海能仪器：挥发性盐基氮(VBN)测定方法(凯氏定氮)
挥发性盐基氮（VBN）测定方法
一、原理：
利用弱碱性试剂氧化镁使试样中碱性含氮物质游离而被蒸馏出来，用硼酸吸收，再用标准酸滴定，计算出含氮量。
二、仪器与器皿：
实验室用样品粉碎机或研钵
分析天平：0.0001g
凯氏蒸馏装置：半微量水蒸汽蒸馏式或者全自动/半自动凯氏定氮仪
振荡机
锥形瓶：150ml、250mL具塞
容量瓶：100mL、1000mL
滴定管：酸式10mL
三、试剂：
1、0.lmol／L盐酸标准溶液（无水碳酸钠标定）：吸取分析纯盐酸8.3mL，用蒸馏水定容至1000mL。
2、0.01mol/L盐酸标准溶液：用0.1mol/L盐酸标准溶液稀释获得。
3、2%硼酸溶液：分析纯硼酸2g溶于100mL水配成2%溶液。
4、混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存期三个月以内。
5、1%氧化镁溶液；化学纯氧化镁1.0g溶于100mL蒸馏水振接成混悬液。
四、测定：
1、称取1～5g试样(精确到0.0010g)于250mL具塞锥形瓶中，加蒸馏水100mL，振荡摇匀30min后静置，上清液为样液。
2、取20mL2%的硼酸溶液于150mL锥形瓶中，加混合指示剂2滴，使半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入此溶液。
3、蒸馏装置的蒸汽发生器的水中应加甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，且保持此溶液为橙红色，否则补加硫酸。
4、准确移取10mL样液注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加入10mL%的氧化镁溶液，小心提起玻璃塞使流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水封好，防止漏气，蒸馏10min，使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。
5、吸收氨后的吸收液立即用0.01mol/L盐酸标准液滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点，同时进行试剂空白测定。
五、测定结果计算：
1、计算见下式：
X1=[(V1-V2)×C1×14/(M1×V’/V)]×100
式中：
X1：样品挥发性盐基氮的含量，mg/100g；
V1：滴定试样时所需盐酸标准溶液体积，mL；
V2：滴定空白时所需盐酸标准溶液体积，mL；
C1：盐酸标准溶液浓度，mol/L；
M1：试样重量，g；
V’：试样分解液蒸馏用体积，mL；
V：样液总体积，mL；
14：与1.00mL盐酸标准滴定溶液[c(HCl)=1.000mol/L]相当的氮的质量，mg。
2、重复性：
每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。
允许相对偏差为5%。
实验六、挥发性盐基氮的测定
氧化镁混悬液5mL，迅速盖塞，并用水封口，通入蒸 汽蒸馏。在冷凝管出现第一滴冷凝水开始计时，蒸馏 5min即停止，取下锥形瓶，冷却。
4、锥形瓶中吸收液用0.0100mol/L盐酸标准溶液滴定
，刚呈蓝紫色为终点，记录标准酸溶液消耗的体积（ mL）。同时作空白试验。
计算
TVBN（mg/100g）=
0.01mol/L盐酸标准溶液、0.2%甲基红乙醇溶液、 0.1%亚甲基蓝水溶液
实验原理
挥发性盐基氮与动物性食品新鲜度的关系。
