最新《植物生理生化》实验指导
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（4）10%异丙醇：用于配制氨基酸标准液。
（5）80%乙醇：取分析乙醇以无离子水稀释。
（6）0.25%的水合茚三酮溶液。
（7）活性炭。
（8）石英砂。
四、操作步骤：
1、氨基酸的提取：
取新鲜的绿豆芽下胚轴2克，加80%乙醇10毫升，加少量石英砂，在研钵研成匀浆，移入三角瓶，用少量80%乙醇淋洗研钵，一并移入三角瓶，加0.8克活性炭，置沸水浴中加热至沸1分钟，取下冷却，用滤纸过滤，用少量80%乙醇冲洗滤渣。滤液收集在蒸发皿中置50-60℃水浴上蒸干。用1毫升10%异丙醇溶解，收集样液，准备点样。
实验八、植物抗逆性的鉴定（电导仪法）…………………………………………43
实验九、植物缺水程度的测定（脯氨酸法）………………………………………45
生物化学实验部分
实验一氨基酸的纸来自百度文库析
一、目的：
层析分析法已广泛用于氨基酸、核酸、激素、维生素、糖类的分离与分析。其优点是能够分离与分析在组成、结构及性质上极为相似的物质；设备简单，操作容易，样品用量很少，结果也较明确。
（2）滤纸的质地以及为水分饱和的程度。滤纸的质地必须均一、纯净、厚薄适当，具有一定的机械强度，层析前应为水和有机溶剂的蒸汽所饱和。
（3）溶剂的纯度、pH值和含水量。pH值和含水量的改变可使氨基酸和层析溶剂极性改变，Rf值也随之改变。
（4）层析的温度和时间。温度改变使溶剂中有机相含水量改变，Rf值也改变。当所有条件相同时，层析时间短，测Rf值的因素必须严格控制。
实验九、聚丙烯酰胺电泳法测定大麦、小麦种子纯度…………………………24
实验十、淀粉酶的诱导、提取和活性测定（综合性实验）…………………………26
植物生理学实验部分:
实验一、植物组织水势的测定（小液流法）……………………………………28
实验二、植物伤流量的测定…………………………………………………………30
实验四、维生素C含量的测定………………………………………………………12
实验五、还原糖和总糖的测定………………………………………………………14
实验六、淀粉酶活性的测定…………………………………………………………17
实验七、脂肪浸提——索氏脂肪浸提法……………………………………………20
实验八、一种简单实用的提取植物DNA的方法……………………………………22
（2）溶液系统：
第一向：正丁醇：甲酸：水：（15：3：2，体积），摇匀静止备用。
第二向：苯酚：水（80：20，重量）。配制方法：在分液漏斗中先计量加入少量无离子水，再加入一定量的新蒸馏的酚。根据酚量补足应加入的全部无离子水，这样可避免因酚的冷凝而造成的溶解困难。充分摇匀后静止备用。
（3）无离子水：用于实验中各种试剂配制。
3、试剂：
（1）氨基酸标准溶液：浓度为0.01M，溶于10%异丙醇中。
第一组：天冬氨酸、赖氨酸、苏氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸。
第二组：鸟氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸、缬氨酸。
第三组：谷氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、脯氨酸。
第四组：酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸、谷氨酰胺。
第五组：胱氨酸、羟脯氨酸、异亮氨酸、瓜氨酸、天门冬酰胺。
本实验的目的在于要求学生掌握纸层析法的一般原理和操作技术。
二、原理：
纸层析法是以滤纸作为支持物的分配层析法。分配层析法是利用物质在两种不同混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离的目的。通常用α表示分配系数。在一定条件下，一种物质在某溶剂系统中的分配系数是一个常数。
层析溶剂是选用有机溶剂和水组成的。由于滤纸纤维素对水有较强的亲和力（纸上有很多-OH基与水以氢键相连），吸附很多水分子，一般达滤纸重的22%左右（其中约有6%的水与纤维素结合成复合物），因此使这一部分水扩散作用降低形成静止相；而有机溶剂与滤纸的亲和力很弱，可以在滤纸的毛细管中自由流动，便形成流动相。层析时，将滤纸一端浸入层析溶剂中，有机溶剂连续不断地通过点有样品的原点处，使其中的溶质依据本身的分配系数在两相间进行分配。分配的过程：一部分溶质随有机相移动离开原点而进入无溶质区，并进行重新分配，即一部分溶质从有机相又进入水相。随着有机相不断向前移动，溶质不断地在两相间进行可逆的分配，不断向前移动。各种物质因其分配系数的不同，在两相间分配的数量也就不同，分配系数小的溶质在流动相中分配的数量多，向前移动的速度快；而分配系数大的溶质在静止相中分配的数量多，移动的速度慢。所以各种溶质在层析的过程中由于移动的速度不同便可以彼此分开。
