【挑战杯】(符小燕)漆酶高产菌株的筛选及产酶条件的优化
高温淀粉酶高产菌株筛选及产酶条件优化
摘要为筛选高温淀粉酶高产菌株,利用淀粉酶水解圈作筛选模型,从稻田中采集土样,筛选得到产淀粉酶能力较高的菌株E10。
为提高菌株产酶能力,进行了碳源种类及浓度,氮源种类及浓度,无机盐种类及浓度,pH 值,种龄及接种量、温度、时间的单因素试验,并对发酵培养基及发酵条件进行了L 9(34)正交优化试验。
结果表明:最佳产酶发酵培养基为2.0%麸皮、0.1%硝酸钾、0.25%氯化钙,最适初始pH 值为6.0。
最适产酶条件为种龄24h ,接种量7mL ,于36℃下培养48h 。
在优化条件下,菌株产酶活力可达180.94IU/mL 。
关键词高温淀粉酶;高产菌株;筛选;发酵条件中图分类号TQ925+.1文献标识码A 文章编号1007-5739(2014)07-0240-04Screening of High-yield Strain Producing Thermostable Amylase and Optimization of Enzyme ProductionYI Zheng-xuan ZHAO Tong SHI Xuan WANG Zheng LI Li-heng *(College of Bioscience and Technology ,Hunan Agricultural University ,Changsha Hunan 410128)Abstract In order to screen a high-yield strain producing thermostable amylase ,starch hydrolysis circle was employed as a screening model.The E10strain achieved from the paddy field soil has high capacity of enzyme production.In order to improve the capability of enzyme production of E10,the single factor experiments was conducted for the kinds and concentrations of carbon source ,the kinds and concentrations of nitrogen source ,the kinds and concentrations of inorganic salt ,pH value ,seed age ,inoculate volume ,temperature and time ,then the L 9(34)orthogonal optimization test for the fermentation medium and conditions was carried out.The results showed that the best fermentation medium of the enzyme production of E10was 2.0%wheat bran ,0.1%KNO 3,0.25%CaCl 2,initial pH value of 6.0.The optimal fermentation conditions of the enzyme production of E10were 24hours of seed age ,7mL of inoculates volume ,36℃of culture temperature ,48hours of time.Under the optimized conditions ,the enzyme production of E10reached 180.94IU/mL.Key words thermostable amylase ;high-yield strain ;screening ;fermentation condition高温淀粉酶高产菌株筛选及产酶条件优化易征璇赵彤师旋王征李立恒*(湖南农业大学生物科学技术学院,湖南长沙410128)淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类总称,广泛分布于动物(唾液、胰脏等)、植物(麦芽、山萮菜)及微生物中,是最早实现工业生产并且迄今为止用途最广、产量最大的酶制剂品种[1]。
