平板分离技术与活菌计数实验报告
实验五 微生物的分离、接种及培养法
实验五微生物的分离、接种及培养法一目的要求1.掌握倒平板的方法、划线分离法、稀释平板分离法和菌落（活菌）计数法。
2.熟练掌握微生物的接种技术，学会微生物的一般培养方法和无菌操作技术。
二实验原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
常用的分离方法有： 1) 平板划线分离法；2）稀释平板分离法。
在食品发酵工业中，通过微生物的分离、纯化，选育优良的微生物菌种，以提高产品的质量和产量；在食品卫生管理方面，需要进行微生物检测，必须将微生物单一分离出来，加以鉴别和研究。
土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。
因此土壤是微生物多样性的重要场所，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。
微生物的分离和接种是微生物学中重要的技术之一，需要严格的无菌操作，否则使得微生物实验毫无意义。
三实验材料1.菌种：葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、酵母菌、毛霉、曲霉、青霉等含菌样品。
2.培养基：肉汤蛋白胨培养基（斜面、平板）、肉汤蛋白胨液体培养基、蔡氏琼脂培养基（斜面、平板）。
3.土壤（自带）或其他物品；无菌水，无菌培养基，无菌吸管，无菌三角瓶等。
四实验内容与步骤（一）微生物的分离技术1. 平板划线分离法借助划线使混杂的微生物在平板的表面分散开，以获得单个菌落，从而达到分离的目的。
具体方法如下：倒制平板→制备含菌样品稀释液→划线→倒置适温培养→观察记录（1)倒制平板：将固体培养基熔化→冷却至 50-55℃→注入培养皿内 15ml（无菌操作）→旋匀→静置凝固→即成平板→在皿盖边贴标。
（2)含菌样液制备：样品少许（1-10g），加入盛有无菌水的试管内，摇匀，制成菌悬液即可，能直接划线的样品（如体液、黏液、污水等），可省去这操作。
（3)划线：左手持平板，接种环经灼烧灭菌后，以无菌操作取样，迅速将接种环伸入培养皿，轻轻划线（切勿把平板表面划破）。
然后将培养皿倒置放入恒温培养箱37℃，培养24-48 小时，观察平板上出现的现象，注意菌落的形状，并做记录。
微生物菌落计数实验报告
微生物菌落计数实验报告实验目的：本实验旨在通过微生物菌落计数方法，确定水样中细菌和真菌的菌落数，以评估水质的卫生安全水平。
实验原理：微生物菌落计数是一种常用的微生物计数方法，通过将待检测样品在适当培养基上培养，促使微生物菌落形成，然后用目镜进行观察计数。
细菌和真菌在不同培养基上生长的特性不同，利用这一特性可以分别计数。
瓶子计数法和平板计数法是常用的微生物菌落计数方法。
实验步骤：1. 做好消毒准备，将取样瓶开盖，取适量水样。
2. 用无菌移液管分别移取水样至含有不同培养基的培养皿中。
3. 均匀涂抹样品，覆膜，进行培养。
4. 培养后观察培养皿上的菌落形成情况，用计数板进行计数。
5. 计算出每毫升水样中的微生物菌落数。
实验结果：根据观察和计数，得出水样中细菌和真菌的菌落数分别为XXX CFU/mL和XXX CFU/mL。
实验分析：通过微生物菌落计数实验，我们可以了解水质中微生物的富集情况，评估水样的卫生安全性。
根据实验结果，可以判断水样是否存在污染，进而采取相应措施提高水质。
结论：微生物菌落计数实验是一种简单而有效的水样检测方法，可以帮助我们及时了解水质情况，保障人们的健康。
在日常生活中，我们应该重视水质安全问题，做好水质检测和管理工作。
实验注意事项：1. 操作时要保持无菌环境，避免外界微生物的污染。
2. 操作时要注意个人防护，避免实验中发生意外伤害。
3. 实验后要及时处理实验用具，保持实验室整洁。
通过微生物菌落计数实验，我们可以更深入了解水质情况，及时采取措施改善水质，保障人们的生活健康。
愿我们在未来的生活中，都能享受清洁卫生的水资源，健康快乐地生活。
平板菌落计数法水中微生物的检测
2、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应 尽快倒培养基，立即摇匀；
3、倾注平板时的培养基温度冷却至45℃左右。 4、计数时，30―300个菌落的稀释度计算每毫升
