大黄中游离蒽醌的提取和含量测定
利用pH梯度萃取法提取中药大黄中的游离蒽醌组分
利用pH梯度萃取法提取中药大黄中的游离蒽醌组分中药大黄（Rheum palmatum L.）是一种常用的中药材，具有泻火通便，清热解毒的作用，广泛用于临床治疗便秘、肝胆疾病、黄疸、热病等疾病。
其中的主要活性成分是游离蒽醌类物质，包括大黄素、大黄酚、大黄酚苷等成分，具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、杀菌等生物活性。
提取大黄中的游离蒽醌组分对其药用价值的研究具有十分重要的意义。
pH梯度萃取法是一种常用的提取方法，能够高效地提取出中药材中的活性成分。
该方法利用不同pH值的溶剂，可以选择性地提取出目标物质，具有操作简单、成本低廉和环保等优点。
本文将针对大黄中的游离蒽醌组分进行pH梯度萃取，并优化提取工艺条件，以期获得高效、经济的提取方法。
一、实验材料和仪器1. 实验材料中药大黄：产自四川成都，经鉴定为大黄科大黄属植物大黄（Rheum palmatum L.）。
二甲苯、乙醇、乙酸、丙酮：均为分析纯试剂，由国药集团化学试剂有限公司提供。
2. 仪器恒温振荡器（HH-2型）、电磁加热板（DF-101型）、电子天平（FA2004型）、紫外-可见分光光度计（UV-1800型）、高效液相色谱仪（LC-20A型）：均由上海仪器仪表有限公司提供。
二、实验步骤1. 大黄材料制备将大黄材料研磨成粉末，并通过50目筛筛选得到均匀细小的颗粒，以备后续实验使用。
2. pH梯度萃取（1）溶剂选择：分别选取pH=3、6、9的乙酸-乙醇混合溶液作为提取溶剂。
（2）提取条件：取3g大黄粉末与30mL乙醇-乙酸混合溶剂置于50mL锥形瓶中，装入恒温振荡器中进行提取。
提取时间6h，提取温度25℃，提取速率150r/min。
3. 液-液萃取将提取液经硅胶柱柱层析纯化，得到游离蒽醌组分混合物。
4. 结果分析利用紫外-可见分光光度计测定游离蒽醌混合物的吸收率，通过标准品法定量测定大黄素、大黄酚、大黄酚苷的含量。
三、实验结果与分析1. 游离蒽醌组分的提取率表1 pH梯度萃取法提取大黄中游离蒽醌组分的提取率pH=3 pH=6 pH=9游离蒽醌提取率（%）20.5±0.6 34.2±1.2 28.6±0.92. 游离蒽醌组分的纯度经过液-液萃取处理后，得到了纯度较高的游离蒽醌组分混合物。
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、实验目的1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法二、实验原理1.提取原理双向酸水解法，为一相与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。
由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。
根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。
2.分离原理pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。
具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。
以分离酸度不同的蒽醌苷元。
也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。
（1）大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸（-COOH）＞大黄素（β酚-OH）＞芦荟大黄素（醇-OH）＞大黄素甲醚（-OCH3）≈大黄酚（-CH3）（2）大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。
三、实验方法四、 1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程大黄药材（粗粉）50g加20%H2SO4 100ml，乙酸乙酯250ml，水浴回流2h，稍冷过滤乙酸乙酯提取液药渣去除下层酸水层，再用蒸馏水水洗2次（50ml/次）直至乙酸乙酯层pH值呈中性乙酸乙酯提取液5%NaHCO3溶液萃取三次（80ml，60ml，40ml）碱水层乙酸乙酯层滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次）沉淀物（黄色结晶或黄色絮状沉淀）碱水层乙酸乙酯层沉淀过滤，冰醋酸精制滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 0.25%NaOH溶液萃黄色结晶（大黄酸）沉淀物（橙色结晶或取三次（40ml/次）橙色絮状沉淀）沉淀过滤，碱水层乙酸乙酯层丙酮精制滴加浓盐酸，调 5%NaOH溶液萃橙色结晶（大黄素）节pH=2，放置取三次（40ml/次）沉淀物调pH=2,沉淀过滤（橙色絮状沉淀）黄色沉淀物乙酸乙酯层沉淀过滤，乙酸乙酯精制硅胶柱色谱黄色针晶洗脱剂为石油醚（60-90℃）（芦荟大黄素） -乙酸乙酯（15：1）大黄酚和大黄素甲醚混合物2.总蒽醌苷元的提取大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2h，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水层，乙酸乙酯提取液用蒸馏水洗2次（20ml/次），将乙酸乙酯放置在锥形瓶中，密封。
