水中微囊藻毒素的测定
编号：
作业指导书水中微囊藻毒素的测定高效液相色谱法
临江市环境保护监测站
1、方法提要
微囊藻毒素在238nm下有
1、方法的适用范围
本标准规定了高效液相色谱法和间接竞争酶联免疫吸附法测定水中微囊藻毒素（环状七肽）的条件和详细分析步骤。
本标准适应于饮用水、湖泊水、河水、地表水中微囊藻毒素的测定。
样品中微囊藻毒素的检出限：高效液相色谱法和酶联免疫吸附法均匀为0.1µg/L。
2、微囊藻毒素的分子式、分子质量及结构式
2.1分子式
微囊藻毒素-RR(MC-RR):C49H75N13O12,
微囊藻毒素-YR(MC-YR):C52H72N10O13,
微囊藻毒素-LR(MC-LR):C49H74N10O12.。
2.2分子质量
MC-RR:1038.21mg,MC-YR:1045.2100µg,MC-LR:995.250µg。
2.3结构式
MC-RR、MC-YR、MC-LR、X和Y
表1 MC-RR、MC-YR、MC-LR、X和Y
3、水样采集和保存
用采水器采集1500ml～2000ml水样（水样采集后，应在4
h内完成以下前处理步骤）。
用500目的不锈钢筛（）过滤，除去水样中大部分浮游生物和悬浮物。
取过滤后的水样1200ml于玻璃杯式滤器（）中，依次经滤膜（）减压过滤。
准确量取1000ml 滤液置于棕色试剂瓶中。
注：如减压过滤后的水样不能立即分析，可置于玻璃容器中，在-20℃保存，30d内分析完毕。
4、试剂和材料
除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂和不含有机物的蒸馏水。
5.1甲醇，HPLC级（色谱级甲醇）
5.2二氯甲烷，农残级
5.3阿特拉津标准贮备溶液，ρ=100µg/mL。
准确称取0.0100g阿特拉津标准样品，用少量二氯甲烷溶解后，再用甲醇准确定容至100mL，作为阿特拉津标准贮备溶液。
在4℃冰箱中保存，保存期半年。
5.4阿特拉津标准使用液，ρ=10.0µg/mL。
取阿特拉津标准贮备溶液1.00ml于10.0ml容量瓶中，甲醇定容，混匀，配制成标准使用溶液。
在4℃冰箱中保存，保存期半年。
5.5无水硫酸钠：在400℃灼烧4小时，冷却后密闭保存在玻璃瓶中。
5.6氯化钠：在400℃灼烧4小时，冷却后密闭保存在玻璃瓶中。
5、仪器和设备
除非另有说明，分析时均使用符合国家标准A级玻璃量器。
6.1高效液相色谱仪：具有可调波长紫外检测器或二极管阵列检测器。
6.2 色谱柱：填料为5.0µm ODS,柱长200mm，内经4.6mm反相色谱柱或其他性能相近的色谱柱。
6.3振荡器：可调速。
6.4浓缩装置：旋转蒸发装置或K-D浓缩器、浓缩仪等性能相当的设备。
6.5分液漏斗：250mL。
6.6一般实验室常用仪器。
6、分析步骤
7.1参考色谱条件
7.1.1色谱柱：反相ODS柱；4.6mm×200mm，5µm。
7.1.2流动相：甲醇：水=70：30（V/V）。
7.1.3流速：0.8ml/min。
7.1.4紫外检测波长：225nm。
7.1.5柱温：40℃。
7.1.6进样量：10.0µL。
7.2校准
7.2.1标准系列的制备
取不同量的阿特拉津标准使用溶液，用甲醇稀释，配制成浓度为0.030、0.050、0.100、0.500、1.00µg/ml的标准系列，贮存在棕色小瓶中，于4℃冰箱存放。
7.2.2初始标准曲线
