凝血酶-抗凝血酶复合物检测方法建立及初步应用
原发免疫性血小板减少症弥散性血管内凝血护理查房
五、诊断要点
1.临床表现 存在易引起DIC的基础疾病 有下列1项以上的临床表现： ①严重或多发性的出血倾向。 ②不能用原发病解释的微循环衰竭或休克。 ③多发性微血管栓塞的表现 。
2.实验室检查 需同时具备下列3项以上异常： ①血小板＜100×109/L或进行性下降。 ②血浆纤维蛋白原含量＜1.5g/L并呈进行性下降。 ③3P试验阳性或血浆FDP＞20mg/L，或D-二聚 体水平增高。 ④PT呈动态变化，缩短或延长3s以上，或APTT 延长或缩短10s以上。
罕有瘀点、紫癜， 可见大片瘀斑 常见 多见 常见 少见 少见 多见
常为终身性，预后不定
三、实验室及其他检查
1.筛选试验 初步判断出血性疾病的病因与发病机制。 • 血管异常：束臂试验、出血时间（BT）。 • 血小板异常：血小板计数、血块回缩试验。 • 凝血异常：凝血时间（CT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、血浆凝血酶原时间（PT）、
二线治疗 • 对病程3～12个月的
糖皮质激素依赖或无 效的成人ITP患者， 一般推荐TPO-RA或 利妥昔单抗治疗。
五、护理诊断/问题与护理措施
常用护理诊断
1.有出血的危险 与血小板减少有关。
护理措施
（1）出血情况监测：及时发现新发出血；血小板＜20×109/L时严格卧床休息；疑有严重出血 做好抢救准备。 （2）预防或避免加重出血。 （3）成分输血的护理。
一般治疗 • 防止外伤。 • 避免应用能降低血小
板数量、抑制血小板 功能及任何引起或加 重出血的药物。
糖皮质激素 • 一般为首选药物，近期有效率80%。 • 作用机制：①减少血小板自身抗体
生成及减轻抗原抗体反应。② 抑制 单核-吞噬细胞破坏血小板。③ 降 低毛细血管通透性。④ 刺激骨髓造 血及促进血小板向外周的释放。
凝血酶-抗凝血酶复合物检测方法建立及初步应用
ｕｓｅｆｕｌ ｉｎ ＴＡＴ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｉｔ ｗａｓ ａｌｓｏ ａ ｕｓｅｆｕｌ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｓｔｕｄｙｉｎｇ ｔｈｅ
ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｓｔａｔｅ ｏｆ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ曲ｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ
ｓｕｐｐｏｓｅｄ ｔｈａｔ ｉｍｍｎｉｎｇ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ＴＡＴ ｗｏｕｌｄ ｂｅ ｍｏｒｅ ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ ｔｈａｎ ｔｈａｔ
ｗｉｔｈ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ａｎｄ ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｌｙ．
Ｔｈｒｅｍｂｉｎ ａｎｄ ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ ｗｅｒｅ ｍｉｘｅｄ ｔｏｇｅｔｈｅｒ ｉｎ ｒａｔｉｏ ａｆｔｅｒ ｂｅｅｎ
ｆｉｂｒｏｍｙａｍａ，ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ，ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅｓ，ａｃｕｔｅ ｌｅｕｋｅｍｉａ ∞ｄ
ｐｒｅｇｎａｎｃｙ．Ｔｅｓｔｉｎｇ ＴＡＴ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｔｏ ｍｏｎｉｔｏｒ ｔｈｅ ｈｉ曲ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｓｔａｔｅ ｉｎ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ，ａｃｕｔｅ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｈｅｐａｔｉｔｉｄｅｓ．
利用肝素一Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ一６Ｂ
柱从人血浆中提取凝血酶和抗凝
血酶，然后两者按一定比例体外反应，即可得到浓度和纯度均较高的ＴＡＴ
复合物（同时含有少量ＡＴ和多余的凝血酶）。以该反应的混合物免疫小
鼠，我们制备了一系列特异和非特异针对ＴＡＴ的单克隆抗体，并得到了特
望． 对ＡＴ和特异针对凝血酶的单抗。
血浆D-二聚体在老年晚期小细胞肺癌患者化疗前后的变化及临床意义