被检样品滤液与弱碱性氧化镁反应后，使被检样品
中的碱性含氮物质游离，并被蒸馏出来，用吸收液 吸收（含混合指示剂），再以标准酸液滴定，求其 含量。
实验方法
1、制备样品肉浸液
（V1-V2）×Cs×14 ×100
m×5/100
式中:
V1—样品消耗的盐酸标准溶液体积，（mL） V2—空白消耗盐酸标准溶液体积，（mL） Cs—盐酸标准溶液浓度，（mol／L） m—样品质量，（g）
14—1mol/L盐酸标准溶液1mL相当于氮的毫克数
评定标准
各种鲜（冻）畜肉中挥发性盐基氮含量应≤ 15mg/100g
《鲜（冻）畜肉卫生标准GB2707—2005》
将样品剔除脂肪、筋腱和骨后 ，绞碎搅匀，称取10g置于锥形瓶中，加入100mL蒸馏 水，不时摇动，浸渍30min 后过滤，滤液放入冰箱备 用。 2、预先将盛有10mL吸收液并加入5～6滴混合指示剂 的锥形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入锥形瓶内 吸收液的液面下。
实验方法
3、吸取5mL上述样品肉浸液于蒸馏器反应室内，加1%
动物性食品卫生学实验
实 验 六 挥发性盐基氮的测定
实验目的
通过本次实验，掌握半微量凯氏定氮法检测
挥发性盐基氮的测定—测定方法
半微量定氮法相同。
• 半微量定氮法
（
半
微
预先将盛有10ml吸收液并加有5-6滴混合指示液的锥形瓶置于冷凝管下端，
量
定
并使其下端插入锥形瓶内吸收的液面下，精密吸取5ml上述样品滤液于蒸
氮
）
馏器反应室内，加5ml1%氧化镁混悬液，迅速盖塞，并加水以防漏气，通
入蒸汽，待蒸汽充满蒸馏器内时即关闭蒸汽出口管，由冷并行管出现第
（
微
量 扩
2.将扩散皿置于37℃温箱内放置2h，揭去盖，用0.01N盐酸标
散 法
准溶液或硫酸标准溶液滴定，终点呈蓝紫色。同时做试剂空
）
白试验。
• 微量滴定管的使用
（
微
先将微量滴定管清洗干净，在活塞处涂上一层薄薄的活塞
量
油脂，然后把座式微量滴定管垂直安装在木座上(夹式则用
滴
定
夹子固定在架子上)，然后从漏斗中注入溶液，扭转活塞，
使用。
接绞碎搅匀。
搅匀。
• 样品处理
（
挥
发
性
盐
基
氮
1. 将样品除去脂肪、
）
骨头及筋腱
2.切碎搅匀
3. 称取肉样10g，精确至0.l蒸馏水浸渍30min
5.浸渍液过滤
6.滤液置于冰箱中备用。
微量滴定管的使用
目录页
微量滴定管种类 微量滴定管的使用 微量滴定管使用注意事项
一滴冷凝水开始计时，蒸馏5min即停止，吸收液用0.0100N盐酸标准溶液
或0.0100N硫酸标准溶液滴定，终点呈蓝紫色。同时做试剂空白试验。
• 凯氏定氮装置的组装
半微量定氮装置 （ 凯 氏 定 氮 装 置 ）
1—电炉； 2—水蒸气发生器（2L平底烧瓶）； 3—螺旋夹； 4—小玻杯及棒状玻塞； 5—反应室； 6—反应室外层； 7—橡皮管及螺旋夹； 8—冷凝管； 9—蒸馏液接收瓶
挥发性盐基氮的测定
挥发性盐基氮的测定GB/T5009.44-2003一、适用范围本检测方法适用于动物性食品，肉、水产品等二、原理挥发性盐基氮(VBN)是指动物性食品在腐败过程中，由于细菌的作用，使蛋白质分解后产生的氨、伯胺、仲胺及叔胺等碱性含氮物质，且均有挥发性。
挥发性盐基氮在弱碱性条件下分解与水蒸气一起蒸馏出来形成NH3，便可使以上挥发性的碱性含氮物溢出，然后用硼酸吸收，用标准盐酸滴定便可计算出挥发性盐基氮的含量。