的菌数最为合适 5、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊
菌落计数方法及原则：
1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围 时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30~300之间，则视二者之比值来决定，若 其比值小于2应报告两者的平均数。若大于 或等于2则报告其中较小的菌落总数。
3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300， 则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释 倍数报告之
水中细菌总数的测定
——平板菌落计数法
一、细菌总数测定的意义
水中细菌总数往往同水中有机物污染的程度呈 正相关，它是评价水质污染程度重要指标之一
细菌总数：指水样在一定条件下培养后，1mL水样 所含菌落的总数。
我国生活饮用水标准（GB5749-85）规定，细 菌总数不得超过100个/ml
含细菌10-100个/ml的水体为极清洁
代表性：多采几个部位，液体样品需经过震摇，以 获得均匀稀释液。
2 水样的10倍稀释
第一步 稀释 水样 第二步： 接种平板
注意：稀释 度的选择
平板混合分离法： 将菌液分离样品摇匀，用无菌移液管取1 ml的
菌液移至无菌培养皿中，然后将融化，凉至45℃ 左右的培养基，在每个培养皿内各倒入约15 ml， 摇匀，凝固，制成平板。
4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之
实验七稀释平板计数法及土壤中真菌的分离纯化
4、涂平皿： 每个稀释度均需要涂布平皿，每皿取菌液0.1ml，
用玻璃刮铲涂布均匀。
5、28℃倒置培养3~7天
6、观察并描述真菌菌落特征
10
可编辑版
五、实验结果及分析
稀释平皿计数法：
稀释倍数 106
107
108
菌落数
每ml原菌样品中微生物的活细胞数（菌落形成数，CFU＝
（同一稀释度平板上菌落平均数×稀释倍数）/原菌样品体积
（ml）
11
可编辑版
描述酵母菌菌落特征： 描述霉菌菌落特征
12
可编辑版
5、37℃倒置培养2天
6、计数：
每ml原菌样品中微生物的活细胞数（菌落形成数，CFU＝
（同一稀释度平板上菌落平均数×稀释倍数）/原菌样品体积
（ml）
7
可编辑版
菌落计数规则： （一）选择平均菌落数在30~300间的平板
1、只有一个稀释度符合，以该稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告； 2、有两个稀释度符合，取决于二者比值（高稀释度的菌落数除以低稀释 度的菌落数的值）：
2、若所有稀释度的菌落平均数均小于30，则按稀释倍数最低的平均菌落
数乘以稀释倍数报告；
8
可编辑版
四、实验步骤---从土壤里分离真菌
1、熔化培养基 2、倒平皿 3、捻碎土样，将土样溶解在90ml无菌水三角瓶中 4、梯度稀释法稀释土样
10g 10-1
90ml
9
10-2
10-3
10-4
1可0-5 编辑版
实验七 稀释平板计数法及土壤中真菌的 分离纯化
1
可编辑版
一、实验目的
掌握活菌计数的基本原理及方法 掌握从样品中分离目的微生物的原理及方法
平板分离技术与活菌计数实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除平板分离技术与活菌计数实验报告篇一：2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(教案) 普通高中课程标准实验教科书——生物选修1[人教版] 课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数★课题目标（一）知识与技能利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数（二）过程与方法分析研究思路的形成过程，找出共性和差异性（三）情感、态度与价值观形成无菌不在的概念，养成讲究卫生的习惯★课题重点对土样的选取和选择培养基的配制★课题难点对分解尿素的细菌的计数★教学方法启发式教学★教学工具多媒体课件★教学过程（一）引入新课上节课我们学习了培养基的配置以及接种技术。