血浆D-二聚体在老年晚期小细胞肺癌患者化疗前后的变化及临床意义宋龙霞;王越;张盼盼;李丽蕊;崔紫阳;王昊辰;王红阳;黄艳【摘要】目的探讨老年晚期小细胞肺癌患者经EP方案化疗前后血浆D-二聚体数值的变化及其与化疗疗效的相关性.方法肺癌组选取50例确诊为Ⅲ或Ⅳ期小细胞肺癌患者,所有患者经EP方案(依托泊苷+顺铂)进行化疗.另选取50例本院健康体检者为正常对照组.采用酶联免疫荧光法测定肺癌组患者化疗前后血浆D-二聚体的含量及体检者体检当日的血浆D-二聚体含量.结果晚期小细胞肺癌患者化疗前血浆D-二聚体水平高于正常对照组,P<0.001;化疗后疗效评估为有效组患者的D-二聚体含量(0.67±0.15)mg/L显著低于化疗前(1.86±0.13)mg/L,P<0.001,稳定组D-二聚体含量(1.72±0.20)mg/L较化疗前(1.85±0.21)mg/L无显著变化,P>0.05,进展组D-二聚体含量(2.71±0.23)mg/L高于化疗前(1.87±0.22)mg/L,P<0.01.结论血浆D-二聚体水平的高低可作为观察老年晚期小细胞肺癌患者化疗疗效的指标之一.【期刊名称】《临床肺科杂志》【年(卷),期】2018(023)012【总页数】4页(P2265-2268)【关键词】小细胞肺癌;D-二聚体;化疗;疗效【作者】宋龙霞;王越;张盼盼;李丽蕊;崔紫阳;王昊辰;王红阳;黄艳【作者单位】063000 河北唐山,华北理工大学附属医院呼吸科;063000 河北唐山,华北理工大学附属医院呼吸科;063000 河北唐山,华北理工大学附属医院呼吸科;063000 河北唐山,华北理工大学附属医院呼吸科;063000 河北唐山,华北理工大学附属医院呼吸科;063000 河北唐山,华北理工大学附属医院呼吸科;063000 河北唐山,华北理工大学附属医院呼吸科;063000 河北唐山,华北理工大学附属医院呼吸科【正文语种】中文小细胞肺癌在所有肺癌中虽然仅占20%左右，但小细胞肺癌患者病情进展快，预后差，5年生存率低。
凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）
凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）凝血酶是由凝血酶原激活物在钙离子参与下激活凝血酶原而生成的,生理情况下体内仅有少量凝血酶生成,之后很快又与抗凝血酶结合生成凝血酶抗凝血酶复合物（TAT）而灭活，TAT生成过程：首先肝素先结合于抗凝血酶的赖氨酰基从而使抗凝血酶的分子构象发生改变,然后抗凝血酶-肝素复合物与凝血酶结合形成凝血酶-肝素-抗凝血酶三联复合物,之后肝素解离形成凝血酶-抗凝血酶复合物。
TAT是能够反映凝血酶生成量和凝血酶活性的分子标志物，因此，临床上通过检测血液中TAT可间接测得凝血酶水平。
TAT是衡量凝血酶生成和活性增高的分子标志物。
在血栓性疾病中均有血栓形成病理过程,凝血酶参与的凝血级联反应过度激活是血栓形成因素之一，检测凝血酶即可以反映体内凝血系统的情况，但是由于体内凝血酶产生后迅速与血液中其他物质作用而消失，因此，很难检测血液中凝血酶水平。
而TAT的血液半衰期为3～15分钟而能够测定。
通过测定血中TAT浓度，能够了解凝血激活的程度。
增高的病理状态有：(1)DIC、DIC前状态；(2)深部静脉血栓症（DVT），肺栓塞（PE）；(3)部分房颤、二尖瓣狭窄症合并房颤；(4)其他凝血激活状态。
1、THA/TKA 术后第一天TAT水平可以早期预测DVT。
静脉血栓栓塞 (VTE) 是与全膝关节置换术 (TKA) 和全髋关节置换术 (THA) 相关的常见并发症。
它涉及三个危险因素：静脉淤滞、血管损伤和高凝状态。
THA/TKA 手术会导致显著的血液学变化、止血带的使用和围手术期行动不便，从而增加 DVT 的风险。
THA/TKA 的患者需要至少14天的抗凝预防和大约35天的最佳持续时间，到目前为止，还缺乏有效的指标或方法来更早地预测或识别VTE。
目前，P-选择素、D-二聚体或血栓弹力图(TEG)均不能指示血栓形成的风险，TAT对DVT的预测具有高灵敏度但低特异性。
研究显示：THA/TKA 术后第一天TAT水平可以早期预测 DVT。
抗凝血酶测定
抗凝血酶（AT）测定1. 实验原理在待测血浆中加入过量的凝血酶，凝血酶与血浆中的AT形成1:1的复合物，剩余的凝血酶作用于显色肽S2765，裂解出显色基团对硝基苯胺(pNA)，用405nm测吸光度，显色程度与剩余凝血酶的量成正相关，而与血浆AT的量呈负相关。
2. 标本采集2.1 早晨空腹采血(空腹12小时左右)，静脉采血。
2.23.8％(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml，混匀。
3. 标本存放：全血贮存在4～10oC不超过2小时，最好1小时内(3000r/min×15min)分离血浆，此血浆在室温22～24oC下可存放2小时，在2～4oC可存放4小时，在-20oC 可存放2周，长时间保存需在冰冻条件下，在-70oC可存放6个月。
冷冻血浆融化时，应将盛血浆的容器置37oC水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化，以免凝血因子消耗，解冻后立即测试。
冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果不准确。
4. 标本运输：低温条件下运输。
5. 标本拒收的标准：抗凝剂不符合，采血量不准确，凝固，溶血，脂血标本不能作该项目检测。
6. 实验材料：6.1每个试剂均购自德国Dade Behring Marburg公司。
1）AT测定试剂盒（代号P/N:20008900）冻干发色底物S2765 2瓶（6mg/瓶)冻干活化X因子试剂（包括牛活化X因子、肝素、缓冲液、牛血清白蛋白）2瓶2）定标血浆Calibration Plasma（代号P/N:8467300）3）正常质控血浆Normal control plasma（代号P/N:8467011）4）异常水平发色底物法质控血浆Abnormal chromogenic control plasma level I/II（代号P/N:8467600）5）Cleaning agent（代号P/N:9832700）6）Cleaning solution（代号P/N:9831700）6.2试剂准备发色底物：用2mL NCCLS II型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶冻干发色底物，盖上盖子，轻摇至完全溶解，置15～25oC30分钟，用前摇匀，勿用力振摇。
习惯性流产的抗凝血酶原抗体IgG、IgM检测的初步应用的论文
习惯性流产的抗凝血酶原抗体IgG、IgM检测的初步应用的论文【摘要】目的建立人血浆抗凝血酶原抗体（apt）igg、igm 的间接elisa检测方法，并用于检测原因不明习惯性流产病人。
方法采用人凝血酶原包被微孔板，以碱性磷酸酶标记的抗人igg、igm为检测抗体，对35例原因不明习惯性流产患者血浆中的抗凝血酶原抗体igg、igm、igg+igm进行检测，同时计算其阳性率和优势比（or，95%可信限）。
结果所建方法线性范围广，稳定性、特异性、重复性较好。
原因不明习惯性流产患者血清中抗凝血酶原抗体igg、igm、igg+igm阳性率分别为%、%和20%，对照组分别为%、%和5%，p值分别为、及。
结论该法是一种较好的抗凝血酶原抗体igg、igm定量测定法。
原因不明习惯性流产的apt较高于正常妇女，可以作为原因不明习惯性流产患者的辅助诊断指标之一。
【关键词】抗凝血酶原抗体；抗磷脂抗体；流产detection of antiprothrombin antibodies igg，igm in patients with recurrent abortionlin qing1，，peng wei lin2，，li shu gan1，tang wen ying2，zhang yi 1，zhao yue zhen2，zhang rong sheng1，lv hua bei2（entry exit inspection and quarantine bureau，international travel health care center，xiamen 361012 china；children’s hospital，quanzhou 362000，chinaabstract：objective to establish an indirect solid phase elisa method for the detection of antiprothrombin （apt）igg and igm，and apply in patients with unknown recurrent a indirect elisa using the purified human prothrombin for plate coating and akp labeled goat anti human igg or igm as detection antibody was applied to quantify apt igg or igm levels in plasmas from 35 patients with habitud aboreion（ha）.their positive rates and odds ratio（or：with 95% confidence interval，ci）were this method had high precision and good linearity and show good sensitivity，specificity，reproducibility and positive rates of igg，igm，igg+igm apt were %，% and 20%，respectively，with unknown recurrent pregnancy loss，compared with %，% and 5% in the controls，p value were ，and conclusion apt are more frequently found in patients with ha than in antiprothrombin assay was validated for the detection of apt，igg，igm，in patients .key words：antiprothrombin antibody；antiphospholipid antibody；abortion抗磷脂抗体（antiphospholipid antibody，apa）是一族主要针对磷脂结合蛋白的异质性抗体。
