G试验-侵袭性真菌病辅助诊断方法
G试验和GM实验的区别及其临床意义
G试验和GM试验的区别及其临床意义一、1，3-β—D葡聚糖检测(简称G试验）1、原理：1，3-β-D葡聚糖可特异性激活鳌变形细胞裂解物中的G因子,引起裂解物凝固，故称G试验.2、诊断：侵袭性真菌感染.可诊断多种致病真菌感染：念珠菌、曲霉菌、肺孢子菌、镰刀菌、地霉、组织胞浆菌、毛孢子菌等.不能用于检测隐球菌和接合菌感染.3、标本采集:静脉采血2ml（肝素抗凝)。
4、参考范围：正常值‹20pg/ml。
5、检测标本:血液、尿液、脑脊液、胸腔积液、腹水等。
6、假阳性：血液透析、病人输入白蛋白、球蛋白、脂肪乳、凝血因子；某些抗肿瘤药如香菇多糖和磺胺类药物；某些细菌败血症（尤其是链球菌败血症）。
7、假阴性：隐球菌具有厚壁胞膜,在免疫缺陷患者体内生长缓慢,导致试验呈假阳性。
8、建议：1、与GM试验联合可提高阳性率。
2、2次或2次以上阳性可降低假阳性率。
3、高危患者建议每周检测1—2次.4、高危人群动态监测二、半乳糖甘露醇聚糖抗原检测(简称GM试验）1、原理：是一种微孔板双抗体夹心法。
采用小鼠单克隆抗体EBA—2,检测人血清中的曲霉菌半乳甘露聚糖.半乳甘露聚糖是一种对热稳定的水溶性的物质,是广泛存在于曲霉和青霉细胞壁中的一类多糖。
2、诊断：侵袭性曲霉菌感染（IPA）3、标本采集：（分离胶管或普通管)。
4、参考范围：≥0。
5为阳性。
5、标本采集：血清标本。
6、假阳性：⑴、应用哌拉西林/他唑巴坦、阿莫西林-克拉维酸。
⑵、与其他的细菌成分有交叉反应:皮炎芽生菌、拟青霉、马尔尼菲青霉菌、链格孢等.⑶、谷类食物和脂质甜点中的GM抗原。
⑷、肠道中定值的曲霉释放GM进入血液循环。
建议:高危人群动态监测，结合影像学、培养结果综合分析诊断。
G试验、GM试验鉴定范围对比。
G 试验和 GM 试验检测原理和临床应用
G 试验和 GM 试验检测原理和临床应用首都医科大学附属北京安贞医院左大鹏G 试验和 GM 试验的检测原理和临床应用。
目前我们国际合国内都对侵袭性真菌病的诊断制订了标准，其中有权威的是欧洲癌症研究和治疗组织暨侵袭性真菌病感染协作组，我们简称叫欧洲标准所制订的一个标准。
这个标准它对侵袭性真菌病它分了三个不同的诊断层次。
一个叫确诊，一个叫临床诊断，一个叫疑诊。
我们国家的很多的专业委员会也都根据欧洲标准就结合我们国家和专业的特点制订了我们国家各个专业的诊断标准。
比如说中国侵袭性真菌感染工作组在 2010 年第 3 次修订的血液病和恶性肿瘤患者侵袭性真菌感染的诊断，诊断标准和治疗原则，这第 3 次修订，第一次是 2006 ，第二次 2008 ， 2010 年是第 3 次修订了。
这应该是血液里的肿瘤病人所用的一个标准。
中华医学会器官移植学分会制订的实体器官移植患者侵袭性真菌感染的诊断和治疗指南。
这可能是实体器官移植的这个方面的诊断标准。
中华医学会儿科学会，中华医学会呼吸病学会，中华医学会急诊协会，中华妇产科学会也都根据自己的专业制订了的相应的侵袭性真菌感染的诊断和治疗指南。
这作为我们从事这些方面的医务工作者所遵循的一个标准。
那我们看不管是国内和国际现在都采用这样一种方式。
首先要看这个病人有没有宿主因素，它是不是容易发生侵袭性真菌，真菌感染的高危人群，你要是这样的，你要一个健康人这就不具备了，起码有一些原因它容易得侵袭性真菌感染要具备这样一个高危因素。
第二它有临床表现，当然包括临床症状和影像学，比如说胸片， CT ，颅片等等。
还有有微声学的检查，还有一个病理学检查，如果你只有宿主因素有临床表现我们叫做拟诊，不叫疑诊，疑似诊断。
如果说你在这两个基础上又多了一条有微生物学证据，或者是培养的，或者是非培养的技术凡是证明他有真菌性感染的这种可能性就要临床诊断，临床诊断。
如果再加上从肺的组织，从脏器的组织取出病理来确定，那叫确诊。
2022侵袭性真菌病实验室诊断方法临床应用专家共识(完整版)
2022侵袭性真菌病实验室诊断方法临床应用专家共识（完整版）摘要侵袭性真菌病的诊断引起临床多学科关注，早期确切诊断是改善患者预后的关键。
