淋巴细胞分离液
3．向分离液管加稀释血液时，应沿管壁缓缓加入，使血液 与分离液形成明显界面。注意轻拿轻放，避免冲散界面。
4．为保持淋巴细胞活性，采血后应在2h内分离细胞，尽快 完成操作全程。
5．离心时，离心机转速的增加或减少要注重均匀、平稳， 以免影响分离效果。
3．配平后将离心管置于水平式离心机内，
以2000r/min 离心20min。
分离液
实验方法
4．离心后管内容物从上至下分为四层：
上层为血浆层 中层为细胞分离液 下层为红细胞和粒细胞 上、中层界面处呈现白色浑浊
即为单个核细胞层。
血浆
单个核细胞 分离液 红细胞和粒细胞
实验方法
5. 用吸管插到血浆与分离液的界面处，沿管壁周缘吸出单 个核细胞。
不同类别人类血细胞的密度如下：
红细胞比重为
1.093
多形核白细胞比重 1.092
血小板比重约为 1.032
单个核细胞比重为 1.076～1.090
实验原理
利用一种比重介于1.075～1.092之间等渗的聚蔗糖泛影葡胺（ficoll-hypaque）混合液（淋巴细胞分离 液），比重为 1.077±0.001，进行密度梯度离心。
实验一 外周血单个核细胞的分离 （不连续密度梯度法）
（验证性实验）
实验目的
外周血单个核细胞指淋巴细胞和单核细胞， 是免疫学实验中最常用的细胞群。
在研究免疫细胞时，常常需要先将淋巴细胞 等分离纯化，再进一步进行检测。
实验原理
根据各种血细胞的体积、形态、密度和比重 均有差异，可将不同的细胞分离。
4个蓝色区域为白细胞计数池
结果判断
活细胞可排斥染料不被着色，折光性强 死细胞着蓝色，体积略膨大。 正常情况下，活细胞比例大于95%。
注意事项
1．分离不同种类动物外周血单个核细胞时，对分离液的密 度要求不同。 人的细胞密度为 1.0770.001。 大鼠为 1.0880.001。 小鼠为 1.0920.001。 兔为 1.0960.001 等。
6. 置入另一离心管中，加入５倍体积的Hanks液混匀， 1500 rpm离心10min。
7. 弃上清，将沉淀细胞振摇重悬后加Hanks液。 8. 按上述方法洗涤2次。 9. 末次离心后，吸尽上清，再加入Hanks液将细胞悬液体
积还原至1ml。 10. 吸取20l细胞悬液加380l白细胞稀释液混匀2～3min。 11. 吸取15l滴入血细胞计数板中，充池计数白细胞数。
离心后不同比重的血细胞在分离液中呈梯度分布。
红细胞和多形核粒细胞密度大于分离液，沉于管底； 血小板因密度小而悬浮于血浆中； 单个核细胞的密度略小于分离液，悬浮于分离液上层与
血浆层交界处，呈云雾状白膜层。
血浆
单个核细胞 分离液 粒细胞 红细胞
实验材料
器材:
试管、滴管、吸管、无菌干燥注射器、无菌棉球、橡皮止 血带、水平式离心机、生物显微镜、血细胞计数板等。
实验讨论
1. 本法制备的单个核细胞悬液能满足许多细胞免疫实验的要 求，若需要进一步进行T细胞、B细胞及单核细胞的纯化， 可考虑采用哪些方法？
2. 如何检测细胞得率与淋巴细胞纯度？
福建医科大学 陈敏
实验二 T淋巴细胞转化试验
（验证性实验）
基本原理
同位素法 MTT法
刺激物PHA
T淋巴细胞
增殖分化、DNA等大分 子物质合成增加
试剂:
1．淋巴细胞分离液（比重1.0770.001）。 2．肝素溶液 用生理盐水配制成500U/ml。 3．Hanks液。 4．2g/L台盼蓝染液。 5．标本 肝素抗凝的人外周静脉血。 6. 白细胞稀释液。
实验方法
1．室温下，将2ml抗凝血与2ml Hanks液混合
抗凝全血 缓冲液
实验方法
2．取分离液2ml置入灭菌离心管内，用毛细 吸管将稀释血液4ml沿管壁加入离心管，使 稀释血液重叠于淋巴细胞分离液上（分离液 与稀释血液体积比例为1：2）。
吸取白细胞层涂片 染色镜检观察细胞形态
操作步骤
1．取肝素抗凝血0.2ml，注入预先加有1.8 ml RPMI 1640培养液的培养瓶内，同时加入PHA(500g/ml ) 0.1 ml，对照瓶内不加PHA。混匀后置37C、 5%CO2培养箱内孵育72h，期间每天旋转摇匀一 次。
