淋巴细胞分离液说明书
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液是一种常用的实验试剂，用于分离和提取人体外周血中的淋巴细胞。
下面是使用该试剂的详细说明：
1. 实验准备：
- 准备干净的工作台和操作工具。
- 检查分离液是否过期，确保其保存条件良好。
- 为实验准备足够数量的外周血样本。
2. 样本处理：
- 从被试者的外周血中采集适量的血液。
- 使用无菌技术将血液转移至无菌离心管中。
3. 样本离心：
- 将含有外周血的离心管放入离心机中。
- 以2000-2500转速离心10分钟，使细胞沉淀到离心管底部。
4. 废液处理：
- 弃去上层的血浆和血小板，只留下上清或底部的细胞悬浮液。
5. 细胞分离：
- 将分离液缓慢倒入含有细胞沉淀的离心管中，通常使用10 mL分离液对应1 mL的细胞悬浮液。
- 轻轻摇晃离心管，使分离液均匀混合。
- 静置15-20分钟，使淋巴细胞在分离液中上浮。
6. 细胞收集：
- 将含有上浮淋巴细胞的上清缓慢转移到新的离心管中。
- 用相同的方法重复上述步骤，以提高细胞收集率。
- 将收集到的细胞悬浮于适当的培养基中，进行后续实验。
请注意，这只是一个基本的使用说明，具体的实验步骤和分离效果可能会因实验目的和细胞样本的来源而有所不同。
在进行实验前，建议查阅供应商提供的用户手册，以获得更加详细的使用说明和操作技巧。
同时，使用过程中严格遵守实验室安全操作规范，确保个人和实验室的安全。
希望以上使用说明能够对您的实验工作有所帮助。
percoll 细胞分离液
北京华越洋生物提供Percoll 细胞分离液Gt0253-100mlPercoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞Percoll 细胞分离液(一)原理Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。
渗透压很低(<20mosm／kg H２O), 粘度也很小，可形成高达1.3g／ml密度，采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200～1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。
由于Percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。
此外，Percoll不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒，还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。
Percoll 细胞分离液(二)操作方法及注意事项1.不同浓度(密度)Percoll溶液的制备: 先用9份Percoll与1份8.5％NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85％NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度。
2.不连续密度梯度Percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。
在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置，有时相邻两层Percoll比重相差不大时，可将Percoll液放入注射器中，小针头斜面紧贴管壁，任其自然慢慢流下。
3.装样：样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。
4.离心：一般采用离心力为400g，时间20～25min。
由于多层Percoll之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。
5.取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll层中,则需要逐层收集。
收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。
Percoll 细胞分离液使用说明
Percoll 细胞分离液编号 品名 规格 单位WX0181 Percoll 细胞分离液 500ml 瓶WX0183 Percoll 细胞分离液 1L 瓶Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞(一) 原理Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。
渗透压很低(<20mosm／kg H２O), 粘度也很小，可形成高达1.3g／ml密度，采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200～1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。
由于Percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。
此外，Percoll不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒，还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。