其方法主要包括真菌直接镜检、真菌培养和鉴定、真菌血清学检查、分子生物学检测和组织病理学检查。
为了促进临床医师深入了解并合理应用这些方法，提高侵袭性真菌病诊断水平，我们邀请多学科专家共同编写了此共识。
本共识对侵袭性真菌病诊断方法的应用人群、送检要求、结果解读及临床意义进行了介绍并提出建议，强调对于侵袭性真菌病高危患者，应综合应用多种诊断方法、正确取材送检、提高结果解读能力、了解不同方法的临床意义，以便合理应用，更好地服务于患者。
侵袭性真菌病的患病率及病死率呈持续上升趋势，严重威胁患者健康。
常见的病原真菌包括念珠菌、曲霉、隐球菌和毛霉等。
这些致病真菌引发的疾病临床特征迥异；新发致病菌及多药耐药菌种不断出现，增加了诊疗难度。
侵袭性真菌病起病隐匿且临床症状不典型，早期诊断困难。
国内外近期推出的针对侵袭性真菌病临床诊疗指南或共识指出，对侵袭性真菌病的诊断均需依靠适宜的微生物学、组织病理学及影像学方法［1, 2, 3, 4］。
2020年，欧洲癌症研究和治疗组织（EORTC）和真菌病研究组教育研究协会（MSGERC）发布侵袭性真菌病诊疗共识修订版，该版共识除上述常规方法外，更强调分子生物学诊断的价值［1］。
我国医院内进行真菌相关微生物检查的实验室主要为检验科微生物室。
近期对全国348家医院微生物室真菌检验能力的调查显示，我国常规真菌检验项目（真菌涂片染色、真菌培养）及部分血清学检查（真菌1，3-β-D葡聚糖检测）覆盖率在70%以上，但真菌其他检验方法以及整体诊断能力较为欠缺，与国外差距较大［5］。
在进一步加强微生物实验室能力建设基础上，也需要将有重要价值的诊断方法介绍给广大临床医师，帮助大家加深认识，合理应用，提高侵袭性真菌病的诊断水平。
为此，我们邀请来自感染、呼吸、血液、重症等领域专家与医学真菌和临床微生物专家们共同参与制定本共识。
侵袭性真菌感染的3种免疫学检测方法的应用研究
侵袭性真菌感染的3种免疫学检测方法的应用研究肿瘤、AIDS患者、器官移植、导管留置及相应药物的广泛使用，使得侵袭性真菌感染的患者在不断增加。
侵袭性真菌感染现在使用最普遍的免疫学检测方法包括G实验、GM实验和隐球菌荚膜多糖抗原检测，具有灵敏度高，特异性强等特点，作为早期检测工具，为侵袭性真菌感染的病情诊断和用药评价提供了参考依据。
该文就此3种常见的免疫学方法在临床中的应用研究作一综述。
标签：侵袭性真菌感染；免疫学检验方法；应用研究Application Research on Three Immunologic Test Methods of Invasive Infections with FungiJIAO Er-li，LI Yue-yu，MA Wen-huiInner Mongolia Steel Hospital，Baotou，Inner Mongolia，014010 China [Abstract] The wide application of tumor，AIDS patients，organ grafting，catheter retaining and corresponding drugs makes the patients with invasive infections with fungi constantly increase，the most common immunological method of invasive infections with fungi at present included G experiment，GM experiment and cryptoceccal capsular polysaccharide antigen test with characteristics of high sensitivity and strong specificity，as an early test tool，it provides reference basis for the disease diagnosis and medication assessment of invasive infections with fungi. The paper summarizes the application of the three common immunologic methods in clinic.