通过自动进样器或样品定量环分别移取5种浓度的标准使用液10µl,注入液相色谱，得到不同浓度的阿特拉津的色谱图。
以色谱响应值为纵坐标，阿特拉津的浓度为横坐标，绘制标准曲线。
标准曲线的相关系数R≥0.999。
7.3样品分析
将按照4样品的制备和按7.1色谱条件测定。
7.4空白试验
在分析样品同时，应做空白实验，即用蒸馏水代替水样。
空白样品应经历样品制备和测定的所有步骤。
检查分析过程中是否有污染。
7、计算结果与表示
8.1标准色谱图
本标准规定的色谱条件（7.1）下，阿特拉津的标准色谱图见图 1
8.2定性分析
以样品的保留时间和标准溶液的保留时间相比来定性。
用作定性的保留时间窗口宽度以当天测定标样的实际保留时间变化为基准。
8.3定量分析
用外标标准曲线法按式（1）计算样品中的浓度：
ρ=m·Vt
Vs
·1000
式中：ρ——水样中阿特拉津的质量浓度，µg/L；
M——从校准曲线上查得阿特拉津的质量浓度，µg/ml； V t——萃取液浓缩定量后的体积，ml；
Vs——被萃取水样的体积，ml。
8、精密度和准确度
9.1精密度
5个实验室对含阿特拉津浓度为1.0µg/L、5.0µg/L的空白加标样品进行了测定：
实验室内相对标准偏差分别为：3.0%～15%，1.7%～5.9%；
实验室间相对标准偏差分别为：8.2%，3.9%；
重复性限为：0.20µg/L，0.49µg/L；
再现性限为：0.20µg/L，0.94µg/L。
9.2准确度
5个实验室对阿特拉津浓度为2.0µg/L的统一样品进行测定：相对误差为：-16%～1.0%；
相对误差最终值为-9.5%±13%。
3个实验室对实际样品进行加标分析测定，加标量分别为1.0µg、5.0µg：
加标回收率分别为81.3%～92.1%，85.9%～104%；
加标回收率最终值为：88.1%±12%，94.6%±18%。
9、质量保证和质量控制
10.1空白试验
每分析一批（20个）样品必须有一个全程空白。
所有空白测试结果应低于方法检出限。
10.2加标样
10.2.1每分析一批（20个）样品必须有一个空白加标样，组分回收率在70%～120%之间。
10.2.2每分析一批（20个）样品必须有一个样品加标样，组分回收率在70%～120%之间。
10.3平行样
每分析一批（20个）样品必须有一个平行样，平行样品相对误差在10%以内。
10.4校准标准点
10.4.1每次分析前用中间浓度的标准溶液作常规校准试验。
校准点测定值的相对误差应在10%以内，初始校准曲线方可使用。
否则要查找原因，采取措施；如果采取措施后不能找到问题根源，应重新绘制校准曲线。
10.4.2每间隔20个样品或1个批次（此批次小于20个样品）必须用标准溶液标准，以便重新校正保留时间及窗口。
10、方法出处
《水质微囊藻毒素的测定高效液相色谱法》（GB/T 20466—
2006）。
微囊藻毒素的荧光定量 PCR检测法
微囊藻毒素的荧光定量 PCR检测法摘要：荧光定量 PCR检测方法具有灵敏度高、精确度高、检测范围宽、重复性好优势，本文就其方法对水体中的微囊藻进行检测。
关键词：荧光定量PCR；微囊藻毒素；检测随着我国工农业的迅猛发展以及城市化进程的加快，生活污水、工业废水中污染物的排放量日益增加，环境污染越来越严重，造成水体富营养化及污染日益严重。
水中过量的氮、磷等营养性物质，使水中蓝藻等藻类过渡繁殖，蓝藻水华暴发频繁。
藻类水华爆发严重威胁城市水源水安全。