产纤维素酶菌种的筛选与优化
产纤维素酶菌种的筛选与优化一、菌种筛选的原理与方法菌种筛选的原理是通过筛选产纤维素酶活性高、产量大的菌种。
常用的菌种筛选方法有以下几种：1.传统菌种筛选：分离环境中的纤维素降解菌株，通过纤维素酶活性测定筛选产纤维素酶能力较强的菌株，再通过多次温育和活性测定，逐步筛选出高活性的菌株。
2.显性菌种筛选：利用纤维素酶结构上保守的区域设计引物，在环境DNA中扩增出纤维素酶基因片段，使用这些基因片段进行克隆构建，然后在宿主中进行表达，通过纤维素酶活性测定筛选产纤维素酶能力较强的菌株。
3.基因工程菌种筛选：利用已知纤维素酶的基因进行基因工程，通过载体导入宿主细胞中，通过外源表达基因，从而获得产纤维素酶菌种。
二、菌种优化的原理与方法菌种优化的原理是通过改变菌株基因组或环境条件，提高纤维素酶产量和活力。
常用的菌种优化方法有以下几种：1.自然进化优化：通过长期培养，逐渐挑选出产酶能力强、极端环境适应能力强的突变菌株。
2.诱变优化：利用物理、化学或基因工程等方法对菌株进行诱变，通过筛选获得产纤维素酶能力强、菌株稳定的变种。
3.基因工程优化：利用已知纤维素酶的基因进行基因编程，通过基因工程技术对菌株基因组进行改造，以提高纤维素酶的产量和活力。
三、未来的研究方向1.菌种筛选方法的改进与创新：应综合运用传统筛选、显性筛选和基因工程筛选等方法，发展新的高效、快速的菌种筛选方法。
2.菌种优化技术的优化与提高产量、活性：要通过生理、代谢工程的方法改造纤维素酶产生菌，提高纤维素酶的产量和活力。
3.开发新型纤维素酶菌株：从不同环境中分离筛选出产酶能力强的菌株，进一步发现和研究产纤维素酶的新菌株。
4.提高纤维素酶产量与废弃物转化率的研究：将纤维素酶应用于废弃物转化过程，提高纤维素酶产量和转化率。
综上所述，产纤维素酶菌种筛选与优化的研究是促进纤维素酶应用的关键。
通过不断改进筛选和优化方法，进一步开发新的菌种，提高纤维素酶的产量和活力，将对纤维素酶的应用产生积极的推动作用。
高产β-葡萄糖苷酶菌株的筛选及产酶条件优化
姚 瑶１，霍元鹏１，周 伟１，叶佳颖１，褚梦真１，朱森林２∗，蒋红英２
（１．浙江师范大学 地理与环境科学学院，浙江 金华 ３２１００４；２．金华职业技术学院 农业与生物工程学院，浙江 金华 ３２１００７）
摘 要：通过七叶苷平板法从腐殖质土壤中筛选得到高产 β－葡萄糖苷酶的 ２ 个菌株（ Ｈ２和 Ｈ５） ，并利用单因素法对 这 ２ 个菌株的产酶条件进行了优化。 经形态学特征初步鉴定，菌株 Ｈ２ 和 Ｈ５ 均为黑曲霉（ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ） 。 Ｈ２ 的最优发 酵条件为：以蔗糖为碳源，以硫酸铵＋尿素（１ ∶１） 为氮源，培养 ５ ｄ，培养温度 ２８ ℃ ，初始 ｐＨ ４．０。 Ｈ５ 的最优发酵条件为： 以红糖为碳源，以硫酸铵＋硝酸铵（１ ∶１） 为氮源，培养 ５ ｄ，培养温度 ２８ ℃ ，初始 ｐＨ ４．５。 在优化的各因素中，以培养温度 对菌株 Ｈ２和 Ｈ５所产 β－葡萄糖苷酶活力的影响最大。
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： β－Ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ； Ｓｔｒａｉｎ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ； Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ； Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ
β－葡萄糖苷酶可水解结合在末端的非还原性 β －Ｄ－葡萄糖苷键，同时释放出葡萄糖体和配基［１］ ，具 有良好的增香酿造潜力［２］ ，其在工业化制备、改善饮 品风味和酶解工程固化回收处理方面发挥重要的作 用。 然而天然酶活性较低往往阻滞了其大规模的工 业化生产。 国内外用于研究的 β－葡萄糖苷酶主要来 源于微生物，这与来源于植物的 β－葡萄糖苷酶活性 不高、稳定性差、产量较低有关［３－４］ 。 目前对 β－葡萄 糖苷酶的微生物来源研究较多［５－６］ ，但不同微生物合 成 β－葡萄糖苷酶的能力有差异［７］ ；Ｗｉｌｋｏｗｓｋａ Ａ 等［８］ 也指出 β－葡萄糖苷酶的活力普遍很低，产量不高。 因此，寻找一种新的高产 β－葡萄糖苷酶的真菌是极
碱性脂肪酶高产菌株的筛选及产酶条件的优化
