淋巴细胞分离
淋巴细胞分离的原理
淋巴细胞分离的原理
淋巴细胞分离的原理主要是利用淋巴细胞在密度梯度离心中的沉降速率差异进行分离。
淋巴细胞是一种低密度细胞，其密度约为1.06 g/ml，而其他血液细胞如红细胞、粒细胞等的密度
均大于1.06 g/ml，因此可以通过离心来分离淋巴细胞。
具体操作步骤如下：
1. 采集血液样品，一般可采用外周血样品，例如静脉采血。
2. 转移血液样品至离心管中，离心管中需要加入离心介质，常用的有Ficoll或Percoll等。
3. 轻轻混合血液与离心介质，以确保均匀混合。
4. 放入离心机，进行离心。
离心过程中，血液样品会在离心介质形成的密度梯度中逐渐分层。
5. 离心结束后，离心管中会分为不同层次的组分。
上层为清澈的血浆层，中间为若干个白色或黄色的细胞层，其中最上面一个细胞层即为淋巴细胞层。
6. 使用移液器将淋巴细胞层吸取出来，转移至另一个离心管中。
7. 加入适当的洗涤缓冲液，如PBS，进行洗涤。
洗涤缓冲液
的作用是去除离心介质残留和其他杂质。
8. 离心再次沉淀淋巴细胞，并倒掉上清液。
9. 加入适量的培养液，使淋巴细胞得到适当的营养和环境，以维持其存活和生长。
通过以上步骤，可以将淋巴细胞从血液中分离出来，并得到较为纯净的淋巴细胞样本，便于后续实验和研究的进行。
淋巴细胞分离方法
淋巴细胞分离方法
淋巴细胞是咱们身体免疫系统里超级重要的小战士呢。
那怎么把它们从其他细胞里分离出来呢？这可有不少有趣的办法哦。
有一种方法叫密度梯度离心法。
想象一下，就像把不同重量的东西放在一个超级特别的旋转机器里。
咱们把血液或者含有淋巴细胞的组织液放在一种有特殊密度的溶液里，然后让这个混合液高速旋转起来。
淋巴细胞就像是一群小机灵鬼，它们会根据自己的密度，跑到溶液里特定的位置。
其他细胞呢，就被分离开啦。
就好像是在一场超级有趣的细胞大派对里，淋巴细胞们被安排到了专属的小角落。
还有一种叫免疫磁珠分离法。
这个方法可酷啦。
咱们给淋巴细胞贴上一种特殊的小标签，这个小标签就像是一个小磁铁。
然后把这个带有标签的细胞混合液放在一个有磁场的地方。
那些贴了标签的淋巴细胞就会被磁场吸引住，就像小铁屑被磁铁吸住一样。
这样就能轻松地把淋巴细胞和其他细胞分开啦。
这就像是给淋巴细胞们发了个特别的通行证，只有它们能被磁场这个小保安给挑出来。
另外，贴壁黏附法也很有意思哦。
淋巴细胞不太喜欢黏附在容器壁上，但是有些细胞就特别爱黏附。
咱们把细胞混合液放在一个容器里，过一会儿，那些爱黏附的细胞就像小懒虫一样趴在容器壁上了，而淋巴细胞还在溶液里自由自在地游着。
这时候把溶液取出来，就得到比较纯的淋巴细胞啦。
就好像是在一个细胞宿舍里，那些黏附细胞是赖床的，淋巴细胞是早起活动的，咱们把早起活动的给挑出来就好啦。
淋巴细胞分离液的原理
淋巴细胞分离液的原理
淋巴细胞分离液是一种用于分离淋巴细胞的重要试剂，其原理主要基于淋巴细
胞与其他细胞在密度梯度离心过程中的不同沉降速度。
淋巴细胞分离液通常由多聚葡萄糖和离子型高分子聚合物组成，这些成分能够形成梯度，使得淋巴细胞在不同密度的位置上有不同的沉降速度，从而实现淋巴细胞的分离。
首先，我们需要明白淋巴细胞分离液的密度梯度原理。
密度梯度是指在一个管中，由上至下逐渐增大或减小的溶液密度。
在离心过程中，淋巴细胞会在密度梯度中找到自己的平衡位置，形成不同密度层次，从而实现淋巴细胞的有效分离。
其次，淋巴细胞分离液的原理还涉及到细胞的沉降速度。
由于淋巴细胞本身的