因此，及时监测城市源水蓝藻发生情况，对保证城市供水安全具有重要意义。
蓝藻监测，传统的方法主要通过显微镜镜检法，对水体中的藻细胞计数及分类，后来又有通过藻类的16S rDNA 序列分析进行藻种分类，然而这些方法不能区分产毒微囊藻及非产毒微囊藻，并在蓝藻暴发之前对其进行准确预测。
实时荧光定量PCR（Real- time fluorescence quantitative PCR，qPCR）方法是一种特异性强、敏感性高、准确性好的分子检测方法，已被用于产毒微囊藻的监测。
微囊藻毒素由一些藻毒素合成酶基因簇控制，该基因簇由 mcyA～mcyJ等10个基因构成。
通过检测微囊藻毒素的产毒基因 mcyA mcyBmcyD 可以用于监测水体中的产毒微囊藻细胞。
mcyE 基因可以用于设计种特异性引物，用于监测水体中的产生微囊藻毒素的不同产毒藻种。
Ouahid 等利用 mcyE 等藻毒素合成酶基因监测水体中的产毒微囊藻［5］。
Al- Tebrineh 等利用 mcyE 和 ndaF 基因设计的实时荧光定量 PCR 方法，同时监测水体中的不同微囊藻毒素产毒藻种［3］。
由于不同水域环境中水体的产毒微囊藻的种类及分布不同，本文利用荧光定量 PCR技术，对水体中的微囊藻进行检测。
1 材料与方法1.1 藻种来源和培养条件实验用藻种购买于中国科学院典型培养物保藏委员会淡水藻种库，藻种编号为鱼腥藻（Anabaena sp）FACHB-82水华束丝藻（ Aphanizomenon flos-aque）FACHB-1039铜绿微囊藻FACHB-315柱胞鱼腥藻（Ana-baena cylindrica）FACHB-170 席藻（Phormidium sp.）FACHB- 1099 水华束丝藻 FACHB- 245 颤藻（Oscillatoriasp．）FACHB- 1053，于 BG- 11 培养基中扩大培养，颤藻 FACHB-528在 SE培养基中扩大培养。
地表水中微囊藻毒素的检测分析方法
化学与生物工程 ２ ｗ ｗ． ｈ ｘ ｓ ｗ ｃ ． ｃ ｏ ｍ ０ １ ５， Ｖ ｏ ｌ ． ３ ２Ｎ ｏ ． ０ ７ ｗ ｙ ｇ
９
： ／ ｄ ｏ ｉ １ ０． ３ ９ ６ ９ ． ｉ ｓ ｓ ｎ． １ ６ ７ ２－５ ４ ２ ５． ２ ０ １ ５． ０ ７． ０ ０ ３ ｊ
地表水中微囊藻毒素的检测分析方法／ ２ ０ １ ５ 年第 ７ 期 赵起越等 ：
பைடு நூலகம்
速、 自 动、 在 线、 实 时 检 测， ＭＣ Ｌ Ｒ 的定量范围为 －
－１ ·Ｌ－１ ， 检测 限 可 达 ０． ０． ２～４． ０μ ０ ９μ ｏ － ｇ ｇ·Ｌ 。 Ｍ ［ ２ ０］ ｒ ａ ｉ ｓ等 应用间接竞争 微 免 疫 反 应 研 制 出 微 传 感 器 ，
３］ 。 世界卫生组 通自来水处理工艺难以将其有效去除 ［
露后 ， 进行抽样 、 抑制 及 引 发 等 实 验 ， 结果与酶联免疫 法相符 ， 与小白鼠动物实验完全一致 ， 该方法可能在不
１ ０］ 。此 外， 远的将来替代动物活体实验 ［ 还有使用植物 ［ ］ １ １ 。 的报道 检测水中 ＭＣ ｓ
对硝 基 苯 基 磷 酸 酶 类 底 物 ， 获取蛋白磷酸酶 Ｐ Ｐ １及 可以得到 ＭＣ Ｐ Ｐ ２ Ａ 的抑制情况 ， ｓ的浓度 。Ｒ ｉ ｖ ａ ｓ ｓ ｅ ａ ｕ 等开发了一种免疫与比色实验相结合的蛋白磷酸酶抑 制方法 ， 样品经免疫萃取后进行磷酸酶抑制检测 ， 可对
