实验四 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
• （4）收集 洗脱液25ml一份，分别收集，回收溶 剂至小体积，放置，即可析出结晶，合并相同晶 形部分。先洗脱下的化合物为大黄酚，后洗脱下 的化合物为大黄素甲醚。
• 三、鉴定
• 1、蒽醌类成分化学鉴定
• 仪器：回流装置一套、蒸发皿、层析槽、试管、梨 形分液漏斗、水浴锅、电炉、薄层板、点样毛细管 等
• 实验内容与方法：
• 一、游离蒽醌的提取
• 称取大黄粗粉50g，加20%硫酸溶液50ml， 充分搅拌混匀，加氯仿200ml，热水浴上回 流提取1小时，过滤得氯仿滤液。药渣继用 氯仿200ml回流1小时，过滤，合并两次氯 仿提取液于圆底烧瓶中，加沸石数粒，水 浴上蒸馏回收氯仿至200毫升（可减压抽干 氯仿）。
• 2. 大黄素的分离和精制：用碳酸氢钠液萃 取后的氯仿液加5%碳酸钠溶液萃取数次 （每次20～30m1），（方法同上述碳酸氢 钠溶液的处理）。萃取液经酸化后析出棕 黄色沉淀，过滤，水洗沉淀物至洗出液呈 中性，沉淀经干燥后，用15ml丙酮热溶， 趁热过滤，滤液静置，析出橙色针状结晶， 过滤后，用少量丙酮淋洗结晶，得大黄素。
• 5.柱层析法分离大黄酚和大黄素甲醚
• （1）装柱 取一玻璃层析柱，垂直固定在铁架台 上，在管的下端垫入少量棉花，装入100～200目 硅胶（约1/3高，湿法装柱）。
• （2）上样 将样品置于小蒸发皿中，用少量石油 醚分散，另加用3倍量硅胶拌和均匀，并于水浴上 缓缓蒸去溶剂。然后将含有样品的硅胶装入色谱 柱的上端，并盖一圆形滤纸。
• 3. 芦荟大黄素的分离和精制：用碳酸钠液 萃取后的氯仿液加0.25%氢氧化钠溶液萃取 数次（每次20～30m1），（方法同上述碳 酸氢钠溶液的处理）。萃取液经酸化后析
大黄中蒽醌类成分的提取 - 大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴别
1.提取、分离流程（如图一）
2.总蒽醌苷元的提取
大黄粗粉100 g，加20％硫酸溶液300 ml润湿，再加氯 仿500 ml，回流提取2hr，稍冷后过滤，残渣弃去，氯仿提 取液于分液漏斗中，分出酸水层，得氯仿提取液。
图1.大黄提取分离流程图
3.蒽醌苷元的分离和精制
（1）蒽醌类成分的缓冲纸色谱试验
b.醋酸镁试验 分别取蒽醌结晶数毫克，置于小试管中，各加乙醇l ml使 溶解，滴加0.5％醋酸镁乙醇溶液，观察颜色变化。
(2)色谱鉴识
a.薄层板：硅胶G-CMC-Na板。
b.点样：提取的大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的 氯仿溶液及各对照品氯仿溶液。
c.展开剂：石油醚－乙酸乙酯－甲酸（15:5:1）上层溶液。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴别
一、实验目的 1. 掌握蒽醌苷元的提取方法——酸水解法。 2. 掌握缓冲纸色谱的原理及基本操作技术。 3. 掌握pH梯度萃取法的原理及操作技术。 4. 通过大黄酚和大黄素甲醚的分离实验，熟悉柱色 谱的操作技术。 5. 熟悉蒽醌类化合物的鉴定方法。
二、基本原理
大黄中羟基葸醌类化合物多数以苷的形式存在，故先 用稀硫酸溶液把蒽醌苷水解成苷元，利用游离葸醌可溶于 热氯仿的性质，用氯仿将它们提取出来。由于各羟基葸醌 结构上的不同所表现的酸性不同，用pH梯度萃取法分离它 们；大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，利用其极性的差别， 用柱色谱分离之。
洗脱：先用100 ml石油醚－乙酸乙酯（9.8:0.2）洗脱，至第一条黄色色 带洗下来，再换用100 ml石油醚－乙酸乙酯（9.5:0.5）洗脱下第二条色带。
4.鉴定
(1)蒽醌类成分化学鉴定
a.碱液试验 分别取各蒽醌结晶数毫克置于小试管中，加2％氢氧化钠溶 液l ml，观察颜色变化。凡有互成邻位或对位羟基的蒽醌呈蓝紫至蓝色， 其它羟基蒽醌呈红色。
大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定大黄是一种广泛应用的中药材，含多种活性成分，其中最重要的是蒽醌类化合物。
这些化合物具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性，因此成为广泛应用的化合物之一。
本文将介绍大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定过程。
大黄通常通过醇提、水提、超声波提取等方式提取蒽醌类成分。
醇提法是最常用的提取方法之一。
一般可以采用乙醇、甲醇或酒精等有机溶剂进行提取。
以乙醇为例，其提取过程如下：（1）将大黄切碎，加入适量的96%的乙醇。
（2）加热回流提取1小时。
（3）过滤，滤去残渣。
（4）将过滤液浓缩至干燥。
（5）得到蒽醌类化合物粗提取物。
大黄中的蒽醌类成分通常需要通过柱层析、薄层层析、高效液相色谱等多种色谱技术进行分离。
其中，高效液相色谱技术最常用。
根据不同的色谱柱填料、移相系统、检测器等条件的不同，可以对获得的粗提取物进行进一步分离。
以高效液相色谱为例，其分离过程如下：（1）将粗提取物溶于少量甲醇中。