密度和大小与其他细胞有所不同，因此在密度梯度中，淋巴细胞会根据自身的密度和大小，以不同的速度向下沉降，最终实现分离。
另外，淋巴细胞分离液的原理还与其成分有关。
多聚葡萄糖和离子型高分子聚
合物能够形成密度梯度，提供适合淋巴细胞分离的条件。
同时，这些成分对细胞的生长和代谢没有明显的影响，保证了淋巴细胞的生物学活性。
总的来说，淋巴细胞分离液的原理是基于密度梯度离心和细胞沉降速度的差异，利用多聚葡萄糖和离子型高分子聚合物形成的梯度，使得淋巴细胞在离心过程中被有效地分离。
这种原理为淋巴细胞的纯化和分离提供了重要的技术支持，广泛应用于生物学研究和临床诊断中。
淋巴细胞分离液的原理不仅为科研工作者提供了便利，也为医学领域的发展做出了重要贡献。
淋巴细胞分离液的原理
淋巴细胞分离液的原理
淋巴细胞分离液是一种用于分离淋巴细胞的溶液。
它的原理是利用淋巴细胞和其他细胞在密度上的差异来进行分离。
淋巴细胞分离液通常是由密度梯度离心法制备而成的。
首先，一种或多种高密度物质（如Ficoll、Percoll等）被溶解在无菌
生理盐水或缓冲液中，形成密度梯度溶液。
然后，这个溶液被注入到离心管中。
接下来，待分离的淋巴细胞样品被加入到离心管中的密度梯度溶液上方。
离心管被放置在离心机中进行离心操作。
离心的过程中，样品中的细胞会向下沉降，并在密度梯度中找到自己的位置。
由于淋巴细胞在密度上相对较轻，它们通常会沉降到密度梯度溶液的较低密度区域。
而其他细胞（如红细胞、血小板等）普遍比淋巴细胞密度高，它们会沉降到密度梯度溶液的较高密度区域。
当离心结束后，离心管中的密度梯度溶液会形成不同的层次，每个层次含有不同种类的细胞。
淋巴细胞分离液将淋巴细胞与其他细胞有效地分离开来。
最后，通过使用适当的技术，如离心、吸引、冲洗等，从密度梯度中提取和收集分离的淋巴细胞。
这种方法能够获得高纯度、高活力的淋巴细胞样品，用于进一步的实验研究。
人淋巴细胞分离液说明书(3篇)
第1篇一、产品概述本产品为一种生物医学试剂，主要用于从人血液中分离纯化淋巴细胞。
淋巴细胞是人体免疫系统的重要组成部分，广泛用于免疫学研究和临床诊断。
本产品采用特殊的分离技术，能够高效、快速地从人外周血中分离出高纯度的淋巴细胞，为后续的免疫学研究提供高质量的实验材料。
二、产品规格| 产品规格 | 批号 | 有效期 || :-------: | :---: | :----: || 100ml/瓶 | ABC123 | 2025年12月 |三、产品特性1. 高效分离：本产品采用独特的分离介质，能够高效地将淋巴细胞与其他血细胞分离，分离效率高，纯度好。
2. 操作简便：本产品使用方法简单，无需特殊设备，适合实验室常规操作。
3. 稳定性好：本产品在规定的储存条件下，稳定性良好，保质期内质量稳定。
4. 无污染：本产品在生产过程中严格遵循无菌操作规程，产品无细菌、病毒等生物污染。
四、产品用途1. 免疫学研究：用于分离淋巴细胞，进行细胞因子检测、细胞培养、细胞因子基因表达等研究。
2. 临床诊断：用于检测血液中的淋巴细胞，辅助诊断某些疾病，如自身免疫性疾病、肿瘤等。
3. 药物研发：用于药物筛选、药效评价等。
五、使用方法1. 准备工作：- 将分离液室温下平衡至室温。
- 准备无菌试管、移液器、吸头等实验器材。
- 准备适量抗凝剂（如EDTA-K2）。
2. 操作步骤：- 将抗凝全血加入分离管中，轻轻混匀。
- 将分离液加入另一支无菌试管中，加入量约为全血量的2倍。