2．培养结束后，弃去上清，混匀细胞，加入离心管 中，1500rpm 离心10min。
3．弃上清，吸取白细胞层制片，自然干燥。 4．甲醇固定1～2min后，姬姆萨染色15～20min，水
洗，干燥。 5．油镜下计数200个淋巴细胞，观察淋巴细胞的形态
变化，计算淋巴细胞转化率。
结果判断
未转化的淋巴细胞
淋巴母细胞
淋巴细胞标志及功能检测
龚道科
2002.4
未转化和转化淋巴细胞的形态特征
转化的淋巴细胞
形态法
淋巴母细胞
体积变大 胞浆增多、空泡 核染色质疏松 核仁明显 有丝分裂
教学内容
1 .实验目的 2 .实验原理 3 .试剂与器材 4 .操作步骤 5 .结果判断 6 .注意事项 7 .实验讨论
一、形态学计数法
实验目的
1. 掌握T淋巴细胞转化试验的原理。 2. 熟悉淋巴母细胞的形态特征及判定方法。
用含10%小牛血清的RPMI培养液稀释至500～ 1000g/ml。 3. 姬姆萨染液。 4. 标本 肝素抗凝人外周静脉血。 5. 器材 细胞培养瓶、CO2培养箱、超净台、高压灭 菌器、无菌过滤装置、离心机、显微镜等。
操作步骤
外周℃ 72h 1500rpm 离心10min
淋巴母细胞 过渡型
细胞大小(直径μm) 12~20
12~16
核大小、染色质 增大、疏松
增大、疏松
核仁
清晰、1~4个 有或无
实验原理
T淋巴细胞在有丝分裂原PHA等刺激后，细 胞的形态和代谢发生变化，发生一系列增殖反应， 如出现细胞体积增大、核染色质疏松、蛋白质和 核酸合成增加，并转化为淋巴母细胞。
试剂与器材
1. RPMIl640 培养液。 小牛血清10%、青霉素 100u/m1 、链霉素
100ug/m1，用无菌3% NaHCO3调pH至7.2～7.4。 2. 植物血凝素（PHA）。
人淋巴细胞分离液说明书
人淋巴细胞分离液使用说明产品名称: 人淋巴细胞分离液产品货号: LTS1077产品展商: 佰易聚生物商城产品规格: 200ml产品品牌: TBD本品为带有乳光或微乳光的灭菌水溶液。
主要成分是葡聚糖与泛影酸葡甲胺。
适用于从血液及组织匀浆中分离所需细胞，在医疗和医学生物中广泛应用。
其他人及动物多种比重细胞分离液。
注：因不同种属不同比重分离液的细胞离散系数及细胞带电不同，所以用户应提供所需分离液的比重、动物的种属及被分离细胞的名称。
使用方法例：取抗凝血1ml，与Hank’s液1:1 混匀后，小心加于2ml的细胞分离液之液面上，以2000转/分离心(半径15cm水平转子)15分钟，收集界面上的细胞，放入含Hank’s液4-5毫升的试管中，充分混匀后，以1500-2000转/分离心10分钟。
吸去上清液，沉淀经反复洗2次即得所需细胞。
(此方法效果较好，推荐使用)注意事项1. 启封后应置4℃保存。
2. 细胞分离液从冰箱取出后，不可立即使用，需待溶液温度升至室温时，混匀后使用。
3. 整个分离过程中，温度应控制在18-28℃，否则会影响分离质量。
应用-从人血液及组织中分离淋巴细胞特点-密度变化率依照Ficoll 400，泛影酸和氢氧化钠.-最佳分离溶液的密度为1.077g/ml(Ng/ml)-生理学参数-在低粘度时高密度-无菌-即用型-溶液产品规格溶液水PH 7.0-7.5渗透压280-340mOsmol/kg内毒素<5EU/ml无菌已检测保存期限2年贮藏+12℃-+20℃注意本公司的细胞分离培养基是敏光型的。
这种培养基在运输和贮藏过程中应避光。
贮藏12-20℃避光保存。
启封后置4℃保存。
以下为推荐产品：。
淋巴细胞分离的原理
淋巴细胞分离的原理
淋巴细胞分离的原理主要是利用淋巴细胞在密度梯度离心中的沉降速率差异进行分离。
淋巴细胞是一种低密度细胞，其密度约为1.06 g/ml，而其他血液细胞如红细胞、粒细胞等的密度
均大于1.06 g/ml，因此可以通过离心来分离淋巴细胞。
具体操作步骤如下：