（2）进行反相或正相高效液相色谱分离。
大黄中蒽醌类成分的鉴定主要采用紫外分光光度法、质谱分析法和红外光谱法等技术。
其中，以紫外分光光度法为例，其鉴定过程如下：（1）使用UV特征峰进行鉴定。
（2）将标准品或纯品溶于适量的甲醇中，按比例稀释。
（3）将样品溶液置于紫外分光光度计检测器中。
（4）记录在特定波长下的吸光度。
（5）通过计算溶液中所含的蒽醌类成分的浓度来鉴定蒽醌类化合物。
总之，大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定可以采用多种技术进行。
通过这些技术的应用，可以得到单纯、纯度高的化合物，为下一步的药理、毒理研究提供了保障。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、实验目的1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法二、实验原理1.提取原理双向酸水解法，为一相与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。
由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。
根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。
2.分离原理pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。
具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。
以分离酸度不同的蒽醌苷元。
也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。
（1）大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸（-COOH）＞大黄素（β酚-OH）＞芦荟大黄素（醇-OH）＞大黄素甲醚（-OCH3）≈大黄酚（-CH3）（2）大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。
三、实验方法四、 1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程大黄药材（粗粉）50g乙酸乙酯提取液药渣去除下层酸水层，再用蒸馏水水洗2次（50ml/次）直至乙酸乙酯层pH值呈中性乙酸乙酯提取液碱水层乙酸乙酯层滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次）沉淀物（黄色结晶或黄色絮状沉淀）碱水层沉淀过滤，冰醋酸精制滴加浓盐酸，调节溶液萃黄色结晶（大黄酸）沉淀物（橙色结晶或40ml/次）橙色絮状沉淀）沉淀过滤，碱水层丙酮精制橙色结晶（大黄素）节pH=2沉淀物（橙色絮状沉淀）黄色沉淀物乙酸乙酯层沉淀过滤，乙酸乙酯精制硅胶柱色谱黄色针晶洗脱剂为石油醚（60-90℃）（芦荟大黄素）-乙酸乙酯（15：1）大黄酚和大黄素甲醚混合物2.总蒽醌苷元的提取大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2h，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水层，乙酸乙酯提取液用蒸馏水洗2次（20ml/次），将乙酸乙酯放置在锥形瓶中，密封。
大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定
大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定大黄蒽醌类成分是一类具有重要药用和工业价值的化合物，广泛应用于医药、染料和化学工业等领域。
提取、分离和鉴定大黄蒽醌类成分的方法对于进一步研究其生物活性和应用具有重要意义。
本文将介绍一种常用的大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定方法。
我们需要准备待提取的植物材料。
大黄是一种常见的含有蒽醌类成分的植物，可以作为提取的原料。
为了提高提取效果，可以将大黄切碎或研磨成较小的颗粒。
接下来，我们可以选择合适的提取剂。
一般来说，乙醇、甲醇或乙醚等有机溶剂是常用的提取剂。
将大黄与提取剂充分混合并浸泡一定时间，以促进目标成分的溶解和转移。
提取完成后，我们需要对提取液进行分离。
通常使用离心、过滤或萃取等方法，将固体颗粒和溶液分离开。
这样可得到含有目标成分的溶液。
为了进一步纯化目标成分，我们可以使用柱层析、薄层层析或高效液相色谱等分离技术。
这些技术可以根据成分的物化性质，如极性、分子大小和亲水性等进行选择。
通过不断进行分离和收集，我们可以得到纯度较高的目标成分。
在分离得到目标成分后，我们需要进行鉴定。
常用的鉴定方法包括红外光谱、质谱和核磁共振等技术。
红外光谱可以用来确定分子的官能团和结构特征。
质谱可以提供分子的相对分子质量和结构信息。
核磁共振可以用来确定分子的空间结构和化学环境。
还可以通过比较样品与标准物质的色谱保留时间和质谱图谱等数据，来确定目标成分的纯度和结构。
如果有条件，还可以进行生物活性实验，评估目标成分的药理活性和毒理学特性。