- 将全血和分离液轻轻混合，避免产生气泡。
- 将混合后的样品垂直静置1-2小时，直至形成清晰的三层界面。
- 小心吸取淋巴细胞层，避免混入其他细胞层。
- 将淋巴细胞转移至新的无菌试管中，加入适量磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤，重复洗涤2-3次，以去除残留的分离液和杂质。
- 最后，将洗涤后的淋巴细胞悬浮于适量的PBS中，即可进行后续实验。
六、注意事项1. 操作过程中应严格遵守无菌操作规程，防止污染。
人外周血淋巴细胞分离液tbd 步骤
人外周血淋巴细胞分离液tbd 步骤人外周血淋巴细胞（Peripheral Blood Lymphocytes，PBL）是指存在于人体外周血液循环中的一类免疫细胞，具有重要的免疫功能。
为了进一步研究这些细胞的结构和功能，需要将其分离和纯化出来。
TBD法（T-Lymphocyte and B-Lymphocyte Discrimination method）是一种常用的人外周血淋巴细胞分离液的制备方法，本文将详细介绍其步骤。
TBD法的具体步骤如下：1.收集外周血样本：首先，需要通过合适的方法收集新鲜的人外周血样本。
最常用的方法是使用静脉血采集针和试管，并采用适当的抗凝剂，如肝素、EDTA等，以阻止血液凝固。
2.稀释血样：将采集到的外周血样本用适量的PBS（磷酸盐缓冲液）或RPMI 1640（常用的培养基）稀释，在混合均匀后使血液与稀释液的比例约为1:1。
3.密度梯度离心：将稀释后的血样缓慢倒入离心管中，并加入缓冲液最上层和下层，形成密度梯度。
最常用的密度梯度制备方法是将无菌的Ficoll-Hypaque溶液（密度为1.077 g/mL）加入离心管底部。
然后，将离心管安置在离心机中，进行高速离心。
4.洗涤淋巴细胞：经过离心后，管中细胞会在密度梯度上不同的位置形成分层，外周血单核细胞和淋巴细胞富集在上清液中。
使用无菌技术，小心地从上清液中采集单个细胞初浆液（称为淋巴细胞悬液），放入离心管中。
5.离心洗涤：离心洗涤的目的是去除细胞残留的Ficoll-Hypaque和其他有害物质，同时收集干净的淋巴细胞悬液。
将采集到的淋巴细胞悬液加入无菌PBS或RPMI 1640中，混匀后进行低速离心。
将上清液丢弃，保留沉淀。
6.细胞复苏：在离心洗涤过程中，细胞可能会受到机械力的破坏，需要进行适当的细胞复苏。
加入培养基到离心管中，轻轻混匀，使细胞中的膜完全复苏，维持其正常的形态和功能。
7.细胞计数和监测：使用显微镜和倒置显微镜，对分离得到的淋巴细胞进行直接观察和计数。
淋巴细胞分离
淋巴细胞分离与计数淋巴细胞分离原理：外周血各种血细胞的密度不尽相同，利用淋巴细胞分层液（Ficoll）作密度梯度离心，使一定比重的细胞群按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。
实验材料：淋巴细胞分离液肝素稀释液（生理盐水）RPMI1640粉末实验设备：1ml移液器、移液管、 5ml注射器、刻度吸管、EP管、离心机、显微镜操作流程：1.在离心管中加入适量淋巴细胞分离液。
2.无菌采集静脉血若干毫升,注入盛有肝素的无菌小瓶中，（每1ml全血加0.1ml 125-250U/ml肝素溶液),加盖后立即轻轻摇匀,使血液抗凝3.稀释（外周血：稀释液=1：2 取肝素抗凝血与等量生理盐水充分混匀）4.用刻度吸管沿倾斜的管壁，把稀释血缓慢叠加于分层液面上，注意保持清楚的界面（Ficoll：稀释血=1：2）5.放入离心机1500r/min 离心20min（注:缓慢加速1-4档个3分钟）6.用吸管插到云雾层，吸取单个核细胞。