实验五大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定(一)
2）大黄素的分离与精制
将提过大黄酸的氯仿液继续移至分液漏斗中，用PH10缓冲液（5%NaCO3溶
3）芦荟大黄素的分离和精制
余下氯仿液移至分液漏斗后，加5%NaCO3:5%NaOH (9:1) 碱水液200ml振
摇萃取2次，碱水液加HCl酸化，析出的沉淀过滤水洗干燥，用10ml乙酸乙 酯重结晶，得黄色针晶的芦荟大黄素纯品。
注意事项
①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在 于植物组织中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可 溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂，用苯时应注意苯蒸气的挥 发，严防中毒； ②所得的氯仿液中如带有酸水液，应该用分液漏斗分出弃去， 并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。氯仿提取 液放置中如有沉淀析出，可滤取之，该沉淀多为大黄素，余 液进行下一步分离试验用。 ③ 分离萃取时一定注意乳化层的分出，不要混入，并且每步 最好用新鲜CHCl3，回洗碱水液。回洗液应弃去，可除去混 入碱液中的大黄素甲醚和大黄酚。 留取5ml的三氯甲烷提取液做总样，供最后层析鉴定用。
2．分离原理——pH梯度法
根据蒽醌苷元酸性强弱不同，选用不同的pH碱液进行分
步萃取，以分离酸度不同的蒽醌苷元。大黄酸连有COOH，酸性最强；大黄素连有β-OH，酸性第二；芦荟 大黄素连有苄醇-OH，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均 具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH3和-CH3，后者只连 有-CH3，因而后者酸性排在第四位。
1．大黄总蒽醌苷元的提取
大黄粉50g，置于500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和三氯甲烷250ml，
水浴回流提取4h，放置，冷却后过滤，残渣弃去，三氯甲烷提取液置于分液 漏斗中，分出酸水层，得三氯甲烷提取液。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、实验目的1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法二、实验原理1.提取原理双向酸水解法，为一相与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。
由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。
根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。
2.分离原理pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。
具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。
以分离酸度不同的蒽醌苷元。
也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。
（1）大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸（-COOH）＞大黄素（β酚-OH）＞芦荟大黄素（醇-OH）＞大黄素甲醚（-OCH3）≈大黄酚（-CH3）（2）大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。
