MD PACIFIC 淋巴细胞分离液说明书
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液是一种常用的实验试剂，用于分离和提取人体外周血中的淋巴细胞。
下面是使用该试剂的详细说明：
1. 实验准备：
- 准备干净的工作台和操作工具。
- 检查分离液是否过期，确保其保存条件良好。
- 为实验准备足够数量的外周血样本。
2. 样本处理：
- 从被试者的外周血中采集适量的血液。
- 使用无菌技术将血液转移至无菌离心管中。
3. 样本离心：
- 将含有外周血的离心管放入离心机中。
- 以2000-2500转速离心10分钟，使细胞沉淀到离心管底部。
4. 废液处理：
- 弃去上层的血浆和血小板，只留下上清或底部的细胞悬浮液。
5. 细胞分离：
- 将分离液缓慢倒入含有细胞沉淀的离心管中，通常使用10 mL分离液对应1 mL的细胞悬浮液。
- 轻轻摇晃离心管，使分离液均匀混合。
- 静置15-20分钟，使淋巴细胞在分离液中上浮。
6. 细胞收集：
- 将含有上浮淋巴细胞的上清缓慢转移到新的离心管中。
- 用相同的方法重复上述步骤，以提高细胞收集率。
- 将收集到的细胞悬浮于适当的培养基中，进行后续实验。
请注意，这只是一个基本的使用说明，具体的实验步骤和分离效果可能会因实验目的和细胞样本的来源而有所不同。
在进行实验前，建议查阅供应商提供的用户手册，以获得更加详细的使用说明和操作技巧。
同时，使用过程中严格遵守实验室安全操作规范，确保个人和实验室的安全。
希望以上使用说明能够对您的实验工作有所帮助。
人周血淋巴细胞分离液技术要求
人外周血淋巴细胞分离液产品技术要求3.1 产品规格及其划分说明250ml/瓶、500ml/瓶、3.2 性能指标3.2.1 外观乳光或微乳光液体。
3.2.2 澄清度比重1.077 –1.080 g/mL3.2.3 pH值（每升标示量/L）pH要求为7.1～7.3，允许偏差范围为±0.30。
3.2.4 渗透压/（m0sm/kgH2O）渗透压为280～340 m0sm/kgH2O3.2.5 细菌内毒素/（EU/ml）﹤0.53.2.6 无菌检查3.2.6.1 细菌数不得检出3.2.6.2霉菌数不得检出3.2.7 细胞分离实验3.2.7.1 细胞形态正常。
3.2.7.2细胞分离数量及存活率数量：90%-95%；存活率：95%-98%3.2.8 安全性检验项目抗生素：不得检出。
3.3 检验方法3.3.1外观检测方法肉眼观察为乳光或微乳光液体3.3.2 澄清度的测定按中华人民共和国药典2010年版二部附录ⅨB进行。
3.3.3 pH值的测定按中华人民共和国药典2010年版二部附录ⅥH进行。
3.3.4 渗透压的测定按中华人民共和国药典2010年版二部附录ⅨG进行。
取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的5℅。
3.3.5 细菌内毒素的测定按中华人民共和国药典2010年版二部附录ⅪE细菌内毒素检查法中的凝胶法进行。
3.3.6 无菌检查按中华人民共和国药典2010年版二部附录ⅪH无菌检查法进行，检查项目为细菌数、霉菌数。
检测法采用平皿法。
3.3.7 人周边血淋巴细胞分离计数及存活率检测实验3.3.7.1 人周边血细胞分离实验3.3.7.1.1方法提要1）本实验所用容器具及溶液均为无菌，实验操作过程均为无菌操作。
2）分离外周血，并计数分离所得细胞及细胞存活率3.3.7.1.2 实验试剂和材料1）人外周血：新鲜血5ml(加肝素抗凝20u/ml)2）分离液：本产品样品3）1640无血清培养液4）10%NCS5）3%冰醋酸6）台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒3.3.7.1.3 仪器1）医用超级洁净工作台：洁净级别为百级。
动物组织淋巴细胞分离液使用说明
动物组织淋巴细胞分离液使用说明规格：4×200mL/kit保存：18-25℃保存，有效期2年。
动物组织淋巴细胞分离液易感染细菌，需无菌条件下操作。
无菌条件下操作，启封后置于常温保存。
如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
试剂盒内容：样本稀释液200mL清洗液200mL动物组织淋巴细胞分离液200mLF液200mL操作步骤：全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。
1.首先制备组织单细胞悬液。
2.取一支15ml离心管，加入与组织单细胞悬液等量的分离液（注：分离液最少不得少于3ml）。
3.用吸管小心吸取组织单细胞悬液加于分离液液面上，400-500g，离心20-30min。
（注：根据组织单细胞悬液量确定离心条件，组织单细胞悬液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。