碱性脂肪酶高产菌株的筛选及产酶条件的优化摘要利用筛选和验证相结合的方法筛选出了产碱性脂肪酶活性较高的菌株bl1011。
经过形态观察、生理生化试验及分子生物学鉴定，结果表明该菌株为假单胞菌（pseudomonas sp.）。
运用单因素试验和均匀试验优化了bl1011菌株摇瓶产酶培养基和最佳发酵条件。
在培养基为麦芽糖2.5%，蛋白胨3.0%，大豆油0.5%，k2hpo4 0.2%，培养条件为起始ph值7.5，温度33 ℃，转速180 r/min，装液量20 ml，发酵周期为60 h的条件下，酶活力达到最高，为223 u/ml。
关键词脂肪酶；筛选；发酵优化；均匀试验中图分类号 q55 文献标识码 a 文章编号 1007-5739（2012）22-0274-03脂肪酶（lipase，e.c.3.1.1.3，又称三酰基甘油水解酶）是一种特殊的酯键水解酶，能在油水界面催化油脂水解，生成甘油和脂肪酸，具有化学选择性和底物选择性[1]。
脂肪酶被广泛应用于食品、轻纺、皮革、香料、化妆品、洗涤剂、有机合成、医药等领域[2]。
尽管自然界中产脂肪酶的微生物很多，但用于商业化生产的细菌很少，主要有伯克霍尔德氏菌（burkholderia）、无色杆菌属（achromobacter）、假单胞菌属（pseudomonas）、色杆菌属（chromobacterium）、产碱杆菌属（alkaligenes）、节杆菌属（arthrobacter）[3]。
假单胞菌产碱性脂肪酶国内外虽有研究，但酶活力均不高[4]。
该研究通过罗丹明b平板法快速筛选出一株产碱性脂肪酶能力较强的菌株，并对其产酶条件进行优化研究。
1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 菌株。
细菌：bl1001-1020；酵母：bl2001-2015；霉菌：bl3001-3025。
试验菌株均由郑州轻工业学校食品与生物工程学院酶分子工程研究室保藏。
1.1.2 培养基。
①种子培养基。
高产乙酸乙酯酵母菌的筛选、鉴定及发酵条件优化
高产乙酸乙酯酵母菌的筛选、鉴定及发酵条件优化
冉霞;肖雨荷;蔡晶钰;刘智文;朱家豪;汪江波;余启
【期刊名称】《中国酿造》
【年(卷),期】2024(43)5
【摘要】该研究以产酯酵母为研究对象,通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术测定菌株的乙酸乙酯产量并筛选高产乙酸乙酯的酵母菌株,通过形态学观察和分子生物学技术对其进行菌种鉴定,并以乙酸乙酯产量为响应值,通过单因素及响应面试验对其发酵条件进行优化。
结果表明,筛选得到一株高产乙酸乙酯的酵母菌株P-3,乙酸乙酯产量为134.32 mg/L。
菌株P-3被鉴定为库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii),其产乙酸乙酯的最佳发酵条件为:发酵温度30℃,乙醇体积分数18%,发酵时间4 d,在此条件下,乙酸乙酯产量达到281.47 mg/L,比优化前提高
109.55%。
【总页数】6页(P105-110)
【作者】冉霞;肖雨荷;蔡晶钰;刘智文;朱家豪;汪江波;余启
【作者单位】湖北工业大学生物工程与食品学院工业发酵省部共建协同创新中心发酵工程教育部重点实验室工业微生物湖北省重点实验室
【正文语种】中文
【中图分类】TS262.3
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产酶条件优化
“产酶条件优化”资料合集目录一、耐低温降解纤维素菌株筛选、鉴定及产酶条件优化二、脂肪酶高产菌株筛选、产酶条件优化及脂肪酶大量纯化研究三、一株纤维素酶真菌的筛选鉴定及产酶条件优化四、纤维素酶产生菌的筛选、发酵产酶条件优化及酶学特性研究五、一株产纤维素酶的暹罗芽孢杆菌筛选及产酶条件优化六、烟草秸秆废弃物中纤维素降解菌的筛选、鉴定及产酶条件优化七、耐低温降解纤维素菌株筛选、鉴定及产酶条件优化八、产环糊精葡萄糖基转移酶的菌株分离、产酶条件优化与酶学特性研究九、脂肪酶高产菌株的筛选及产酶条件优化耐低温降解纤维素菌株筛选、鉴定及产酶条件优化随着环境问题日益严重，生物可降解材料的研究和应用变得日益重要。
其中，纤维素作为地球上最丰富的可再生资源之一，其降解和利用是当前研究的热点。
然而，纤维素的降解需要特定的微生物菌株，尤其在低温环境下，筛选和鉴定具有耐低温特性的纤维素降解菌株是当前的重要任务。
