从牛奶中分离酪蛋白(实验原理及步骤)

从牛奶中分离酪蛋白

实验原理

牛奶中含丰富的蛋白质，其中主要是酪蛋白。蛋白质在其等电点PI溶液中溶解度最低。据此原理，将牛奶的PH调至 4.7，即酪蛋白的等电点时，酪蛋白即沉淀出来。酪蛋白不溶于乙醇和乙醚，利用乙醇除去酪蛋白沉淀中不溶于水的磷脂类物质脂肪，用乙醚除去脂肪类物质，得到纯的酪蛋白。实验步骤

1. 将100 mL牛奶和100 mL pH为4.7的乙酸-乙酸钠缓冲溶液加热至40-45℃，在搅拌下将缓冲溶液慢慢加至牛奶中，直到pH值达到4.7，可用精密pH试纸检查，此过程应保持温度在40-45℃。将上述悬浊液冷却至室温，离心15min(3000r/min),弃去上层清液，得酪蛋白粗制品。

2. 向沉淀中加入10mL蒸馏水，用玻璃棒将沉淀充分搅匀，离心10 min(3000r/min)，弃去上层清液。重复此过程一次。

3. 在沉淀中加入20mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇-乙醚混合液（乙醇:乙醚=1:1 V/V）洗涤沉淀2次（每次加洗涤液10 mL，加洗涤液时将抽气系统断开）抽干，最后用乙醚洗涤沉淀2次，抽干。

4. 将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白纯品。准确称重，计算含量。