4.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。
第一层为稀释液层。
第二层为环状乳白色淋巴细胞层。
第三层为透明分离液层。
第四层为红细胞层。
5.用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15ml离心管中，向离心管中加入10ml清洗液，混匀细胞。
6.250g，离心10min。
7.弃上清。
8.用吸管以5ml清洗液重悬所得细胞。
9.250g，离心10min。
10.重复7、8、9，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。
注意事项：1.全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。
为获得最佳的实验结果，最好在取样2h内进行实验，样品存放时间越长，细胞分离效果越差。
样品放置超过6h后分离效果更差甚至不能达到分离目的。
2.本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。
3.吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加。
大鼠骨髓淋巴细胞分离液使用方法
大鼠骨髓淋巴细胞分离液使用方法
大鼠骨髓淋巴细胞分离液的使用方法如下：
1. 悬浮细胞：将需要进行分离的细胞悬浮在分离液中。
2. 离心：将悬浮液在2000rpm的转速下离心5分钟，收集沉淀的细胞。
3. 清洗：使用清洗液清洗离心后的细胞沉淀，以去除杂质和多余的分离液。
4. 再次离心：将清洗后的细胞在相同条件下再次离心，以进一步纯化细胞。
5. 培养：将纯化后的细胞接种到培养基中进行培养，以进行后续的实验或研究。
需要注意的是，大鼠骨髓淋巴细胞分离液需要在无菌条件下操作，且启封后应置常温保存。
如果需要在4℃保存，应避免出现白色结晶，以免影响分离效果。
此外，该试剂盒易感染细菌，因此在使用过程中需要特别注意无菌操作。
以上是大鼠骨髓淋巴细胞分离液的使用方法，仅供参考，如需获取更多详细信息，建议查阅相关网站。
淋巴细胞分离液说明书
Lonza Walkersville, Inc.biotechserv@Tech Service: 800-521-0390Document # INST-17-829-1 06/07Walkersville, MD 21793-0127 USA© 2007 Lonza Walkersville, Inc.Lymphocyte Separation MediumInstruction For Use17-829EIntroductionLymphocyte Separation Medium (LSM) is a mixture of Ficoll® and sodium diatrizoate (Hypaque) with density adjusted to 1.077 g/ml. This sterile filtered product is intended for laboratory/manufacturing use, and is not for in vitro diagnostic use. It is commonly used to isolate lymphocytes from human blood. One protocol to accomplish this is presented here.Protocol1. Anticoagulated blood (citrated or heparinized)should be used.Note: Always treat human and other primatesource material as potentially infectious and take safety precautions.2. Dilute blood 1:1 with calcium-magnesium-freePBS and layer 9 ml onto 6 ml LSM. Use a clearplastic centrifuge tube with a cap. For largevolumes use a similar ratio of diluted blood toLSM.3. Centrifuge at 400xg for 15 minutes.4. Remove plasma-PBS without disturbing theinterface.5. Collect the interface with a cannula and dilute to20 ml in serum-free medium, such as RPMI1640.6. Centrifuge at 70xg