置入另一离心管中，加入5倍以上体积的稀释液（生理盐水），1500rpm×10分钟离心，洗涤细胞。
7.重复洗涤一次，1500rpm×10分钟离心。
8.末次离心后，弃上清，加入含有10％小牛血清的RPMI1640，重悬细胞9.计数细胞后再调整细胞置所需浓度.10.取一滴细胞悬液与一滴0.2％台盼兰染液混合，于血球计数板上，计数四个大方格内的细胞总数。
单个核细胞浓度(细胞数／1毫升细胞悬液)＝4个大方格内细胞总数──────────×10４×2(稀释倍数)411.分离出的淋巴细胞置于培养瓶中二氧化碳培养箱培养。
注意事项:1.每毫升外周血液大约可获1×106单个核细胞2.Ficoll应适量，外周血应充分稀释3.温度直接影响到Ficoll的比重和分离效果4.在Ficoll上加入稀释外周血时，应缓慢加，以免冲散界面5.吸取单个核细胞层时，应避免吸出过多的上清液或分层液而导致血小板污染淋巴细胞计数：实验流程：1.准备计数板：2.制备细胞悬液：收集细胞，制成单个细胞悬液3.加样：用吸管轻轻吹打细胞悬液，取少许细胞悬液，在计数板上盖玻片的一侧加微量细胞悬液，4.计数：在显微镜下，用10×物镜观察计数板四角大方格中的细胞数5.计算：将结果代入下式，得出细胞密度胞数/毫升原=（4大格细胞数之和/4）×104注意事项：1.取样计数前，应充分混匀细胞悬液2.加样量不要溢出盖玻片，也不要过少或带气泡3.细胞压中线时，数上不数下，数左不数右4.本法要求细胞密度不低于104细胞/ml5.镜下计数时，细胞数过少或过多，说明稀释不当，需重新制备细胞悬液、计数。
淋巴细胞 分离方法
淋巴细胞分离方法淋巴细胞是免疫系统中的一类重要细胞，它们在保护机体免受病原体和其他外部侵袭物的侵害中起着重要作用。
为了研究和理解淋巴细胞的功能和特性，需要从体内样本中分离出淋巴细胞。
本文将介绍几种分离淋巴细胞的常用方法。
1. 密度梯度离心法密度梯度离心法是最常用的分离淋巴细胞的方法之一。
该方法基于淋巴细胞与其他细胞（如红细胞和中性粒细胞）在离心过程中在不同密度梯度下沉降速度的不同。
一种常用的密度梯度离心介质是Ficoll-Hypaque，它是一种高渗透压溶液。
将全血或其他样本与Ficoll-Hypaque混合后离心，淋巴细胞会沉积在密度梯度下层，其他细胞则沉积在上层或底层。
通过取得下层液体，可分离得到富含淋巴细胞的悬浮液。
2. 黏附法黏附法是一种常用的非离心方法。
它基于淋巴细胞与塑料或玻璃表面的亲和性差异。
将样本与普通培养皿等容器接触，淋巴细胞会黏附在容器表面，而其他细胞则较少或不黏附。
在培养过程中，淋巴细胞会逐渐扩增，并可以通过洗涤等步骤分离得到。
3. 磁珠法磁珠法是一种利用磁性特性分离淋巴细胞的方法。
通过将淋巴细胞表面标记上磁珠特异抗体，使其与抗体携带的磁珠结合，然后通过磁场使磁珠和与其结合的淋巴细胞沉降在一侧，从而分离出淋巴细胞。
这种方法可以非常精确地分离出特定类型的淋巴细胞。
4. 细胞排序法细胞排序法是一种高级的分离淋巴细胞的方法，它基于流式细胞术或荧光激光共聚焦显微镜等技术。
这种方法通过在淋巴细胞表面标记上荧光染料或抗体，然后使用器械和设备进行精确的细胞分选。
这种方法可以快速准确地分离出不同类型的淋巴细胞，并可以进一步进行功能和表型分析。