下面我们来学习如何进行细菌的分离，获得所需要的目的微生物。
（二）进行新课1．基础知识1．1。
1．2科学家能从热泉中把耐热细菌筛选出来是因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物，这样也适用于实验室中微生物的筛选，原理是人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、ph等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
点评：生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用。
所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。
〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是葡萄糖，提供氮源的的是尿素，琼脂的作用是凝固剂。
〖思考2〗该培养基对微生物具有（具有，不具有）选择作用。
如果具有，其选择机制是只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长。
1．3在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是此之外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。
【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。
公式：观察到的红细胞平均数∶观察到的细菌平均数＝红细胞含量∶细菌含量1．4采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。
细菌计数方法实验报告
一、实验目的1. 掌握细菌计数的基本原理和方法。
2. 了解不同细菌计数方法的优缺点。
3. 培养实验操作技能，提高实验数据处理和分析能力。
二、实验原理细菌计数是微生物学研究中的一项基本技能，常用的细菌计数方法有直接计数法、活菌计数法和间接计数法等。
本实验主要介绍平板菌落计数法（CFU法）和显微镜直接计数法。
1. 平板菌落计数法（CFU法）：将样品进行稀释，涂布在固体培养基上，培养一定时间后，根据培养皿上生长的菌落数来推算样品中的细菌数量。
2. 显微镜直接计数法：将样品进行稀释，用计数板或计数仪直接计数，根据计数室内的细菌数来推算样品中的细菌数量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大肠杆菌菌液、牛肉膏蛋白胨培养基、生理盐水、计数板、显微镜、移液器、培养箱等。
2. 实验仪器：培养皿、移液器、酒精灯、镊子、无菌操作台、培养箱、显微镜等。
四、实验步骤1. 平板菌落计数法（CFU法）：（1）将牛肉膏蛋白胨培养基倒入培养皿，制成平板。
（2）用移液器吸取适量的大肠杆菌菌液，进行一系列的倍比稀释。
（3）用无菌镊子取适量稀释液，涂布在平板上。
（4）将平板倒置放入培养箱，培养一定时间。
（5）计算平板上生长的菌落数，根据稀释倍数计算样品中的细菌数量。
2. 显微镜直接计数法：（1）将牛肉膏蛋白胨培养基倒入计数板，制成涂片。
（2）用移液器吸取适量的大肠杆菌菌液，进行一系列的倍比稀释。
（3）用移液器吸取适量稀释液，滴加在计数板的计数室上。
（4）将计数板置于显微镜下，观察计数室内的细菌数。
（5）根据计数室内的细菌数和稀释倍数计算样品中的细菌数量。
五、实验结果与分析1. 平板菌落计数法（CFU法）：（1）稀释倍数：10^-4（2）菌落数：30（3）样品中的细菌数量：30 × 10^4 = 3 × 10^52. 显微镜直接计数法：（1）稀释倍数：10^-3（2）计数室内的细菌数：200（3）样品中的细菌数量：200 × 10^3 = 2 × 10^5实验结果表明，两种细菌计数方法得到的样品中的细菌数量基本一致，说明实验结果准确可靠。
土壤中微生物的分离纯化(电子版实验报告)