(二) 操作方法及注意事项1.不同浓度(密度)Percoll溶液的制备: 先用9份Percoll与1份8.5％ NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M P BS)稀释到所需浓度。
Percoll浓度(％)706050403020 比重g／ml 1.090 1.077 1.067 1.056 1.043 1.0312.不连续密度梯度Percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。
在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置，有时相邻两层Percoll比重相差不大时，可将Percoll液放入注射器中，小针头斜面紧贴管壁，任其自然慢慢流下。
3.装样：样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。
4.离心：一般采用离心力为400g，时间20～25min。
由于多层Percoll之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。
5.取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll层中,则需要逐层收集。
淋巴细胞分离液的原理
淋巴细胞分离液的原理
淋巴细胞分离液是一种用于分离淋巴细胞的溶液。
它的原理是利用淋巴细胞和其他细胞在密度上的差异来进行分离。
淋巴细胞分离液通常是由密度梯度离心法制备而成的。
首先，一种或多种高密度物质（如Ficoll、Percoll等）被溶解在无菌
生理盐水或缓冲液中，形成密度梯度溶液。
然后，这个溶液被注入到离心管中。
接下来，待分离的淋巴细胞样品被加入到离心管中的密度梯度溶液上方。
离心管被放置在离心机中进行离心操作。
离心的过程中，样品中的细胞会向下沉降，并在密度梯度中找到自己的位置。
由于淋巴细胞在密度上相对较轻，它们通常会沉降到密度梯度溶液的较低密度区域。
而其他细胞（如红细胞、血小板等）普遍比淋巴细胞密度高，它们会沉降到密度梯度溶液的较高密度区域。
当离心结束后，离心管中的密度梯度溶液会形成不同的层次，每个层次含有不同种类的细胞。
淋巴细胞分离液将淋巴细胞与其他细胞有效地分离开来。
最后，通过使用适当的技术，如离心、吸引、冲洗等，从密度梯度中提取和收集分离的淋巴细胞。
这种方法能够获得高纯度、高活力的淋巴细胞样品，用于进一步的实验研究。
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液使用说明使用人外周血淋巴细胞分离液的步骤如下：1.样本准备：准备外周血样本，并将其采集到一个干净的试管中。
确保样本是新鲜的，并在使用前充分混合。
2.离心：将样本离心，以去除血浆或血浆和血小板，通常以低速（300×g）离心5-10分钟。
将离心管中的血浆小心吸除。
3.阻止红细胞溶解：加入足够的红细胞阻断缓冲盐溶液到血细胞沉淀中，使其与样本体积相等。
这将阻止红细胞的溶解和污染淋巴细胞。
4.包裹淋巴细胞：将滤质或管中的混合物转移到一个滤筒或离心管中，并加入合适的分离液。
分离液的添加量通常是样本体积的2-3倍。
5.混合和离心：彻底混合分离细胞和分离液，然后以适当的速度和时间进行高速离心（500×g，5-10分钟）。
此步骤将导致淋巴细胞在分离液的底部形成一个沉淀。
6.转移沉淀：使用无菌吸管或移液器小心地将沉淀转移到干净的离心管中，以避免污染。
7.洗涤：向沉淀中加入足够的平衡缓冲盐溶液，如磷酸缓冲盐溶液，轻轻混合后进行低速离心。
再吸去上清液，保留沉淀。
8.储存：沉淀可在冷藏条件下暂时储存，或冷冻保存以备将来使用。
需要注意的是，在使用人外周血淋巴细胞分离液时，一些步骤可能因其具体的类型和制造商而有所不同。
因此，建议在使用前仔细查阅并遵守产品说明书和使用手册。
此外，使用前要确保实验室操作是在严格的无菌条件下进行的，以避免污染和细胞的损伤。
总而言之，人外周血淋巴细胞分离液是一种用于从人类外周血样本中分离和富集淋巴细胞的试剂。
准确遵循产品说明和使用手册中的步骤和建议，能够帮助实验者在研究和临床应用中有效地使用该分离液。
人淋巴细胞分离液说明书(3篇)
第1篇一、产品概述本产品为一种生物医学试剂，主要用于从人血液中分离纯化淋巴细胞。
淋巴细胞是人体免疫系统的重要组成部分，广泛用于免疫学研究和临床诊断。
本产品采用特殊的分离技术，能够高效、快速地从人外周血中分离出高纯度的淋巴细胞，为后续的免疫学研究提供高质量的实验材料。
二、产品规格| 产品规格 | 批号 | 有效期 || :-------: | :---: | :----: || 100ml/瓶 | ABC123 | 2025年12月 |三、产品特性1. 高效分离：本产品采用独特的分离介质，能够高效地将淋巴细胞与其他血细胞分离，分离效率高，纯度好。
2. 操作简便：本产品使用方法简单，无需特殊设备，适合实验室常规操作。
3. 稳定性好：本产品在规定的储存条件下，稳定性良好，保质期内质量稳定。
4. 无污染：本产品在生产过程中严格遵循无菌操作规程，产品无细菌、病毒等生物污染。
四、产品用途1. 免疫学研究：用于分离淋巴细胞，进行细胞因子检测、细胞培养、细胞因子基因表达等研究。
