大黄中大黄素的提取分离与鉴定
大黄中药材及其醇、水提取物中大黄素成分分析标准物质研究
大黄中药材及其醇、水提取物中大黄素成分分析标准物质研究采用“单一化学成分→复杂成分体系”的量值传递技术路线，完成了大黄、大黄95%乙醇提取物、大黄水提取物中大黄素成分分析系列标准物质的研制。
使用大黄素国家一级纯度标准物质进行量值传递，利用高效液相色谱协作标定法，确定了不同基质中大黄素成分的标准值；建立不确定度评估数学模型并计算各不确定度分量，最终获得不确定度值。
完成大黄、大黄95%乙醇提取物、大黄水提取物中大黄素成分分析标准物质，其大黄素成分分别为0.40%±0.03%，1.15%±0.18%，0.16%±0.08%（k=2，P=0.95）。
建立的量值传递技术路线成功解决了中药复杂体系中化学成分量值溯源的技术难题，研制的标准物质属国家级计量有证标准物质，为大黄中药材及其提取物中大黄素的定量质量控制提供了准确可靠的标准物质、物质标准、标准方法。
标签：大黄；大黄95%乙醇提取物；大黄水提取物；大黄素；标准物质；不确定度[Abstract]The certified reference materials （CRMs）of emodin in rhubarb and its alcohol extract，water extract were developed by using quantity transfer technology from single chemical composition to the complex systems. The CRM of emodin was used for quantity transfer，and high performance liquid chromatography （HPLC）method was used to determine the contents of emodin in different matrix composition. By establishing mathematical model and calculating the parts of uncertainty，the uncertainty values were finally gotten. CRMs of emodin in rhubarb，alcohol extract and water extract were accomplished. The content values of emodin were 0.40% ±0.03%，1.15%±0.18%，0.16%±0.08% （k=2，P=0.95），respectively. The established method for quantity transfer has successfully solved the technical problems that the value of active ingredient of traditional Chinese med icine can′t be traced to SI units. The series of CRMs are assigned as grade primary reference materials，which are useful for quality control of the emodin content，also provide the accurate and reliable CRM，materials standard and standard methods.