微生物实验报告土壤中微生物的分离与纯化指导教师：李海花周四晚第四组实验成员: 杜玉琪 180112010009董天涵 180112010008蒋怡菲 180112010018逄颖 180112010035【摘要】利用分离纯化微生物的基本操作技术对土壤中的微生物进行分离和纯化，通过观察微生物的菌落形态特征判断菌的类型并通过平板划线进行分离纯化【关键词】土壤、微生物、菌落观察、分离纯化1.实验目的（1）通过对几种培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。
（2）掌握倒平板的方法、接种和无菌操作技术。
（3）初步观察来自土壤中的几类微生物的菌落形态特征，并能判断菌的类型。
（4）学习平板菌落计数的基本原理和方法，并掌握其基本技能。
2.实验原理（1）培养基的配制与灭菌培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴别、保存各种微生物或积累代谢产物。
一般的培养基应包含适合微生物生长的6大营养素即水分、碳源、氮源、能源、无机盐和生长因子。
不同微生物对pH要求不一样，霉菌和酵母菌的培养基的pH一般是偏酸的，而细菌和放线菌培养基的pH一般为中性或微碱性。
所以配制培养基时还要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适的范围。
已配制好的培养基必须立即灭菌，如来不及灭菌，应暂存冰箱，以防止其中微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养基酸碱度所带来不利影响。
（2）微生物的培养及鉴定接种：将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。
接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。
接种的关键是要严格的进行无菌操作。
鉴定：常见与常用的微生物中,根据它们的主要形态可分为细菌、放线菌、酵母菌和霉菌四大类。
细菌菌落光滑，易于基质脱离；放线菌菌落质地致密，菌落较小，广泛延伸；酵母菌菌落较细菌菌落大而厚；霉菌形成的菌落较稀松，多成绒毛状，絮状。
（3）平板分离与活菌计数倒平板：按稀释涂布平板法倒平板，并用记号笔标明培养基名称、土样编号和实验日期等。
实验三 平板分离技术与活菌计数
实验三平板分离技术与活菌计数实验教学课题：实验三平板分离技术与活菌计数实验教学目的：1学习从泡菜中分离微生物的方法，学习无菌操作技术。
2用稀释法分离大肠杆菌和酵母菌。
3用平板划线法分离微生物。
实验教学重点：平板划线分离方法。
实验教学难点：转角划线的轻重。
实验用品：1酵母菌。
2已灭菌的LB、YPD固体培养基各1瓶。
3无菌培养皿10套、无菌EP管10支、泡菜样品、天平、称量纸、药匙、试管架、记号笔、涂布器、1ml、10ml移液管，1000ul、200ul枪头和移液器。
4无菌水(90、带玻璃珠) 1瓶。
实验教学方法与手段：板书讲解+演示实验＋学生动手实验教学课时：4课时教学过程：一、实验方法(一)泡菜稀释分离1取泡菜：取表层以下5-10ml处的泡菜10g，泡菜汁10ml，或放在4℃冰箱中暂存。
2制备稀释液(1)制备泡菜悬液：称泡菜10g，或泡菜汁10ml，迅速倒人带玻璃珠的无菌水瓶中，振荡5-10min，使泡菜充分打散，即成为10-1的泡菜悬液。
(2)梯度稀释：用移液器吸10-1的泡菜悬液1ml，放入装有9ml无菌水的试管中，震荡，即为10-2的稀释液，如此重复，可依次制成10-3-10-8的稀释液。
注意：每一个稀释度换用一支移液管。
3混菌法测定菌落数的方法(1)LB：取原液、10-1两管稀释液各1ml，分别接入相应标号的平皿中，每个稀释度接两个平皿。
然后取冷却至50℃的MRS培养基，分别倒人以上培养皿中(装量以铺满皿底的2／3为宜)，迅速轻轻摇动平皿，使菌液与培养基充分混匀，但不沾湿平皿的边缘，待琼脂凝固即成乳酸菌平板。
倒平板时要注意无菌操作。
(2)酵母菌：先把冷却至50℃的PDA培养基倒入培养皿中，凝固后，取10-4、10-5两管稀释液各200ul，分别接入相应标号的平皿中，每个稀释险接两个平皿。
接着，用涂布棒（灭菌）把菌液涂布均匀，即为酵母菌平板。
4培养：将接种好的平板倒置，即皿盖朝下放置，于28-30℃中温培养，大肠杆菌和酵母菌均培养1-2d。
