凝血因子VIII活性(FVIII：C)测定
FVIII自身抗体的自身免疫性疾病
0.8
0.4
103
122
103
80
一. FVIII抑制物定义
• 体内产生的具有灭活凝血因子VIII促凝活性（FVIII:C）的抗体 （即中和抗体）引起FVIII水平降低，包括两大类：
–同种免疫抗体（allo- antibodies）:
• 血友病（HA）患者输注FVIII制品后产生的抗FVIII抗体
• 空腹血糖、肾功能、电解质均正常；肝功能：ALT 106U/L，AST 56U/L，ALB、TBIL、DB正常；甲功七项、肿瘤三项、贫血三项 均正常；CRP 19.9mg/L，ASO、RF正常，IgA 1.2g/L，IgG 4.0g/L↓，IgM 0.24g/L↓，C3、C4正常；乙肝两对半：HBsAb、 HBeAb、HBcAb阳性；HBV-DNA荧光定量 <500IU/ml；术前免疫 三项正常；ENA抗体全套、ANCA、ACA均正常；地贫一套、 G6PD活性、Coombs test及Hams test均正常；
• 结合病史及上述检查结果，基本排除血管性血友病、结 缔组织疾病、血小板减少性紫癜、肿瘤、药物、家族遗 传等原因致凝血功能异常，考虑患者第二次妊娠产生Ⅷ 抑制物致使Ⅷ因子缺乏，
• 诊断：获得性血友病A。
治疗观察表 1
血浆 (ml/d) 凝血因Ⅷ
(U)
地塞米松(mg/d)
20/9 400 1800 10
–自身免疫抗体（Auto-antibodies ，获得性FVIII抑制物)
• 非血友病患者自发产生的抗FVIII抗体-获得性血友病
二、获得性血友病A (AH）
• 非血友病A患者体内自发性产生针对FVIII的特异性自身免疫性抗体, 中和或灭活FⅧ活性，引起FⅧ水平降低，导致临床严重，甚至威胁 生命的出血。
凝血因子抗体检测
凝血因子抗体检测凝血因子抗体检测是一种检测机体是否出现对凝血因子产生抗体的方法。
凝血因子是血液中参与凝血过程的一类蛋白质，它们在正常情况下能够协同作用，形成血凝块，并阻止血液过多流失。
而当机体出现对凝血因子产生抗体时，会造成凝血功能异常，导致出血倾向或血栓形成等疾病。
凝血因子抗体检测主要用于排除或诊断先天性或后天性凝血因子缺乏症、自身免疫系统性疾病和其他疾病引起的抗凝血因子免疫血液病。
其中，自身抗凝血因子免疫血液病是一类自身免疫性疾病，常见的有抗磷脂抗体综合征（APS）、自身抗凝血酶抗体综合征（CAC）、抗凝血酶抗体和抗磷脂抗体同时存在等。
凝血因子抗体检测一般包括两个方面：常规凝血因子抗体和磷脂抗体的检测。
常规凝血因子抗体检测可以检测循环中凝血因子特异性抗体，用于诊断先天性或后天性凝血因子缺乏症。
而磷脂抗体检测主要用于检测一些自身免疫性疾病，如APS，由于自身产生的抗体可与凝血系统相关的磷脂结合，导致凝血系统功能异常。
常规凝血因子抗体检测主要包括凝血因子八、凝血因子九、凝血因子十一、凝血因子十二、凝血因子十三等凝血因子的抗体检测。
这些抗体的检测一般采用酶联免疫吸附试验（ELISA），通过对患者血清中的抗体与特定凝血因子抗原进行结合，然后用特定的辅助试剂检测反应的产物，从而判断血液中的抗体含量。
磷脂抗体检测一般采用磷脂筛选试验和磷脂抗体定量试验。
磷脂筛选试验通常采用凝集试验、凝血试验等方法，通过观察血浆与磷脂之间的凝集程度来判断是否存在磷脂抗体。
而磷脂抗体定量试验则可以进一步确定磷脂抗体的水平。
常用的磷脂抗体定量试验有凝血抑制试验、酶联免疫吸附试验等。
凝血因子抗体检测的结果可以帮助医生判断病情、指导治疗以及评估疗效。
对于先天性或后天性凝血因子缺乏症患者来说，抗体检测可以帮助确定凝血因子缺乏的类型和程度，并制定相应的治疗方案。
对于自身免疫性凝血功能障碍患者来说，抗体检测可以帮助明确诊断，并指导治疗。
血浆凝血因子Ⅱ活性测定