大黄蒽醌类成分的提取、分离和鉴定是一项复杂而重要的工作。
通过合理选择提取剂、分离技术和鉴定方法，我们可以得到高纯度的目标成分，并进一步研究其应用前景和药理学特性。
这对于推动大黄蒽醌类成分的研究和开发具有重要意义。
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定.
试验三 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定（一）概述大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。
自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所收载的世界性生药。
大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L ），大黄（R. officinale Baill ）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim.et Regll ）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。
已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种：OOHR 2OHR 112-H -COOH 大黄酸(Rhein) 黄色针晶 318~320℃ -CH 3 -OH大黄素(Emodin)橙色针晶 256~257℃ -H-CH 2OH 芦荟大黄素(Aloe-emodin)橙色细针晶 206~208℃ -CH 3 - 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶 207℃ -H-CH 3大黄酚(Chyrsophanol)金色片状结晶196℃大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。
大黄酸连有-COOH ，酸性最强；大黄素连有β-OH ，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH ，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH 3和-CH 3，后者只连有-CH 3，因而后者酸性排在第四位。
（二）实验目的和要求1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案。
2．掌握PH 梯度法的原理及操作技术。
3．通过磷酸氢钙柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚的试验，进一步熟悉柱色谱操作技术。
4．学习蒽醌类化合物鉴定方法。
（三）实验方法1．大黄总蒽醌苷元的提取大黄粗粉（100g）加20%H2SO4水溶液200ml，氯仿500ml，水浴回流4hr，过滤，测量滤液体积。
残渣氯仿提取液（约450ml）注意：①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织中。
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定是一项重要的分析化学工作。
通常采用溶剂提取法将大黄中的蒽醌类成分分离。
首先将大黄粉末用60目筛过筛，然后用乙醇将大黄粉末浸泡2~3次，每次浸泡时间为1小时，离心分离液体，将沉淀收集并用肉桂酸重结晶法纯化获得大黄中的蒽醌类成分。
对所提取的大黄蒽醌类成分进行鉴定时，需采用高效液相色谱和质谱联用技术。
高效液相色谱条件为：色谱柱为C18（250mm×4.6mm，5μm），流速为1.0mL/min，检测波长为254nm，梯度洗脱方式：A相为甲醇，B相为水，梯度程序：0~12min，A相从30%逐渐升高到98%，12~15min，A相维持在98%。
通过高效液相色谱检测，可以得到大黄中蒽醌类成分的相对保留时间和峰面积，并使用质谱联用技术对其分子式进行鉴定。
同时，通过实验数据对大黄中蒽醌类成分的含量进行确定，并与国家药典规定的标准相比较，以确保其质量符合相应的药品标准。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定一、实验目的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法二、实验器材材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。
仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL 分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。
三、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。
其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。
其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