1. 采集血液样品，一般可采用外周血样品，例如静脉采血。
2. 转移血液样品至离心管中，离心管中需要加入离心介质，常用的有Ficoll或Percoll等。
3. 轻轻混合血液与离心介质，以确保均匀混合。
4. 放入离心机，进行离心。
离心过程中，血液样品会在离心介质形成的密度梯度中逐渐分层。
5. 离心结束后，离心管中会分为不同层次的组分。
上层为清澈的血浆层，中间为若干个白色或黄色的细胞层，其中最上面一个细胞层即为淋巴细胞层。
6. 使用移液器将淋巴细胞层吸取出来，转移至另一个离心管中。
7. 加入适当的洗涤缓冲液，如PBS，进行洗涤。
洗涤缓冲液
的作用是去除离心介质残留和其他杂质。
8. 离心再次沉淀淋巴细胞，并倒掉上清液。
9. 加入适量的培养液，使淋巴细胞得到适当的营养和环境，以维持其存活和生长。
通过以上步骤，可以将淋巴细胞从血液中分离出来，并得到较为纯净的淋巴细胞样本，便于后续实验和研究的进行。
大鼠骨髓淋巴细胞分离液使用方法
大鼠骨髓淋巴细胞分离液使用方法
大鼠骨髓淋巴细胞分离液的使用方法如下：
1. 悬浮细胞：将需要进行分离的细胞悬浮在分离液中。
2. 离心：将悬浮液在2000rpm的转速下离心5分钟，收集沉淀的细胞。
3. 清洗：使用清洗液清洗离心后的细胞沉淀，以去除杂质和多余的分离液。
4. 再次离心：将清洗后的细胞在相同条件下再次离心，以进一步纯化细胞。
5. 培养：将纯化后的细胞接种到培养基中进行培养，以进行后续的实验或研究。
需要注意的是，大鼠骨髓淋巴细胞分离液需要在无菌条件下操作，且启封后应置常温保存。
如果需要在4℃保存，应避免出现白色结晶，以免影响分离效果。
此外，该试剂盒易感染细菌，因此在使用过程中需要特别注意无菌操作。
以上是大鼠骨髓淋巴细胞分离液的使用方法，仅供参考，如需获取更多详细信息，建议查阅相关网站。
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液使用说明人外周血淋巴细胞分离液（Peripheral Blood Lymphocyte Separation Medium）是一种广泛应用于分离人外周血中淋巴细胞的试剂，被广泛应用于免疫学和生物医学研究领域。
该试剂通过层析技术，可快速、高效地分离出外周血中的淋巴细胞，供后续的分析和实验使用。
一、试剂组成人外周血淋巴细胞分离液的主要成分包括离心管分层缓冲液、细胞分离密度悬液、所需的辅助试剂和脏器灭菌液等。
离心管分层缓冲液的成分通常包含氯化钠、氯化无水亚铁、酵母精、酵母根、胰蛋白水解物、洋葱提取物、N-酰胺毛细管蓝等。
细胞分离密度悬液则通常包含氯化钠、氯化无水亚铁、葡萄糖、胰蛋白水解物等，以及一些辅助试剂如生理盐水、浓度为2%的纯度高粘度明胶等。
辅助试剂方面，常用的有人凝血酶、去细菌酶、维生素C和青霉素等。
脏器灭菌液则是为了确保细胞分离过程中试剂和设备的无菌。
二、试剂使用方法1.准备工作在开始实验前，应准备好所需的实验试剂和设备，并确保所用的所有物品和材料都是无菌的。
同时，应将离心管分层缓冲液和细胞分离密度悬液放在常温下静置30分钟以上。
2.外周血分离取相应容量的外周血标本，在无菌条件下加入带有抗凝剂的离心管中，并轻轻倾转混合均匀，避免凝块形成。
置于无菌离心管架中，以1000-1500r/min离心5-10分钟，离心后分血浆、白细胞层和红细胞层。
3.分离淋巴细胞将离心后的中间白细胞层完全转移至新的离心管中，加入适量的生理盐水进行洗涤，离心1500r/min 5分钟。
倒掉上清液，留下沉淀。
重复该步骤2-3次。
洗涤后，加入等量的细胞分离密度悬液轻轻混合，再次离心。
离心1000r/min 20分钟。
此步骤可以使淋巴细胞充分分离。
4.收集淋巴细胞将分离好的淋巴细胞沉淀取出，加入等量的生理盐水或适宜的培养基中进行悬浮，使淋巴细胞悬浮液浓度适宜。
然后可以根据实验需要进行后续分析和实验操作。
MD PACIFIC 淋巴细胞分离液说明书