［２］ 研 ＭＣ ｓ水华毒性进行 快 速 的 在 线 监 测 。Ｃ ｏ ｖ ａ ｃ ｉ等 １ 究了 ３ 种蛋白磷酸酶被 ＭＣ 使用其中２ ｓ 抑制 的 情 况 ，
ELISA试剂盒法测定水中LR型微囊藻毒素
Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄｓ ＥＬ Ｉ Ｓ Ａ Ｋｉ ｔ ； ｗａ ｔ ｅ ｒ ； ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｃ ｙ ｓ ｔ ｉ ｎ － － ＬＲ
人类在工农 业生产及 日常生活 中向水体排人 大量含氮 、 磷的污染物 ， 加速了湖泊 的富营养化。在 富营养化的淡水水体 中， 当有适宜 的化学物理条件 时， 水体中的藻类短时间内大量繁殖并聚集 ， 这种生 态异常现象称为水华。当水华 出现时 ， 水面被厚厚
的蓝绿色湖靛所覆盖 ， 甚至在岸边 大量堆积。藻体
在死亡分解过程 中， 会大量消耗水 中的溶解 氧使鱼 类窒息死亡 ， 尤其是藻类能释放生物毒素——藻毒 素 １ － ２ ］ ０淡水中蓝绿藻属分泌产生的蓝藻毒素 ， 是目
前 已经 发 现 的 污染 范 围 最广 、 研 究 最 多 的一类 藻毒
第２ ２ 卷， 第１ 期
２ ０ １ ３年 １ 月
化学 分析 计量
ＣＨ Ｅ ＭＩ Ｃ ＡＩ ＡＮＡＬ Ｙ Ｓ Ｉ Ｓ ＡＮ Ｄ ＭＥＴ Ｅ Ｒ ＡＧ ｒ Ｅ
Ｖ ｏ １ ． ２ ２ ， Ｎ ｏ ． １
Ｊ ａ ｎ ． ２ ０ １ ３
０ ７
～
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ８ － ６ １ ４ ５ ． ２ ０ １ ３ ． ０ １ ． ０ ２ ９
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ Ａ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｗａ ｓ ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｅ ｄ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｃ ｙ ｓ ｔ ｉ ｎ － － Ｌ Ｒ（ ＭＣ － Ｌ Ｒ ） ｉ ｎ ｗ ａ ｔ ｅ ｒ ｂ ｙ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ（ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｅ － －
超高效液相色谱_串联质谱法测定水体中微囊藻毒素
=技术与方法>超高效液相色谱-串联质谱法测定水体中微囊藻毒素张晓梅,张竹青,黄文鹏 (吉林省环境监测中心站,吉林 长春 130011)=摘 要> 目的 建立测定水体中微囊藻毒素的超高效液相色谱-串联质谱分析方法。
方法 通过固相萃取富集净化,采用超高效液相色谱-串联质谱测定水中微囊藻毒素-LR 。
结果 该方法检出限为0104L g/L ;线性定量范围为10~1000L g/L ,平均回收率为97120%,平均相对标准偏差为4171%。
结论 本文建立的超高效液相色谱-串联质谱法为水质微囊藻毒素监测提供了一种快速、准确、灵敏的分析方法。