洗手前后的手指平板菌落数实验报告
洗手前后的手指平板菌落数实验报告一、引言手是我们日常生活中最常接触到外界的器官之一，而手指上的微生物也是最容易受到污染的部位。
因此，洗手对于预防疾病的传播非常重要。
本实验旨在通过比较洗手前后的手指平板菌落数，评估洗手对于减少手指上微生物数量的作用。
二、实验方法1. 实验材料准备：a. 手指采样棉签：在实验前，用无菌棉签取样器具采样器具在手指上轻轻擦拭，将手指上的微生物转移到棉签上。
b. 平板培养基：将平板培养基均匀地倒入无菌培养皿中。
c. 无菌培养皿：用无菌培养皿盛装平板培养基，以供接种使用。
d. 灭菌针：用于接种平板培养基。
e. 酒精棉球：用于消毒手指。
f. 实验室消毒液：用于消毒实验台面和培养器具。
2. 实验步骤：a. 洗手前的操作：(1) 将无菌培养皿放置在实验台上。
(2) 用无菌棉签取样器具采样器具在手指上轻轻擦拭，将手指上的微生物转移到棉签上。
(3) 将含有手指样本的棉签均匀地在平板培养基上划线，确保菌液均匀覆盖整个培养基面。
(4) 用灭菌针连续刺穿培养基，以促进菌落的生长。
(5) 用酒精棉球消毒手指。
b. 洗手后的操作：(1) 将无菌培养皿放置在实验台上。
(2) 用无菌棉签取样器具采样器具在手指上轻轻擦拭，将手指上的微生物转移到棉签上。
(3) 将含有手指样本的棉签均匀地在平板培养基上划线，确保菌液均匀覆盖整个培养基面。
(4) 用灭菌针连续刺穿培养基，以促进菌落的生长。
c. 培养和观察：(1) 将培养皿倒置放置在恒温培养箱中，以28℃恒温培养48小时。
(2) 观察培养皿上的菌落情况，计数每个培养皿中的菌落数量。
三、实验结果经过洗手前后的实验操作，我们观察到了洗手前后的手指平板菌落数，并进行了统计和比较。
1. 洗手前的菌落计数结果：在洗手前的培养皿上，我们观察到了多个菌落。
经过计数，得到菌落数量为100 CFU/mL（菌落形成单位/毫升）。
2. 洗手后的菌落计数结果：在洗手后的培养皿上，我们观察到了较少的菌落。
平板分离技术与活菌计数
实验六平板分离技术与活菌计数实验报告一．实验目的1.掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化徽生物的基本操作技术。
2．初步观察来自土壤中的三大类群微生物的菌落形态特征。
3．学习平板菌落计数的基本原理和方法,并掌握其基本技能。
二．实验原理值得指出的是从微生物群体中经分离、生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。
因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显徼镜检测个体形态特征等综合考虑。
有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定方能得到。
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
平板分离法主要有：①平板划线分离法，②稀释涂布平板法。
后者除能有效分离纯化微生物外，还可用于测定样品中活菌数量。
平板菌落计数法是将待测菌液经适当稀释，涂布在平板上；经过培养后在平板上形成肉眼可见的菌落。
统计菌落数，根据稀释倍数和取样量计算出样品中细胞密度。
由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，平板上形成的每个菌落不一定是单个细胞生长繁殖面成，有的可能来自2个或多个细胞。
因此，平板菌落计数的结果往往比样品中实际细胞数低，这就是现在使用菌落形成单位（colony-forming unit, CFU）取代以前用绝对菌落数来表示样品活菌含量的原因。
平板菌落计数法虽然操作较繁琐，结果需要培养一段时间才能获得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该方法能直接反映样品中活细胞数量，所以被广泛用于生物制品(如活菌制剂)、食品、饮料、水（包括水源水）以及多类产品等质量检测与控制的标准方法。
快速细菌自动稀释仪和自动菌落计数仪则提供快速准确的结果。
土壤是微生物生存的大本营，所含徼生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。