MD PACIFIC 淋巴细胞分离液说明书主要用途：淋巴细胞分离试剂是一种旨在通过葡聚糖和泛影酸钠混合液，达到特定比重，然后离心分层以获得纯化完整的单核细胞/淋巴细胞的权威而经典的技术方法。
可以被用于动物（大鼠、小鼠等）单核细胞/淋巴细胞的分离、鉴定、染色、标记、培养、DNA萃取、线粒体分离、细胞因子测定和细胞流式仪分析等研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，分离出色，性能稳定，细胞活性保证。
技术背景：全血溶液含有血清、各种蛋白因子、无核血红细胞、血小板、多核白细胞和单核白细胞等。
为了获得纯化完整的单核白细胞/淋巴细胞，采用Boyum（1968）的离心技术，可以方便快速地从全血和骨髓中分离。
产品内容：淋巴细胞分离液（200）毫升产品说明书1份产品特点：-密度变化率依照Ficoll400泛影酸和氢氧化钠。
-最佳分离溶液的密度为参照具体产品的标签-生理学参数-在低粘度时高密度-无菌-即用型-溶液产品规格检测标准：热源检测结果：＜0.5EU∕ml无菌检测结果：已检测应用人外周血中分离出淋巴细胞的最佳试剂。
这种分离液同样可被用作从其它途径分离人的淋巴细胞，包括骨髓血细胞、脐带血细胞及组织匀浆。
实验步骤实验开始前，室温预热淋巴细胞分离液。
然后进行下列操作。
（注：上述方法适用于从外周血中分离淋巴细胞。
如从骨髓、脐带及组织匀浆中分离，需要先去除红细胞后再进行上述步骤分离淋巴细胞。
1．准备无菌的锥形离心管2．加入淋巴细胞分离液3. 用hank’s 液或用户自备的PBS缓冲液1：1比例（如果全血样本粘稠，可适当增大比例）稀释抗凝过的全血样品。
3．小心沿着管壁，接近分离液层面，非常缓慢地加入新鲜的稀释过的全血样品在淋巴分离液上面。
（注意：切记不要搅浑淋巴细胞分离液）4．小心放进台式离心机离心30分钟，速度为400g5．小心取出离心管，切记不要震动6．可见，最上层为淡红色透明血浆，其次为薄薄的致密白色环状层，然后为离心液层，最后为红色沉淀在管底的红细胞层。
淋巴细胞分离实验报告
淋巴细胞分离实验报告淋巴细胞分离实验报告引言：淋巴细胞是免疫系统中的重要组成部分，具有免疫应答和免疫调节的功能。
淋巴细胞分离实验是研究淋巴细胞功能的重要手段之一。
本实验旨在通过离心法和梯度离心法分离和纯化淋巴细胞，并验证其纯度和活力。
实验材料：- 血液样本- PBS缓冲液- 淋巴细胞分离液- Ficoll梯度离心液- 离心管- 移液管- 显微镜- 细胞计数板- 无菌培养皿- 37℃恒温培养箱实验步骤：1. 血液预处理：将新鲜的血液样本加入无菌离心管中，加入等体积的PBS缓冲液，轻轻混合。
注意避免气泡的产生。
2. 离心分层：将离心管放入离心机中，以2000rpm的速度离心10分钟。
离心后，可观察到血液分为三个层次：上层为血浆，中层为白细胞和淋巴细胞，下层为红细胞。
3. 分离淋巴细胞：将中间层的白细胞和淋巴细胞转移至新的离心管中，加入等体积的PBS缓冲液。
轻轻混合后，以1000rpm的速度离心10分钟。
此步骤的目的是去除红细胞和血浆。
4. 梯度离心：将混合后的细胞悬液加入离心管中，并缓慢滴加Ficoll梯度离心液。
注意避免两种液体混合。
离心管中的液体应该形成明显的两层。
5. 离心分层：将离心管放入离心机中，以1500rpm的速度离心30分钟。
离心后，可观察到淋巴细胞在上层梯度液中形成一个白色的浑浊环。
6. 分离淋巴细胞：使用移液管将上层梯度液中的淋巴细胞转移至新的离心管中。
加入等体积的PBS缓冲液，轻轻混合。
以1000rpm的速度离心10分钟，去除梯度液。
7. 洗涤淋巴细胞：将淋巴细胞沉淀用PBS缓冲液洗涤三次，以去除梯度液和离心液中的残留物。
8. 细胞计数和活力检测：取适量的淋巴细胞悬液，用细胞计数板进行细胞计数，并观察细胞形态。
同时，使用显微镜观察细胞的活力和完整性。
结果与讨论：通过以上实验步骤，我们成功地分离和纯化了淋巴细胞。