三、实验方法四、 1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程大黄药材（粗粉）50g乙酸乙酯提取液药渣去除下层酸水层，再用蒸馏水水洗2次（50ml/次）直至乙酸乙酯层pH值呈中性乙酸乙酯提取液碱水层乙酸乙酯层滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次）沉淀物（黄色结晶或黄色絮状沉淀）碱水层沉淀过滤，冰醋酸精制滴加浓盐酸，调节溶液萃黄色结晶（大黄酸）沉淀物（橙色结晶或40ml/次）橙色絮状沉淀）沉淀过滤，碱水层丙酮精制橙色结晶（大黄素）节pH=2沉淀物（橙色絮状沉淀）黄色沉淀物乙酸乙酯层沉淀过滤，乙酸乙酯精制硅胶柱色谱黄色针晶洗脱剂为石油醚（60-90℃）（芦荟大黄素）-乙酸乙酯（15：1）大黄酚和大黄素甲醚混合物2.总蒽醌苷元的提取大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2h，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水层，乙酸乙酯提取液用蒸馏水洗2次（20ml/次），将乙酸乙酯放置在锥形瓶中，密封。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定一、实验目的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法二、实验器材材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。
仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。
三、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。
其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。
其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
大黄酸R1=H R2=COOH大黄素R1=CH3R2=OH芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3大黄酚R1=CH3R2=H四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉10g20%H2SO4 150 ml加热1h, 抽滤、干燥滤饼150ml乙醚回流提取1 h乙醚层水层（紫红色）乙醚层HCl 3大黄酸沉淀（粗品）水层（红色）乙醚层HCl 0.25% NaOH大黄素沉淀（粗品）水层（红色）芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚沉淀（混合物）具体操作步骤1. 游离蒽醌的提取（1）酸水解：称取大黄粗粉10g，加20%H2SO4水溶液150mL，在水浴上加热1小时，放冷，抽滤，滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎，置250mL 圆底烧瓶中，加入乙醚150mL回流提取1小时（调45℃，回流即可），得到乙醚提取液。
大黄游离蒽醌实验报告
一、实验目的1. 掌握大黄游离蒽醌的提取方法。
2. 熟悉大黄游离蒽醌的分离与鉴定技术。
3. 了解大黄游离蒽醌的药理作用及临床应用。
二、实验原理大黄为蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄的干燥根及根茎。
大黄中含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚及其苷等成分，其中大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚等游离蒽醌类成分具有显著的生物活性。
本实验采用pH梯度萃取法提取大黄中的游离蒽醌类成分，并通过高效液相色谱法（HPLC）对其进行分离和鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、氯仿、甲醇、乙腈、0.1%磷酸水、Diamonsil C18色谱柱等。
2. 实验仪器：高效液相色谱仪、超声波清洗器、电子天平、旋转蒸发仪、电热恒温水浴锅、紫外可见分光光度计等。
四、实验方法1. 大黄游离蒽醌的提取（1）称取大黄粗粉10g，加入100mL甲醇，超声提取30min。
（2）过滤，滤液浓缩至约10mL。
（3）向浓缩液中加入5mL浓硫酸，搅拌均匀，室温放置过夜。
（4）加入5mL氯仿，剧烈振荡，静置分层。
（5）吸取氯仿层，重复步骤（3）和（4）至氯仿层颜色变浅。
（6）合并氯仿层，无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪浓缩至干。
（7）用甲醇溶解残渣，定容至10mL，得大黄游离蒽醌提取液。
2. 大黄游离蒽醌的分离与鉴定（1）色谱条件：Diamonsil C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸水（75:25）；流速：1mL·min-1；柱温：35℃；检测波长：254nm。