因此，土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，人们可以从中分离﹑纯化获得许多有价值的菌株。
本实验将采用3种不同的培养基从土壤中分离不同类型的徽生物。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
平板分离技术与活菌计数实验报告篇一：微生物学大实验实验报告微生物学大实验实验题目：土壤微生物的分离纯化与鉴定一．实验目的：1.巩固本学期所学的所有微生物实验操作技术。
2.再次强调无菌操作概念。
3.初步学习微生物鉴定纯化的方式和思路。
4.学会应用相关手册对微生物进行分类。
二．实验原理：1. 培育基的制备、消毒与灭菌：培育基是人工配制的适合微生物生长繁衍或积累代谢产物的营养基质，用以培育、分离、鉴定、保留各类微生物或积累代谢产物。
在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加上实验和研究的目的不同，所以培育基的种类很多。
可是，不同种类的培育基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。
不同微生物对pH 要求不一样，霉菌和酵母的培育基的pH 一般是偏酸性的，而细菌和放线菌的培育基的pH 一般为中性或微碱性的( 嗜碱细菌和嗜酸细菌例外) 。
所以配制培育基时，都要按照不同微生物的要求将培育基的pH 调到适合的范围。
另外，由于配制培育的各类营养物质和容器等含有各类微生物，因此，已配制好的培育基必需当即灭菌，若是来不及灭菌，应暂存冰箱内，以避免其中的微生物生长繁衍而消耗养分和改变培育的酸碱度所带来不利的影响。
2. 微生物的分离与纯化：自然界中各类微生物混杂生活在一路，要研究某种微生物的特性，首先须使该微生物处于纯培育状态。
从混杂的微生物群体中取得只含有某一株微生物的进程称为微生物的分离与纯化。
土壤是微生物生活的大本营，所含微生物无论是数量仍是种类都是及其丰硕的。
因此，土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，人们可以从中分离到很多有价值的菌株。
本实验将采用平板划线分离法。
3. 平板分离技术与活菌计数：值得指出的是从微生物群体中经分离、生长在平板上的单个菌落并非必然保证是纯培育。
因此，纯培育的肯定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征等综合考虑。
有些微生物的纯培育要通过一系列的分离与纯化进程和多种特征鉴定方能取得。
从混杂的微生物群体中取得只含有某一种或某一株微生物的进程称为微生物的分离与纯化。
平板分离法主要有：（1）平板划线分离法，（2）稀释涂布平板法。
后者除能有效分离纯化微生物外，还可用于测定样品中活菌数量。
平板菌落计数法是将待测菌液经适当稀释，涂布在平板上；通过培育后在平板上形成肉眼可见的菌落。
统计菌落数，按照稀释倍数和取样量计算出样品中细胞密度。
由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，平板上形成的每一个菌落不必然是单个细胞生长繁衍而成，有的可能来自2个或多个细胞。
因此，平板菌落计数的结果往往比样品中实际细胞数低，这就是此刻利用菌落形成单位（colony-forming unit，CFU）取代以前用绝对菌落数来表示样品活菌含量的原因。
4. 分离菌株的鉴定：微生物的分类鉴定是微生物的重要内容，一般从菌落特征、细菌特点及生理生化、分子生物学等方面进行鉴定。
各类细菌在代谢类型上表现了很大的不同。
不同的细菌分解大分子碳水化合物、蛋白质和脂肪的能力不同，所能发酵的类型和最终产物也不一样。
不同细菌对营养的要求不同也说明了它们有不同的合成能力。
所有这些都反映了它们是有不同的酶系统。
细菌的这种生化反映的多样性在自然界产生了两种结果：第一、使自然界所有的有机分子都有可能取得分解；第二、使不同细菌之间有了彼此作用和彼此依赖的基础。
另一方面，微生物生化反映是微生物分类鉴定中的重要依据之一，细菌的生化反映的多样性也被人们作为细菌的鉴定和分类方式来利用，可以辨别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。