1、NH4+OH→NH3↑+H2O2、4H3BO3+ NH3→NH4HB4O7+5H2O3、NH4HB4O7+HCl+5H2O→NH4C1+4H3BO1．实验用试剂2．实验用设备试验内容精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%附录2：盐酸标准溶液的配制与标定参考标准：GB/T601-20021.盐酸标准溶液的配制按下表的规定量取盐酸，注人1000m L 水中，摇匀。
2.盐酸标准溶液的标定按下表的规定称取于270-300℃高温炉中灼烧至恒重的工作基准试剂无水碳酸钠，溶于50ml 水中，加10滴溴甲酚绿-甲基红指示液，用配制好的盐酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗红色，煮沸2 min ，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。
同时做空白试验。
3.计算盐酸标准滴定溶液的浓度[c(HCI)].数值以摩尔每升(mol/L 表示，按式(2)计算：MV V m HCl C ⨯-⨯=)21(1000)( m- 无水碳酸钠的质量的准确数值，单位为克(g); V1 -盐酸溶液的体积的数值，单位为毫升(ml);V: -空白试验盐酸溶液的体积的数值，单位为毫升(mL)M- 无水碳酸钠的摩尔质量的数值，单位为克每摩尔(g/mol)注意事项：1.灼烧温度不能超过300度，当温度超过300度时无水碳酸钠分解，可将马福炉的温度调至250，等升温稳定后再调至280，或者将马福炉事先升温至280度，待稳定后再放入无水碳酸钠2.无水碳酸钠的称量质量小于0.2g时要用十万分子之一天平称量。
海能仪器：烟草含氮化合物测定(凯氏定氮)
烟草含氮化合物测定第一节烟叶中氮化合物的特性及其测定意义1烟草中氮素形态：蛋白质氨基酸酰胺NH3硝酸盐植物碱未知氮化物2烟草氮化合物分类：1)水不溶性氮：部分蛋白质（醇溶性和脂溶性蛋白质）2)水溶性氮：除去不溶性蛋白质，剩余氮化物都是水溶性的，其中也包括了水溶性蛋白质。
蛋白质占整个含氮化合物的60％-90％，植物体中蛋白质的含氮量为15％-17.6％，平均为16％（蛋白质系数）烟草样品（干烟叶）中主要的含氮化合物是蛋白质（8%）和生物碱（1.5-3.5％），其次是游离氨基酸（0.8％）等。
3含氮化合物测定意义含氮量高的鲜烟叶，其多酚氧化酶活性也高，烘烤时易出现黑糟烟含氮化合物高的干烟叶，燃吸时，味苦，辛辣，刺激性强，杂气大。
第二节烟叶总氮测定烟叶中总氮含量高，则其它氮化物含量往往也高，蛋白质和烟碱也高，因此测定总氮的含量对了解烟叶氮化物的特征具有代表性。
一、测定方法测定主要有凯氏法和杜马法两种。
杜马法就是将烟叶燃烧，收集N2和其它氮的氧化物，所用仪器十分精密。
现在主要用的是凯氏法。
二、凯氏法定氮原理：烟草中的含氮化合物用浓硫酸消煮分解，使其中各种形态的氮素全部转化为氨，并与硫酸结合形成硫酸铵，然后加碱（NaOH）蒸馏，使硫酸铵中的NH3释放出来，用硼酸吸收，然后用标准酸（H2SO4）滴定，计算出N含量。
1、烟样消化在高温下浓硫酸是一种强氧化剂，能将有机物中的碳全部分解氧化成CO2,从而破坏了有机物的结构，样品中的含氮化合物，如蛋白质，在浓硫酸的作用下，水解为氨基酸，氨基酸脱氨产生NH3,NH3与硫酸结合成为硫酸铵留在溶液中。
2、蒸馏向消化液中加入过量的强碱NaOH，使（NH4）2SO4的NH3逸出，并用硼酸溶液吸收之。
3、滴定用标准酸滴定硼酸吸收的氨，根据标准酸的用量计算出消化液中的N量。
这种测定总氮的方法最初是由凯德尔（Kjeldahl）1884年在研究蛋白质中的N时发明的，所以叫凯氏定氮法。
海能凯氏定氮仪操作流程
海能凯氏定氮仪操作流程1.准备工作：a.打开仪器电源，并等待仪器的自检完成。
