徒手切片制作技能达标表
技能训练五徒手切片技术
技能训练五
徒手切片技术及 植物各种细胞的组织结构观察，常常 都是要对临时所见到的植物进行即时 的观察，为了能很好的观察其结构特 征，又不需要太多的复杂的仪器，必 须要对它们进行做徒手切片做成临时 装片进行观察。通过本次训练着重要 解决这些问题。
器材和用具
显微镜、双面刀片、载玻片、 盖玻片、解剖器、滴瓶、药芹等。
训练内容和方法：
讲解和反复练习徒手切片技术
训练内容
基本组织细胞的观察，用芹菜叶 和叶柄做徒手切片做临时装片进行 观察，观察其薄壁组织（同时培养 动手能力） 。
训练内容
3.输导组织细胞的观察，观察 南瓜茎纵、横切永久装片（或做芹 菜叶柄纵切片）进行观察。
作业
1.试述做好徒手切片的关键技术 和注意要点。 2. 绘基本组织和厚角组织细胞 图。
徒手切片技术
植物病理徒手制片技术徒手制片的方法有整体封藏法、徒手切片法、组织透明制片法和涂抹制片法等多种。
限于时间本实验实践最为常用的整体封藏法和徒手切片法两种。
(一)整体封藏法对于生长在植物病部表面或培基上的菌丝体、分生孢子、分生孢子梗和其他孢子器官以及线虫等，可直接择取少许封藏在适当的浮载剂中，在显微镜下观察，根据材料的特点和观察的目的可采用不同的方法封藏制片。
常用方法的概括为挑、刮、拨、撕四种。
1挑：对于在植物受病部位或基质表面生长繁茂的霉状病原体(如霜霉菌)粉状病原体(如锈菌、白粉菌)以及培养基上的许多培养菌，可用尖细的解剖针等直接挑取封埋制片，挑取病原体的量，在保证选材典型的前提下，越少越好，以免互相重叠，分辨不清。
2刮：对病部病原体稀少，或用放大镜也难辩认霉层的病害标本，可采用两侧具刀的三角刮针(或可用刀片代替)刮取病原物制片。
刮的方法是，用刮针的一刃，蘸浮载剂少许，在病部顺同一个方向刮取2—3次，将刮得的病原体蘸在载玻片的浮载剂中封片镜检。
浮载剂在保证浮载质量的前提下要尽量少，否则少量的病原体在大滴的浮载剂中极易分散漂流，在显微镜下难以寻找。
3拨：对于产生在植物表皮下或半埋生于基物内的病原体孢子器官。
如子囊壳、分生孢子器、闭囊壳等，可将病原体连同寄主组织一同拨下，放入浮载剂中，用两支解剖针，一支稳定材料，另一支拨出植物组织，使病原体外露制片。
4撕：对于寄生在植物表皮细胞上的病原真菌，也可以将此有病原物的表皮撕下来制片镜检，这种方法不仅能看到病原物形态，而且可以观察病原物与寄主的解剖学关系。
用刀片割破叶背表皮再用小镊子轻轻撕下，放在浮载剂中制片镜检白粉病菌分生孢子梗、分生孢子和吸器形态。
(二)徒手切片法欲观察受病组织病变，病菌侵入和寄主体内扩展过程，以及埋生在基物内真菌子实体的形态结构等，都需将有关材料切成薄片，进行镜检，徒手切片是最常用的简便易行的方法，不需要特殊的设备，而且节省时间，切成的片子不仅可作临时观察，也可进一步制成永久性玻片标本。
徒手切片基本要求
、目的与要求1、学习并掌握临时装片的制作方法和步骤。
2、学习徒手切片技术。
3、了解细胞基本结构和厚角组织的特点。
二、材料和用品1、自备材料：解剖器（镊子、解剖针、单面刀片或双面刀片）；洋葱鳞茎、青红椒、芹菜叶柄、女贞叶片或其它植物的叶片、胡萝卜块等。
2、其它材料和用品：显微镜、盖玻片、载玻片、纱布、蒸馏水、吸水纸、10%甘油水溶液、50%甘油水溶液、纯甘油、碘—碘化钾稀溶液、培养皿、吸管。
三、实验内容1、临时装片的制作方法2、徒手切片方法四、实验方法要观察、研究植物细胞、组织和器官的微细结构，以及一些很微小的藻、菌植物等，这些用肉眼是无法看到的，必须借助于显微镜来观察，要用显微镜观察，首先必须制成各种制片，放在显微镜下才能观察。