=关键词> 微囊藻毒素;固相萃取;超高效液相色谱-质谱1中图分类号2 R 12311 1文献标识码2 A 1文章编号2 167124199(2010)0320223203De term i na tion of M icr ocystins inW a ter by U ltr a H igh P er form an ce L i qu i d Ch ro m a togr aphy -M a ss Spectro m etry Z HA NG Xia o -mei ,ZHA NG Zhu -qing,HU A NG Wen -peng 1J ili n P rovincia l Environ m enta l m o n itoring Center Sta ti on ,Changchun J ilin 130011,China=Abstr a ct >Ob jec ti ve To establi sh a m ethod for m i c rocystins in water by u ltra-h i gh perfor m ance liqu i d chro m atog 2raphy -tandem m ass spectro m etry 1M e thods U ltra h i gh pe rf or m ance li qu i d chro ma to graphy-m ass spectro m e try co m bi 2n i ng with solid phase extracti on has been emp l oyed to enhance the accuracy in the deter m i natio n of m i c rocystins ,such as m icrocysti n-LR 1R esults The de tecti on li m its was 0104L g/L ,t he li near range was 10-1000L g /L ,average recovery rate was 97120%,average RS D was 4171%1C onc l u sion The resu lts sho w that the rapid ,accurate and sensiti ve me t hod is su itab l e for ana l yzing and mon itoring m i crocysti ns i n wate r 1=K ey word s > M icrocysti ns ;Soli d phase extractio n ;U ltra h i gh perfor m ance liqu i d chro m atography-m ass spectro m 2etry作者简介:张晓梅(1963-),女,吉林长春人,本科,高级工程师,研究方向:环境监测。
高效液相色谱法检测水体中微囊藻毒素
, 流动相 : V ( 0 . 1 % TFA ) V ( 甲醇 ) =
1 引 言
随着工农业的迅速发展以及污水排放量的增加, 水体富养化日益严重, 频繁暴发蓝藻水华, 微囊藻毒 素是在蓝藻水华污染中出现频率最高、 产量最大、 造成危害最严重的藻毒素。最常见的有微囊藻毒素-RR (M icrocystin s -RR, MC -RR)和微囊藻毒素 -LR( M icrocystins-LR, MC-LR )。 MCs 具有明显的肝毒性, 会导致 肝癌的发生。 目前 , 检测水体中 MCs的常用方法有 H PLC-UV 法