在离心分层和梯度离心的过程中，红细胞和血浆被有效地去除，从而得到了较为纯净的淋巴细胞。
小鼠淋巴细胞的分离培养
小鼠淋巴细胞的分离培养
一、血液中淋巴细胞的分离：
1在1.5ML离心管中加入淋巴细胞分离液0.7ML；
2眼部采集小鼠的抗凝血，抗凝剂20%.。
3轻轻将血液加入淋巴细胞分离液的表面，立即以2000—2500转/分离心10MIN。
4小心吸取上层细胞，转移至另一1.5ML离心管中,再用HANK’S 悬浮至1.5ML，再离心，去上清，再悬浮，等待分型用。
二、鼠脾脏中淋巴细胞的分离：
1无菌采集鼠的脾脏，且灭菌注射器的弯针头轻轻扎取，尽可能使单个细胞分离，再分别用4层灭菌纱布过滤2次。
2将滤液小心加入淋巴细胞分离液中。
离心。
3 吸取上层淋巴细胞，HANK‘S液洗涤2次（尽可能去除淋巴
细胞分离液）。
4加入1640培养液进行培养。
、
*淋巴细胞分离液不低于全部液体的50%。
深圳市达科为生物工程有限公司小鼠淋巴细胞分离液说明书
深圳市达科为生物工程有限公司生产地址：深圳市坪山区坑梓街道金辉路14号深圳市生物医药创新产业园区1号楼702、703518122小鼠淋巴细胞分离液说明书Cat#7211011/7211012本品为深圳市达科为生物工程有限公司研发的新一代密度梯度分离液。
主要成份为Iodixanol ，分子量为1550。
它是完全化学惰性、无生物毒性的碘化物，不会结合任何已知的生物功能蛋白，不会干扰任何细胞表面膜蛋白，不会抑制酶活性，不会干扰抗原抗体反应。
本产品分离的淋巴细胞纯度高、状态好、得率高；分离方法简单易学，对操作者的经验要求不高。
本公司的研究表明，小鼠脾脏淋巴细胞在该分离液中暴露1小时，离心分离后，淋巴细胞的数量和质量没有明显变化，随后的ELISPOT 检测结果同对照组完全一致。
【产品信息】【使用方法】自备材料：35mm 培养皿、10mL 玻璃注射器内活塞、70μm 细胞筛网或200目尼龙网——裁成90mm ×90mm 正方形（以上材料均为无菌要求）、离心管、移液管、加样枪、水平转子离心机等。
【实验步骤】1.断颈处死小鼠，浸泡于75%的乙醇中。
2.在超净台中取出小鼠脾脏。
注意无菌操作。
3.在35mm 培养皿中放入4mL-5mL 小鼠淋巴细胞分离液（取用前恢复至室温并摇匀）。
研磨（研磨操作请参考图二）。
4.把悬有脾脏细胞的分离液立即转移到15mL 离心管中，如图一（A ），覆盖500μL-1000μL 的RPMI 1640培养基（保持液面分界明显），如图一（B ）。
5.室温，水平转子800g 离心30min 。
设置较慢的升降速（如果共有十档且第十档为最高档，升降速应该调整到第三档）。
离心结束后细胞分层如图一（C ）所示。
6.吸出淋巴细胞层，再加入10mL RPMI 1640培养基，颠倒洗涤。
室温，250g 离心10min 收集细胞。
7.倾倒上清液，用培养液重悬细胞，计数。
商品名Mouse 1×Lymphocyte Separation Medium 小鼠淋巴细胞分离液货号规格7211011:100mL/瓶7211012:250mL/瓶主要成分Iodixanol ，化学惰性，无生物毒性内毒素含量<0.5EU/mL 密度(1.081±0.001)g/mL (20℃)渗透压(280±15)mOsmol/kg保存条件常温密封避光保存，保质期2年。
小鼠外周血淋巴细胞分离液
小鼠外周血淋巴细胞分离液说明书修订日期：2016.03.31 Cat number：KGA831Storage RT for2yearsFor Research Use Only（科研专用）一、试剂盒说明小鼠淋巴细胞分离液将人血液中的淋巴细胞分离出来，是由于各种机体的血细胞比重不同制备出不同比重的分离液，它是一种体外应用的生化试剂，主要成分聚蔗糖（Ficoll）或葡聚糖与泛影酸葡甲胺或泛影酸钠，适用于从血液及组织匀浆中分离所需细胞。
二、试剂盒组份组份Cat:KGA831保存条件小鼠淋巴细胞分离液200ml室温，有效期两年。