血浆凝血因子Ⅱ活性测定血浆凝血因子Ⅱ活性测定介绍：血浆凝血因子Ⅱ活性测定是对血浆内的凝血因子Ⅱ，即凝血酶原进行测定，对急性肝炎和慢性肝炎有诊断指导。
血浆凝血因子Ⅱ活性测定正常值：正常值 2～4mg/mL血浆凝血因子Ⅱ活性测定临床意义：异常结果：凝血因子Ⅱ活性正常或轻度下降;慢性肝炎中度、重度和肝硬化患者，凝血因子Ⅱ活性水平明显下降，说明它的降低程度与肝细胞损害程度密切相关。
有研究认为异常凝血酶原(protein-Ⅱinducedbyvitam inKabsence，PIVKA-Ⅱ)可用于原发性肝癌的诊断，部分AFP阴性的原发性肝癌患者PIVKA-Ⅱ阳性，在临床上应联合检测AFP与PIVKA-Ⅱ。
需要检查的人群：有慢性肝炎症状的人群。
血浆凝血因子Ⅱ活性测定注意事项：不合宜人群：无检查前禁忌：检查前一天不吃过于油腻、高蛋白食物，避免大量饮酒。
血液中的酒精成分会直接影响检验结果。
体检前一天的晚八时以后，应禁食。
检查时要求：抽血时应放松心情，避免因恐惧造成血管的收缩、增加采血的困难。
血浆凝血因子Ⅱ活性测定检查过程：采用静脉采血进行检测。
静脉采血前要仔细检查针头是否安装牢固，针筒内是否有空气和水分。
所用针头应锐利、光滑、通气，针筒不漏气。
先用30g/L碘酊棉签自所选静脉穿刺处从内向外、顺时针方向消毒皮肤，待碘酊挥发后，再用75%乙醇棉签以同样方法拭去碘迹。
以左手拇指固定静脉穿刺部位下端，右手拇指和中指持注射器针筒，食指固定针头下座，使针头斜面和针筒刻度向上，沿静脉走向使针头与皮肤成30°角斜行快速刺入皮肤，然后以5°角向前穿破静脉壁进入静脉腔。
见回血后，将针头顺势探入少许，以免采血时针头滑出;但不可用力深刺，以免造成血肿，同时立即去掉压脉带。
针栓只能外抽，不能内推，以免静脉内注入空气形成气栓，造成严重后果。
取下注射器针头，将血液沿试管壁缓缓注入抗凝管中，防止溶血和泡沫产生。
血栓与止血的检测及临床意义
APTT(A)
PT(N) 内源途径缺陷
APTT(A)
PT(A) 无出血症状
共同途径缺陷
凝血因子I、II、V、X缺陷症
（遗传性、获得性）
凝血因子XII、PK、HMWK缺陷症
（遗传性、获得性）
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血友病筛选及诊断试验
筛选试验
确诊试验
PT APTT TT Fg
混合试验
纠正
凝血因子活性检测 病理性抗凝物质检测
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血管性血友病分型
❖ 1型, VWF 量部分缺乏 (75%)
❖ 2型, VWF 质异常 (25%)
90%以上漏诊
◆ 2A型,血浆中缺乏大中分子量VWF多聚物 ◆ 2B型,血浆中缺乏大分子量VWF多聚物，与血小板GPIb的 结合能力增强 ◆ 2M型,血浆中VWF多聚物分布正常，血小板黏附能力下降 ◆ 2N型,血浆中VWF多聚物分布正常，与因子VIII结合能力 明显下降
❖ 3型, VWF 完全缺乏 (《5%)
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血管性血友病实验室诊断
出血筛查
PLT ; PTT; PT; Fibrinogen or TT
VWD初步诊断
VWF:Ag; VWF:Rco; FVIII； BT
确诊和分型
➢ VWF:Rco /VWF:Ag比值 ➢ 多聚物检测 ➢ 胶原结合试验
费时 经验
➢ RIPA ➢ FVIII 结合试验
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病例1