[Key words] Invasive infections with fungi；Immunology detection method；Application research随着实体器官的移植、骨髓的移植、留置导管、肿瘤及AIDS患者等的增多，临床对免疫抑制剂、抗生素、激素以及抗肿瘤药物等的广泛使用，侵袭性真菌感染（IFI）的病人也在不断增加。
G试验和GM试验检测的方法及临床意义
G试验和GM试验检测的方法及临床意义G试验和GM试验检测的方法及临床意义侵袭性真菌病即是以往所说的深部真菌病，是指致病性真菌侵犯皮下组织、粘膜、肌肉和内脏器官等所引起的真菌感染性疾病。
引起侵袭性真菌病的病原菌有270余种，常见病原菌有念珠菌（占70%-90% ）和曲霉菌（占10%-20%）。
常引起侵袭性真菌病的高危因素有严重粒细胞缺乏、免疫功能低下、移植、糖尿病、肾衰、血透、慢阻肺、实体器官移植、长期激素治疗以及入住ICU 等。
侵袭性真菌感染病早期诊断和治疗面临着巨大挑战，临床表现缺乏特征性，发病率高、死亡率高、漏诊率高且诊断困难，特异性诊断指标有限，继发性真菌感染常被基础疾病和治疗药物所掩盖。
和检验科相关的辅助诊断方法有培养法和非培养法。
血培养作用有限，阳性率较低（念珠菌感染患者血培养阳性率只有38%）。
相对而言，非培养技术就突显出其优越性。
真菌的检测的非培养技术常见的有G实验和GM试验。
此实验敏感性高，阳性检出率高，能早期快速诊断，为临床用药提供帮助。
G试验是检测1,3-β-D-葡聚糖的试验，采用的方法是动态显色法。
1,3-β-D-葡聚糖是真菌细胞壁的一种成分，广泛存在与各种真菌，只有当真菌进入体内被吞噬细胞吞噬，细胞壁被破坏,1,3-β-D-葡聚才能释放入血，定植情况该实验为阴性，所以G试验可区分定植和感染。
G试验可检测除隐球菌和接合菌外的多种真菌感染，对于念珠菌血症而言, G试验检测是首选检查方法。
G试验检测一般先于临床症状平均4天，平均早于发热5天，是早期检测的重要手段。
G试验检测值<70pg/ml定义为阴性，此时不建议抗真菌治疗，当检测值在70-95pg/ml 时定义为灰区，此为观察期，应连续监测，当检测值>95pg/ml定义为阳性, 建议结合临床症状诊断治疗。
GM试验是检测半乳甘露聚糖抗原的试验，采用的方法是酶免法。
半乳甘露聚糖（GM）是曲霉细胞壁的一种成分，GM从薄弱的菌丝顶端释放，曲霉菌感染的患者血液内存在GM。
G和GM试验对于侵袭性肺真菌病的诊断价值
G和GM试验对于侵袭性肺真菌病的诊断价值侵袭性曲霉可以说是在ICU重症病房中的霸主，来拿那些资深的ICU牛人对之也是谨慎不已。
因为纵然有各种高大上的抗真菌药，但价格昂贵却让很多病人头痛不已。
能够早期发现预防更符合病人的利益。
看看这些实验会有什么新的亮点？ 侵袭性曲霉病（IA）发病率逐年增加，病死率高。
早期诊断治疗能提高生存率。
但IA的早期诊断困难。
半乳甘露聚糖（GM）是曲霉细胞壁的组成成分，随着曲霉菌丝的生长被释放到菌体外。
1995年Stynen等首先报道了应用双夹心酶联免疫吸附法检测血清中GM抗原，其敏感度高，确定了该方法对IA的诊断价值。
由Bio-Rad公司研制的单克隆抗体双夹心酵素免疫分析的检测方法于2003年通过美国食品药品监督管理局的审核，在世界各地推广应用。
目前临床检测血清和经支气管镜肺泡灌洗液（BALF）中的GM以帮助筛查具有IA高危因素的病人和临床疑似病人，为早期诊断IA提供了帮助。
血液系统恶性肿瘤和干细胞移植患者IA高发。
在其诊断中，血清GM具有较高的敏感性和特异性。
多数研究发现这两个指标均为90%左右。
针对儿童患者的研究也发现类似结果。
而2006年发表的一项荟萃分析纳入了27个随机对照研究（限于血液系统恶性肿瘤，骨髓移植和实体器官移植患者），发现确诊和临床诊断患者，GM诊断的敏感性为61%，特异性93%。