[Key words]rhubarb；alcohol extract；water extract；emodin；CRM；uncertainty中药历史悠久，其用药特点是多成分复杂体系协同起效，因此如何进行中药的质量控制成为研究重点与难点，这也成为了制约中药国际化与现代化进程的主要原因。
分光光度法测定大黄中大黄素的含量
乙酸乙酯溶解 ，％ Ｎ ：Ｏ 溶液萃取数次 ， ５ ａＣ ， 合并萃取
液 ， １ ％ 盐酸 至酸性 ， 橙 黄 色沉 淀 。 冰 乙酸重 加 ０ 得 用
收 稿 Ｅ期 ：０ ７０ －１ ｔ ２ ０ －９０
图 １ 大 黄素在 Ｎ Ｏ ａ Ｈ中的平衡方程
图 １ 明， ＮＯ 表 当 ａ Ｈ过量 时 ， 大黄 素结 构 中蒽 醌
药有 限公 司 ； 大 黄 素 标 准 溶 液 ： ０ ｇ ｍＬ 精 密 称 取 ５０ ／ 。
大 黄素几 乎不 溶 于水 ， 溶 于 乙醇 、 ａ Ｈ水 溶 易 ＮＯ 液 中， 微溶 于 乙醚 、 氯仿 、 。 由于天 然 大 黄 中大 黄 苯
素含 量较 少 ， 而且杂质 多 ， 测定 方法 较复 杂 。实验 发 现， 大黄 素 在 Ｎ Ｏ 水 溶 液 中 的 平衡 随着 ｐ 的 变 ａＨ Ｈ 化 而可逆 ， １为 大 黄 素 在 Ｎ Ｏ 水 溶 液 中的平 衡 图 ａＨ
摘要
建 立 了 １ 量 ９ ％ 乙 醇 回流 提 取 、５倍 量 乙酸 乙脂 二 次 回 流 提 取 ， ０倍 ０ １ 最后 用碱 提 酸 沉 法 制 备 高 纯 度 大 黄
素 的 方 法 。 用 改进 的 分 光 光 度 法 对 纯 化后 产 品 进 行 测 定 ， 黄 素含 量 达 ８ ． １ 。 显 色剂 为 ５ｍ ｌＬ的 Ｎ Ｏ 溶 液 ， 大 ５４ ％ ｏ ／ ａＨ
上 ３个羟 基完 全质 子 化 ， 上 共 轭 环上 有 甲基 的 推 加
电子 作用 ， 轭 体 系 内电子 云流 动 增 加 。大 黄 素 与 共
ＮＯ ａ Ｈ反应 生 成稳 定 红 色 络 合 物 ， 一 定 波 长 下 有 在 最 大 吸收 ， 可用 分光光 度 法进行 测定 。当提 高酸度 ，
中药大黄的成分检测方法研究
中药大黄的成分检测方法研究中药大黄不仅仅是中药材同时也可作为食材，在使用的过程中为了保证药品的纯度在对其进行检测时可利用现代科技技术。
本次研究的目的则是分析中药大黄的几种检测方法。
标签：中药；大黄；检测方法；成分在中药中大黄是常见且常用的一种药材，应用范围较广，大黄具有斜热通肠、凉血解毒、祛瘀等功效[1]。
大黄的应用价值比较高，分布在四川、甘肅等地区，然而大黄的种类比较多，但是能用的却比较少。
1 HPLC检测法流动相为甲醇-1.0%冰醋酸，在430 nm下进行检测，在图谱中有23个共有峰，针对12个来自不同产地及不同时间段收集样本来说其相似度>90%，在检测中药大黄成分时具有专属性指纹图谱的优势。
利用微乳电动毛细管色谱法对来源不同掌叶大黄监理指纹图谱，采用没有经过图层的石英毛细管柱，以SDS、正丁醇、硼砂溶液与正辛烷作为缓冲液，再添加由乙腈组成的O/W型微乳体系，将分离电压及检测波长分别设置为18 kV及280 nm。
在检测完成之后通过聚类分析及相似度对其进行分析，然后将研究的掌叶大黄分为道地药材、一般药材及次品[2]。