制片的方法很多，这里着重介绍临时装片法和徒手切片的方法技术。
1、临时装片的制作方法临时装片法是用少量的新鲜植物材料，如单个细胞、薄的表皮或切成的薄片以及其它小的或扁平的材料（如丝状或叶状的藻类、菌类、蕨类的原叶体和孢子囊、纤细的苔藓植物等等），把这些材料放在载玻片的水滴中，再盖上盖玻片做成玻片标本的方法。
这种方法制成的标本，可以保持材料的生活状态和天然的色彩。
此法一般多做为临时观察使用，也可根据需要选择适宜的染料染色，制成永久制片或用某些化学试剂作组织化学反应。
临时装片的制作方法和步骤如下：（1）清洁玻片：将盖玻片和载玻片用清水洗净，再用纱布擦干，擦玻片时用左手食指和拇指夹住玻片的两边，右手食指和拇指包住纱布，同时擦到的玻片的两面，用力要均匀。
注意：由于盖玻片很薄，所以擦盖玻片时要特别小心，用力要轻，右手食指和拇指要轻轻捻动，以免把盖玻片捏破。
（2）放置材料：先将载玻片平放在桌面上，于载玻片中央滴一滴蒸馏水或稀甘油，然后用镊子镊取或吸管吸取少量要观察的材料（如洋葱鳞叶表皮或水绵……），放在载玻片中央的水滴或甘油中，再用镊子和解剖针将材料展平或分散开，勿使材料折叠或干燥。
（3）加盖玻片及其它处理：为了避免产生气泡，盖盖玻片时，应该以大拇指和食指拿着盖玻片的两个角或用镊子夹住其一端，使盖玻片的一边先与载玻片上的水滴边缘接触，而后徐徐放下另一边，当盖玻片被夹持的一边将贴近载玻片时，则可放手或抽出镊子，使其自然轻轻复盖，这样可以使盖玻片下的空气挤出，免生气泡。
手术中快速冰冻切片标本送检操作评分标准表
手术中快速冰冻切片标本送检操作评分标准姓名：科室：日期：评分：监考人：操作项目操作内容分值扣分操作目的及时送检快速冰冻切片标本，为手术治疗提供参考。
评估要点评估手术间环境，操作台清洁干燥。
5 护士准备：着装整洁规范，仪表端庄大方。
5操作准备操作用物：标本袋（大、中、小号）、专用标本袋标签、手套、笔、抹布、登记簿。
51）洗手，戴口罩。
5 2）备齐用物，备清洁干燥操作台。
103）根据标本的大小、数量选择合适的标本袋。
54）检查标本袋是否破损，标本袋清洁干燥。
55）在标本袋标签上逐项填写患者姓名、年龄、住院号、科别、床号、标本名称及日期。
106）待手术医生切除标本后，打开标本袋封口，将标本装袋并封口（每个标本袋只装一个标本）。
107）与手术医生一起核对，标本与标签上注明标本是否正确。
并做好标本登记并签名。
108）巡回护士携已装好的标本到手术室家属等候区，呼叫患者家属，请患者家属看标本。
并向患者家属做好解释。
109）呼叫送检人员立即将标本送病理科。
并与病理科人员交接签字。
510）告知手术医生标本送检时间，整理用物。
5操作步骤11）操作速度：完成时间限5分钟以内。
5综合评价A、5分；B、4分；C、3分；D、2分；E、1分；F、0分； 5注意事项1、快速冰冻切片标本不需任何处理，不可染有任何杂物及溶液，以免影响病检结果。
2、同一患者有数个标本时，标本要排序，标本袋标签上依次注明（如1、2、3等）。
并与病理检查单上的序号、标本名称一致。
3、标签上填写标本名称前应认真询问手术医生，确定标本名称，按要求填写后，再与手术医生核对标本名称。
告知手术医生标本送检时间时再与手术医生核对标本名称。
4、清醒手术患者，送标本前要询问患者是否看标本，满足患者的需求。
评分标准（1）用物缺一项或者不符合要求扣2分。
（2）仪表、着装一项不符合要求扣2 分。
（3）操作程序颠倒一处扣1分。
（4）操作程序错误或遗漏一处扣2分。
实验一 徒手切片的制作