for 10 minutes.7. Discard supernatant fluid and resuspend pelletin 2-3 ml serum-free medium.8. Count nucleated cells on a hemocytometer orelectronic counting device.9. Lymphocytes will be concentrated at theinterface, along with some platelets andmonocytes. Granulocytes will be found mostly in the Lymphocyte Separation Medium anderythrocytes will pellet at the bottom of the tube.References1. Boyum, A. 1968. Isolation of mononuclear cellsand granulocytes from human blood. Isolation of mononuclear cells by one centrifugation, and ofgranulocytes by combining centrifugation andsedimentation at 1 g. Scand. J. Clin. Lab. Invest.Suppl. 97:77-89.2. Boyum, A. 1976. Isolation of lymphocytes,granulocytes and macrophages. Scand. J. Clin.Lab. Invest. Suppl. 5:9-15.3. Boyum, A. 1977. Separation of lymphocytes,lymphocyte subgroups and monocytes: areview. Lymphology. 10-2:71-6.4. Boyum, A. 1984. Separation of lymphocytes,granulocytes and monocytes from human blood using iodinated density gradient media. Methods Enzymol. 108:88-102.5. Boyum, A. et al. 2002. Separation of HumanLymphocytes from Citrated Blood by DensityGradient (NycoPrep) Centrifugation: MonocyteDepletion Depending upon Activation ofMembrane Potassium Channels. Scand. J.Immunol. 56-1:76-84.6. Koistinen, P. 1987. Human peripheral blood andbone marrow cell separation using densitygradient centrifugation on Lymphoprep andPercoll in haematological diseases. Scand. J.Clin. Lab. Invest. 47-7:709-14.7. Rola-Pleszczynski, M. and W.H. Churchill. 1978.Purification of human monocytes by continuous gradient sedimentation in ficoll. J. Immunol.Methods. 20:255-62.Product Use StatementTHESE PRODUCTS ARE FOR RESEARCH USE ONLY. Not approved for human or veterinary use, for application to humans or animals, or for use in clinical or in vitro procedures.INST-17-829-1 06/07Ficoll is a trademark of GE Healthcare. All other trademarksherein are marks of Lonza Group or its subsidiaries.1。
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液使用说明使用人外周血淋巴细胞分离液的步骤如下：1.样本准备：准备外周血样本，并将其采集到一个干净的试管中。
确保样本是新鲜的，并在使用前充分混合。
2.离心：将样本离心，以去除血浆或血浆和血小板，通常以低速（300×g）离心5-10分钟。