b.检查仪器的相关部件和试剂是否充足，并确保仪器处于可正常工作的状态。
c.连接好仪器的电源线、通信线和样品检测探头，并确保连接牢固。
d.确认仪器的操作手册和相关标准方法的要求，以便进行正确的操作。
2.校准仪器：a.打开仪器的校准程序，并按照操作手册的指导进行校准。
b.选择适当的校准液进行校准，根据所测定的氮的形态选择相应的校准液。
c.将校准液注入校准池中，并按照仪器要求的步骤进行校准。
通常需要进行零点校准和标定点校准。
3.准备样品：a.将需测定的水样收集到干净的容器中，并进行标记。
b.根据样品的特性，选择适当的预处理方法，如过滤、浓缩或稀释等。
c.打开仪器的样品处理程序，并按照操作手册的指导进行样品处理。
4.进行测定：a.打开仪器的测定程序，并选择相应的分析模式。
b.使用操作手册提供的方法设置仪器的参数，如温度、体积、反应时间等。
c.将处理后的样品注入分析池中，并开始测定。
d.仪器会根据设定的参数，自动进行反应和测量，完成后会自动显示测定结果。
5.数据处理：a.保存测定结果，并根据需要进行数据的导出和打印。
b.根据测定结果和相关标准进行数据的分析和解释。
c.检查仪器的测定结果是否符合标准，并对仪器进行维护和校准。
6.清洁维护：a.测定完成后，及时清洗仪器的各个部件，尤其是样品处理和分析池。
b.定期检查仪器的功能和性能，确保仪器的正常工作。
c.检查仪器的试剂和耗材情况，并及时补充和更换。
以上就是海能凯氏定氮仪的操作流程。
通过正确和规范的操作，可以确保仪器的准确性和可靠性，并获得符合要求的测定结果。
海能仪器复合肥料中的总氮含量的测定(凯氏定氮法)
海能仪器：复合肥料中的总氮含量的测定（凯氏定氮法）凯氏定氮仪具有高精度颜色传感器判断终点，智能化程序控制，可自动完成加水稀释、加酸、加碱、蒸馏、滴定、滴定杯自动排液清洗、消化管排空、结果计算和输出打印结果，全程无需人为干预，数据准确可靠等优点。
整个过程只需5min,而传统的全氮蒸馏法和半微量蒸馏法需要20min甚至更长的时间。
因此凯氏定氮仪在食品、化工、农牧业、医药卫生等领域的蛋白质含量测定方面有着巨大的优势和应用前景。
消化技术是制约全自动凯氏定氮仪发展的一个瓶颈技术。
由于在复合肥料中含有硝态氮、铵态氮、有机态氮、尿素态氮、氰氨态氮等多种形态的氮，所以复合肥料中总氮的消化过程相对于单一形态氮较复杂，有必要总结出一套适合全自动凯式定氮仪并且易操作、准确、快速的消化方法。
本研究结合现行化肥定氮国标方法和其他消化手册，改进了消化方法，一定程度上克服了全自动凯氏定氮仪的瓶颈，使得利用全自动凯式定氮仪测定复合肥料中的总氮含量更加快速、准确、易操作。
1材料与方法1.1消化原理将复合肥料中的硝酸盐在催化剂定氮合金的作用下加入浓盐酸还原成铵盐，用浓硫酸进行消化，将有机态氮或尿素态氮和氰氨态氮转化为硫酸铵。
1.2试剂试剂均为二次蒸馏水；定氮合金（Cu、Al和Zn的含量分别为50%、45%和5%）及其他标定和使用的试剂同GB/T8572。
1.3仪器全自动凯氏定氮仪；消化系统。
1.4实验方法称取复合肥料样品0.1g-0.2g于消化管中，加入15ml蒸馏水摇动使试样溶解，再加入1.0g定氮合金，7ml浓盐酸，置于石墨消解仪上，加热至150℃左右，反应20min，取下蒸馏管于消化管架上冷却到室温。
再加入10ml浓硫酸，把消化管置于石墨消解仪上缓慢升温至420℃消化，待蒸馏管中澄清透亮并且有小股硫酸白烟冒起，后取下消化管和消化管架于通风橱内冷却至室温。
再加10-20ml 蒸馏水于蒸馏管中于100℃继续消化，待蒸馏管中溶液呈明亮透明蓝色溶液时取下蒸馏管冷却至室温，上全自动凯氏定氮仪进行蒸馏。
