BPB直接法测试抗菌实验
抗菌测试检测标准
抗菌测试检测标准
抗菌测试是评价物质抑制或杀灭细菌或其他微生物能力的方法。
下面是常见的抗菌测试方法和相关的标准：
1. 纸片扩散法（Disk diffusion method）：根据CLSI（Clinical and Laboratory Standards Institute）标准进行抗菌活性测试。
该
标准包括了对不同细菌株和药物的测试方法和结果解读标准。
2. 最小抑菌浓度法（Minimum Inhibitory Concentration, MIC）：根据CLSI或欧洲常用测试方法（EUCAST，European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing）进行细菌的
药敏性测试。
该测试可以确定药物对细菌的最低有效抑制浓度。
3. K-B法（Kirby-Bauer method）：也是一种常用的纸片扩散法，测定细菌对抗生素的药敏感性。
除了上述各种抗菌测试方法外，还有许多其他的标准和指南可供参考，例如：
- 美国药典（USP，United States Pharmacopeia）中的相关方法
规范。
- 欧洲抗菌药物开发委员会（EUCAST）的药敏性测试指南。
- 中国药典（ChP，Chinese Pharmacopoeia）中的抗菌药物相关标准。
这些标准和指南提供了在实验室中进行抗菌测试的具体步骤和结果的解释。
根据不同的应用领域和目的，选择合适的标准进行抗菌测试非常重要。
实验五 琼脂孔洞法测定抗菌剂的抑菌效果
实验五应用孔洞法测定抗菌剂的抑菌效果一、目的要求：观察抗菌剂抗菌的作用效果，熟练掌握琼脂孔洞法体外测定抗菌物质的抗菌活性。
二、原理：抗菌物质从孔洞中向琼脂培养基扩散渗透，通过对试验菌的抑杀作用而影响细菌生长繁殖，使菌落形成抑菌圈，依抑菌圈的大小确定抑菌物质抗菌能力的强弱。
三、材料1. 菌种：大肠杆菌菌，用营养肉汤培养16~18 h得到的菌液。
2. 药品：氨苄青霉素，肉汤培养基。
3. 器材：生化培养箱、高压蒸汽灭菌锅、水浴锅、灭菌肉汤琼脂培养基、酒精灯、平皿、吸管、打孔器（内径6-8 mm）、镊子、记号笔、尺子（游标卡尺）等。
四、实验步骤1.按照实验一（培养基的配制）的方法步骤配制好肉汤培养基，并在121℃，灭菌20 min后，放在60 ℃水浴锅中保温，注意温度恒定，不要让培养基凝固。
2.将已经培养好的菌制成一定浓度（106cfu/mL）的悬浮液，用移液管移取1 mL该菌悬液至灭过菌的（121℃，20 min）培养皿中，倒入15 mL已灭菌的培养基（温度约45℃，用手摸瓶壁不感觉烫手即可），轻轻转动培养皿，使培养基与菌液混匀，静置凝成平板。
3.将用于试验的防腐剂（抑菌物质）配制成3个所需的浓度（见表1），用打孔器在平板上按顺时针均匀打4个孔，用无菌的镊子将孔内的培养基取出，按顺时针的顺序依次缓慢地滴加0.2 mL对照液、不同浓度的抑菌剂到孔洞内。
4.按上述方法，每个浓度做3个重复。
5.在37 ℃下培养24 h，用直尺或游标卡尺测量抑菌圈的大小。
五、注意事项1.应在无菌条件下操作，试验完毕后及时灭菌处理。
2.注意滴加无菌水和氨苄青霉素的体积要准确，避免误滴到孔洞以外的地方。
六、实验结果表1 琼脂孔洞法测定抗菌剂的抑菌效果思考题：如何判定防腐剂或抑菌物质的抑菌效果，说明其食品应用的指导意义。
菌株药物浓度（µg/mL ） 抑菌圈直径（mm ） 抑菌圈平均数大肠杆菌氨苄青霉素5050 50100100 100 300300 300。
粉末抗菌测试方法
粉末抗菌测试方法
粉末抗菌测试方法通常包括以下步骤：