将离心管中的血浆小心吸除。
3.阻止红细胞溶解：加入足够的红细胞阻断缓冲盐溶液到血细胞沉淀中，使其与样本体积相等。
这将阻止红细胞的溶解和污染淋巴细胞。
4.包裹淋巴细胞：将滤质或管中的混合物转移到一个滤筒或离心管中，并加入合适的分离液。
分离液的添加量通常是样本体积的2-3倍。
5.混合和离心：彻底混合分离细胞和分离液，然后以适当的速度和时间进行高速离心（500×g，5-10分钟）。
此步骤将导致淋巴细胞在分离液的底部形成一个沉淀。
6.转移沉淀：使用无菌吸管或移液器小心地将沉淀转移到干净的离心管中，以避免污染。
7.洗涤：向沉淀中加入足够的平衡缓冲盐溶液，如磷酸缓冲盐溶液，轻轻混合后进行低速离心。
再吸去上清液，保留沉淀。
8.储存：沉淀可在冷藏条件下暂时储存，或冷冻保存以备将来使用。
需要注意的是，在使用人外周血淋巴细胞分离液时，一些步骤可能因其具体的类型和制造商而有所不同。
因此，建议在使用前仔细查阅并遵守产品说明书和使用手册。
此外，使用前要确保实验室操作是在严格的无菌条件下进行的，以避免污染和细胞的损伤。
总而言之，人外周血淋巴细胞分离液是一种用于从人类外周血样本中分离和富集淋巴细胞的试剂。
准确遵循产品说明和使用手册中的步骤和建议，能够帮助实验者在研究和临床应用中有效地使用该分离液。
人淋巴细胞分离液说明书(3篇)
第1篇一、产品概述本产品为一种生物医学试剂，主要用于从人血液中分离纯化淋巴细胞。
淋巴细胞是人体免疫系统的重要组成部分，广泛用于免疫学研究和临床诊断。
本产品采用特殊的分离技术，能够高效、快速地从人外周血中分离出高纯度的淋巴细胞，为后续的免疫学研究提供高质量的实验材料。
二、产品规格| 产品规格 | 批号 | 有效期 || :-------: | :---: | :----: || 100ml/瓶 | ABC123 | 2025年12月 |三、产品特性1. 高效分离：本产品采用独特的分离介质，能够高效地将淋巴细胞与其他血细胞分离，分离效率高，纯度好。
2. 操作简便：本产品使用方法简单，无需特殊设备，适合实验室常规操作。
3. 稳定性好：本产品在规定的储存条件下，稳定性良好，保质期内质量稳定。
4. 无污染：本产品在生产过程中严格遵循无菌操作规程，产品无细菌、病毒等生物污染。
四、产品用途1. 免疫学研究：用于分离淋巴细胞，进行细胞因子检测、细胞培养、细胞因子基因表达等研究。
2. 临床诊断：用于检测血液中的淋巴细胞，辅助诊断某些疾病，如自身免疫性疾病、肿瘤等。
3. 药物研发：用于药物筛选、药效评价等。
五、使用方法1. 准备工作：- 将分离液室温下平衡至室温。
- 准备无菌试管、移液器、吸头等实验器材。
- 准备适量抗凝剂（如EDTA-K2）。
2. 操作步骤：- 将抗凝全血加入分离管中，轻轻混匀。
- 将分离液加入另一支无菌试管中，加入量约为全血量的2倍。
- 将全血和分离液轻轻混合，避免产生气泡。
- 将混合后的样品垂直静置1-2小时，直至形成清晰的三层界面。
- 小心吸取淋巴细胞层，避免混入其他细胞层。
- 将淋巴细胞转移至新的无菌试管中，加入适量磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤，重复洗涤2-3次，以去除残留的分离液和杂质。
- 最后，将洗涤后的淋巴细胞悬浮于适量的PBS中，即可进行后续实验。
六、注意事项1. 操作过程中应严格遵守无菌操作规程，防止污染。
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液使用说明人外周血淋巴细胞分离液（Peripheral Blood Lymphocyte Separation Medium）是一种广泛应用于分离人外周血中淋巴细胞的试剂，被广泛应用于免疫学和生物医学研究领域。
该试剂通过层析技术，可快速、高效地分离出外周血中的淋巴细胞，供后续的分析和实验使用。
一、试剂组成人外周血淋巴细胞分离液的主要成分包括离心管分层缓冲液、细胞分离密度悬液、所需的辅助试剂和脏器灭菌液等。
离心管分层缓冲液的成分通常包含氯化钠、氯化无水亚铁、酵母精、酵母根、胰蛋白水解物、洋葱提取物、N-酰胺毛细管蓝等。
细胞分离密度悬液则通常包含氯化钠、氯化无水亚铁、葡萄糖、胰蛋白水解物等，以及一些辅助试剂如生理盐水、浓度为2%的纯度高粘度明胶等。
辅助试剂方面，常用的有人凝血酶、去细菌酶、维生素C和青霉素等。
脏器灭菌液则是为了确保细胞分离过程中试剂和设备的无菌。
二、试剂使用方法1.准备工作在开始实验前，应准备好所需的实验试剂和设备，并确保所用的所有物品和材料都是无菌的。
同时，应将离心管分层缓冲液和细胞分离密度悬液放在常温下静置30分钟以上。
2.外周血分离取相应容量的外周血标本，在无菌条件下加入带有抗凝剂的离心管中，并轻轻倾转混合均匀，避免凝块形成。
置于无菌离心管架中，以1000-1500r/min离心5-10分钟，离心后分血浆、白细胞层和红细胞层。