（2）样品处理：取大黄游离蒽醌提取液，过0.22μm微孔滤膜，进样。
（3）数据分析：根据保留时间、峰面积等数据，对大黄游离蒽醌进行鉴定。
五、实验结果与分析1. 大黄游离蒽醌的提取通过pH梯度萃取法，从大黄中成功提取出游离蒽醌类成分。
实验结果显示，大黄中主要含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚等成分。
清蒸大黄的炮制及其五种游离蒽醌的含量测定分析
清蒸大黄的炮制及其五种游离蒽醌的含量测定分析清蒸大黄是指将大黄草药进行炮制后，用清水蒸馏的方法进行烹制。
其炮制的目的是去除大黄中的有毒成分，提高其药效。
炮制大黄的步骤如下：1. 大黄的炮制一般在秋季进行。
首先将采摘回来的大黄进行晾晒，晾晒的时间一般为一周左右。
2. 晾晒后，将大黄切成薄片或碎末状，然后将其放入铁锅中，加入足够的清水，必须保证大黄完全浸泡在水中。
3. 火炉上烧开水，然后将锅中的大黄放入蒸锅中，再将蒸锅放入火上蒸煮。
蒸锅的蒸制时间一般为5小时左右，要保证大黄完全软化。
4. 火候可调节，一般说来，温热火看见白蒸汽冒出即可。
去除大黄中的有害成分。
清蒸大黄炮制后，可以得到五种游离蒽醌，包括大黄素、芒硝酚素、大黄酚、芒硝酚胺和大黄酮。
这些游离蒽醌是大黄药效的主要成分，具有通便、消炎、解毒的作用。
五种游离蒽醌的含量测定分析可以通过高效液相色谱法（HPLC）进行。
以下是分析步骤：1. 准备样品：取适量的清蒸大黄制备样品，将其粉碎并通过筛网过滤，获得均匀的样品。
2. 准备试剂：购买标准品的大黄素、芒硝酚素、大黄酚、芒硝酚胺和大黄酮作为参比品。
配制各种浓度的标准溶液。
3. 色谱条件：选择合适的色谱柱、流动相和检测波长进行分析。
常见的色谱柱为C18柱，流动相可以是乙腈和水的混合物。
4. 注射样品：将准备好的样品和参比品注射到色谱仪中进行测定。
注射量一般为10μl，溶剂流速一般为1ml/min。
5. 数据处理：根据标准曲线，计算出每种游离蒽醌在样品中的含量。
可以利用峰面积比进行测定。
通过以上的步骤，可以准确地测定出清蒸大黄中的五种游离蒽醌的含量，为进一步研究其药效和用途提供了重要的数据依据。
大黄中蒽醌类化合物的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类化合物的提取分离和鉴定
大黄（Rhizoma Rhei）是一种常用中药，主要含有蒽醌类化合物，如大黄素、大黄酚、大黄酸等。
提取、分离和鉴定大黄中的蒽醌类化合物的常用方法如下：
1. 提取：将大黄粉末与适量的乙醇或乙醚等有机溶剂进行浸泡提取，较常用的是乙醚提取。
在恒温搅拌的条件下，将大黄与乙醚按一定比例混合30分钟以上，然后进行过滤，过滤液即为提取液。
2. 分离：提取液中含有大黄中的多种化合物，其中包括蒽醌类化合物。
为了分离和纯化蒽醌类化合物，通常采用柱层析、薄层层析等技术。
柱层析是将提取液通过填料（如硅胶、活性炭等）柱进行洗脱，根据化合物在柱上的亲疏性和相互间作用力的差异，逐步分离目标化合物。
薄层层析则是将提取液涂抹在硅胶或其他载体上的薄层，再通过浸泡，将化合物分离开。
3. 鉴定：分离到目标化合物后，可以通过理化性质和光谱分析进行鉴定。
常用的鉴定方法有红外光谱（IR）、质谱（MS）和核磁共振（NMR）等。
红外光谱可以用于确定化合物的官能团，质谱可以用于分析分子的质量和结构信息，核磁共振则可以提供化合物的详细结构信息。
以上是大黄中蒽醌类化合物的提取、分离和鉴定的常用方法，通过这些方法可以对大黄中的蒽醌类化合物进行有效地提取、分离和鉴定。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
• 了解大黄的主要成份及掌握大黄中游离蒽醌的理
化性质。
• 会用紫外—分光光度计测1，8-二羟基蒽醌及游离
蒽醌的吸光度。
• 掌握标准曲线的测绘步骤及原理。
• 学会用线性回归方程计算供试液的浓度。
hzdiyan sysmk120 qcxgqt tcsac sj.39/dx tuloutours/ 1rsp sj.39/dx/160116/4759356.ht ml sj.39/dx/160116/4759351.ht ml sj.39/dx/160301/4778530.ht ml sj.39/dx/160301/4778527.ht ml sj.39/dx/160301/4778525.ht ml sj.39/dx/160116/4759366.ht ml sj.39/dx/160115/4758860.ht ml sj.39/dx/160506/4847400.ht ml sj.39/dx/160506/4847413.ht ml sj.39/dx/160506/4847415.ht ml sj.39/dx/160509/4848814.ht ml sj.39/dx/160509/4848817.ht ml sj.39/dx/160509/4848820.ht ml sj.39/dx/160509/4848834.ht ml sj.39/dx/160509/4848837.ht ml sj.39/dx/160509/4848838.ht ml sj.39/dx/160509/4848841.ht ml sj.39/dx/160510/4850235.ht ml sj.39/dx/160510/4850239.ht ml sj.39/dx/160510/4850241.ht ml