1. 准备样品：将粉末抗菌材料制成一定大小的样品，如片状、颗粒状等。
2. 制备菌液：选择合适的菌种，制备一定浓度的菌液，可以使用液体培养基或固体培养基。
3. 试验设置：将样品放入试验容器中，加入适量的菌液，密封容器并轻轻摇动以混合样品和菌液。
4. 培养：将试验容器置于恒温培养箱中，在适宜的温度下培养一定时间，使粉末抗菌材料与菌液充分接触和作用。
5. 观察结果：培养结束后，观察样品的抗菌效果，可以通过透明度、颜色变化、抑菌圈等方法进行评估。
6. 数据处理：记录试验数据，如抑菌圈直径、菌落数等，并进行统计分析，得出抗菌性能的评价结果。
需要注意的是，具体的测试方法可能会因不同的抗菌材料和用途而有所差异。
因此，在进行粉末抗菌测试时，应遵循相关标准或规范，确保测试结果的准确性和可靠性。
抗菌药物敏感性试验药敏试验
稀释法
定量测定抗菌药物活性 抗菌药物与肉汤或琼脂培养基混合稀释后
种入试验细菌，孵育过夜。 以能抑制细菌生长的最低浓度为最低抑菌
浓度（MIC） 将MIC与机体血清或体液中可获得药物浓度
相比较来确定恰当的临床疗效
MIC的对数与抑菌环直径关系 ——近似线性负相关
CLSI药物选择原则
A组 常规和首选药物，其结果应常规报告 B组 首选试验选择性报告。包含一些临床
报告方式
常规报告 敏感
菌株能被使用推荐剂量在感染部位达 到的抗菌药物浓度所抑制
中介
被测菌株对该药物的MIC接近于血液、组 织中通常可达到的浓度而治疗反应率可能 低于敏感株。意味着可通过提高剂量或在 药物被生理浓集的部位发挥临床效力。
耐药
被测菌不能被该抗菌药物的常用剂量在组 织或血液内达到的浓度所抑制
磺胺异恶唑
所有菌属
所有磺胺类
萘啶酸（敏感） 肠杆菌科
头孢噻吩/头孢 肠杆菌科 唑啉（敏感）
所有喹诺酮类敏感 所有头孢菌素敏感
万古霉素 氨苄西林
革兰阳性杆菌 肠球菌属
替考拉宁 青霉素
B组药物
细菌对A组同类药物耐药，可选择性报告 报告指征
特定的标本来源 多种细菌感染 多部位感染 对A组药过敏、耐受或无效 以流行病学调查为目的向感染控制部门报告
生长法
挑选琼脂平板上3~5个形态特征一致的 菌落，用接种环接触每个菌落顶部
转移至4~5mL 适宜的液体培养基中 （如胰酶消化大豆胨肉汤）
置35℃孵育2-6 h 用无菌生理盐水或肉汤校正，使其浊度至
0.5号麦氏管
直接调制菌悬液法 生长法的简便替代法
从孵育16-24h 的非选择性琼脂培养基 上用接种环挑取单个新鲜菌落，悬浮 于生理盐水或肉汤中震荡混匀
纤维的抗菌活性测试方法研究
纤维的抗菌活性测试方法研究在现代生活中，纤维材料的应用无处不在，从我们日常穿着的衣物到医疗领域的敷料，从家居用品到工业材料。
随着人们对健康和卫生的关注度不断提高，具有抗菌性能的纤维材料越来越受到青睐。
然而，要确定这些纤维的抗菌活性是否真正有效，就需要科学准确的测试方法。
本文将深入探讨纤维抗菌活性的各种测试方法。
一、抗菌纤维的重要性抗菌纤维是指能够抑制或杀灭细菌、真菌、病毒等微生物的纤维材料。
在医疗领域，抗菌纤维可以减少患者感染的风险，加速伤口愈合；在日常生活中，抗菌衣物和床上用品可以提供更清洁、健康的环境，预防疾病传播。
因此，准确评估纤维的抗菌活性对于保障产品质量和消费者健康至关重要。
二、常见的纤维抗菌活性测试方法1、琼脂平板扩散法这是一种较为简单直观的定性测试方法。
将含有细菌的琼脂平板均匀打孔，然后将待测试的纤维样品放入孔中。
经过一定时间的培养，如果纤维周围出现明显的抑菌圈，说明纤维具有抗菌活性，抑菌圈的大小可以初步反映抗菌能力的强弱。
但这种方法只能定性判断是否有抗菌效果，无法定量测定抗菌活性的具体数值。