5. 生理生化反映：微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪等不能直接利用，必需依托产生的胞外酶将大分子物质分解后，才能被微生物利用。
胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小化合物，使其能被运输至细胞内。
如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖，脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸，蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等，这些进程都可通过观察细菌菌落周围的物质转变来证明。
糖发酵实验是常常利用的辨别微生物的生化反映，在肠道细菌的鉴定上尤其重要，绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源，可是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异，有些细菌能分解某种糖产生有机酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢气、甲烷、二氧化碳等），有些细菌只产酸不产气。
IMViC是吲哚（indol）、甲基红（methyl red test）、伏-普（Voges-Prokauer test）和柠檬酸盐（citrate test）四个实验的缩写，主要用于快速辨别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水细菌学检查。
吲哚实验是用于检测吲哚的产生，某些细菌可产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。
对二甲基氨基苯甲醛遇吲哚形成玫瑰吲哚（红色）。
但并非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，因此吲哚实验可以作为一个生物化学检测的指标。
色氨酸水解反映：吲哚与对二甲基氨基苯甲醛反映：6. 实验整体思路：在肯定取样环境以后，对微生物原样进行梯度稀释，产生适合的浓度进行涂板用于微生物的计数。
染色并镜检，利用形态学方式对微生物做一粗略的定位。
按照镜检设计相关生理生化实验作进一步定位。
按照以上取得的信息肯定微生物类群并加以定位。
三．实验器材：1. 实验菌种：大肠杆菌金黄色葡萄球菌2. 培育基：牛肉膏蛋白胨培育基，马铃薯培育基，固体油脂培育基，固体淀粉培育基，葡萄糖发酵培育基试管，乳糖培育基试管（内装有倒置的德汉氏小管），蛋白胨水培育基，葡萄糖蛋白胨水培育基。
3. 溶液和试剂：50%乙醇，20%的甘油，硝酸银染色液、香柏油、二甲苯、0.01％美兰水溶液，卢戈氏碘液，甲基红指示剂，5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液，革兰氏染液，草酸铵结晶紫染液，卢戈式（Lugol）碘液，95%乙醇，番红复染液，香柏油，二甲醇等。
4. 土样：山东大学中心校区图书馆前光草坪内地表10cm土样。
5. 仪器和其他用品：普通光学显微镜，擦镜纸，酒精灯，载玻片，双层瓶，接种环，试管架，镊子，滴管，二甲苯，香柏油，蒸馏水，盖玻片，吸水纸，无菌平板，无菌试管，U型玻棒，解剖刀，无菌吸管等。
四．操作步骤：1.培育基的制备与分装。
（1）称量：按培育基配方依次准确地称取药品。
（2）熔化：在滚水浴锅中或电炉上加热熔化。
（3）调pH ：用1mol/L NaOH或1mol/L HCl调pH 至培育基所需pH。
（4）分装：将溶化的固体培育基趁热加至漏斗上，装试管时，注意管口不要沾上培育基。
液体分装装量不超过试管的1/4，固体分装装量不超过试管的1/5，分装三角瓶的量不超过三角瓶容积的一半，半固体分装装量为试管的1/3，灭菌后垂直待凝。
（5）加棉塞：培育基分装完毕后，在试管口或三角瓶口塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培育基内而造成污染，并保证有良好的通气性能，然后包扎一层牛皮纸。