出血性疾病
1．抗凝血酶（AT） AT是人体内最重要的抗凝物质，约占血浆生理性抗凝活性的75％。AT生成于肝及血管内皮细胞，主要功能是灭活FXa及凝血酶，对其他丝氨酸蛋白酶如FⅨa、Ⅺa、FⅫa等亦有一定灭活作用，其抗凝活性与肝素密切相关。
2．蛋白C系统 蛋白C系统PC、PS、TM等组成。PC、PS为维生素K依赖性因子，在肝内合成。TM则主要存在于血管内皮细胞表面，是内皮细胞表面的凝血酶受体。凝血酶与TM以1：1形成复合物，裂解PC，形成活化的PC（APC），APC以PS为辅助因子，通过灭活FV及FⅧ而发挥抗凝作用。
（2）血小板异常：血小板数量、形态，平均体积，血小板黏附、聚集功能，PF3有效性测定，网织血小板、血小板α颗粒膜蛋白（P选择素）、直接血小板抗原（GP II b/Ⅲa和I b/Ⅸ）单克隆抗体固相（MAIPA）检测及血栓烷B2测定等。
（3）凝血异常：
1及活性。
主要为获得性疾病：①肝素使用过量；②香豆素类药物过量及敌鼠钠中毒；③免疫相关性抗凝物增多；④蛇咬伤、水蛭咬伤；⑤溶栓药物过量。
（五）复合性止血机制异常
1．先天性或遗传性血管性血友病（vWD）。
2．获得性弥散性血管内凝血（DIC）。
【出血性疾病诊断】
（一）病史
1．出血特征 包括出血发生的年龄、部位、持续时间、出血量、有否出生时脐带出血及迟发性出血、有否同一部位反复出血等。一般认为，皮肤、黏膜出血点、紫癜等多为血管、血小板异常所致，而深部血肿、关节出血等则提示可能与凝血障碍等有关。
2．获得性 ①感染：如败血症；②过敏：如过敏性紫癜；③化学物质及药物：如药物性紫癜；④营养不良：如维生素C及PP缺乏症；⑤代谢及内分泌障碍：如糖尿病、Cushing病；⑥其他：如结缔组织病、动脉硬化、机械性紫癜、体位性紫癜等。
抗凝血酶III(ATIII)活性测定
出凝血抗凝血酶III（AT III）活性测定（第四版）出凝血原理：抗凝血酶III能和凝血酶形成复合物，使之丧失转化纤维蛋白原为纤维蛋白的酶活性。
在血浆中加入过量的凝血酶后，凝血酶与血浆中的AT III形成1︰1复合物，剩余的凝血酶作用于显色剂，裂解出显色基团，其显色程度与血浆中的AT III活性呈负相关。
出凝血标本处置：患者处于休息状态下，采空肚静脉血（急诊病人除外）。
采血者应技术熟练，“一针见血”，以避免组织损伤，使外源性凝血因子进入标本。
最好不与其它实验一路搜集而使血液停留在针管的时刻延长。
采完血后，将血液沿管壁缓缓注入试管，幸免产动气泡；然后迅速将血液和抗凝剂轻轻倒置混匀，幸免使劲震荡。
全血要在1小时内分离血浆。
分离乏血小板血浆时，要在室温下3000rpm离心10分钟，室温下可寄存4小时。
全数实验不能在4小时内完成，应将乏血小板血浆分装在～的小试管中快速冷冻，贮存于-20℃冰箱中。
冷冻过的标本不能再次冷冻，不然结果会不准确。
冷冻血浆融化时，应将盛冷冻血浆的容器置于37℃水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化。
出凝血试剂：试剂购于天津威士达公司AT III试剂盒：试剂盒代号OWWR 15。
试剂包括6×15ml凝血酶试剂；6×3ml底物试剂；1×100ml缓冲液。
凝血酶试剂每瓶用15ml 缓冲液复溶，室温平稳30分钟。
底物试剂每瓶用3ml蒸馏水复溶，室温平稳30分钟。
出凝血仪器：利用Sysmex公司的CA-7000型全自动血液凝固仪。
出凝血操作：按仪器操作步骤执行标准操作。
出凝血6.６.1开机：按下机械侧面的POWER 按钮。
开机后机械进行自检，当屏幕上边显示“Ready:”时能够进行实验。
出凝血6.６.2检查消耗品：一、预备反映杯：打开仪器上盖装反映杯的盖子查看反映杯是不是够量，不足时，需及时添加。
（一次性最多可放1000 个杯子）二、预备试剂：依照仪器对试剂的要求，把试剂预备好，放到仪器内相应位置，注意查看试剂的量和有效期。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
４
引
言
凝血酶一抗凝血酶复合物（ｔｈｒｏｍｂｉｎ—ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ，ＴＡＴ）是 人体内凝血和抗凝血相互作用以维持生理平衡的产物，是凝血酶 （ｔｈｒｏｍｂｉｎ，Ｔ）生成和凝血系统激活的标志物之一。
肝素（ｈｅｐａｒｉｎ，Ｈ）催化ＴＡＴ的形成，首先肝素结合抗凝血酶 （ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ，ＡＴ），形成肝素一ＡＴ二联体（Ｈ—Ｔ），使ＡＴ抗凝活性基团暴
一 经过抗体配对试验，用针对ＴＡＴ的凝血酶部位的Ⅺ号单抗作捕获抗
体，用针对ＴＡＴ之抗凝血酶部位的Ⅲ号抗体作酶标检测抗体，建立了检测
ＴＡＴ的双抗体夹心法酶联免疫吸附试验。该法的线性检测范围为
０．４—６３．Ｏ！ＬＬｇ／Ｌ，批内ｃＶ为３．９％一５．９％，批间ｃＶ为９．１％一１３．３％，回收率为