海能凯氏定氮仪操作流程
海能凯氏定氮仪操作流程1.准备工作：a.将仪器放置在安全、平稳的工作台上，并连接电源。
b.检查氮气供应管、水源、废液收集装置等设备的连接情况，并确保正常运作。
c.打开电源开关，并调整仪器的设置温度和流速等参数。
2.样品准备：a.取出待测样品，并根据需要进行处理。
比如，对固体样品进行干燥和研磨，对液体样品进行过滤。
b. 根据样品中氮的预估含量，确定每个样品的适当量。
通常，每个样品中氮含量不宜超过10mg。
3.样品处理：a.将样品放入预先称好的莫尔熔融管中。
b.将封闭的熔融管与莫尔熔融装置连接，并将样品送入炉中。
c.根据仪器的说明书，设定合适的温度和时间来进行样品的燃烧。
4.测定过程：a.确认样品已经完全燃烧并释放出氮气。
b.将释放的氮气通过吸附柱/吸附管，使其与硷液中的溴酸反应生成氯胺，同时收集释放出的氯胺气体。
c.将收集到的氯胺气体与硷液中的短程指示剂反应，观察其颜色变化。
d.使用分光光度计或比色计测定溶液的吸光度或颜色强度。
5.计算结果：a.根据生成氯胺的浓度和标准曲线，计算出样品中的氮含量。
b.针对同一样品的重复测定结果，进行平均值的计算。
c.将测定结果进行合适的单位换算，并进行结果汇总。
6.仪器清洗：a.测定结束后，将吸附柱/吸附管、溶液槽等配件进行拆卸和清洗。
b.使用去离子水或其他适当的清洗液清洗仪器的各个部件。
c.确保所有部件彻底干燥，然后装回仪器中，以备下次使用。
7.数据记录和分析：a.将测定结果记录在实验记录簿或计算机软件中。
b.进行数据分析，比较不同样品之间的差异，或与其他相关指标进行对比和关联分析。
以上是海能凯氏定氮仪的一般操作流程，根据具体型号和使用要求可能会有一些细微差别，请在操作前仔细阅读相关的操作手册和技术要求。
同时，使用仪器期间要保持实验室的安全，遵循相关的操作规范和操作规程。
挥发性盐基氮的测定(VBN)
m——试样质量，单位为克（g）
V2=
C=
计算结果保留三们有效数字。
六、精密度：
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
检测人：审核人：日期:
五、计算结果：
试样中挥发性盐基氮的含ຫໍສະໝຸດ 按式⑴进行计算。X=式中：
X——试样中挥发性盐基氮的含量，单位为毫克每百克（mg/100g）
V1——测定用样液消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，单位为毫升（ml）
V2——试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，单位为毫升（ml）
c——盐酸或硫酸标准溶液的实际浓度，单位为摩尔每升（mol/L）
挥发性盐基氮的测定(VBN)
序号
样品名称
入库日期
试样质量（g）
消耗HCL标准溶液体积（ml）
VBN含量（mg/100g）
备注
分析步骤：
依据_________.试样处理：称试样取约10.0 g，置于锥形瓶中，加100 ml水，不时振摇，浸渍30 min后过滤,滤液帜置冰箱备用。
蒸馏滴定：将盛有50ml吸收液及5滴~6滴混合指示液的锥形瓶置于冷凝管的下端，并使其下端插入吸收液的液面下，准确吸取20 ml上述试样滤液于蒸馏器反应室内，加10 ml氧化镁混悬液(10 g/L)，迅速盖塞，并加水以防漏气，通入蒸汽，进行蒸馏，蒸馏5 min即停止，吸收液用盐酸标准滴定溶液，终点至蓝紫色。同时做试剂空白试验。
海能K9860凯氏定氮仪
海能K9860定氮仪操作步骤：1、加试剂。