实验分组
每个桌面坐7个人，2或3个人为一小组， 7个人为一大组。
实验报告要求
1、实验前认真预习实验内容，毋须写预习报 告，合理安排好实验时间。 2、实验完成后，根据实验内容写一份真实的 实验报告。下一次实验时以班级为单位上 交上一次的实验报告。 3、请假者，请及时上交实验报告。
选 片
用毛笔挑选透明的薄片，制临时 装片。
临时装片技术
首先将载玻片、盖玻片用纱布拭擦干净，拭擦玻 片动作要轻，手指用力要均匀，否则易拭破。在载玻 片中央，滴加一、二滴清水，然后用毛笔取培养皿中 切好的材料置于载玻片上，将盖玻片轻轻盖上，盖盖 玻片时，用镊子夹起盖玻片，使载玻片一边先放下， 接触一边水，然后再轻轻放平，以免水中产生气泡， 影响观察。如仍有气泡，可用镊子轻轻加压盖玻片， 将气泡赶出。如水分过多，可用滤纸条将水吸干，如 水分不足，可在盖玻片边沿用滴管加水少许。使材料 浸没水中，盖玻片紧贴载玻片，这样装片制成。
注意事项
1、在切片前，要不断地用水湿润材料和刀片。 2、夹持物上端要保持表面平整。
3、切片时，双手应该保持活动状态，不要使它们紧靠身
体或实验台。
4、用力不要过猛，不能用刀片挤压材料或来回切割材料。
5、动作要敏捷，材料要一次切下，不要追求切片形状的
完整。速度要快，才能切得又薄又平。
握夹持物和持刀
用左手的拇指和食指捏紧夹有叶片 的夹持物，并使其劈缝与自己本身平行， 拇指要稍低于食指，以免被刀割破。夹 持物上端要略高于手指，但勿过高，以 防切割时夹持物和刀摇动。 右手拿刀将刀片平稳地放在左手食指 上，与材料切面平行。
42.3徒手切片法制作植物临时装片
一、材料准备
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二、徒手切片
用左手大拇指、食指和中指捏住材料，拇指略低于中指，使材 料突出于手指之上，以免刀口损伤手指。右手平稳地拿住刀片，将 刀片平放在左手的食指第一指节的皮肤上，与材料切面平行，然后 以均匀的力量，自左前方向右后方拉，注意要用臂力而不是腕力。
切片时要湿润材料和刀面，使之滑润，且动作要快，一刀切下， 切忌中途停顿或前后作“拉锯”式切割。
一、材料准备
徒手切片一般运用于软硬适度的植物根、茎、叶等材料。 先准备一个盛有清水的培养皿，准备好毛笔，滴管和刀片等用 具和待切的材料。将待切的材料截成2-3cm长的小段便于手持，削 平切面。 若为质地较软而薄的材料，可将其夹在支持物中一同切片。支 持物通常为萝卜、胡萝卜、马铃薯等。先将支持物切成高3~5cm、 长、宽0.5cm的立方体小块，将其中部纵切形成一缝，然后将修整 好的材料夹在其中。
连续多切几片，转移至盛有清水的培养皿中，然后用毛笔将较 薄切片挑取至滴有清水的载玻片上，制成临时装片进行观察。
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二、徒手切片
左手拿材料，右手切片挥臂来自续切片将切片放入盛水的培养皿
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《实验八徒手切片技术》教案
《实验八徒手切片技术》教案实验九徒手切片技术一、教学目标学生学会植物组织徒手切片技术二、材料与用品显微镜、载玻片、盖玻片、刀片、镊子、滴管、0.1%碘液、实验材料及夹持物、吸水纸、擦镜纸、毛笔、培养皿三、实验原理用光学显微镜观察的样品，必须是透明的薄片，因此，首先要把观察的材料制成透明的切片后才能在显微镜下观察。
徒手切片法是指手拿刀片把新鲜材料切成薄片，制成临时装片的方法。