女，25岁，月经增多伴皮肤黏膜瘀点、瘀斑10年 APTT70’‘，PT13“，Fg2.1g，BPC130×109/L FⅧ:C21%，FⅨ:C60%， FⅪ:C73%，FⅫ:C81% vWF:Ag 30% ，BT16’, vWF:Ristocf A:25% 诊断 血管性血友病 治疗 DDAVP，低温冷沉淀制剂
医学检验·检查项目：凝血因子活性测定(因子Ⅷ∶C、Ⅸ∶C)_课件模板
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ห้องสมุดไป่ตู้临床意义：
∶C或Ⅸ∶C小于2%，中型2%～5%，轻型 5%～25%，亚临床型25%～45%。因子Ⅷ∶C 降低还见于血管性血友病、DIC和抗因子 Ⅷ∶C抗体所致的获得性血发病甲;因子 Ⅸ∶C降低还见于肝脏疾病、维生素K缺乏 症、DIC和口服抗凝剂等。
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临床意义：
(1)因子Ⅷ∶C或Ⅸ∶C水平增高：见 于高凝状态和血栓性疾病。尤其是静脉血 栓形成，如深静脉血栓形成、肺栓塞、肾 病综合征、口服避孕药、妊娠高血压综合 征、恶性肿瘤以及肝功能衰竭时因子 Ⅷ∶C水平增高。 (2)因子Ⅷ∶C或Ⅸ∶C 水平降低：见于血友病甲或血友病乙，按 其降低程度分为：重型Ⅶ
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正常值： 因子Ⅷ∶C 78%～128%；因子Ⅸ∶C
68%～128%。
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相关检查： 维生素E、红细胞聚集性、血小板聚集试 验（PAgT）、血清黏度（SV）、乙醇凝胶 试验、活化部分凝血活酶时间（APTT）。
谢谢！
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相关症状： 拔牙后伤口经久不愈、弥漫性出血、血液 粘滞度增高、凝血因子功能的障碍、延髓 出血、面颊及上胸部充血。
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相关疾病：
丘疹紫癜性手套和短袜样综合征、妊娠合 并血栓性疾病、产科播散性血管内凝血、 肝硬化、小儿播散性血管内凝血、丘疹性 血管增生、皮肤骨髓纤维化。
出血性疾病的实验室检测
抑制物
• APTT参考范围 26-34s
• APTT 60s • APTT1:1 mix 40s
• APTT不被纠正 • 抑制物存在
Mixing test 结果解释
aPTT results
Example
123
A -- normal plasma
30” 30” 30”
B -- test plasma
• PT延长＞3′， APTT延长＞5′ • 患者血浆：正常人血浆 1：1或4：1 • 即刻检测，37°C孵育2h后检测 • 结果判断： ＞X+2SD 不纠正
Mixing test 结果判断
因子缺陷
• APTT参考范围 26-34s
• APTT 60s • APTT1:1mix 32s
• APTT被纠正 • 因子缺陷
• 基于 APTT凝固法 • 乏FVIII血浆倍比稀释参比血浆和待检血浆 • APTT时间与FVIII:C对数成线性关系 • 制备标准曲线
FVIII:C检测
一步法检测FVIII:C (One-Stage)
质量控制
• 标准曲线和待检标本分析前准备条件必须在相同 • 标准曲线检测FVIII:C范围尽可能宽 • 稀释倍数: 标准曲线至少3个稀释度
抑制物检测方法
• Bethesda法 • Nijmegen modification
狼疮抗凝物质检测
相关概念
aCL aPL β2GP1 LA
抗心磷脂抗体 抗磷脂抗体 Β2-糖蛋白1
ELISA法检测抗心磷脂的抗体 抗体依赖或不依赖β2GP1
IgG，IgM或IgA抗体，靶蛋白是心磷脂、 β2GP1或凝血酶原，靶蛋白与磷脂结合