９２．６％一１０４．９％。加入２０“ｇｍｌ的ＡＴ和凝血酶原对ＴＡＴ检测无影响。检测
ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｒｏｍｂｉｎ’Ｓ ａｎｄ ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ’Ｓ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｗｉｌｌ ｅｍｅｒｇｅ．ＳＯ ＴＡＴ
ｓｈｏｕｌｄ ｈａｖｅ ｎｅｏａｎｔｉｇｅｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｒｏｍ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ａｎｄ ａｎｔｉｔｈｒｏｌＩ虹ｉｎ．Ｂａｓｅ ０ｎ
ｔｈｏｓｅ ｃａｓｅｓ，ａｎｄ ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ｍｅｒｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｔｏ ＴＡＴ ｔｈｅ ｓＮｉｌｅ ｔｉｍｅ ｒｅｄｕｃｅ ｃｒｏｓｓ－ａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｏｒ ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ，ｗｅ
ｓｉｔｕａｔｉｏｎｓ．
Ｂｅｈｒｉｎｇ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｉｎ Ｇｅｒｍａｎｙ ｃｏａｔｅｄ ｍｉｃｒｏｔｉｔｒａｔｉｏｎ ｐｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｈｕｍａｎ ｔｈｒｏｍｂｉｎ，ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｔｏ
ｓｕｐｐｏｓｅｄ ｔｈａｔ ｉｍｍｎｉｎｇ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ＴＡＴ ｗｏｕｌｄ ｂｅ ｍｏｒｅ ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ ｔｈａｎ ｔｈａｔ
ｗｉｔｈ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ａｎｄ ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｌｙ．
Ｔｈｒｅｍｂｉｎ ａｎｄ ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ ｗｅｒｅ ｍｉｘｅｄ ｔｏｇｅｔｈｅｒ ｉｎ ｒａｔｉｏ ａｆｔｅｒ ｂｅｅｎ
、
附试验临床应用。
酶联免疫吸
Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ鼬ｄｉｍｅｎｔａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ Ｆｎｚ，ｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｍｏｓｏｒｂｅｎｔ
Ａｓｓａｙ ｔｏ Ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ Ｔｌｍ妯ｉｒｒ－ａｎｔｉｔｂｒｕｎｂｉｎ Ｃｏｍｐｌｅｘ ｉｎ Ｐｌａｓｍａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ
ｆｉｂｒｏｍｙａｍａ，ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ，ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅｓ，ａｃｕｔｅ ｌｅｕｋｅｍｉａ ∞ｄ
ｐｒｅｇｎａｎｃｙ．Ｔｅｓｔｉｎｇ ＴＡＴ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｔｏ ｍｏｎｉｔｏｒ ｔｈｅ ｈｉ曲ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｓｔａｔｅ ｉｎ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ，ａｃｕｔｅ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｈｅｐａｔｉｔｉｄｅｓ．
上海第二医科大学 硕士学位论文
凝血酶-抗凝血酶复合物检测方法建立及初步应用 姓名：陈红兵
申请学位级别：硕士 专业：临床检验诊断学（免疫学测定）
指导教师：罗伟 2002.5.1
凝血酶一抗凝血酶复合物检测方法的建立及其初步临床应用
中文摘要