样本稀释液（赠品）200ml清洗液（赠品）200ml三、试剂盒以外自备仪器和试剂离心机（最大离心力要求达到1200g）四、操作方法首先取抗凝血按体积比1:1的比例与样本稀释液混匀，根据稀释后的样本量大小，分以下两种情况：情况A：稀释后的血液样本量小于5ml时，实验方法如下：1.取一支15ml离心管，先加入与稀释后样本等量的分离液（注：分离液最少不得少于3ml）。
2.用吸管小心吸取稀释后的血液样本加于分离液液面上，400-500g，离心20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。
3.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。
第一层为血浆层。
第二层为环状乳白色淋巴细胞层。
第三层为透明分离液层。
第四层为红细胞层。
4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15ml离心管中，往所得离心管中加入10ml清洗液，混匀细胞。
5.250g，离心10min。
6.弃上清。
7.用吸管以5ml清洗液重悬所得细胞。
8.250g，离心10min。
9.重复6、7、8，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。
情况B：稀释后的血液样本量大于等于5ml时，实验方法如下：1.取一支适当的离心管，先加入与稀释后样本等量的分离液。
人外周血淋巴细胞分离液说明书
分离后水平离心分离前血浆层淋巴细胞层分离液层红细胞层人外周血淋巴细胞分离液说明书货号：P8610/P8900规格：200mL产品简介：本产品是一种用于分离人外周血淋巴细胞的无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。
其分离原理是根据血细胞的密度差异（红细胞和粒细胞密度为1.090g/mL左右；淋巴细胞和单核细胞密度为1.075~1.090g/mL；血小板为1.030~1.035g/mL），通过离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将淋巴细胞从人外周血或脐带血中分离出来。
产品指标：密度1.077±0.001g/mL 渗透压290~350mOsm/kg H2O 无菌0.1μm 滤膜过滤保存条件：本产品对光敏感，应该室温避光储存，保质期2年。
无菌开封后，保存于室温。
操作步骤：1.取新鲜抗凝全血（EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝均可）或者去纤维蛋白血液，用等体积的全血及组织稀释液或者PBS稀释全血。
2.在离心管中加入适量分离液（当稀释后血液体积小于3mL时，加入3mL分离液；大于等于3mL，加入等体积分离液。
但二者的总体积不能超过离心管的三分之二，否则会影响分离效果），将稀释后的血液平铺到分离液液面上方，注意保持两液面界面清晰。
（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后将血液小心的平铺于分离液上，因为两者的密度差异，将形成明显的分层界面。
如果样品较多加样时间较长，在离心之前出现红细胞成团下沉属正常现象。
）3.室温，水平转子500~1000g，离心20~30min（血液的体积越大所需的离心力越大，离心时间越长，最佳的分离条件需摸索，离心转速最大不超过1200g）。
4.离心后将出现明显的分层：最上层是稀释的血浆层，中间是透明的分离液层，血浆与分离液之间的白膜层即为淋巴细胞层，离心管底部是红细胞与粒细胞。
5.小心的吸取白膜层细胞到15mL洁净的离心管中，10mL PBS或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。
250g，离心10min。