在本次研究中，我们从不同环境中收集了多种微生物，通过在低温条件下筛选，我们成功获得了一株具有良好耐低温性能的纤维素降解菌株。
该菌株可以在低温条件下有效降解纤维素，并且表现出较高的酶活性。
为了进一步了解该菌株的特性，我们采用了多种分子生物学和生理学方法对其进行了鉴定。
结果表明，该菌株属于一个名为Xylanimonas 的属，这是一个在纤维素降解方面具有良好前景的菌种。
接下来，我们对该菌株的产酶条件进行了优化。
通过单因素实验和正交实验，我们发现该菌株的最佳产酶条件为：温度20℃，pH值为6.5，在含有1%纤维素的液体培养基中培养。
在此条件下，该菌株的酶活性达到了最大值。
总的来说，我们的研究提供了一种具有耐低温特性的纤维素降解菌株，并对该菌株的产酶条件进行了优化。
这为纤维素的生物降解和利用提供了新的可能性，有助于推动生物可降解材料的发展和环保事业的发展。
脂肪酶高产菌株筛选、产酶条件优化及脂肪酶大量纯化研究一、引言脂肪酶（Lipases）是一类在生物体内起着重要作用的酶，它们能够水解脂肪，生成脂肪酸和甘油。
高温淀粉酶高产菌株筛选及产酶条件优化
高温淀粉酶高产菌株筛选及产酶条件优化作者：易征璇赵彤师旋王征李立恒来源：《现代农业科技》2014年第07期摘要为筛选高温淀粉酶高产菌株，利用淀粉酶水解圈作筛选模型，从稻田中采集土样，筛选得到产淀粉酶能力较高的菌株E10。
为提高菌株产酶能力，进行了碳源种类及浓度，氮源种类及浓度，无机盐种类及浓度，pH值，种龄及接种量、温度、时间的单因素试验，并对发酵培养基及发酵条件进行了L9（34）正交优化试验。
结果表明：最佳产酶发酵培养基为2.0%麸皮、0.1%硝酸钾、0.25%氯化钙，最适初始pH值为6.0。
最适产酶条件为种龄24 h，接种量7 mL，于36 ℃下培养48 h。
在优化条件下，菌株产酶活力可达180.94 IU/mL。
关键词高温淀粉酶；高产菌株；筛选；发酵条件中图分类号 TQ925+.1 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2014）07-0240-04Screening of High-yield Strain Producing Thermostable Amylase and Optimization of Enzyme ProductionYI Zheng-xuan ZHAO Tong SHI Xuan WANG Zheng LI Li-heng *（College of Bioscience and Technology，Hunan Agricultural University，Changsha Hunan 410128）Abstract In order to screen a high-yield strain producing thermostable amylase，starch hydrolysis circle was employed as a screening model. The E10 strain achieved from the paddy field soil has high capacity of enzyme production. In order to improve the capability of enzyme production of E10，the single factor experiments was conducted for the kinds and concentrations of carbon source，the kinds and concentrations of nitrogen source，the kinds and concentrations of inorganic salt，pH value，seed age，inoculate volume，temperature and time，then the L9（34） orthogonal optimization test for the fermentation medium and conditions was carried out. The results showed that the best fermentation medium of the enzyme production of E10 was 2.0% wheat bran，0.1%KNO3，0.25% CaCl2，initial pH value of 6.0. The optimal fermentation