[ 2~ 5, 8] [ 1, 3, 5] , 4 , 6~ 8]
。其中质谱法检出限低,
测定结果准确, 但是价格昂贵。由于天然水体中 MCs的含量低 , 因此在进样检测之前需要对其进行富集, 文献中主要采用固相萃取柱 ( SPE) 和免疫亲和层析柱 ( I A C) 进行富集, 但是这些柱子成本过高, 且 不能重复使用。本研究采用 XAD-2大孔吸附树脂富集 MC s , 成本低 , 且树脂经活化后可以重复使用。 本研究以 MC-LR 和 M C -RR 为对象 , 对色谱检测条件以及水样前处理过程中使用的富集柱、 淋洗 液和洗脱液进行了选择, 建立并且优化了 XAD-2树脂富集-H PLC-UV 检测水体中的微囊藻毒素的方法。
第 5期
梁丽丽等 : 高效液相色谱法检测水体中微囊藻毒素
741
2 . 4 . 2 微囊藻毒素的富集与净化
固相萃取-超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法同时测定地表水中9种微囊藻毒素
甲基一 － 天冬氨 酸一— Ａ ｄ — 异 谷 氨 酸－ 甲 Ｄ异 Ｌ Ｒ 一 ｄ ａＤ一 Ⅳ．
基脱 氢 丙 氨 酸 ） 其 中 Ⅳ＿ 基 脱 氢 丙 氨 酸 （ 。 甲 Ⅳ＿
ｍｅｈ ｌｅ ｙ ｒＡ ａ Ｍｄ ａ 为 一 种 特 殊 的 氨 基 酸 ， ｔｙｄ ｈ ｄｏ ｌ ， ｈ ） 含有 Ｏ、 ／ 不饱 和 双键 ；一 ３氨基 一一 ９ 甲氧基一 ， ，－ 甲 ２ ６ ８三 基一０苯 基一 ，一 １一 ４ ６ 二烯 酸 （ 一ｍｉｏ９ ｍｅｈ ｘ 一 ， ，一 ３ａ ｎ 一一 ｔｏ ｙ２ ６ ８
６ Ｄ． ｕ Ｇｌ Ｃ０Ｏ Ｈ
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Ｃ ＯＯＨ
Ｄ － － ｅ Ａｓ ８Ｍ － ｐ
３
图 １ 典 型 微 囊 藻 毒 素 的 分 子 结构
Ｆ ｇ Ｍ ｏ ｅ ｕ ａ ｔ ｕ ｔ ｒ ｓ ｏ ｐ ｃ ｌｍｉ ｒ ｃ ｓ ｉ ｓ ｉ ．１ ｌ ｃ ｌｒ ｓｒ ｃ ｕ ｅ ｆｔ ｉａ ｃ ｏ ｙ ｔｎ ｙ
（ 色谱 纯 ， 国 Ｔ ｄａ公 司 ） 其他 试 剂 均 为分 析 纯 。 美 ｅｉ ，
ห้องสมุดไป่ตู้
Ａ Ｑ Ｔ ｌ ａＰ ｒ ｒ ｎ ｅＬ 超高 效液相 Ｃ ＵＩＹ Ｕ ｔ ｅｆ ｍａ ｃ Ｃ 。 ｒ ｏ Ｍ
９种 ＭＣ标准 品购 自 Ａ ｅ ｉ 司 ， 结 构 信 息 和 相 ｌｘｓ公 其
・
５ ２・
色
谱
第３ ０卷
随着 环境 污染 和 富 营 养化 程 度 加剧 ， 水 流 域 淡
康 ，９ ６年 巴西一 透析 中心 因透 析 液 遭 ＭＣ污染 最 １９
中有 害 藻类水 华尤 其 是 蓝 藻水 华 频 繁 发生 ， 已成 现
为 国 内 外 普 遍 关 注 的 环 境 问 题 … 。 微 囊 藻 毒 素
细胞和水中的微囊藻毒素的快速检测
细胞和水中的微囊藻毒素的快速检测摘要水中微囊藻毒素的污染在全球的出现以及被人们所关注，促使了一系列对它定性和定量的检测方法的发展。
然而，大多数的方法相对来说是耗时的，昂贵的，而且还需要实验室的专业知识。
完整和灵敏的重组抗体的出现已经减少了免疫试纸条发展的困难，这种试纸条可以用最少的装备和最简单的步骤在现场快速的检测微囊藻毒素和节球藻毒素。