One-Stage Factor VIII Bioassay
和AT意义解读
（2）正常男子与血友病甲、乙携带女子 婚配，儿子半数是患者、半数正常；女 儿半数为携带者。
（3）血友病甲、乙患者于女性携带者婚 配，儿子中半数是是患者、半数正常； 女儿半数为携带者、半数为患者。
（4）男性患者与女性患者婚配，其子女 均为患者。
尿血、便血、咳血、呕血、颅内出 血、外伤性出血等。
HEMOPHILIA
临床表现 （血友病检查适应症）
Dept. Hematology, NFYY
❖自发性出血1/3；轻度外伤、小手术、注射 后诱发
❖出生时即可出血，也可成年后发病；伴随 终身
皮肤粘膜出血 非特有症状，常呈大片瘀斑 及皮下血肿
❖肌肉出血 特有症状，可形成血肿 ❖关节腔出血 特有症状，可致血友病性关
分析的方法主要有DNA印迹法、寡核苷酸探针杂交法 （DOH）、聚合酶链反应（PCR）、核苷酸序列分析 法等。血友病的产前诊断可在妊娠8～10周进行绒毛 膜活检确定胎儿的性别以及通过胎儿的DNA检测致病 基因；在妊娠的15周左右可行羊水穿刺进行基因诊断。 如果上述方法失败，在妊娠的20周左右，于胎儿镜下 取脐带静脉血，测定因子水平和活性，可明确诊断。
HEMOPHILIA
（一）概述 Dept. Hematology, NFYY
病因:血友病是由于遗传性凝血因子Ⅷ、 Ⅸ、Ⅺ基因缺陷或突变，使其相对 应的凝血因子合成明显减低，导致 凝血酶原酶激活障碍所引起的出血 性疾病。
分类
HEMOPHILIA Dept. Hematology, NFYY
1、血友病甲（血友病A、因子Ⅷ缺乏 症）：缺乏因子Ⅷ
近年来在体外受精卵中，取出单个细胞就可以鉴定非 常早期的胚胎的性别并可行DNA分析。因为这种方法 是在所有细胞分化之前进行的，所以不会对胎儿造成 不良影响。
血友病的总结
关于血友病的介绍作者 09级生科蒋秀兰 1244409044摘要：在我们的日常生活中，血友病并不陌生。
它是一组先天性凝血因子缺乏以致出血的疾病，为典型的性染色体上的隐性遗传病，由女性传递，男性发病，控制因子合成的基因位于X染色体上。
关键词：血友病 X染色体1.什么是血友病血友病是一组先天性凝血因子缺乏，以致出血性疾病。
先天性因子Ⅷ缺乏为典型的性联隐性遗传，由女性传递，男性发病，控制因子Ⅷ凝血成分合成的基因位于X染色体。
患病男性与正常女性婚配，子女中男性均正常，女性为传递者;正常男性与传递者女性婚配，子女中男性半数为患者，女性半数为传递者;患者男性与传递者女性婚配，所生男孩半数有血友病，所生女孩半数为血友病，半数为传递者。
约30%无家族史，其发病可能因基因突变所致。
因子Ⅸ缺乏的遗传方式与血友病甲相同，但女性传递者中，因子Ⅸ水平较低，有出血倾向。
因子X1缺乏，均导致血液凝血活酶形成发生障碍，凝血酶原不能转变为凝血酶，纤维蛋白原也不能转变为纤维蛋白而易发生出血。
2.血友病的发现过程回顾历史，遗传性血液病在遗传性疾病和血液性疾病中最先为人们所注意。
早在12世纪时，阿拉伯文中已有血友病的记载，19世纪时，由于英国下室出现了血友病并波及了欧洲各王室，至今仍为众人所盛传。
目前已发现的遗传性血液病约有100余种，基本分为三大类：(1)遗传性红细胞系统疾病。
(2)遗传性白细胞系统疾病。
(3)遗传性出血性疾病。
其中有极少见的，至今报告不过数例；也有极常见的，例如镰形细胞贫血病，在我国虽然极为罕见，但在热带非洲有此基因者约占人口的20％，有些地区高达40％；又如8地中海贫血从地中海、中东、印度和巴基斯坦部分地区，一直延伸到南亚的广大地区，其基因携带者达人口的5～20％。
3.血友病的表现和诊断标准【临床表现】出血是本病的主要临床表现，患者终身有自发的/轻微损伤/手术后长时间的出血倾向，重型可在出生后既发病，轻者发病稍晚。