此法简单方便，不需设备即可保留植物活体状态。
四、教学过程1．组织教学。
各组检查实验材料与用品。
2．检查实验预习情况：（1）实验内容；（2）实验原理；（3）实验目的要求；（4）实验方法。
3．入门（示范操作）指导。
教师演示：（1）用双面刀片截取材料（芹菜叶柄），削平切面。
左手三个手指拿住材料，使材料突出于手指上面。
（安全教育）把刀刃放在经过削平的平面上，然后轻轻地压住它，以均匀的力量和平稳的动作，从刀刃的右侧，斜着向左的方向切，继续切片，一连切几个切片，然后用毛笔取下，切下的切片放在有水的培养皿中。
（2）叶片夹在莴苣茎中进行切片。
（制片、染色和显微镜的使用技术，前面几次实验已重点练习过，教师简单讲解，不再演示操作。
）4．学生练习，教师巡查指导。
讲解注意点：（1）切片时,右手平稳地拿住刀片，两手应该可以自由活动，切时两臂不要过于紧张，也不要使肘臂紧靠身体或压在桌子上，要用臂力而不要用腕力而且不要用力过大。
（2）切片时为了避免材料枯干，应使材料的切面及刀刃上保持有水，呈湿润状态。
（3）切片时，所切的材料和刀片一定要保持水平方向。
如果斜向切下材料，虽然切片很薄，但会由于细胞切面偏斜而影响观察。
（4）徒手切片时，最重要的是要切下一小片平而薄的组织，而不是要求切下一个完整的切片。
例如切一茎的横切片，不要求切下圆形的一片，而只需切下一小部分即可。
5．点评：实验中存在的主要问题及改进的方法。
6．学生练习，教师巡查指导。
7．评比：哪些组运用徒手切片技术制作的切片质量比较好。
用新鲜材料制作切片的徒手切片法(精)
用新鲜材料制作切片的徒手切片法作徒手切片不需要复杂的设备，只需要一把锋利的剃刀或一片刀片就可以进行，方法简单，而且易于保持细胞的生活状态。
徒手切片法所作的切片通常不经染色或经简易染色后，封藏于水中即可观察。
用剃刀切片，材料不能太大，一般以表面不超过3-5mm2 为宜。
切片最要紧的是平而薄，无需很完整，比如茎的横切面，无需切片整圆形，只需一角就够了。
所有切片前的准备工作，如截取材料、削平切面，都应使用解剖刀或用过的刀片，不可用剃刀，以保持剃刀的锋利。
为了成功地切片，应掌握正确的用刀方法。
一般用左手的大拇指、食指和中指三个手指捏住材料，使材料突出在指尖之上，避免切片时割伤手指；用右手平稳地拿住剃刀，把刀口放在经解剖刀削平的材料平面中间，轻轻地压住它，以均匀的动作，从剃刀刀口下方起，斜着向后拉切。
切时要用臂力而不是腕力，并且不必太用力，否则就不易切薄。
在切的过程中，决不能以剃刀直接挤压材料，或以剃刀来回拉割材料，并且要始终保持材料与剃刀在水平状态，否则会由于切面偏斜而影响观察。
切下的切片应该薄而透明，形状则不要求非常完整，可以用刀不同的部位一次作几个切片，然后用蘸水的毛笔取下切片，置于盛水的培养皿中。
有些较柔嫩的器官，例如幼叶，难以直接拿住进行切片，因而需借助一些维持物，一般用胡萝卜根或土豆块茎作为维持物，把要切的材料夹于其中，进行切片，以利于把握操作。
将切下的薄片放在载玻片上时，要先在玻片中央加一滴水，把材料放到水滴中，然后用镊子夹住盖片，将盖片的一侧先接触到载玻片中央的水滴，然后用镊子顶住盖片的另一侧，慢慢放下，使盖玻片与载玻片之间充满水，如有气泡，要掀起盖片，重新放置。
徒手制作的切片可以直接在光镜下观察，也可以经过简易的染色，以使结构看得更清楚。
常用的染料有：0.1% 亚甲基蓝、0.5-1% 中性红或1% 番红水溶液等。
染色的方法是将切片放在载玻片上后，用吸水纸吸去多余的水分，滴上一滴染料，经过1－2 分钟后，用水冲洗一下，盖上盖玻片，在显微镜下观察。