实验三、根系活力的测定……………………………………………………………31
实验四、蒸腾强度的测定……………………………………………………………35
实验五、叶绿体色素的提取、分离、性质和定量测定（综合性实验）……………37
实验六、光合强度的测定（改良半叶法）……………………………………………39
实验七、呼吸强度的测定…………………………………………………………41
三、实验材料、仪器和试剂：
1、实验材料：在25℃温箱中萌发2-3天的绿豆芽。
2、仪器：（1）恒温水浴一台；（2）烘箱一个；（3）研钵一个；（4）三角瓶一个；（5）蒸发皿一个；（6）50毫升分液漏斗一个；（7）量筒三个；（8）微量吸管（或标有刻度的毛细管）；（9）电热吹风机一个；（10）层析缸及培养皿；（11）层析滤纸；（12）小型喷雾器一个；（13）剪刀、刀片、铅笔、尺子、玻棒、凡士林、点样瓶。
《植物生理生化》实验指导
（适用专业：农学类相关专业）
黑龙江八一农垦大学植物科技学院生理生化教研室
生物化学实验部分：
实验一、氨基酸的纸层析……………………………………………………………1
实验二、蛋白质含量测定（设计性实验）……………………………………………5
实验三、酶的基本性质……………………………………………………………7
移动速度一般用移动速率表示Rf表示：
各种化合物在恒定条件下，经层析后都有其一定的Rf值，也就是说在层析谱中有一定的位置。借此可以达到分离、定性、鉴别的目的。
Rf值决定于很多的因素，其中最主要的是所分离物质的分配系数。物质的分配系数是由以下因素决定的：
（1）物质极性的大小。水的极性很强，一般极性强的物质就容易进入水相，非极性的物质易进入有机溶剂中。例如侧链含-OH和-NH2、-COOH较多的氨基酸分配在水相中，Rf值较小，而含非极性（如-CH3）较多的物质其分子的极性降低，Rf值增大。
（5）80%乙醇：取分析乙醇以无离子水稀释。
（6）0.25%的水合茚三酮溶液。
（7）活性炭。
（8）石英砂。
四、操作步骤：
1、氨基酸的提取：
取新鲜的绿豆芽下胚轴2克，加80%乙醇10毫升，加少量石英砂，在研钵研成匀浆，移入三角瓶，用少量80%乙醇淋洗研钵，一并移入三角瓶，加0.8克活性炭，置沸水浴中加热至沸1分钟，取下冷却，用滤纸过滤，用少量80%乙醇冲洗滤渣。滤液收集在蒸发皿中置50-60℃水浴上蒸干。用1毫升10%异丙醇溶解，收集样液，准备点样。
实验八、植物抗逆性的鉴定（电导仪法）…………………………………………43
实验九、植物缺水程度的测定（脯氨酸法）………………………………………45
生物化学实验部分
实验一氨基酸的纸来自百度文库析
一、目的：
层析分析法已广泛用于氨基酸、核酸、激素、维生素、糖类的分离与分析。其优点是能够分离与分析在组成、结构及性质上极为相似的物质；设备简单，操作容易，样品用量很少，结果也较明确。
（2）滤纸的质地以及为水分饱和的程度。滤纸的质地必须均一、纯净、厚薄适当，具有一定的机械强度，层析前应为水和有机溶剂的蒸汽所饱和。
（3）溶剂的纯度、pH值和含水量。pH值和含水量的改变可使氨基酸和层析溶剂极性改变，Rf值也随之改变。
（4）层析的温度和时间。温度改变使溶剂中有机相含水量改变，Rf值也改变。当所有条件相同时，层析时间短，测Rf值的因素必须严格控制。
实验九、聚丙烯酰胺电泳法测定大麦、小麦种子纯度…………………………24
实验十、淀粉酶的诱导、提取和活性测定（综合性实验）…………………………26
植物生理学实验部分:
实验一、植物组织水势的测定（小液流法）……………………………………28
实验二、植物伤流量的测定…………………………………………………………30
实验四、维生素C含量的测定………………………………………………………12
实验五、还原糖和总糖的测定………………………………………………………14
实验六、淀粉酶活性的测定…………………………………………………………17
实验七、脂肪浸提——索氏脂肪浸提法……………………………………………20