大黄酸 R1=H R2=COOH大黄素 R1=CH3 R2=OH芦荟大黄素 R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3大黄酚 R1=CH3 R2=H四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉10g20%H2SO4 150 ml加热1h, 抽滤、干燥滤饼150ml乙醚回流提取1 h乙醚层水层（紫红色）乙醚层HCl 5%Na大黄酸沉淀（粗品）水层（红色）乙醚层HCl % NaOH大黄素沉淀（粗品）水层（红色）芦荟大黄素、大黄素甲醚沉淀（混合物）具体操作步骤1. 游离蒽醌的提取（1）酸水解：称取大黄粗粉10g，加20%H2SO4水溶液150mL，在水浴上加热1小时，放冷，抽滤，滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎，置250mL圆底烧瓶中，加入乙醚150mL回流提取1小时（调45℃，回流即可），得到乙醚提取液。
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实验四大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定
一、概述
植物来源：大黄系蓼科植物掌叶大黄(Rheum palmatum L．)、唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim. ex Balf．)或药用大黄(Rheum offcinale Baill．)的干燥根及根茎。
大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，具有泻下、健胃、清热解毒等功效。
自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一味很早就被各国药典收载的世界性药材。
功效：大黄具有多方面的生物活性，其抗菌、抗感染及抗肿瘤活性有效成分主要为蒽醌类衍生物，如：大黄酸、大黄素和芦荟大黄素；止血的主要有效成分为大黄酚；泻下的有效成分是结合型的蒽苷类。
蒽醌类衍生物占大黄总化学成分的3％～5％，该类成分少部分以游离状态存在，大部分与葡萄糖结合成苷的形式存在。
此外，大黄还含有鞣质等多元酚类化合物，含量在10％一30％之间，具止泻作用，与蒽苷的泻下作用恰恰相反。
主要化学成分的结构及物理性质大黄中含有多种游离的羟基蒽醌及其与糖所形成的苷类化合物，已知的游离羟基蒽醌主要有以下5种化合物。
大黄酸(rhein)，C15H806，黄色针晶，m.p321—322℃(330℃分解)，UVλmax431，258，231，204。
可溶于碱水，微溶于乙醇、苯、三氯甲烷、乙醚和石油醚，不溶于水。
大黄素(emodin)，C15H1005，橙黄色针晶(乙醇)，m.p256—257℃。
UVλmax436，289，266，253，222。
可溶于碱水，微溶于乙醚、三氯甲烷，不溶于水。
芦荟大黄素(aloe emodin)，橙色针晶(甲苯)，m.p223～224℃。
UVλmax429，287，254，225，202。
可溶于乙醚、苯及碱水，不溶于水。
大黄素甲醚(physcion)，砖红色单斜针状结晶(苯)，m.p205—207℃。
溶于苯、三氯甲烷及甲苯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮，不溶于水。
大黄酚(chrysophano1)，C15H1004，橙黄色针晶(乙醇或苯)，m.p195—196℃。
UVλmax429，287，256，225，202。
可溶于丙酮、三氯甲烷、苯、乙醚和冰醋酸和碱水，微溶于石油醚，不溶于水。
大黄酸葡萄糖苷(rhein 8-monoglucoside)，黄色针晶。
m.p266—267℃。
大黄素葡萄糖苷(emodin monoglucoside)，橙色针晶(甲苯)。
m.p190—191℃。
芦荟大黄素葡萄糖苷(aloeemodin monoglucoside)，黄色针晶。
m.p235℃。
大黄酚葡萄糖苷(chrysophanol monoglucoside)，橙色针晶(甲苯)。
m.p239℃。
二、实验部分
(一)实验目的要求
1．掌握蒽醌苷元的提取方法—双相酸水解法。
2．掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法。
3．掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法。
(二)实验的基本原理
1．提取原理
双相酸水解法，为一相为与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。
由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双相酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。
根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。
2．分离原理
pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。