2. 临床诊断：用于检测血液中的淋巴细胞，辅助诊断某些疾病，如自身免疫性疾病、肿瘤等。
3. 药物研发：用于药物筛选、药效评价等。
五、使用方法1. 准备工作：- 将分离液室温下平衡至室温。
- 准备无菌试管、移液器、吸头等实验器材。
- 准备适量抗凝剂（如EDTA-K2）。
2. 操作步骤：- 将抗凝全血加入分离管中，轻轻混匀。
- 将分离液加入另一支无菌试管中，加入量约为全血量的2倍。
- 将全血和分离液轻轻混合，避免产生气泡。
- 将混合后的样品垂直静置1-2小时，直至形成清晰的三层界面。
- 小心吸取淋巴细胞层，避免混入其他细胞层。
- 将淋巴细胞转移至新的无菌试管中，加入适量磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤，重复洗涤2-3次，以去除残留的分离液和杂质。
- 最后，将洗涤后的淋巴细胞悬浮于适量的PBS中，即可进行后续实验。
六、注意事项1. 操作过程中应严格遵守无菌操作规程，防止污染。
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液使用说明人外周血淋巴细胞分离液（Peripheral Blood Lymphocyte Separation Medium）是一种广泛应用于分离人外周血中淋巴细胞的试剂，被广泛应用于免疫学和生物医学研究领域。
该试剂通过层析技术，可快速、高效地分离出外周血中的淋巴细胞，供后续的分析和实验使用。
一、试剂组成人外周血淋巴细胞分离液的主要成分包括离心管分层缓冲液、细胞分离密度悬液、所需的辅助试剂和脏器灭菌液等。
离心管分层缓冲液的成分通常包含氯化钠、氯化无水亚铁、酵母精、酵母根、胰蛋白水解物、洋葱提取物、N-酰胺毛细管蓝等。
细胞分离密度悬液则通常包含氯化钠、氯化无水亚铁、葡萄糖、胰蛋白水解物等，以及一些辅助试剂如生理盐水、浓度为2%的纯度高粘度明胶等。
辅助试剂方面，常用的有人凝血酶、去细菌酶、维生素C和青霉素等。
脏器灭菌液则是为了确保细胞分离过程中试剂和设备的无菌。
二、试剂使用方法1.准备工作在开始实验前，应准备好所需的实验试剂和设备，并确保所用的所有物品和材料都是无菌的。
同时，应将离心管分层缓冲液和细胞分离密度悬液放在常温下静置30分钟以上。
2.外周血分离取相应容量的外周血标本，在无菌条件下加入带有抗凝剂的离心管中，并轻轻倾转混合均匀，避免凝块形成。
置于无菌离心管架中，以1000-1500r/min离心5-10分钟，离心后分血浆、白细胞层和红细胞层。
3.分离淋巴细胞将离心后的中间白细胞层完全转移至新的离心管中，加入适量的生理盐水进行洗涤，离心1500r/min 5分钟。
倒掉上清液，留下沉淀。
重复该步骤2-3次。
洗涤后，加入等量的细胞分离密度悬液轻轻混合，再次离心。
离心1000r/min 20分钟。
此步骤可以使淋巴细胞充分分离。
4.收集淋巴细胞将分离好的淋巴细胞沉淀取出，加入等量的生理盐水或适宜的培养基中进行悬浮，使淋巴细胞悬浮液浓度适宜。
然后可以根据实验需要进行后续分析和实验操作。
MD PACIFIC 淋巴细胞分离液说明书
MD PACIFIC 淋巴细胞分离液说明书主要用途：淋巴细胞分离试剂是一种旨在通过葡聚糖和泛影酸钠混合液，达到特定比重，然后离心分层以获得纯化完整的单核细胞/淋巴细胞的权威而经典的技术方法。
可以被用于动物（大鼠、小鼠等）单核细胞/淋巴细胞的分离、鉴定、染色、标记、培养、DNA萃取、线粒体分离、细胞因子测定和细胞流式仪分析等研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，分离出色，性能稳定，细胞活性保证。
技术背景：全血溶液含有血清、各种蛋白因子、无核血红细胞、血小板、多核白细胞和单核白细胞等。
为了获得纯化完整的单核白细胞/淋巴细胞，采用Boyum（1968）的离心技术，可以方便快速地从全血和骨髓中分离。
产品内容：淋巴细胞分离液（200）毫升产品说明书1份产品特点：-密度变化率依照Ficoll400泛影酸和氢氧化钠。
-最佳分离溶液的密度为参照具体产品的标签-生理学参数-在低粘度时高密度-无菌-即用型-溶液产品规格检测标准：热源检测结果：＜0.5EU∕ml无菌检测结果：已检测应用人外周血中分离出淋巴细胞的最佳试剂。
这种分离液同样可被用作从其它途径分离人的淋巴细胞，包括骨髓血细胞、脐带血细胞及组织匀浆。
实验步骤实验开始前，室温预热淋巴细胞分离液。
然后进行下列操作。
（注：上述方法适用于从外周血中分离淋巴细胞。
如从骨髓、脐带及组织匀浆中分离，需要先去除红细胞后再进行上述步骤分离淋巴细胞。
1．准备无菌的锥形离心管2．加入淋巴细胞分离液3. 用hank’s 液或用户自备的PBS缓冲液1：1比例（如果全血样本粘稠，可适当增大比例）稀释抗凝过的全血样品。
3．小心沿着管壁，接近分离液层面，非常缓慢地加入新鲜的稀释过的全血样品在淋巴分离液上面。
（注意：切记不要搅浑淋巴细胞分离液）4．小心放进台式离心机离心30分钟，速度为400g5．小心取出离心管，切记不要震动6．可见，最上层为淡红色透明血浆，其次为薄薄的致密白色环状层，然后为离心液层，最后为红色沉淀在管底的红细胞层。
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Document # INST-17-829-1 06/07
Walkersville, MD 21793-0127 USA
© 2007 Lonza Walkersville, Inc.