在确定大黄指纹图谱共有的模式之后，利用HPLC法对掌叶大黄不同炮制品水提取物的指纹图谱，再根据灰关联度分析的方法对止血谱效的关系进行分析。
大黄经炮制后鞣质类成分及蒽醌类成分的含量变化对大黄止血效果有着重要的影响作用。
当以流动相为乙腈-水-1%冰醋酸时，在254 nm之下可有效的反应出了大黄中含有的化学成分指纹图谱，因此可确定大黄指纹图谱最佳进样量时61.35 ug。
2 薄层扫描色谱法利用超临界流体萃取薄层色谱扫描方法对大黄中所含大黄素进行测定，超临界流体萃取技术具有提取物纯净的优势，可以直接分析点样。
使用薄层层析方法分离大黄中游离型及结合型蒽醌类，然后再利用薄层扫描的方法对其含量进行测测定。
在硅胶G层上使用正己烷-乙酸乙酷-甲酸对生大黄、熟大黄及配方颗粒中的大黄素进行测定，同时使用双波长薄层扫描仪进行测定。
大黄素的提取工艺进展,
中药制剂中大黄素提取工艺的进展摘要：本实验主要详细介绍了大黄素的几种常见的提取工艺，论述了提取工艺的进展，大黄素常见的提取方法有反相高效液相色谱法，葡聚糖凝胶分子筛及重结晶法，超声波－微波协同萃提取测定大黄素含量且获得较为满意的结果，实验证明该方法分离能力强、干扰少，具有广泛的应用性。
1 常用的大黄素提取方法1.1方法一：准确称取烘至恒重的本品粉末5 g，加硫酸液(2．5ml／1)30 ml，加热回流2h，冷却，加氯仿50ml，水浴回流1h，分取氯仿层，酸液再加氯仿40ml，继续回流，冷却后分取氯仿层，合并氯仿层，水洗三次，回收氯仿，残渣加甲醇溶解定容至5ml[1]。
1.2方法二：(双相水解提取法)精密称取样品粉末5g，加入60m1氯仿浓度为2．5M硫酸溶液，水浴回流4h，转至分液漏斗中静置，分出氯仿层再用氯仿60、50、40m1，萃取酸水层，合并回收氯仿液，残渣加甲醇溶解、定容至5m1，[1]1.3方法三：准确称取烘至干燥恒重的本品粉末5g，置圆底烧瓶内，加甲醇40m1，加热回流提取1h，过滤，滤液蒸干，残渣加2.5M硫酸液10m1，沸水浴中水解30 min，放冷后用乙醚萃取三次(20m1，15m1，15m1分取乙醚层，合并，回收乙醚，残渣加甲醇溶解、定容至5ml)。
将三种方法制得的样品液10m1点于同一块薄层板上，展开后观察。
[1]2 超声波－微波协同萃提取将萃取物先用硅胶层析板点样，初步确定萃取效果。
展开剂为石油醚∶乙酸乙酯∶甲酸= 15∶ 5∶ 1的上层清夜。
然后将萃取物样品测试条件进行HPLC分析，萃取液中保留时间为8.288 min 的峰和对照品中大黄素(保留时间8.354 min)的出峰时间基本一致，且峰型对称，结合薄层层析分析结果可确定该组分为大黄素[2]。
实验表明，超声波功率内置为50W的仪器条件下，影响超声波－微波协同萃取大黄素的因素依次为: 乙醇浓度、提取时间、乙醇用量、微波功率。
实验二 大黄中大黄素的提取
滤渣பைடு நூலகம்
③水洗至中性，干燥
水洗：有H2SO4 留在滤渣中，若不 除去，干燥过程水分减少， H2SO4 浓度增高，造成药材碳化。
滤饼
①
②
③
二、总羟基蒽醌苷元的提取
1. 实验仪器： 平底烧瓶、索氏提取器、冷凝管、滤纸 2. 实验试剂： 干燥滤饼、乙醚
3. 实验方法 干燥滤饼
①置索氏提取器中，加150 （100+50）乙醚，提取1.5h
实验二 大黄中大黄素的提 取、分离和鉴定
一、大黄的酸水解
1. 实验仪器： 圆底烧瓶、冷凝管、电炉、滤布 2. 实验试剂： 大黄粉、20%H2SO4