该研究还发现，GM检测对诊断血液系统恶性肿瘤和骨髓移植患者并发IA的敏感性和特异性显著高于实体器官移植患者。
由此可见，GM对不同免疫状态人群的诊断效力不同。
血清GM在判断粒缺发热患者“经验性抗真菌治疗”时机中也发挥重要作用。
2011年发表的一项前瞻性研究，采用外周血GM和胸部HRCT结合的方法判断粒缺发热患者抗真菌治疗的时机，使经验性抗真菌治疗的比例减少了14%；且采用该方法筛选不影响患者的12周生存率。
2013年，柳叶刀发表的多中心、开放性、平行、随机队列研究，将“外周血GM+PCR”（122例患者）与“培养+组织学”的诊断方式（118例患者）进行比较，发现“外周血GM+PCR”的诊断标准显著降低经验性抗真菌治疗的比例，且不影响患者的短期生存率。
一张表搞懂GGM试验
一张表搞懂GGM试验侵袭性真菌病（invasive fungal disease，IFD）即以往所说的深部真菌病，是指致病性真菌侵犯皮下组织、黏膜、肌肉和内脏器官等所引起的真菌感染性疾病。
据WHO统计，能引起人类疾病的真菌约有270余种，尤其是深部真菌，可侵袭心、肺、血液、胃肠等人体各个器官和系统。
真菌感染已成为临床感染学中不可忽略的一部分。
IFD宿主因素包括：免疫抑制性治疗：免疫抑制剂、糖皮质激素、恶性肿瘤、器官移植、放疗化疗等；免疫抑制性疾病：中性粒细胞减少、艾滋病等；长时间使用抗生素：已证实80%-90%的真菌血症主要因素是大量使用抗生素；免疫功能低下的患者：糖尿病、新生儿、肾功能衰退、血液透析、营养不良；长期入住ICU；创伤、烧伤、腹腔手术；体内留置试管；真菌寄殖。
侵袭性真菌感染传统的检测方法包括培养、细胞学检查和组织病理学检查、CT检查、PCR检测，这些诊断方法存在一些问题，比如血培养作用有限，某些播散性感染常常为假阳性，全身使用抗真菌治疗或其它原因易导致假阴性，非无菌部位标本阳性结果，难以判断是真菌定植或感染；细胞学检查和组织病理学检查需侵入性手段获取标本，全身使用抗真菌治疗或其它原因易导致假阴性；CT检查其它某些真菌或细菌感染也有可能出现相似征象，在免疫正常宿主相关研究较少；PCR检测目前尚未标准化，尚在研究阶段。
因此，非培养技术对侵袭性真菌的早期诊断和临床用药具有重要意义。
G试验是指检测人体血液中真菌细胞壁成分1,3-β-D-葡聚糖（Glucan，BG）的试验，故称G试验。
1,3-β-D-葡聚糖占真菌细胞壁成分＞50%，广泛存在于各种真菌。
人体吞噬细胞吞噬真菌后能持续释放该物质，使血液中含量升高，因此可以作为侵袭性真菌的早期检测的重要指标。
GM试验是检测曲霉菌感染的经典血清学方法之一，其主要检测物质是半乳甘露聚糖（Galactomannan，简写GM）抗原。
半乳甘露聚糖是曲霉菌特有的细胞壁多糖成份，当机体感染曲霉菌后，随着菌丝生长，半乳甘露聚糖从薄弱的菌丝顶端释放出来，是最早释放的抗原，被认为是一种可靠的侵袭性曲霉菌感染早期诊断的生物标记物。
G试验-侵袭性真菌病的辅助诊断方法幻灯片课件
应用III：
真菌(1-3)--D葡聚糖检测
2019/4/18
24
医学上通常把用于检测真菌葡聚糖的
鲎试验称为G试验。这是取葡聚糖的英文名
称Glucan的首字母来命名该试验。
2019/4பைடு நூலகம்18
25
需要指出的是，隐球菌的细胞壁虽然有 葡聚糖组分，在隐球菌感染患者的血液中
却检测不出葡聚糖异常。这可能与隐球菌
具有特殊的细胞被膜有关。因此G试验不适
合对隐球菌感染的检测。
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四、G试验——临床意义
27
G试验的临床意义
28
G试验的临床意义
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G试验应用科室
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五、“生物探针”介绍
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“生物探针”介绍