3.分离淋巴细胞将离心后的中间白细胞层完全转移至新的离心管中，加入适量的生理盐水进行洗涤，离心1500r/min 5分钟。
倒掉上清液，留下沉淀。
重复该步骤2-3次。
洗涤后，加入等量的细胞分离密度悬液轻轻混合，再次离心。
离心1000r/min 20分钟。
此步骤可以使淋巴细胞充分分离。
4.收集淋巴细胞将分离好的淋巴细胞沉淀取出，加入等量的生理盐水或适宜的培养基中进行悬浮，使淋巴细胞悬浮液浓度适宜。
然后可以根据实验需要进行后续分析和实验操作。
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MD PACIFIC 淋巴细胞分离液说明书
主要用途：
淋巴细胞分离试剂是一种旨在通过葡聚糖和泛影酸钠混合液，达到特定比重，然后离心分层以获得纯化完整的单核细胞/淋巴细胞的权威而经典的技术方法。
可以被用于动物（大鼠、小鼠等）单核细胞/淋巴细胞的分离、鉴定、染色、标记、培养、
DNA萃取、线粒体分离、细胞因子测定和细胞流式仪分析等研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，分离出色，性能
稳定，细胞活性保证。
技术背景：
全血溶液含有血清、各种蛋白因子、无核血红细胞、血小板、多核白细胞和单核白细胞等。
为了获得纯化完整的单核白细胞
/淋巴细胞，采用Boyum（1968）的离心技术，可以方便快速地从全血和骨髓中分离。
产品内容：
淋巴细胞分离液（200）毫升
产品说明书1份
产品特点：
-密度变化率依照
Ficoll400泛影酸和氢氧化钠。
-最佳分离溶液的密度为参照具体产品的标签-生理学参数-在
低粘度时高密度-无菌-即用型-溶液产品规格
检测标准：
热源检测结果：＜0.5EU∕ml
无菌检测结果：已检测
应用
人外周血中分离出淋巴细胞的最佳试剂。
这种分离液同样可被用作从其它途径分离人的淋巴细胞，包括骨髓血细胞、脐带血
细胞及组织匀浆。
实验步骤
实验开始前，室温预热淋巴细胞分离液。
然后进行下列操作。
（注：上述方法适用于从外周血中分离淋巴细胞。
如从骨髓、脐带及组织匀浆中分离，需要先去除红细胞后再进行上述步骤分离淋巴细胞。
1．准备无菌的锥形离心管
2．加入淋巴细胞分离液
3. 用hank’s 液或用户自备的PBS缓冲液1：1比例（如果全血样本粘稠，可适当增大比例）稀释抗凝过的全血样品。
3．小心沿着管壁，接近分离液层面，非常缓慢地加入新鲜的稀释过的全血样品在淋巴分离液上面。
（注意：切记不要搅浑淋巴细胞分离液）
4．小心放进台式离心机离心30分钟，速度为400g
5．小心取出离心管，切记不要震动
6．可见，最上层为淡红色透明血浆，其次为薄薄的致密白色环
状层，然后为离心液层，最后为红色沉淀在管底的红细胞层。
7．小心抽掉白色环状层以上三分之二血浆液，切记不要搅动白色环状层
8．用无菌塑料吸管小心吸取白色环状层液体
9．移入到新的无菌的锥形离心管
10．加入用户自备的PBS缓冲溶液
11．轻柔上下倾倒混匀
12．放进台式离心机离心10分钟
13．小心倒掉上清液
14．用手指轻弹离心管至下，使白细胞颗粒群松动
15．（选择步骤）加入毫升用户自备的淋巴细胞完全培养液，进行细胞培养
16．（选择步骤）或加入毫升用户自备的白细胞冻存液，放进－80℃冻存
17．（选择步骤）或即刻进行各种后续实验（包括白细胞分离、鉴定、染色、标记、DNA萃取、线粒体分离、细胞因子测
定和细胞流式仪分析等）
分离图例
Ficoll-Paque
Ficoll-Paque
注意事项
1. 上述方法适用于从外周血中分离淋巴细胞。
如从骨髓、脐带
及组织匀浆中分离，需要先去除红细胞后再进行上述步
骤分离淋巴细胞。
2. 所有操作均须无菌状态下进行。
3. 细胞分离液启封后应置4℃保存避免微生物污染。
4. 细胞分离液从冰箱取出后，不可立即使用，需待溶液温度升到室温时，摇匀后使用。
5. 操作时，在室温下进行（18-25℃）。
6. 组织，血液，细胞要求新鲜，避免冷冻和冷藏。
7. 全血样品采集须使用血液抗凝液。
8. 如果血液出现凝块，不宜进行分离操作。
9. 美德太平洋公司生产的细胞分离产品属于敏光型的。
因此在运输和贮藏过程中应注意避光保温。
由于各品牌离心机的性能不同，国内南北地区温度环境和四季的差异，可能影响分离效果，用户可以调节离心转数，调节离心的时间，
摸索最佳的分离条件（具体分离条件各实验室自定）。
保存方式
18-25℃避光保存。
启封后置4℃保存。
本品为真空包装，未启封前置于10℃以下易出现白色结晶，影响分离效果。
保存期限为2年。
天津美德太平洋科技有限公司
天津市新技术产业园区华苑产业区海泰发展六道
6号海泰绿色产业基地
C座
101
Tel：86-22-85689342 85689343◆Fax：86-22-85689054 ◆
◆E-mail: koohan@
美德太平洋科技
MD PACIFIC TECHNOLOGY。