3. 实验方法 15g大黄粉
回流：防止水分蒸发使硫酸浓度增 加造成药粉碳化。
①120ml 20%H2SO4,直火回流加热1h， ②滤布抽滤
酸水提取：大黄的蒽醌类化合物多 以苷的形式存在，用酸水解可得总 蒽醌苷元，苷原极性弱，留在滤渣 中。
乙醚提取：苷元极性弱，用弱极性 乙醚提取。
乙醚提取液（总蒽醌苷元）
温度需控制在溶剂蒸汽至冷凝管 第二个球处：防止乙醚蒸汽逸出 造成污染且影响提取效率。
玻璃仪器必须干燥，若平底烧瓶 中有水，水将会改变提取试剂的 极性，影响提取效率，且可能与 乙醚混溶后改变溶剂沸点。
三、pH梯度萃取
1. 实验仪器： 锥形瓶、布氏漏斗、滤纸、pH试纸 2. 实验试剂： 乙醚提取液、NaHCO3 、Na2CO3、NaOH
①
②
④ ③
四、柱色谱分离大黄素
1. 实验仪器： 色谱柱、烧杯、烧杯 2. 实验试剂： 硅胶、脱脂棉、丙酮、石油醚-乙酸乙酯
3. 实验方法
用洗脱剂检漏，留2cm洗脱剂缓冲 且排除脱脂棉的气体
实验六 虎杖中大黄素的提取、分离和检识
实验六虎杖中大黄素的提取、分离和检识虎杖又名阴阳莲、土地榆、苦杖，为蓼科植物虎杖（Polygonum cuspidatum siebet Zucc．）的根茎。
有活血化瘀，清热解毒，祛痰止咳等功用。
近年来用于治疗急性黄疸，降低血脂，升高白血球和血小板，并可治疗慢性气管炎等多种炎症及烧伤等症。
虎杖根茎中含有大量的蒽醌成份和二苯乙烯类成份。
一、虎杖根茎中已知主要成份的理化性质1．大黄酚（Chrysophanol）：金黄色片状结晶（丙酮）或针状结晶（乙醇），mp196~197℃，能升华。
可溶于苯、氯仿、乙酸、乙醇。
NaOH水溶液及热的Na2CO3水溶液。
微溶于石油醚和乙醚，不溶于水，NaHCO3和Na2CO3水溶液。
2．大黄素（Emodin）：橙黄色针状结晶，mp256~257℃，能升华。
易溶于乙醇，可溶于NH4OH、Na2CO3和NaOH水溶液，几乎不溶于水。
3．大黄素甲醚（Physion）：砖红色针状结晶，mp206℃，能升华。
易溶于NaOH 溶液，可溶于苯、氯仿、吡啶、甲苯，微溶于乙酸、乙酸乙酯、乙醚，不溶于水。
4．大黄素葡萄糖苷（Emodin monoglucoside）：浅黄色针状结晶（稀乙醇中析出，含分子结晶水），mpl90~191℃。
5．白藜芦醇（Resveratol）：无色针状结晶，mp256~257℃，216℃，264℃，能升华。
易溶于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮等。
6．虎杖苷（白藜芦醇葡萄糖苷，Polydatin，Piceid）：无色针状簇晶，mp223~226 ℃（分解）。
易溶于甲醇、乙醇、丙酮、热水，可溶于乙酸乙酯，Na2CO3和NaOH的水溶液，微溶于冷水，难溶于乙醚。
二、目的要求1．掌握从虎杖中提取羟基蒽醌类成份的方法。
2．熟悉用硅胶柱层析方法分离混合羟基蒽醌类成份的一般操作技术。
3．熟悉羟基蒽醌类化合物的主要检识反应。
三、实验原理本实验是根据游离蒽醌类成份能溶于含水氯仿的性质，先将原料的浓酸溶液湿润后，加入含水氯仿进行回流提取，在回流过程中即可将结合态的蒽醌（苷类）类成份水解成为游离蒽醌，这样就可连同原存在的游离态蒽醌成份，一并被含水氯仿提取出来。
大黄的提取分离
⼤黄的提取分离⼤黄的提取分离实验报告⼀．背景和⽬的⼤黄，⼜名黄良、⽕参、将军等，为我国传统常⽤中药材。