试管先捆成一捆后再于棉塞外包扎牛皮纸，贴上标签，注明培育基名称、日期、组别。
2．无菌水的制备。
（1）用量筒量取90ml水于带玻璃珠三角瓶中，塞上棉塞，包扎牛皮纸。
（2）用10ml吸管取9ml水于10支试管中，塞上棉塞，包扎牛皮纸。
3．器皿的准备。
（1）培育皿的包装：每10套一包，用牛皮纸包扎。
（2）吸管的包装：首先在吸管的上端塞上一小段棉花，用长纸条包扎、打结。
（3）玻璃涂布棒的包装：方式同吸管的包装。
（4）枪尖的包装：放入枪尖盒，牛皮纸包装。
4．高压灭菌。
（1）将所要灭菌物品放入高压蒸汽灭菌锅内，按照需要设定灭菌温度和时间（一般121℃，20min灭菌，若培育基中含有葡萄糖等成份时，113 ℃，30min灭菌）。
如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。
（2）灭菌完毕，将试管培育基搁成斜面，搁置的斜面长度以不超过试管总长度的一半为宜。
培育基冷至50℃左右，倒平板。
5．微生物的分离与纯化。
（1）土壤稀释液的制备：称取10g土壤，放入灭好菌的无菌水顶用玻璃珠打坏土壤，静置30min。
取10mL土壤原液于1号试管中，从中取1mL浸液于装有9mL无菌水的试管中，充分震荡后依次操作，将7支试管按稀释倍数别离记作0，-1，-2，-3，-4，-5，-6号试管。
（2）涂布平板：别离取0度，-2度和-5度的试管中的土壤浸出液0.2ml于细菌培育基平板上，用刮刀涂布均匀。
再别离取0度和-3度稀释液0.2mL于准备好的霉菌培育基平板上，涂布均匀。
相同稀释度的浸液涂布3个平板。
（3）培育：将细菌培育基平板置于37℃恒温箱培育24h，将霉菌培育基平板置于27℃恒温箱培育3d。
（4）平板计数及菌落描述：将培育好的细菌进行平板计数（理想为每平板上不多篇二：实验十微生物稀释平板计数、划线分离实验十微生物稀释平板计数、划线分离一、目的要求1. 学习平板菌落计数的大体原理和方式。
2. 熟练掌握倒平板技术、系列稀释原理及操作方式，平板涂布及划线分离方式。
二、大体原理平板菌落计数法是按照微生物在固体培育基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁衍而成的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个单细胞。
计数时，先将待测样品作一系列稀释，再取必然量的稀释菌液接种到培育皿中，使其均匀散布于平皿中的培育基内，经培育后，由单个细胞生长繁衍形成菌落，统计菌落数量，即可换算出样品中的含菌数。
这种计数法的长处是能测出样品中的活菌数。
此法常常利用于某些成品检定（如杀虫菌剂），生物制品检定和食物、水源的污染程度的检定等。
但平板菌落计数法的手续较繁，而且测定值常受各类因素的影响。
三、器材大肠杆菌悬液，牛肉膏蛋白胨培育基，1ml无菌吸管，无菌平皿，盛有4．5 ml无菌水的试管，试管架和记号笔等。
四、操作步骤（一）稀释平板计数1．编号：取无菌平皿9套，别离用记号笔标明10、10、10各3套。
另取6支盛有4．5ml无菌水的试管，排列于试管架上，依次标明10、10、10、10、10、10。
2．稀释用1ml无菌吸管精准地吸取0．5ml大肠杆菌悬液放入10的试管中，注意吸管尖端不要碰着液面，以避免吹出时，管内液体外溢。
然后仍用此吸管将管内悬液来回吸吹三次，吸时伸入管底，吹时离开水面，使其混合均匀。
另取一支吸管自10试管吸0．5ml放入10试管中，吸吹三次，……其余依次类推。
-1-2-1-1-2-3-4-5-6-4-5-63．取样用3支1ml无菌吸管别离精准地吸取10、10、10的稀释菌液0．2ml，对号放入编好号的无菌培育皿中。
4．倒平板于上述盛有不同稀释度菌液的培育皿中，倒入溶化后冷却至45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培育基约10—15ml，置水平位置，迅速旋动混匀，待凝固后，倒置于37℃温室中培育。
5．计数培育24小时后，掏出培育皿，算出同一稀释度三个平皿上的菌落平均数，并按下列公式进行计算：每毫升中总活菌数=同一稀释度三次重复的菌落平均数×稀释倍数×5一般选择每一个平板上长有30—300个菌落的稀释度计算每毫升的菌数最为适合。