34
“生物探针”介绍
35
“生物探针”介绍
隐球菌病、接合菌病占真菌病比 例不高
12
当人体深部受这类真菌感染时，真菌在 代谢过程会不断释放出葡聚糖。检查患者
的血液（血浆或血清），会发现葡聚糖含
量明显高于非感染者。因此，葡聚糖可作
为具有这种细胞结构的真菌感染标识物。
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三、鲎试验与G试验
1. 鲎（Hòu，后）试验
2019/4/18
2. 细胞壁含有葡聚糖组分的真菌：
（1）是导致侵袭性真菌病(IFD)的常见真菌。
（2）细胞壁有葡聚糖组分
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10
这类真菌有：
念珠菌
曲霉菌 耶氏肺孢菌 镰刀酶 隐球菌 接合菌
.......
2019/4/18 11
北京301医院尸检结果（77～97年）
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Charles River Laboratories
• 作为全球最大的实验动物公司，Charles River Laboratories一直是全球实验动物商 业化繁育和市场供应的领导者，拥有分 布在北美、欧洲和日本的15个分设施和 遍布全球的销售网络；已成为一个生物医
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应用III： 真菌(1-3)--D葡聚糖检测
:
1
内容目录
一、真菌感染概述 二、真菌与葡聚糖
• 一三四、、、真G鲎试试菌验验感—与—染G临试概床验意义
五、“生物探针”介绍 六、“生物探针”操作流程 七、“生物探针”的临床比对 八、G试验的影响因素
湛江安度斯的简介
• 湛江安度斯生物有限公司是查 尔斯河公司设在中国的子公司 ，是中国细菌内毒素检测试剂 的最大供应商，也是中国细菌 内毒素检测领域的技术领导者 和创新先锋；
学前临床产品和服务的主要供应商。
库珀博士
• C R Endosafe（恩度斯弗） 公司是美国著名三 大鲎试剂企业之一,有国际知名权威学者詹母 斯 弗.库珀博士(Dr. Jammes F.Cooper)创建。库 珀博士是细菌内毒素检查研究领域的先驱。 1971年他与Lein 及 Banger等人提出以鲎实验 法检查热源，并率先证明了鲎实验法作为注 射药品热源检查的敏感方法的价值。1972年 他协助美国(The parentral Drug Association) 的 鲎试剂.他一直主持着美国非经肠道药物协会 (The parenteral Drug Associatoin)的鲎实验应用 促进工作,以及每年一届的美国南卡罗纳州查 尔顿的鲎实验学术会议。
10 真菌
828
1997
感染类型
死亡人数
呼吸道
87,181
败血症
22, 396
HIV/AIDS
16, 524
肾脏/泌尿道
13, 413
心脏
5577
肝胆管
4596
真菌
2370
结核
1259
胃肠道
1053
围产期
820
真菌感染的死亡率上升了3.4倍
（死亡率：0.7~2.4 /100,000）
8
侵袭性真菌病(Invasive Fungal Disease ,IFD)
• 深部真菌感染则是真菌突破人体天然屏障导致组织脏器 的感染。
7
美国死于感染性疾病的十大原因
1980
感染类型
死亡人数
1 呼吸道
56, 966
2 败血症
9438
3 肾脏/泌尿道 8006
4 心脏
2486
5 肺结核
2333
6 细菌性脑膜炎 1402
7 胃肠道
1377
8 肝胆管
1277
9 围产期
1305
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20
人们利用鲎的阿米巴细胞溶胞物制 备成了鲎试剂（LAL或TAL）。通常称 使用鲎试剂检测脂多糖（LPS）或-葡 聚糖（-G）的试验为鲎试验（LAL Test or TAL Test）。