Lymphocyte Separation Medium
Instruction For Use
17-829E
Introduction
Lymphocyte Separation Medium (LSM) is a mixture of Ficoll® and sodium diatrizoate (Hypaque) with density adjusted to 1.077 g/ml. This sterile filtered product is intended for laboratory/manufacturing use, and is not for in vitro diagnostic use. It is commonly used to isolate lymphocytes from human blood. One protocol to accomplish this is presented here.
Protocol
1. Anticoagulated blood (citrated or heparinized)
should be used.
Note: Always treat human and other primate
source material as potentially infectious and take safety precautions.
2. Dilute blood 1:1 with calcium-magnesium-free
PBS and layer 9 ml onto 6 ml LSM. Use a clear
plastic centrifuge tube with a cap. For large
volumes use a similar ratio of diluted blood to
LSM.
3. Centrifuge at 400xg for 15 minutes.
4. Remove plasma-PBS without disturbing the
interface.
5. Collect the interface with a cannula and dilute to
20 ml in serum-free medium, such as RPMI
1640.
6. Centrifuge at 70xg for 10 minutes.
7. Discard supernatant fluid and resuspend pellet
in 2-3 ml serum-free medium.
8. Count nucleated cells on a hemocytometer or
electronic counting device.
9. Lymphocytes will be concentrated at the
interface, along with some platelets and
monocytes. Granulocytes will be found mostly in the Lymphocyte Separation Medium and
erythrocytes will pellet at the bottom of the tube.
References
1. Boyum, A. 1968. Isolation of mononuclear cells
and granulocytes from human blood. Isolation of mononuclear cells by one centrifugation, and of
granulocytes by combining centrifugation and
sedimentation at 1 g. Scand. J. Clin. Lab. Invest.
Suppl. 97:77-89.
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granulocytes and macrophages. Scand. J. Clin.
Lab. Invest. Suppl. 5:9-15.
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lymphocyte subgroups and monocytes: a
review. Lymphology. 10-2:71-6.
4. Boyum, A. 1984. Separation of lymphocytes,
granulocytes and monocytes from human blood using iodinated density gradient media. Methods Enzymol. 108:88-102.
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Lymphocytes from Citrated Blood by Density
Gradient (NycoPrep) Centrifugation: Monocyte
Depletion Depending upon Activation of
Membrane Potassium Channels. Scand. J.
Immunol. 56-1:76-84.
6. Koistinen, P. 198
7. Human peripheral blood and
bone marrow cell separation using density
gradient centrifugation on Lymphoprep and
Percoll in haematological diseases. Scand. J.
Clin. Lab. Invest. 47-7:709-14.
7. Rola-Pleszczynski, M. and W.H. Churchill. 1978.
Purification of human monocytes by continuous gradient sedimentation in ficoll. J. Immunol.
Methods. 20:255-62.
Product Use Statement
THESE PRODUCTS ARE FOR RESEARCH USE ONLY. Not approved for human or veterinary use, for application to humans or animals, or for use in clinical or in vitro procedures.
INST-17-829-1 06/07
Ficoll is a trademark of GE Healthcare. All other trademarks
herein are marks of Lonza Group or its subsidiaries.
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