2、振荡烧瓶法该方法将一定量的细菌悬液和纤维样品放入烧瓶中，在一定条件下振荡培养。
通过定期取样，测定培养前后细菌悬液中活菌的数量，计算细菌减少率来评价纤维的抗菌活性。
振荡烧瓶法能够较为准确地定量测定抗菌效果，但由于是在液体环境中进行，可能与实际使用条件存在一定差异。
3、吸收法吸收法是将纤维样品浸泡在含有细菌的溶液中，一定时间后测定溶液中剩余的活菌数。
与振荡烧瓶法类似，通过计算细菌减少率来评估抗菌活性。
这种方法更接近纤维在实际使用中与细菌接触的方式，但操作相对复杂，需要严格控制实验条件。
4、贴膜法贴膜法是将含有细菌的琼脂平板表面覆盖一层纤维样品，经过培养后观察细菌的生长情况。
这种方法可以直观地观察纤维对细菌的抑制作用，但同样只能进行定性或半定量的分析。
5、织物抗菌性能测试法对于制成织物的纤维产品，可以采用织物抗菌性能测试法。
QBT25912003抗菌塑料的抗菌性能试验方法
QB/T2591-2003抗菌塑料的抗菌性能试验方法本标准规定了抗菌塑料的抗菌性能试验方法和对抗菌效果的评价。
本标准的抗菌性能要求和试验方法对应于日本国家工业标准JIS Z 2801—2000《抗菌加工制品——抗菌性试验方法和抗菌效果》（英文版），及美国材料与试验协会标准ASTM G 21—1996《合成高分子材料耐真菌性的测定》（英文版）。
本标准与JIS Z 2801—2000和ASTM G21—1996的一致性程度为非等效。
本标准的附录A和附录B为规范性附录。
本标准由中国轻工业联合会提出。
本标准由全国塑料制品标准化技术委员会归口。
本标准主要起草人：董晓旭、季君晖、李毕忠、颜乃泓、王友斌、陶志清、陈仪本。
本标准为首次发布。
引言抗菌塑料是一种新型的功能塑料，随着人们对生活质量要求的提高，其应用日益广泛。
为保证国内抗菌塑料制品的质量，为抗菌塑料的评价提供统一的技术依据，特制定本行业标准。
本标准主要提供抗菌塑料的试验方法和抗菌效果评价。
对于抗菌塑料的其它重要性能，如产品的理化性能和安全性可参考其他相关标准，在本标准中不作明确规定。
而抗菌效果的长效性问题比较复杂，需要进一步研究，本标准暂不涉及。
抗菌塑料——抗菌性能试验方法和抗菌效果1 范围本标准界定了抑菌、杀菌、抗菌和抗菌塑料的术语。
本标准规定了抗菌塑料抗菌性能的术语和定义、产品分类、抗菌性能要求和试验方法。
本标准适用于具有抑制/杀死细菌和（或）抑制/杀死霉菌作用的抗菌塑料，不适用于软质抗菌泡沫塑料和添加光触媒类抗菌剂的抗菌塑料。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB 4789.2 食品卫生微生物学检验菌落总数测定3 术语和定义本标准采用以下术语和定义。
抗菌和抑菌效果评价方法
抗菌和抑菌效果评价方法引言：随着抗生素的广泛应用和细菌耐药性的不断增强，对抗菌和抑菌效果评价方法的研究变得越来越重要。
本文将介绍几种常用的抗菌和抑菌效果评价方法，以期为相关研究提供参考。
一、最小抑菌浓度（MIC）最小抑菌浓度是指抑制细菌生长所需的最低药物浓度。
常用的MIC 测定方法有两种：管法和板法。
管法采用不同浓度的抗生素溶液与细菌进行反应，观察细菌生长情况以确定最小抑菌浓度。
板法则是将抗生素涂于琼脂培养基上，再将细菌接种于上面，通过观察细菌生长情况来确定最小抑菌浓度。
这两种方法都具有操作简单、结果可靠的特点，被广泛应用于抗菌药物的研究和临床应用。
二、抗菌圈直径法抗菌圈直径法是通过测量药物在琼脂培养基上抑制细菌生长所形成的抗菌圈直径来评价抗菌效果的方法。
该方法适用于各种抗菌药物的评价，操作简单、结果直观，广泛应用于实验室和临床。