conditions of the enzyme production of E10 were 24 hours of seed age，7 mL of inoculates volume，36 ℃ of culture temperature，48 hours of time. Under the optimized conditions，the enzyme production of E10 reached 180.94 IU/mL.Key words thermostable amylase；high-yield strain；screening；fermentation condition淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类总称，广泛分布于动物（唾液、胰脏等）、植物（麦芽、山萮菜）及微生物中，是最早实现工业生产并且迄今为止用途最广、产量最大的酶制剂品种[1]。
产脂肪酶菌株C7828-5的筛选、鉴定以及产酶条件的优化
产脂肪酶菌株C7828-5的筛选、鉴定以及产酶条件的优化麻琼丽;张家明
【期刊名称】《工业微生物》
【年(卷),期】2010(0)6
【摘要】以花生油为唯一碳源,从海口市各地被油脂污染土样中分离筛选出1株中温碱性脂肪酶菌株C7828-5.形态学、生理生化特征和分子生物学鉴定结果表明,该菌株为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa).该菌所产脂肪酶的最适温度为37 ℃,最适pH为8.0.优化了菌株的产酶条件,最适产酶培养基(g/L)为:蔗糖5、牛肉膏20、(NH4)2SO4 1、MgSO4·7H2O 0.5、CaCl2 0.5,聚乙烯醇花生油乳化液120 mL,发酵72 h,获得高达8.08 U/mL的脂肪酶表达量.
【总页数】6页(P39-44)
【作者】麻琼丽;张家明
【作者单位】中国热带农业科学院,热带生物技术研究所,海南,海口,571101;海南大学,农学院,海南,海口,571101;中国热带农业科学院,热带生物技术研究所,海南,海口,571101;海南大学,农学院,海南,海口,571101
【正文语种】中文
【中图分类】Q93
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漆酶高产菌株的筛选和产酶条件的优化
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指导教师 林俊芳 研究员
学院名称 食品学院 专业名称 03食品科学与工程
摘 要
漆酶是一种含铜的多酚氧化酶（Laccase ，p－diphenol
oxidase ,EC1.10.3.2)，具有降解木质素，去除酚类和芳胺类化合物的毒性作用，
漆酶的造纸工业，环境保护，食品工业具有广泛的应用价值。本课题主要选取实
验室现有的大型真菌，及从野外采集华南地区特色菌株进行产漆酶菌株的初筛，
并进行产酶条件的研究。实验结果如下：
（1） 用PDA－Bavendamn方法进行漆酶菌株的初筛。从69个土样和本
旗开得胜
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实验室现有的大型真菌菌株共200株，筛选出两个漆酶野生菌株M1、M2及十
六个大型真菌漆酶菌株。
（2） 选取两个野生菌株M1、M2和一个大型真菌菌株（菌株2号）进行
液体发酵，优化产酶培养条件。
① 比较研究了天然马铃薯培养基中添加不同营养物质的培养基对菌株
M1，M14的产酶的影响。与其他培养基相比，添加有淀粉的PDA培养基漆酶
活性较高。
② 对于菌株2号，摇瓶培养比静止培养能明显加快产酶的速度，缩短了最
高产酶的天数。
③ 不同碳源对菌株2号漆酶的分泌的影响很大，产漆酶最好的碳源是麦
芽提取物，其次是淀粉和葡萄糖，最低的是蔗糖。
④ 不同的葡萄糖添加量对菌株2号漆酶分泌影响不显著。
⑤ 不同的氮源对菌株2号分泌漆酶活性影响很大，与无机氮相比，有机氮
对漆酶分泌影响较大。最佳的氮源是酪蛋白胨，其次是酵母膏，漆酶活性最低是
硝酸铵。
⑥ 铜离子的菌株2号漆酶分泌影响较大，与对照（铜离子浓度0mmol/L）
相比，添加铜离子达到终浓度为0.1mmol/L，漆酶最高活性提高3倍。
(3) 比较目前研究最多的漆酶菌株侧耳和菌株2号分泌漆酶最高酶活，得出
本实验筛选得到的菌株2号的最高酶活明显比侧耳的高，差不多是侧耳分泌漆
酶最高酶活的2倍。
关键词 漆酶 筛选 产酶条件