尽管以上方法在分离淋巴细胞中非常有效，但每种方法都有其局限性。
例如，密度梯度离心法在操作过程中可能会对淋巴细胞产生一定的损伤；黏附法可能对特定类型的淋巴细胞选择性较差；磁珠法和细胞排序法则需要较为复杂的设备和技术。
因此，在具体选择方法时需要综合考虑研究的目的、操作难度和资源条件等因素。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
用毛细吸管吸取界面处的淋巴细胞与单 个核细胞，置于含5倍体积的Hanks液 的离心管中， 1000r/min离心10min；
用Hanks液重复洗涤一次， 1000r/min离心10min；
最后用Hanks液配成1×107个细胞/ml 浓度的细胞悬液。
要求 分离的淋巴细胞纯度高、产量多，而且不丧失活性，同时 也要求分离技术简单、操作方便。
细胞分离基本原理
➢不同细胞密度不同 ➢不同细胞表面生物学特性不同 ➢不同细胞表面分化抗原不同
一、白细胞的分离
血液中红细胞与白细胞比例约为600~1000：1， 两者的比重不同其沉降速度也不同，通常用两种方法 加以分离。（直立静置RT30～60min，紧贴红细 胞层上的白膜层）
三、豚鼠淋巴细胞的分离
采血前的准备 用注射器取3 ml淋巴细胞分层液于一试管中. 再用注射器吸取２ml的阿氏液，并保存在注射 器中．
心脏采血 取血前应探明心脏搏动最强部位，通常在胸骨左 缘的正中，选心跳最显的部位作穿刺。针头宜稍 细长些，以免发生手术后穿刺孔出血。
取豚鼠抗凝血4毫升，加3毫升Hanks 液使之稀释。
（二）EA花环
B细胞表面带有IgG Fc段受体，AgAb复合物中IgG Fc 段牢固结合；这类红细胞抗体致敏的动物红细胞（EA)黏附在 B细胞周围形成花环。
（三）尼龙毛柱分离法
利用B细胞和单核细胞具有黏附在尼龙（nylon wool) 表面的特性。
先洗脱出的事T细胞，再用培养也便冲洗边捻 压塑料管，流出来的液体中主要含B细胞。T细胞 纯度达90%，B细胞纯度达80% 。
（3）阿氏液（Alsever液）：
枸橼酸钠（Na3C6H5O7·5H2O） 0.80g 枸橼酸 0.0325g 葡萄糖 2.05g 氯化钠 0.42g H2O 加至 100.00ml 混匀溶解后，114.3℃高压蒸汽灭菌10min备用。
阿氏液中既含有枸橼酸钠抗凝剂，又含有细胞生存的营养，所以它既可做抗 凝剂，又可做血细胞的保存液。 以阿氏液和采血量以1︰1比例采集血液，边采边轻轻摇动采血瓶，使之混匀。 用阿氏液采血，除了抗凝外，多用于红细胞的保存。一般在4℃条件下，阿 氏液中保存的红细胞2周其活性和特性不变。
人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMC）的分离
聚蔗糖-泛影葡胺(ficoll-hypaque)
2、Percoll分层液
是一种连续密度梯度离心分离法，其主要成分为：硅胶颗粒，其 原液密度为：1.135。经过聚乙烯吡咯烷酮（polyvinyl pyrolidone,PVP)处理的硅胶颗粒大小不一的混悬液。高速离心 后，形成连续密度梯度（由下而上的逐减的连续密度梯度，density gradient），可将密度不同的细胞分离纯化。可将血液分成四层， 从上到下依次是：死亡细胞和血小板、单核细胞、淋巴细胞、粒 细胞和红细胞。淋巴细胞纯度98%, 单核细胞纯度78%。流程长, 步骤繁, 成本
正选（positive selection）法： 纯化所需的细胞