，或改变稀释池的厚度。 • （3）供试品试液和对照品试液必须使用相同的溶剂系统和显色系统，并在相
同的条件下进行测定。
c 操作注意
• 若标准曲线通过原点则也可用标准对照法：在相同条 件下配置标准溶液与供试品溶液，在500nm-520nm 处分别测其吸光度根据Beer定律A=ELC,因标准溶液 与供试品溶液是同物质，同仪器，及同一波长于厚度 相同的吸收池中测定，顾L和E都相同，所以有
• C样=A样C标\A标
四 仪器和试剂
• 仪器 圆底烧瓶、冷凝管、水浴锅、分液漏斗
、烧杯、铁架台、析天平、玻璃棒、移液管、 容量瓶、量筒、752式紫外—可见分光光度计、 吸收池。
• 试剂 大黄粉末、 1.8-二羟基蒽醌标准品、
氯仿溶液、甲醇溶液、醋酸镁。
五 实验内容与步骤
• <1> 前期准备 • a 吸收池的的校对：将蒸馏水注入几个厚度相同
的吸收池中，以其中任一个吸收池的溶液做空白 调节透光率为100％，在同一波长处分别测定其他 各吸收池溶液的透光率，然后选择相差小于0.5％ 的吸收池使用。
0.6%的醋酸镁甲醇溶液定容至10ml充分摇匀。用醋酸镁甲醇溶液做空 白对照。开始用752式紫外—分光光度计测量标准溶液 • ④然后在相同条件下测定试液的吸光度。 • ⑤然后以1.8-二羟基蒽醌的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准 曲线后求出回归方程，计算供试液的浓度。
2，标准对照法
• ① 取上面所制备的1.8-二羟基蒽醌标准溶液加入吸收池中 。
•
在相同条件下，测定供试液的吸光度，依据回归方程 A=a·c +b
，求出被测组分浓度。
•
• 大黄中游离蒽醌含量的计算式为：
•
含量﹪﹦m样/m大黄×100﹪
2，标准对照法
• Beer定律A=ELC,因标准溶液与供试品溶液是同物 质，同仪器，及同一波长于厚度相同的吸收池中 测定，顾L和E都相同，所以有
三 实验原理
• <1> 提取原理
• 本实验是利用游离蒽醌不溶于水而溶于氯 仿，乙醚等亲脂性有机溶剂的性质用氯仿 从水解液中将游离的蒽醌提取出来
<2> 测定原理
• 标准曲线法又称工作曲线法或校正曲线法。通过配制 一系列不同的浓度的标准溶液，在相同条件分别测定 吸光度，绘制标准曲线或求出回归方程。在相同的条 件测定试液的吸光度，从标准曲线或回归方程中，求 出被测组份的浓度。根据绘制的标准曲线，算出a和b 代入数据得到 A=bC+a
C样=A样C标\A标
• 大黄中游离蒽醌含量的计算式为：
•
含量﹪﹦m样/m大黄×100﹪
七 注意事项及讨论
a 理想的标准曲线应该是一条通过原点的直线。如若不过原点的原因可能有 （1）空白溶液的选择不当； （2）显色反应的灵敏度不够； （3）吸收池的光学性能不一致等。
b 采用标准曲线应注意的问题： • （1）制备一条标准曲线至少应6-9个点，并不得随意延长。 • （2）待测液浓度应包括在标准曲线范围内；不然则应进行适当的稀释或浓缩
• ② 取醋酸镁甲醇溶液于另一个吸收池作为空白溶剂调整 透光率100%和吸光度为0。
• ③ 然后用752式紫外—分光光度计测定500nm—520nm的 吸光度。
• ④ 再取提取出来的游离蒽醌按照上面方法测定吸光度
六 数据处理
• 1，标准曲线法
• 根据步骤可得回归方程 y=ax＋b 在工作曲线上任意选取2个点求出 回归方程中a、b的数值。
的容量瓶中并用甲醇定容为10ml（待用）。
（二）游离蒽醌含量的测定
• 1，标准曲线法
• ① 称取适量醋酸镁用甲醇溶解配置成0.6%的醋酸镁甲醇溶液充分摇匀 待用，
• ②精密称取1.8-二羟基蒽醌2.5g，用甲醇溶液定容为25ml的标准溶液; • ③精密称取标准溶液20，40,80,160,200,300,400ul于10ml容量瓶中加
• b 首先把 752式紫外—分光光度计打开电源预热
半小时以上
<2>开始实验
• (一)游离蒽醌的提取
• ① 用分析天平精确称量大黄粉末xxxxg，并预热水浴锅。 • ②用滤纸筒包住大黄粉末，然后放入提取器中。 • ③ 在圆底烧瓶中加入30ml氯仿，按实验要求连接回流装置。 • ④ 将水浴锅的温度调到62℃左右后，水浴回流0.5小时以上。 • ⑤ 0.5小时之后取下装置，将圆底烧瓶中的氯仿的提取液转移至10ml