酸碱，在搅拌下滴加浓盐酸，调节pH=2，析出棕黄色沉淀，抽滤，水洗沉淀物至洗出液呈中性，60℃干燥，沉淀经干燥后，用15ml丙酮热熔，趁热过滤，滤液静置，析出橙色针晶，过滤后，用少量丙酮淋洗结晶，得大黄素。
（3）芦荟大黄素的分离和精制
经Na2CO3提取过的乙酸乙酯液，再用0.25%NaOH溶液提取三次，每次用量40ml，合并后的碱液同（1）法处理。
萃取液经酸化后析出黄色沉淀，过滤，水洗至中性，干燥，用10ml 乙酸乙酯精制，得黄色针晶的芦荟大黄素。
（4）大黄素甲醚和大黄酚混合物的分离和精制
萃取除去芦荟大黄素后余下的乙酸乙酯层，再用5%NaOH溶液萃取多次（每次100ml），至碱水液呈无色为止，合并碱水层，加盐酸至呈酸性（pH2~3），析出黄色沉淀，过滤，水洗至中性，干燥，为大黄酚和大黄素甲醚的混合物。
将此混合物溶于乙酸乙酯，用硅胶柱色谱分离。
（5）柱层析分离大黄酚和大黄素甲醚
●装柱取一玻璃层析柱，垂直固定在铁架台上，在管的下端垫入少量棉花，装入100~200
目硅胶（约1/3高，湿法装柱）。
●上样将样品置于小蒸发皿中，用少量石油醚分散，另加用3倍量硅胶拌和均匀，并于
水浴上缓缓蒸去溶剂。
然后将含有样品的硅胶装入色谱柱的上端，并盖一圆形滤纸。
●洗脱将色谱柱活塞打开，洗脱剂为石油醚（沸程60-90℃）-乙酸乙酯（15:1）混合
液。
●收集洗脱液25ml一份，分别收集，回收溶剂至小体积，放置，即可析出结晶，合并
相同晶形部分。
先洗脱下的化合物为大黄酚，后洗脱下的化合物为大黄素甲醚。
4.游离蒽醌类化合物的鉴定
（1）化学鉴定
①碱液试验分别取各蒽醌结晶少许置于小试管中，加1ml乙醇溶液，加10%氢氧化钠溶液数滴，观察颜色变化。
羟基蒽醌应显橙色到蓝紫色。
②醋酸镁试验分别取各蒽醌结晶少许置于小试管中，各加乙醇1ml使溶解，滴加0.5%醋酸镁乙醇溶液，观察颜色变化，羟基蒽醌应显橙色到蓝紫色。
（2）色谱鉴定
①薄层色谱鉴定
吸附剂：硅胶G-CMC-Na板
样品：上述分别获得的大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚和大黄酚的三氯甲烷溶液及各相应对照品的三氯甲烷溶液。
展开剂：石油醚-乙酸乙酯-醋酸（2:1:0.2）
展开方式：上行展开。
显色：在可见光下观察，记录黄色斑点出现的位置，然后用浓氨水熏成或喷5%醋酸镁甲醇溶液，斑点显红色。
实验结果记录：观察斑点颜色，记录图谱并计算Rf值。
四．数据记录、结果讨论与分析：
1.实验现象
加5% NaHCO3溶液萃取后，收集下层溶液，一天后未发现结晶，使用旋转蒸发仪蒸发后，最终得到黄色絮状大黄酸沉淀。
加5% Na2CO3溶液萃取后，最终得到橙色大黄素结晶。
加0.25% NaOH溶液萃取后，精制最终得到黄色芦荟大黄素结晶。
加5% NaOH溶液萃取后，得到黄色的大黄酚和大黄素甲醚混合物，无法调节pH值分开，故使用柱层析分离。
（1）碱液试验：取各类蒽醌的标准乙醇溶液，滴加10% NaOH后。
大黄酸呈红色，大黄素呈粉红色，芦荟大黄素呈红色，大黄酚呈红色。
（2）醋酸镁试验：取各类蒽醌的标准乙醇溶液，滴加0.5%的醋酸镁溶液后，大黄酸呈红色，大黄素呈粉红色，芦荟大黄素呈橘黄色，大黄酚呈橘黄色。
（3）薄层板鉴定
点样次序为：1.2.3.4依次为柱层析洗脱液，5为大黄酚标准液，6为大黄酸标准液，7为大黄酸自制，8为大黄素标准液，9为大黄素自制，10为芦荟大黄素标准液，11为芦荟大黄素自制，12为大黄素甲醚标准液。
测得Rf 值：
大黄酸：标准液的Rf 值为2.75/6.6=0.42，我组制得产物的数据缺失，图上无明显斑点 大黄素：标准液的Rf 值为4.21/6.6=0.64,我组制得产物的Rf 值为5.8/6.6=0.88
芦荟大黄素：标准液的Rf 值为3.95/6.6=0.60,我组制得产物的Rf 值为4.81/6.6=0.73 大黄酚标准液的Rf 值为5.65/6.6=0.86,大黄素甲醚标准液的Rf 值为5.7/6.6=0.86
柱层析洗脱液1.2.3.4的Rf 值依次为6.05/6.6=0.92; 5.9/6.6=0.89; 5.8/6.6=0.88;
5.71/
6.6=0.87
2.结果讨论
加5% NaHCO 3溶液萃取后，收集下层溶液，一天后未发现结晶，可能与之前加的NaCl 溶液
过多，使收集的液体体积过大，大黄酸浓度过低引起，使用旋转蒸发仪蒸发后，最终得到黄色絮状大黄酸沉淀。
蒽醌类与醋酸镁显色反应的必要条件是蒽醌化合物中有α-酚羟基或邻二酚羟基结构。
3.分析
（1）游离蒽醌的提取要控制温度，回流不宜太剧烈。
要注意碱液浓度及萃取时的静置时间对实验结果的影响。
（2）
A大黄酸R1=H R2=COOH
B大黄素R1=CH3 R2=OH
C芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H
D大黄素甲醚R1=CH3 R2=OCH3
E大黄酚R1=CH3 R2=H
酸性：A>B>C>E≈D
本实验采用了 pH梯度萃取法，其原理是由于溶剂系统pH变化而改变了它们的存在状态（游离型或解离型），从而改变了他们在溶剂系统中的分配系数。
由于各羟基蒽醌结构上的不同所表现的酸性不同，用pH梯度萃取法分离他们；大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，利用其极性的差异，用柱色谱分离之。