凝血酶一抗凝血酶复合物（ｔｈｒｏｍｂｉｎ—ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ，ＴＡＴ）是 体内凝血酶原激活成凝血酶（ｔｈｒｏｍｂｉｎ，Ｚ）后，迅速被抗凝血酶 （ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ，ＡＴ）结合，生成共价键相连的无活性不可逆复合物ＴＡＴ，由 此维持凝血一抗凝血之间的生理平衡，目前认为该复合物的形成是凝血酶 生成的直接证据，标志凝血系统的激活。检测ＴＡＴ的血浆水平可以监测凝 血系统的激活情况，是研究生理病理状态下凝血系统行为的一项有用指
标。一
一、｛ＴＡＴ在形成过程中，凝血酶裂解抗凝血酶的Ａｒ９３９３－Ｓｅｒ３９４位肽键，
并以凝血酶丝氨酸活性中心Ｓｅｒ２０５结合抗凝血酶的Ａｒ９３９３位，两者构象
均发生一定的改变，呈现出一定的新抗原表位。因此，用ＴＡＴ免疫小鼠来
制备单克隆抗体可以得到针对Ｔ
高和特异性好的单克隆抗体，同
时减少与ＴＡＴ前体分子的交叉反
ｔｈｅ ｔｈｉｒｄ ａｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ（ｗｉｔｈ ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ ｃｒｏｓｓ－ｒｅａｃｔｉｏｎ）．Ｔｈｅ
ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ａｓｓａｙ ｖｒａｓ ｆｒｏｍ ０．４ ｕ ｇ／Ｌ ｔｏ ６３．０ ｕ ｇ／Ｌ．Ｔｈｅ ｉｎｔｒａ－ａｓｓａｙ
ａｎｄ ｉｎｔｅｚ－－ａｓｓａｙ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ３．弘５．９ｊ６ ａｎｄ ９．１％￣１３．３９６ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ｎｌｅ Ｔ』盯ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅｓ ｗｅｒｅ ９２．６％ｔｏ １０４．弧Ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ
露。在血浆游离凝血酶生成后此Ｈ～Ｔ二联复合体立即与之结合，形成ＡＴ— Ｔ—Ｈ三联复合体，凝血酶酶解ＡＴ并与之形成共价键，凝血酶失活，两者构 象均有一定程度改变［１引。此后肝素脱离，稳定ＴＡＴ形成。
国外研究表明，检测ＴＡＴ对前ＤＩＣ（ｐｒｅ—ＤＩＣ）有高的敏感性和特异性 ＩＴ］，可据ＴＡＴ值对ＤＩＣ（ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ ｃｏｎｇｕｌａｔｉｏｎ，弥散 性血管内凝血）进行诊断和分级［８］。检测ＴＡＴ可预测ＤＶＴ（ｄｅｅｐ ｖｅｉｎ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ，深静脉血栓）形成［９］，可作ＤＶＴ疗效指标“０｜。检测ＴＡＴ可对 ＡＭＩ（ａｃｕｔｅ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔ ｉｏｎ，急性心肌梗死）进行早期诊断、预测 再闭塞、考察溶栓疗效ｎ１¨］，可区分良性和恶性肿瘤、监视妇科癌症的转 移‘－５·川。可作为肝病严重程度和死亡预测指标［１８、１引。ＴＡＴ也在妊娠、感 染、类风湿病等升高［２０≈４｜。
溶酶复合物）、ＤＤ（Ｄ－ｄｉｍｅｒ，Ｄ一二聚体）、ＦＤＰ（ｆｉｂｒｉｎ（ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ）
ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ，纤维蛋白（原）降产物］显著相关。肝病、消化道 恶性肿瘤、急性白血病患者ＴＡＴ也显著升高。ＴＡＴ在预测心肌梗死、监视
妊娠、肝炎等高凝状态具有很大意义。
以上结果表明，该法可用于检测血浆ＴＡＴ。为评估生理、病理状态下
利用肝素一Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ一６Ｂ
柱从人血浆中提取凝血酶和抗凝
血酶，然后两者按一定比例体外反应，即可得到浓度和纯度均较高的ＴＡＴ
复合物（同时含有少量ＡＴ和多余的凝血酶）。以该反应的混合物免疫小
鼠，我们制备了一系列特异和非特异针对ＴＡＴ的单克隆抗体，并得到了特
望． 对ＡＴ和特异针对凝血酶的单抗。
ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｔｉ－ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｎ＿Ｌ １ｈｅ ｃｏｍｐｌｅｘ ｉｓ ａ ｄｉｒｅｃｔ ｉｎｄｉｃａｔｏｒ ｏｆ ｉｎ ｖｉｖｏ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｉｔ ｉｓ ａ ｇｏｏｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ ｔｏ
ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｆｒｅｓｈ ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｂｓｅｎｔ ｐｌａｓｍａ ｂｙ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ｏｎ ｈｅｐａｒｉｎ－ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ，ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｉｓ ａｐｐｒｏａｃｈ ｗｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ弋吼
ｂｌｅｎｄ（ｍａｉｎｌｙ ＴＡＴ ａｎｄ ａｌＳＯ ａｎｙ ｒｅｓｉｄｕａｌ ａｎｔｈｔｈｒｏｍｂｉｎ ａｎｄ ｔｈｒｏ曲ｉｎ）．Ｉｎｍｍｉｎｇ
ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ｔｈｉｓ ｂｌｅｎｄ，ｗｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ ａ ｐｏｏｌ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｏｒ ｕｎｓｐｅｃｉｆｉｃ ｔｏ ＴＡＴ，ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ ａｎｄ ｔｈｒｏｍｂｉｎ．
Ａｆｔｅｒ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｓｉｆｔｉｎｇ ｔｅｓｔ。ｗｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ａ ｓａｎｄｗｉｃｈ ＥＬＩＳＡ ｅｍｐｌｏｙｉｎｇ ｔｈｅ ｅｌｅｖｅｎｔｈ ａｎｔｉｂｏｄｙ（ｗｉｔｈ ｔｈｒｅｍｂｉｎ ｃｒｏｓｓ－ｒｅａｃｔｉｏｎ）ａｓ ｃａｐｔｕｒｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｎｄ
Ａｓ ｓｏｏｎ ａｓ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｔｈｒｏｍｂｉｎｏｇｅｎ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｓ ｔｏ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｉｎ
ｂｌｏｏｄ，ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ ｒａｐｉｄｌｙ ｂｉｎｄｓ ｔｏ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｂｙ ａ ｃｏｖａｌｅｎｔ ｂｏｎｄ ｔｏ ｆｏｒｍ
ｉｎａｃｔｉｖｅ ｔｈｒｏｍｂｉｎ－ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ，ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｍａｉｎｔａｉｎ ｔｈｅ ｂａｌａｎｃｅ
ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ５０ ｎｏｒｍａｌ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ ｗｉｔｈ ｖａｒｉａｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ
掰？：
ｔｈａｔ，ｃ唧ａｒｅｄ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｓｈｏｗｅｄ
ｔｏ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｒｔｒｏｌｓ．ｈｉｇｈｅｒ １虹ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ
Ｉｎ ｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｒｅｕｌｔｓ，ｗｅ ｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ
ｕｓｅｆｕｌ ｉｎ ＴＡＴ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｉｔ ｗａｓ ａｌｓｏ ａ ｕｓｅｆｕｌ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｓｔｕｄｙｉｎｇ ｔｈｅ
ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｓｔａｔｅ ｏｆ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ曲ｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