具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5％碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5％碳酸钠溶液，只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。
以分离酸度不同的蒽醌苷元。
也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离
(1)大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸(—COOH)>大黄素(β酚—OH)>芦荟大黄素(醇—OH)>大黄素甲醚(—OCH3)≈大黄酚(—CH3)。
(2)大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸>大黄素>芦荟大黄素>大黄素甲醚>大黄酚。
大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。
(三)实验方法
1．总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程
操作注意事项
①所得乙酸乙酯液中若带有酸水液，应用分液漏斗分出弃去；此处用蒸馏水洗除乙酸乙酯液中的酸。
②萃取时容易发生乳化，而且随着碱液碱度的增高，乳化现象会越严重，所以要轻轻振摇。
③每次加碱液进行pH梯度萃取时，注意要测一下乙酸乙酯液的pH。
④萃取时一定要注意乳化层的分出，不要混入。
2．总蒽醌苷元的提取
大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20％硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2个h (加磁子搅拌)，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水层，乙酸乙酯提取液用蒸馏水洗2次（每次20ml），将乙酸乙酯液放置在锥形瓶中，密封。
3.游离蒽醌的分离与精制
(1)大黄酸的分离和精制
将乙酸乙酯提取液置500m1分液漏斗中，用5％NaHCO3溶液萃取三次（80ml, 60ml, 40ml），合并碱液，在搅拌下滴加浓盐酸，调节ph＝2，放置，待沉淀析出完全后，过滤，并用少量水洗沉淀物至洗出液呈中性，60℃干燥，得深褐色粉末，主为大黄酸。
沉淀干燥后，样品加冰醋酸10ml加热溶解，趁热过滤，滤液放置析晶，过滤，用少量冰醋酸淋洗结晶，得黄色针晶为大黄酸。
(2)大黄素的分离和精制
经NaHCO3溶液提取过的乙酸乙酯液，继用5％Na2CO3溶液萃取三次，每次用量40ml，合并碱液，在搅拌下滴加浓盐酸，调节ph＝2，析出棕黄色沉淀，抽滤，水洗沉淀物至洗出液呈中性，60℃干燥，沉淀经干燥后，用15ml丙酮热溶，趁热过滤，滤液静置，析出橙色针晶，过滤后，用少量丙酮淋洗结晶，得大黄素。
(3)芦荟大黄素，大黄素甲醚和大黄酚混合物的分离
经Na2CO3提取过的乙酸乙酯液，再用5％NaOH溶液提取三次，每次用量40ml，合并后的碱液同（1）法处理，所得产品为黄色粉末，为芦荟大黄素、大黄酚和大黄素－6－甲醚的混合物。
3.游离蒽醌类化合物的鉴定
(1)化学鉴定
①碱液试验分别取各蒽醌结晶少许置于小试管中，加lml乙醇溶解，加10％氢氧化钠溶液数滴，观察颜色变化。
羟基蒽醌类应呈红色。
②醋酸镁试验分别取各蒽醌结晶少许置于小试管中，各加乙醇lml使溶解，滴加0．5％醋酸镁乙醇溶液，观察颜色变化，羟基蒽醌应显橙色到蓝紫色。
(2)色谱鉴定
①薄层色谱鉴定
吸附剂：硅胶G—CMC—Na板。
样品：上述分别获得的大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚和大黄酚的三氯甲烷溶液及各相应对照品的三氯甲烷溶液。
展开剂：石油醚—乙酸乙酯—醋酸(2：1：0.2)。
展开方式：上行展开。
显色：在可见光下观察，记录黄色斑点出现的位置，然后用浓氨水熏或喷5％醋酸镁甲醇溶液，斑点显红色。
实验结果记录：观察斑点颜色，记录图谱并计算Rf值。
四、注意事项
①大黄中蒽醌类化合物的种类、含量与大黄的品种、采集季节、炮制方法及贮存时间均有关系。
由于蒽醌类衍生物主要以苷的形式存在，所以较新鲜的原药材蒽醌类成分含量高，如果是贮存时间长的饮片，则蒽醌类成分含量低，实验选材要注意。
②用碱液萃取时要注意浓度和用量，酸化时，加酸要慢，多搅拌。
③分液漏斗的正确使用。
五、思考题
1．简述液—液萃取法的原理、溶剂选择原则和操作技术。
2．什么叫双相酸水解?掌握其原理和用途。
3．大黄中5种游离羟基蒽醌化合物的酸性和极性与结构有什么关系?
4．pH梯度萃取法的原理是什么?该法适用于哪些中药成分的分离?
5．蒽醌类化合物及其甙的薄层色谱用什么作吸附剂、展开剂和显色剂?
6. 蒽醌类与醋酸镁显色反应的必要条件是什么?其颜色反应与羟基所在的位置有
何关系?
参考文献
1．杨其菖主编．天然药物化学．北京：中国医药科技出版社，1998，84-87
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