⼤黄(Radixe RhiZomaRhei)为寥科植物掌叶⼤黄(RheumPalmatumL)，唐古特⼤黄(Rheum tangutieumMaxim.exBal勺或药⽤⼤黄 (RheumoffieinaleBaill)的⼲燥根和根茎。
掌叶⼤黄和唐古特⼤黄药材称北⼤黄，主产于青海、⽢肃等地。
药⽤⼤黄药材称南⼤黄，主产于四川。
于秋末茎叶枯萎或次春发芽前采挖。
除去须根，刮去外⽪切块⼲燥，⽣⽤，或酒炒，酒蒸，炒炭⽤。
味苦、性寒。
归脾、胃、⼤肠、肝、⼼包经。
1.1天然产物提取、分离和纯化技术概述植物的化学成分⽐较复杂，种类很多，因此在着⼿研究⼀个植物的有效成分时，⾸先要⼤致知道有哪些类型的化学成分，这就需要对各类化学成分的进⾏简单的定性预试验。
通常先⽤⼏种不同极性的溶剂分别进⾏提取，进⾏⽣物活性筛选，确定哪⼀个溶剂提取部位有效后，再对该部位进⾏各类化学成分的预实验。
另外在植物资源化学研究⼯作中，常常根据⼯作需要，定向的寻求某类化学成分，这就要进⾏某类化学成分的单项预实验。
根据预实验的结果，判断可能含有哪些类型的化学成分，然后按照所含化学成分的性质，设计有效成分分离的具体⽅法。
通常将植物分别⽤⽯油醚、95%⼄醇和⽔提取。
这样便可以把绝⼤部分植物成分提取出来，假使我们不着重研究挥发油，⼀般经过酒精和⽔两种溶剂的提取就可以进⾏预实验。
预实验往往只能提供初步的线索。
1.1.1.⽔提液取植物粉末5g，加50mL蒸馏⽔，在50-60℃的⽔浴上加热约1⼩时后过滤，此滤液即可在试管及滤纸上作糖、多糖、有机酸、皂苷、苷类、酚类、鞣质、氨基酸、⽣物碱等项的预试验。
1.1.2.酒精提取液取植物粉末5g，加50mL95%的酒精，在⽔浴上加热回流约1⼩时后过滤，滤液即可进⾏酚类、鞣质、有机酸等项的预实验。
其后将滤液浓缩⾄浆状，置于研钵中，⽤少量5%盐酸溶解，取盐酸⽔溶液进⾏⽣物碱的预实验。
中药化学实验内容
4）鉴定
、实验目的
1、学习生物碱的TLC检识方法
2、巴马汀、四氢巴马汀的定性鉴别（TLC、m.p.）
二、实验原理 用硅胶板进行巴马汀、四氢巴马汀的TLC检识，选用氨薰的方法避免生物碱在硅胶板 上易拖尾的现象。
三、实验方法
1、TLC
点板→氨缸中放5min→展开槽展开→取出察看（可见光、荧光、显色剂） 样品：巴马汀、四氢巴马汀的样品及对照品，用乙醇溶解
四、实验注意事项
1、湿润 目的：避免干药材吸水后溶胀，在渗漉筒中膨胀而使渗漉液难流出； 方法：溶剂量为药材的1/2，放置15分钟； 程度：湿润后的药材手握成团，放开后松散。
2、装筒方法：
（1）两层小纱布湿润后盖于渗漉筒小孔上，避免紧、大；
（2）湿润后的药粉均匀地倒入渗漉筒里，避免松紧不匀；
（3）药粉上盖一层滤纸，压上瓶盖，以防药粉翻出，影响提取得率；
四、注意事项
1、NaBH4为强还原剂，避免长时间接触空气及用手接触；
2、加NaBH4时充分摇匀，使反应充分；
3、四氢巴马汀在碱液中易氧化成巴马汀。
五、思考题
1、加入NaBH4后，颜色由黄变无色、溶液变混浊的原因？
2、用6 mol HCl调反应液PH2至无气泡产生的原因？此时的溶液呈什么现象？
3、用NH4OH调PH9原因、现象？
4、本实验在可见光和荧光下检识有什么现象？为什么？
5、熔点测定时，样品量多会对测定结果有什么影响？
6、从鉴定结果如何判断样品的纯度？
实验二 大黄中大黄素的提取、分离和鉴定
（1）酸水解