通过测量抗菌圈直径，可以判断药物对细菌的抑制程度，进而评估其抗菌效果。
三、抑菌率法抑菌率法是通过将不同浓度的抗生素溶液与细菌进行反应，然后观察细菌生长情况，计算抑菌率来评价抑菌效果的方法。
抑菌率是指抑制细菌生长的百分比，通常使用百分比作为评价指标。
抑菌率法可以较直观地反映药物对细菌的抑制能力，但其结果受到实验条件和操作方法的影响，需要注意标准化实验条件以确保结果的准确性。
四、细菌存活率法细菌存活率法是通过测量抗生素处理后细菌存活的比例来评价抗菌效果的方法。
常用的方法有平板计数法和浊度法。
平板计数法是将处理后的细菌溶液均匀涂布于琼脂平板上，经过一段时间后，计算细菌的存活率。
浊度法则是通过测量细菌溶液的光学密度来评估细菌存活率。
这两种方法都可以较准确地评估抗菌效果，但需要注意操作的严谨性和结果的可靠性。
五、细菌增殖曲线法细菌增殖曲线法是通过测量细菌在不同浓度抗生素处理条件下的生长曲线来评价抗菌效果的方法。
该方法可以直观地反映药物对细菌生长的抑制程度，并且可以确定最佳抑菌浓度。
化妆品中的抗菌效果评价方法研究
化妆品中的抗菌效果评价方法研究在当今社会中，人们对于健康和美容的需求越来越高。
化妆品作为人们日常护肤、美容的必备品，其安全和卫生性变得尤为重要。
在化妆品生产过程中，抗菌效果的评价是确保产品质量和安全的关键因素之一。
本文将探讨化妆品中的抗菌效果评价方法的研究。
一、化妆品抗菌效果的重要性化妆品的抗菌效果直接关系到产品的卫生安全及使用后的感染风险。
如果化妆品中存在细菌或其他微生物，不仅可能导致用户皮肤感染，还可能引发更严重的健康问题。
因此，评价化妆品的抗菌效果成为确保产品质量的必要步骤。
二、传统抗菌效果评价方法1. 全菌计数法全菌计数法是一种常见的评价化妆品抗菌效果的方法。
该方法通过将待测样品与致病菌接触，然后在一定时间内计数活菌数量。
此方法的优点是简单易行，结果直观，但不足之处在于无法评估抑菌效果的持久性和广谱性。
2. 抑菌圈直径法抑菌圈直径法是利用纸片浸渍化妆品样品，然后在含有微生物的琼脂平板上进行培养。
通过测量化妆品样品周围形成的抑菌圈直径来评估其抑菌效果。
这种方法操作简单、结果明确，但只能评价抑菌性能，无法评估杀菌效果。
三、新型抗菌效果评价方法的研究随着科学技术的不断进步，新型的抗菌效果评价方法不断涌现。
以下是几种新兴的研究方法：1. 流式细胞术流式细胞术是一种通过荧光染色标记微生物细胞，并使用流式细胞仪进行检测的方法。
该方法能够准确评估化妆品样品对微生物的抗菌能力，并提供详细的结果分析，但需要专业的设备和操作技术支持。
2. 分子生物学技术分子生物学技术在化妆品抗菌效果评价中发挥着重要作用。
通过应用PCR、实时荧光定量PCR等技术，可以检测和鉴定微生物的种类和数量，评价化妆品样品对不同微生物的抗菌效果，并分析其抗菌机制。
3. 新型试剂和检测方法随着抗菌效果评价的研究的不断深入，出现了一些新型的试剂和检测方法。
例如，利用荧光染料、酶标记试剂和基因工程技术开发的快速抗菌评价试剂盒等，能够更加准确和高效地评估化妆品的抗菌效果。
抗菌药物敏感性实验及细节耐药检测
抗菌药物敏感性实验与细节耐药性监测来源：查验医学在线2009-4-15 南网编辑2010-7-6一、需氧菌及兼性厌氧菌的药物敏感实验(一)纸片琼脂扩散法纸片琼脂扩散法又称Kirby-Bauer实验，是操作最简易、利用最普遍的抗菌药物敏感性实验。
1．实验原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。
纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。
在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关关系，即抑菌圈越大，MIC越小。
2．培育基和抗菌药物纸片(1)培育基：水解酪蛋白(Mueller-Hin-ton，MH)培育基是CLSI/NCCLS采用的兼性厌氧菌和需氧菌药敏实验标准培育基，pH值为～，对那些营养要求高的细菌如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、链球菌等需加入补充物质。
琼脂厚度为4mm。
配制琼脂平板当天利用或置塑料密封袋中4℃保留，利用前应将平板置35℃孵育箱孵育，使其表面干燥。
(2)抗菌药物纸片：选择直径为6.35mm，吸水量为20ul的专用药敏纸片用逐片加样或浸泡方式使每片含量达到规定所示。
含药纸片密封贮存2～8℃或-20℃无霜冷冻箱内保留，β-内酰胺类药敏纸片应冷冻贮存，且不超过l周。
利用前将贮存容器移至室温平衡l～2h，避免开启贮存容器时产生冷凝水。
3．细菌接种细菌接种采用直接菌落或细菌液体生长方式。
用麦氏比浊标准的菌液浓度。
校正浓度后的菌液应在15min内接种完毕。
接种步骤如下：①用无菌棉拭子蘸取菌液，在管内壁将多余菌液旋转挤去后，在琼脂表面均匀涂片接种3次，每次旋转60°，最后沿平板内缘涂抹1周；②平板置室温下干燥3～5min，用纸片分离器或无菌镊将含药纸片紧贴于琼脂表面；③置35℃孵育箱孵育16～18h后阅读结果，对甲氧西林和万古霉素药敏感实验结果应孵育24h。
《药学微生物》3-5-1 药物抗菌性的测定技术
挖沟法
可以根据沟和细菌间的抑菌距离的长短， 来判断该药物对这些细菌的抗菌能力。
图 挖沟法
打孔法：
在含菌琼脂平板上打洞（一般打6个孔， 4个小孔加不同浓度标准溶液，另外2个小孔 加血清样品，放在37℃，12-18小时，测定 其抑菌圈直径。所以说微量法适于药物血浓 度的监测。
机体本身对细菌有较强的抵抗力，一 般细菌感染动物后不易使动物致病，所以 体内抗菌实验模型建立比较困难，动物实 验感染模型一般分为全身感染和局部感染 模型。
管碟法：
与打孔法原理相同，只是把药液加入放到琼 脂板上的牛津杯中。加药量相对比较多，适合 中药的体外抗菌试验。
3．抗菌药物的联合应用 （1）棋盘稀释法 （2）琼脂扩散纸片法
纸条试验：
1．只有横条纸 片含抗菌药 2．两条纸片含 不同抗菌药
图 联合抗菌试验纸条法
1．梯度平板制备 2．加强作用 图 纸条梯度平板试验
3、中草药的抗菌作用
4、其他抗菌剂（消毒剂、 防腐剂）的作用机制
试验菌
二、药物抗菌作用试验方法 （一）药物体外抗菌试验 1、影响抗菌试验的因素控制
培养基
供试药物
对照 试验
2．药物的体外抗菌试验技术 常用的有稀释法和琼脂扩散法。
稀释法是药物系列稀释后加入菌液，观察细菌 生长与否来判断结果。常用于测定药物的最低 抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。
图 液体培养基连续稀释法
琼脂扩散法
纸片扩散法 挖沟法 平板打孔法 管碟法等
纸片扩散法:
一般药敏试验常采用滤纸片法，我们可以根 据抑菌圈的大小，来判断菌种对药物的敏感性， 是敏感，中度敏感还是耐药。选用吸水力强而且 质地均匀的滤纸，用打洞机制成6mm直径的圆 纸片，120℃干燥灭菌2小时。然后把配制好的 各种适宜浓度的抗生素溶液，每100张纸片加入 0.5ml药液，使它均匀浸润，放在无菌平皿中， 37℃，使它干燥，分装小瓶中，封口，4℃保存。