负选（negtive selection）法： 去除不要的细胞，留下所需细胞
（一）亲和板结合分离
将所需的细胞对应的单克隆抗体包被于小管内→加入淋巴 细胞→形成Ag-Ab复合物→洗去不反应的物质。
（二）免疫磁珠分离
磁性微珠(magnetic beads
①用FACS分离细胞准确快速、纯度高、回收率高， 能保持细胞活力，并可在无菌条件下进行。
②仪器昂贵，极少用于常规，而多数仅作为研究的 手段
六、细胞的保存及活力测定
1、分离细胞的保存 （1）短期保存 用含有10%~20%灭活小牛血清的 Hanks、RPMI 1640 培养液可保存数周 （2）长期保存及复苏 保存：在保护剂二甲亚砜中于液氮（-196℃)中保存。其 过程是：先对需冻存的细胞作活细胞计数，低速离心后， 取沉积细胞用含有10%二甲亚砜的小牛血清配制成适当浓 度的细胞悬 液，分装于冻存管内，立即放入降温过渡站 ( -80℃)中，继而进行降温(-196℃)冷冻。
高。
三、淋巴细胞的分离与纯化
PBMC悬液富含淋巴细胞，但有混杂有单核细胞、红 细胞和血小板。 红细胞的去除: 无菌蒸馏水低渗裂解法或0.83%氯化铵处理法。 血小板的去除: 离心洗涤2~3次。
（去单核细胞）
贴壁粘附法 磁铁吸引法 Percoll 分离液法
1. 贴壁粘附法 利用二者具黏附玻璃、塑料和葡聚糖凝胶（Sephhadex G-10) 等特性。95%为淋巴细胞，活性大于95% 。但损失部分B淋 巴细胞。
注意事项
如果分离细胞用作培养，全过程在超净台中完成。 分离柱一般只能一次应用，再用时分离效率降低。 抗体包被磁珠和死细胞常有非特异性结合，因而分选前应
去除死细胞；上分离柱前，充分振荡混悬细胞，打散细胞 团块。 用分离柱分选，应用真空抽滤水，减少水中气泡，使分离 柱不被气泡阻滞
（三）流式分选
1、自然沉降法
外周血， 抗凝，静置约一小时血液分为三层，上层为 血浆，底层为红细胞，紧贴红细胞层上面的灰白层为WBC， 轻轻吸取此层即可得到富含WBC悬液，低渗破坏RBC，洗涤 即可。
无菌蒸馏水低渗裂解法或0.83%氯化铵处理法。
2、聚合物加速沉淀法
某些高分子聚合物（如明胶、右旋糖酐、甲基纤维素和 聚乙烯吡咯烷酮等）可使红细胞凝聚成串，加速红细胞沉降， 使之更易与白细胞分离。本法的细胞获得率比自然沉降法高。
2.磁铁吸引法 PBMC吞噬直径3um的羰基铁颗粒，用磁铁将细胞吸至管
底，上清即含较纯的淋巴细胞。
3. Percoll 分离液法
四、T细胞和B细胞的分离
➢ E花环沉降法 ➢ EA花环沉降法 ➢ 尼龙毛柱分离法
（一）E花环沉降法
成熟T细胞表面有SRBC受体（E受体），可和SRBC形成E 花环，B细胞则无。
①免疫磁珠分离法具有高纯度（8099％），高得率 （9095％）、高细胞活性（99 100%）的特点，仅次或 相当于流式细胞仪（FACS）的分选效率。
②与FACS 相比，本方法操作简单、省时、经济；可用做 FACS分选前的预分离，以减少FACS所用时间。
③另外连续两次过柱分选可进一步提高分选细胞纯度，通常 可达95－99％。
荧光激活细胞分离仪(FACS)主要由4部分组成:细胞流动系 统及气压流速控制系统;激发系统;检测与讯号处理系统;细 胞分选系统。
荧光激活细胞分离仪 （fluorescence activated cell sorter，FACS）
细胞经荧光染色后，通过高速流动系统，细胞排成单行， 逐个流经检测区。
免疫细胞分离和保存技术