2、芦丁的精制和酸水解11
3、槲皮素五乙酰化物的制备12
4、糖鉴定13
5、芦丁、槲皮素的鉴定14
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
将此样品加到硅胶柱顶端，填脱脂棉。 加洗脱剂洗脱，待色带冲下时，用试管分段 收集(10-15mL/瓶)
南中医 中药化学实验 大黄素
点样，观察
南中医 中药化学实验 大黄素
五.大黄素的鉴定
熔点测定
南中医 中药化学实验 大黄素
显色反应
南中医 中药化学实验 大黄素
THANKS
南中医 中药化学实验 大黄素
R1 R2
大黄酚 芦荟大黄素 大黄素 大黄素甲醚 大黄酸
H
CH3
H CH2OH OH CH3 OCH3 CH3 H COOH
南中医 中药化学实验 大黄素
2.流程
10g大黄粉
100ml 20% H2SO4直火回流加热1h，滤布抽滤
滤 渣 水洗至中性，干燥
滤饼
南中医 中药化学实Байду номын сангаас 大黄素
10g大黄粉
2.流程图
Et20提取液
Et2O提取液（1）
NaHCO3液（大黄酸）
Et2O提取液（2）
NaCO3液
Et2O提取液（3）
NaCO3液（芦荟 大黄素）
沉淀（芦荟大黄素）
Et2O提取液（4） NaOH液(大黄素甲醚 和大黄酚)
南中医 中药化学实验 大黄素
南中医 中药化学实验 大黄素
用6M HCl调pH3，抽滤。得到沉淀（大 黄素粗品）。
南中医 中药化学实验 大黄素
称取12g硅胶，取适量洗脱剂。 将50mL洗脱剂与硅胶混合。
南中医 中药化学实验 大黄素
用脱脂棉填柱子底部，加入洗脱 剂与硅胶混合液，打开玻璃柱下 端活塞。
将大黄素粗品所在的滤纸剪碎，用少量 丙酮溶解样品后，加少许硅胶(约1g)拌匀， 再在水浴上挥干丙酮。
南中医 中药化学实验 大黄素
南中医 中药化学实验 大黄素
取大黄素粗品，进行点样。
南中医 中药化学实验 大黄素
四.柱色谱分离大黄素
1.实验原理 根据大黄酸，大黄素，芦荟大黄素，大黄酚，大黄 素甲醚等5种成分的极性大小不同，则与鬼叫吸附剂 产生的吸附能力不同而分离
2.实验方法 （1）.湿法装柱 （2）.干法上样 （3）.洗脱收集 （4）.合并浓缩 （5）.放置析晶
实验二 大黄中大黄素的提取，分离和鉴定
一.大黄的水解 二.总羟基蒽醌苷元的提取 三.PH梯度的萃取
四.柱色谱分离大黄素
五.大黄素的鉴定
南中医 中药化学实验 大黄素
一.大黄的水解
1.实验原理 大黄的蒽醌类化合物大多以苷的形式存在，如大黄酚葡萄糖 苷，大黄素葡萄糖苷，大黄酸葡萄糖苷，芦荟大黄素葡萄糖 苷，一些双葡萄糖链苷及少量的番泻苷A,B,C,D等，其主要成 分的 结构如下。
直火回流加热
南中医 中药化学实验 大黄素
滤布抽滤
滤渣
南中医 中药化学实验 大黄素
二.总羟基蒽醌苷元的提取
1.实验原理 大黄中总蒽醌苷元为亲脂性成分，故可用乙醚提取，连续 回流提取法在溶剂提取法中效率最高
2.流程图 干燥滤饼
置索氏提取器中，加150ml（100+50）Et2O 提取2.5h（至提取液近无色）
Et2O 提取液(总蒽醌苷元)
南中医 中药化学实验 大黄素
研碎装入纸筒
索氏提取器回流
南中医 中药化学实验 大黄素
三.PH梯度萃取
1.实验原理 根据大黄酸，大黄素，芦荟大黄素，大黄酚和大黄素 甲醚的酸性强弱不同，采用由弱到强加入不同碱液进 行萃取的方法，分离的单大黄素粗品。
南中医 中药化学实验 大黄素