实验八、一种简单实用的提取植物DNA的方法……………………………………22
（2）溶液系统：
第一向：正丁醇：甲酸：水：（15：3：2，体积），摇匀静止备用。
第二向：苯酚：水（80：20，重量）。配制方法：在分液漏斗中先计量加入少量无离子水，再加入一定量的新蒸馏的酚。根据酚量补足应加入的全部无离子水，这样可避免因酚的冷凝而造成的溶解困难。充分摇匀后静止备用。
（3）无离子水：用于实验中各种试剂配制。
3、试剂：
（1）氨基酸标准溶液：浓度为0.01M，溶于10%异丙醇中。
第一组：天冬氨酸、赖氨酸、苏氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸。
第二组：鸟氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸、缬氨酸。
第三组：谷氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、脯氨酸。
第四组：酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸、谷氨酰胺。
第五组：胱氨酸、羟脯氨酸、异亮氨酸、瓜氨酸、天门冬酰胺。
本实验的目的在于要求学生掌握纸层析法的一般原理和操作技术。
二、原理：
纸层析法是以滤纸作为支持物的分配层析法。分配层析法是利用物质在两种不同混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离的目的。通常用α表示分配系数。在一定条件下，一种物质在某溶剂系统中的分配系数是一个常数。
层析溶剂是选用有机溶剂和水组成的。由于滤纸纤维素对水有较强的亲和力（纸上有很多-OH基与水以氢键相连），吸附很多水分子，一般达滤纸重的22%左右（其中约有6%的水与纤维素结合成复合物），因此使这一部分水扩散作用降低形成静止相；而有机溶剂与滤纸的亲和力很弱，可以在滤纸的毛细管中自由流动，便形成流动相。层析时，将滤纸一端浸入层析溶剂中，有机溶剂连续不断地通过点有样品的原点处，使其中的溶质依据本身的分配系数在两相间进行分配。分配的过程：一部分溶质随有机相移动离开原点而进入无溶质区，并进行重新分配，即一部分溶质从有机相又进入水相。随着有机相不断向前移动，溶质不断地在两相间进行可逆的分配，不断向前移动。各种物质因其分配系数的不同，在两相间分配的数量也就不同，分配系数小的溶质在流动相中分配的数量多，向前移动的速度快；而分配系数大的溶质在静止相中分配的数量多，移动的速度慢。所以各种溶质在层析的过程中由于移动的速度不同便可以彼此分开。
实验三、根系活力的测定……………………………………………………………31
实验四、蒸腾强度的测定……………………………………………………………35
实验五、叶绿体色素的提取、分离、性质和定量测定（综合性实验）……………37
实验六、光合强度的测定（改良半叶法）……………………………………………39
实验七、呼吸强度的测定…………………………………………………………41
三、实验材料、仪器和试剂：
1、实验材料：在25℃温箱中萌发2-3天的绿豆芽。
2、仪器：（1）恒温水浴一台；（2）烘箱一个；（3）研钵一个；（4）三角瓶一个；（5）蒸发皿一个；（6）50毫升分液漏斗一个；（7）量筒三个；（8）微量吸管（或标有刻度的毛细管）；（9）电热吹风机一个；（10）层析缸及培养皿；（11）层析滤纸；（12）小型喷雾器一个；（13）剪刀、刀片、铅笔、尺子、玻棒、凡士林、点样瓶。
《植物生理生化》实验指导
（适用专业：农学类相关专业）
黑龙江八一农垦大学植物科技学院生理生化教研室
生物化学实验部分：
实验一、氨基酸的纸层析……………………………………………………………1
实验二、蛋白质含量测定（设计性实验）……………………………………………5
实验三、酶的基本性质……………………………………………………………7
移动速度一般用移动速率表示Rf表示：
各种化合物在恒定条件下，经层析后都有其一定的Rf值，也就是说在层析谱中有一定的位置。借此可以达到分离、定性、鉴别的目的。
Rf值决定于很多的因素，其中最主要的是所分离物质的分配系数。物质的分配系数是由以下因素决定的：
（1）物质极性的大小。水的极性很强，一般极性强的物质就容易进入水相，非极性的物质易进入有机溶剂中。例如侧链含-OH和-NH2、-COOH较多的氨基酸分配在水相中，Rf值较小，而含非极性（如-CH3）较多的物质其分子的极性降低，Rf值增大。