本文主要评估已经商业化的试纸条的灵敏度和交叉反应性，并且用它们来检测了实验室培养物和自然样品中的微囊藻毒素。
结果表明：免疫试纸条用于检测10 mg/l 的微囊藻毒素时，所有要检测的八个样品都检测出毒素的浓度低于 1 mg/l 。
此外，在一系列实验室培养物和取自灌溉池塘的样品中都成功的检测出了微囊藻毒素和节球藻毒素。
1.前言微囊藻毒素是一种由许多水生类的蓝藻产生的剧毒肝毒素，在世界很多地方都有它的报道。
被这种毒素污染的水体正在增加，这个问题已经被我们察觉，我们把它归咎于湖水和水库的富营养化或者也可能由于气候的变化。
微囊藻毒素对暴露在其中的人有急性和慢性致癌作用，正是由于它这种影响使它受到广泛关注，也导致了饮用水中的MCLR的最高含量标准，以及一类工作者探测、识别和量化在自然经过加工的水中的微囊藻毒素需要必备条件的出台。
仪器分析（也就是HPLC和LC-MS）提供了高质量的资料，这些资料包括了对已知的以及潜在的新型的微囊藻毒素的定量和定性。
一般来说，这种方法要求样品有浓度的数量限制，而这个数量限制要低于WHO1m g/l的标准。
这种方法使用固相萃取，能同时达到样品浓度和样品清洁度，虽然在取样和的结果会超过48H，但是它仍然是最受亲睐的。
在广泛的生物检测和酶抑制力中，ELISA法由于其良好的选择性和灵敏度已被最广泛使用，另外几种方法现在已经商业化了数年。
相对于其他的生物实验，ELISA法可以检测和报告样本的微囊藻毒素含量总数。
虽然没有查明个别微囊藻毒素，但它达到了消除一个范围广泛的分析标样的要求，并允许简单的风险评估。
HPLC测定水中痕量微囊藻毒素
毕后用 ４ Ｌ ０ ｍ ２ ％甲醇／ 水溶液清洗小柱， 然后用 ４Ｌ ０ ｍ ９ ％甲醇／ 水溶液洗脱 ， 经氮吹仪浓缩后，
用 甲醇定 溶至 ０ ５Ｌ ．ｍ 。 １３ 定步 骤 ．测 １３１ 作条 件 ．．操 流动 相 ：Ａ 乙腈 ；Ｂ １ 一 一 ‰三 氟 乙酸 水溶 液 。
流速 ：１ ０ ｍ ／ ｉ ． Ｌ ｍ ｎ
囊藻毒素 ，避 免其对人类 产生危 害。
Ａｂ ｔ ａ ｔ ｓｒ ｃ ：Ｍ ｉ ｒ ｃ ｓｉ ｈ ｔ ａｇ ｅ ｐ ｏ ｕ ｅ ｃ ｎ ｐ ａ ｅ ａ ｐ ｅ ｕ ｏ ｉ ｅ ａ ｃ ｒ Ｍ ｏ ｉ ｒ ｇ ｔ ｅ ｃ ｏ ｙ ｔ ｔ ａ ｌ ａ ｒ ｄ ｃ ａ ｌ ｃ ｒ ｍｉ ｍ ｎ ｌ ｒ ｃ ｅ ． ｎ ｖ ｎ ｎｔ ｉ ｏ ｎ ｈ ｗａｅ ｐ ｌ Ｌ Ｃ ｅ ｔ ｄａ ｃ ｒ ｔ ｎ ｉ ｒ ｃ ｓ ｎ ａ ｏ ｄｉ ｎ ｓ ． ｔ ｒ ｐ ｙ ＨＰ Ｃ ａ ｆ ｅ ｌ ａ ｃ ｕ ａ ｌ ｆ ｄ Ｍ ｃ ｏ ｙ ｔ ，ｖ ｉ ｌ ｅ ｓ ａ ｎ ｌ ｙｎ ｙｉ ｉ ｌ
失活，不挥发，抗 ｐ Ｈ变化，溶，从而帮助解除对细胞增值 的正常的制动作用，促进肿瘤的发育 。 微囊
藻毒 素虽 然主 要存 在于 细胞 中，但研 究表 明藻 细胞 死亡 解体 后 ，不断 有毒 素释 放到 水体 ，对 人类 的饮 用水 源 造 成危 害 ， 已证 明某 些 地 区 的肝癌 高发 率与 饮 用水 源 中 的水 华大 量 发 生有 关 。 因此 对 微囊 藻毒 素 的检测 已势 在必 行 。 ¨ 微 囊 藻毒 素有 不 同的脂 多糖 和极 性 ，毒性 也不 同 ，ＭＣＬ 是 最 早被 阐 明化学 结构 的藻 —Ｒ