分别在四个试剂瓶中加入足量的氢氧化钠、硼酸指示剂、蒸馏水和盐酸试剂2、打开自来水开关3、打开电源4、排除盐酸接管中的气泡。
按“选择”键选择“滴定”然后点确定，系统进行补液，反复进行两次。
之后选择“硼酸”键点确定，进行硼酸清洗接受杯的过程。
结束后选择“排液”，进行排液5、放入空管，空蒸一到两次，预热机器。
6、做空管试验，滴定盐酸体积重复性在0.05ml内，可用7、测定对照管消耗盐酸体积8、测定样品。
输入样品重量，点确定键9、测定结束后，用蒸馏水空蒸，清洗橡皮塞10、关闭电源，关闭水龙头注意事项：1、添加试剂。
往试剂瓶中加试剂时，一定要在关机状态下进行；试剂瓶要旋紧（左右握旋），保证密封；试剂瓶如果放置仪器内部，请将“液路”面朝下，利于试剂排放2、使用仪器时，务必先打开水龙头5、仪器在进行盐酸滴定时，不可打开观察仓。
防止外源光线进入，影响滴定3、实验结束后，若一周内不再使用，将氢氧化钠试剂瓶换成蒸馏水，清洗氢氧化钠管路，防止碱结晶，堵塞管路4、若开机时，发现黑屏，请检查保险丝是否烧毁5、长期不用，重做标定系数时，硫酸铵标准误在1%内，可用试剂的配置：1、氢氧化钠：40%（质量比）2、硼酸指示剂：分别称取甲基红和溴甲酚绿0.1、0.5克，混合，用无水乙醇定容至100毫升。
配取质量比为2%的硼酸溶液，将指示剂液和硼酸溶液以1:100比例混合即为硼酸指示剂溶液，此时液体颜色应为暗紫色。
检验：取25ml上述液体，加入100ml蒸馏水，此时溶液应变为灰蓝色，如果还是红色，则应加碱进行调节。
配好的指示剂液PH在4.5—5之间3、0.1M盐酸：量取浓盐酸9ml，加蒸馏水稀释至1000ml，摇匀，最后进行精确标定（小数点后四位）。
挥发性氨基氮(VBN)检测方法
挥发性氨基氮（VBN）检测方法1、VBN是指动物性食物由于酶和细菌的作用，在腐败过程中，蛋白质分解而产生氨以及含氮胺类物质。
此类物质具有挥发性，在碱性溶液中蒸出后．用标准酸液滴定从而计算含量。
本试验根据此原理。
在半微量检测方法的基础上改良，使检测更简易、快捷。
2、仪器设备：（1）分析天平：分度值0.0001g；（2）电炉子；（3）VBN测定设备；（4）5ml酸式滴定管；（5）电动搅拌器；（6）20ml、5ml大肚移液管；（7）150ml锥形瓶。
3、试剂溶液的配制：（1）0.1mol/L盐酸滴定液：取盐酸分析纯9ml置于1000ml容量瓶中，用蒸馏水定溶至刻度，摇匀标定；（2）1%氧化镁溶液：取氧化镁10g置于1000ml聚乙烯瓶中，用蒸馏水定溶至刻度摇匀即可；（3）2%硼酸溶液：取20g硼酸分析纯置于1000ml容器瓶中，先用少许蒸馏水加热溶解，再稀释至刻度即可。
（4）甲基红-溴甲酚绿指示剂：0.125g甲基红，乙醇25ml混合溶解；0.025g溴甲酚绿，乙醇25ml混合溶解，二者混合使用，在阴凉处保存期为3个月。
4、检测步骤：（1）试样液制备：称取样品10g左右，加入100ml蒸馏水，用电动搅拌器搅拌10分钟后，静止1小时。
（2）蒸馏：吸取5ml试样液上清液置于VBN蒸馏器中，再加入1%氧化镁溶液5ml，密封。
用20ml2%硼酸溶液吸收（150ml锥形瓶），蒸馏4分钟，空蒸1分钟，用0.1mol/L盐酸滴定液滴定，由蓝色滴至红色即可。
5、计算公式：(V1－V2) × C × 14VBN = × 100mg/100gM ×（V1/V）注：V1-------滴定试样时所需盐酸标准液的体积，ml；V2-------滴定空白时所需盐酸标准液的体积，ml；V1-------吸取试样液上清液的体积，ml（5ml）；V--------稀释试样的总体积，ml（100ml）；M-------所测试样液的总质量，g。