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21
2. 鲎试验反应机理
22
3. 鲎试验的应用
应用I：细菌内毒素检查 (Bacterial Endotoxin Test, BET)
• EORTC/MSG原称侵袭性真菌感染（IFI），修订后改称 IFD；
• 是指真菌侵入人体，在组织、器官或血液中生长、繁殖 ，并导致炎症反应及组织损伤的疾病。
• 是真菌感染致死的重要原因
9
侵袭性真菌病已变得越来越常见
10
侵袭性真菌感染的诊断标准
G试验可作为拟诊病例的微生物 学标志
11
主要可引发侵袭性真菌病的疾病
接合菌
.......
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15
北京301医院尸检结果（77～97年）
肺真菌病发生率3.7％ (38/1027 )
隐球菌病、接合菌病占真菌病比 例不高
16
当人体深部受这类真菌感染时，真菌在 代谢过程会不断释放出葡聚糖。检查患者 的血液（血浆或血清），会发现葡聚糖含 量明显高于非感染者。因此，葡聚糖可作 为具有这种细胞结构的真菌感染标识物。
肿瘤类： 胃癌，肝癌，肝内胆管癌， 肺癌，多发性骨髓瘤，白
血病，恶性淋巴瘤
12
二、真菌与葡聚糖
1. 某些真菌的细胞壁结构
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13
2. 细胞壁含有葡聚糖组分的真菌： （1）是导致侵袭性真菌病(IFD)的常见真菌。 （2）细胞壁有葡聚糖组分珠菌 曲霉菌 耶氏肺孢菌 镰刀酶 隐球菌
• 库珀博士创建的 Endosafe 公司现以成 为美国鲎试剂(LAL)市场最大的供应商. 该公司的鲎试剂以其良好的稳定性,广
泛的适用性以及优越的抗干扰性能享 誉国际医药工业界.
一、真菌感染概述
• 真菌感染 ：
• 真菌感染在通常情况下我们最常见的是表皮的感染，例 如头癣、体癣、甲癣等，由于侵犯的部位大都表浅，不 会导致严重问题，因而叫浅部真菌感染；
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研究发现，革兰氏阴性细菌的细胞壁都含有一 种叫内毒素(Endotoxin)的组分。
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内毒素是能够引起哺乳动物原反应 的主要热原物质。
革兰氏阴性细菌在新陈代谢过程不 断地向环境释放内毒素，污染药品和医疗 器械。因此注射药品和医疗器械都要求必 须作细菌内毒素检查（BET）。
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三、鲎试验与G试验
1. 鲎（Hòu，后）试验
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鲎是地球上最古老的海洋生物之一，已 有三亿多年的历史，人们称它为“活化石”。
雌
雄
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研究发现，鲎的循环细胞（阿米巴细 胞）中含有一种特殊的凝固酶原。这种凝 固酶原可以被自然界广泛存在的两种物质 激活为凝固酶，从而导致一系列的生化反 应。这两种物质就是脂多糖 (Lipopolysaccharide, LPS)和(1-3)--D 葡聚糖。
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应用II： 革兰氏阴性菌脂多糖检测
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细菌内毒素的化学成分是脂多糖。当 人体深部感染革兰氏阴性菌时，细菌会在体内 不断释放内毒素（脂多糖）。检查患者的血液 （血浆）、腹水、尿液及脑脊液，会发现脂多 糖明显高于非感染者。
脂多糖检测对败血症、严重器官衰竭 的快速辅助诊断有临床价值。