标准 曲线的制备： 取标准样 品使用液 ， 以相同浓度下不 同体积进样的方式编排序列进样 。
高效液相色谱-电喷雾电离质谱法测定地表水中微囊藻毒素
ｓｏ ｅ ａ ｍ ｂ ｅｓｌｔ ｎ ［ （ ｅｈｎ １ ： （ ａｅ）＝６ ：０ ｈ ｗ ｄｔ ｔ ｏ ｉ ｏｕｉ ｈ ｌ ｏ Ｖ ｍ ｔａ ｏ） Ｖ ｗ ｔ ｒ ０ ４ ］ｗ ｉ ｏ ｔ ｎ ｄ０ １ ｍ ｔａｏｃａｉ ，ｓｌ ． ｈｃ ｃ ｎ ｉｅ ． ％ ｅｈｎ ｉ ｃ ｈ ａ ｄ ｅｅ ｃ ｔ ｅｑ ａ ｔｙｉ （ ／ ｉ ｕ ｎｉ ｎ ｍ ｚ＝９ ６ ３） Ｇ ｏ ｉｅｒｙ ｏ ｔｅ ｍ ｔｏ ａ ｏ ｔ ｎｄ ｉ ｒ ｇ ｒｍ ０ １ ０ ｍｇ Ｌ ｔ ｖ ｔ ｏ ９ ． ． ｏｄ ｌ ａｉ ｆ ｈ ｅ ｄ ｗ ｓ ｂ ｉｅ ｎ ａ ｅｆ ． ／ ｏ ｎ ｔ ｈ ａ ｎ ｏ ０
Ｍ Ｃ中研究 最多且毒 性较 大 的有 ＭＣ—Ｌ Ｍ Ｒ、 Ｃ—Ｒ Ｒ
和 ＭＣ— Ｒ， Ｙ 世界 卫 生 组 织 （ ＷＨＯ） 许 多发 达 国 和
１ 试 验 １ １ 主 要 仪 器 与 试 剂 ．
Ａ ｉ ｎ １ ０型 高效液 相色谱 一单 四级质 谱 联 ｇｌ ｔ ３ ｅ ６
用仪 ， 国 Ａ ｉ ｎ 公 司 ； 美 ｇｅｔ ｌ 手动 固相萃 取仪 ， 国 ｓ － 美 ｕ
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微囊藻毒素的检测方法及其展望
微囊藻毒素的检测方法及其展望内陆水体富营养化的加剧引起了藻类大量繁殖，形成日趋严重的水华污染。
水华污染是淡水水体中危害最严重的因素之一，所产生的微囊藻毒素（Microcystins，MC)毒性较大,分布广泛,具有稳定的化学结构和生物活性，是目前发现的最强的肝脏肿瘤促进剂之一。
常规饮用水处理技术并不能有效地脱除水体中的微囊藻毒素，微囊藻毒素引起的野生动物、家禽和家畜等中毒或死亡的事件已有许多报道,并通过生态系统、食物链对人类造成潜在的威胁。
由于MC—LR在微囊藻毒素中的毒性最大，并证实其有促肿瘤作用，所以目前关于饮用水中藻毒素的限值都是以MC—LR为代表的。
上世纪九十年代世界卫生组织（WHO）在对饮用水质量基准的补充文件中规定微囊藻毒素—LR（游离的和与细胞结合的）的基准值为0.001mg/L，我国在2006年修订并实施的《国家生活饮用水卫生标准》中已将MCYST-LR列为非常规监测项目，确定执行标准为0.001mg/L。
水体中藻毒素污染已成为一个全球性的环境问题而日益受到人们的关注。
1微囊藻毒素的特点藻细胞破裂后会释放出多种藻毒素。
一般认为它是由肽合成酶复合体合成的生物活性小肽,具有环状结构及其氨基酸的特殊结构.影响微囊藻毒素合成的环境因子较多，主要的有光照、温度、pH值和营养元素等。
有研究结果表明藻毒素是初级代谢产物，其主要作用是通过鳌合使进入藻体内的重金属离子减轻毒性和抑制其它水生植物并促进其本身的生长。
不同藻毒素的功能还有待深入研究。
2检测方法国内在这方面的研究则相对集中在对MC的去除方法上，在检测技术方面目前常用的检测方法主要有生物毒理检测法、化学分析法和生化分析法。
2.1生物毒理检测法：生物毒理检测法包括动物毒性法、细胞毒性法。
动物毒性法是将纯化的微囊藻毒素或水华蓝藻中提取的藻毒素通过动物口服或注射来间接评价藻毒素的毒性的一种方法。
根据动物的生理病变及半致死剂量(LD50）可初步确定藻毒素的毒性,这也是毒理评价的常用方法。