意义
临床上的各种类型的免疫缺陷、自身免疫病以及肿瘤等 疾病均可出现淋巴细胞或淋巴亚群的数量和功能的变化。因 此用体外方法对机体具有免疫反应的外周血淋巴细胞及其亚 群的数目或比例以及它们所显示的功能的强弱进行检测，是 判断机体细胞免疫水平的一种重要手段。这对于临床认识疾 病、探讨其发病机制、观察病情变化、判断预后、考核疗效 和防治疾病等方面均有重要意义。
离心之前一定要配平
四、家兔红细胞分离
心脏采血 把采取的血液轻轻沿壁注入到试管中．并轻
轻摇晃几次． 取家兔阿氏液混合的血液，以Hanks洗三次
（2000r/min离心10分钟）。然后，将压 积红细胞用Hanks液配制成1%悬液。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 常用的分离剂为：Ficoll和Percoll分离剂
1、 Ficoll分层液
主要用于分离外周血中的单个核细胞，是一种单次密度梯度
离心分离法。其主要成分为聚蔗糖(商品名为Ficoll )其密度为 1.020。可将血液分成四层，从上到下依次是：血浆、单个核细胞、 粒细胞和红细胞。
Ficoll 成份：2份6%聚蔗糖（ficoll)水溶液 + 1份34% 泛影葡胺（hypaque)生理盐水溶液。
当细胞从流动室喷嘴处流出时，超声振荡搅动液流，使液 流断裂成一连串的均匀小滴，每小滴内最多含一个细胞 （其中只有百分之几的液滴中含细胞）。
细胞经激光照射产生荧 光和散射光，信号经计 算机系统处理，分辨细 胞的类型。如识别的是 所需的细胞时（如T细 胞），使液滴瞬即感应 阳电荷、阴电荷或不带 电荷，使所需的细胞在 电场偏转下进入不同的 收集管。
实验步骤
一、动物保定
豚鼠的抓取保定
豚鼠性情温顺，胆小易惊，一般不易伤人。捉拿时，实 验人员可先用手轻轻扣、按住豚鼠背部，顺势抓紧其肩胛 上方皮肤，拇指和食指环其颈部，用另一只手轻轻托住其 臀部，即可将豚鼠抓取保定。
兔的抓取保定
家兔驯服不咬人，但四肢的爪尖锐，挣扎时容易抓伤人。 抓取保定方法是用右手把两耳拿在手心并抓住颈后部 皮肤，提起家兔，然后用左手托住臀部。
二、外周血单个核细胞分离
外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell)主要指淋巴细胞和单核 细胞，是免疫学实验中最常用的细胞群。密度为 1.075~1.090 。
➢人的红细胞密度为1.093
➢粒细胞密度为1.092
➢单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为
1.075-1.090
五、细胞亚群的分离
（一）亲和板结合分离 （二）免疫磁珠分离 （三）流式分选
免疫细胞表面标志
T细胞：TCR、CD3、CD4、CD8、CD25等 B细胞：BCR 、 CD19、CD5等 NK细胞: TCR/CD3－、BCR/CD19－、CD56+、CD16+ Macrophage: DC: Mast cells: ……
另一种方法是使用家兔保定栏。
二、抗凝剂
（1）肝素：肝素是含硫酸基的粘多糖，常用其钠盐或钾盐，它能阻止凝血酶 原转化为凝血酶，进而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白，从而阻止血液凝固。 常用的肝素溶液浓度为1 000U/ml，市售肝素多为100U~126U／mg。使每 ml血液含15U~20U肝素。