植物提取物白芸豆提取物
T
中国医药保健品进出口商会团体标准
T/CCCMHPIE 1.26—2018
ICS 11.120C
25
植物提取物白芸豆提取物
Plant extract ——White Kidney Bean Extract
中国医药保健品进出口商会
发布
2018-07-01发布
2018-07-15实施
前言
本标准按照GB/T1.1—2009和GB/T20004.1—2016给出的规则起草。
本标准由中国医药保健品进出口商会提出。
本标准由中华人民共和国商务部归口。
本标准由中国医药保健品进出口商会国际商务标准化技术委员会负责解释。
本标准负责起草单位：云南天保桦生物资源开发有限公司。
本标准主要起草人：钟毓、薛佳、孙艳、迟永楠、李丽波、何绍凯、张武松、任英。
植物提取物白芸豆提取物
1范围
本标准规定了白芸豆提取物的技术要求、检验方法、检验规则、包装、运输和贮存要求。
本标准适用于白芸豆的种子经粉碎、水提取、分离、干燥等工序得到的提取物。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB4789.2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定
GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验
GB4789.15食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数
GB4789.3食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数
GB4789.10食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验
GB4806.1食品安全国家标准食品接触材料及制品通用安全要求
GB5009.3食品安全国家标准食品中水分的测定
GB5009.4食品安全国家标准食品中灰分的测定
GB5009.5食品安全国家标准食品中蛋白质的测定
GB5009.11食品安全国家标准食品中总砷的测定
GB5009.12食品安全国家标准食品中铅的测定
GB5009.17食品安全国家标准食品中总汞的测定
GB5009.19食品中有机氯农药多组分残留量的测定
GB5749生活饮用水卫生标准
《中华人民共和国药典（2015版）》第四部通则2351黄曲霉毒素测定法
3技术要求
3.1工艺要求
3.1.1植物原料
本品以豆科植物菜豆属多花菜豆种Phaseolus coccineus Linn.白芸豆种子为原料。
3.1.2工艺过程
原料→粉碎→水提取→分离→干燥→产品
3.2产品要求
3.2.1感官要求
应符合表1的要求。
表1感官要求
项目要求
组织形态细腻、均匀的粉末
色泽呈白色至淡黄色
气味具有白芸豆蛋白质特有气味，无异味
杂质无正常视力可见外来异物
3.2.2理化要求
应符合表2的规定。
表2理化要求
项目指标
鉴别加入茚三酮后显蓝紫色蛋白质含量/%≥53.0淀粉酶抑制剂活性/（U/g）≥1000
植物凝集素活性/（mg/mL）≥0.25
水分/%≤10.0
灰分/%≤10.0
铅（以Pb计）/(mg/kg)≤0.5
砷（以As计）/(mg/kg)≤0.5
汞（以Hg计)/(mg/kg)≤0.5
黄曲霉毒素B1/(μg/kg)≤5.0
六六六（HCB）/(mg/kg)≤0.05
滴滴涕（DDT）/(mg/kg)≤0.05
3.2.3微生物要求
应符合表3的规定。
表3微生物要求
项目指标
菌落总数/(CFU/g)≤1000
大肠菌群/(MPN/g)≤0.92
霉菌和酵母/(CFU/g)≤50
沙门氏菌不得检出
金黄色葡萄球菌不得检出
3.2.4其他污染物
其他污染物限量要求，依据不同要求，应符合我国相关法规的规定。对于出口产品，应符合出口目的国相关法规的规定。
4检验方法
4.1感官检验
启开试样后，立即嗅其气味；另取试样适量置于白色瓷盘中，在自然光线下，观察其色泽、外观，并检查有无异物。
4.2理化指标
4.2.1鉴别
称取白芸豆提取物0.4g，加水10mL让其充分溶解，离心取上清液，取1mL上清液加入至试管中，并在试管中加入3mg茚三酮，摇匀，并加热煮沸3min，溶液显蓝紫色。
4.2.2淀粉酶抑制剂活性
按第A章中规定的方法进行测定。
4.2.3蛋白质
按GB5009.5中规定的方法进行测定。
4.2.4植物凝集素活性
按第B章中规定的方法进行测定。
4.2.5水分
按GB5009.3中规定的方法进行测定。
4.2.6灰分
按GB5009.4中规定的方法进行测定。
4.2.7砷
按照GB5009.11中规定的方法进行测定。
4.2.8铅
按照GB5009.12中规定的方法进行测定。
4.2.9汞
按照GB5009.17中规定的方法进行测定。
4.2.10黄曲霉毒素B
1
按《中华人民共和国药典（2015版）》第四部通则2351黄曲霉毒素B
测定法进行测定。
1
4.2.11六六六
按照GB5009.19中规定的方法进行测定。
4.2.12滴滴涕
按照GB5009.19中规定的方法进行测定。
4.3微生物指标
4.3.1菌落总数
按GB4789.2中规定的方法进行检验。
4.3.2霉菌及酵母菌数
按GB4789.15中规定的方法进行检验。
4.3.3大肠菌群
按GB4789.3中规定的方法进行检验。
4.3.5沙门氏菌
按GB4789.4中规定的方法进行检验。
4.3.6金黄色葡萄球菌
按GB4789.10中规定的方法进行检验。
5检验规则
5.1组批
同品种，同等级，以同一批投料、同一工艺生产的同一生产日期且包装完好的产品为一批。5.2出厂检验
5.2.1产品须逐批检验，检验合格并签发合格证后产品方可出厂。
5.2.2出厂检验项目：外观、水分、灰分、蛋白质、淀粉酶抑制剂活性、菌落总数、大肠菌群。
5.3型式检验
5.3.1型式检验项目包括本标准中规定的所有项目。
5.3.2正常生产时每年应进行一次型式检验。
5.3.3有下列情况之一时须进行型式检验。
a）原料来源变动较大时；
b)正式投产后，如配方、生产工艺有较大变化，可能影响产品质量时；
c)出厂检验与上一次型式检验结果有较大差异时；
d)产品停产6个月以上,恢复生产时；
e)食品安全监督部门提出进行型式检验的要求时。
5.4判定规则
5.4.1检验结果全部项目符合本标准规定时，判该批产品为合格品。因酶本身的特性决定了酶活性具有可调节性，导致淀粉酶抑制活性会随着测定时间、环境、温度具有一定的随机性和可调性，故对淀粉酶抑制剂的活性要求是只限定了最低限，每次测定淀粉酶抑制剂活性不得低于1000U/g即符合规定。
5.4.2检验结果不符合本标准要求时，可以在原批次产品中双倍抽样复检一次，判定以复检结果为准。复检后仍有一项或一项以上不符合标准时，判该批产品为不合格品。
6包装、标签、运输、贮存
6.1包装
包装材料应符合GB4806.1食品安全国家标准食品接触材料及制品通用安全要求。
6.2标签
应符合GB7718、GB28050的规定。包装标签上应标明：产品名称、批号、规格、净含量、执行标准、生产单位名称、厂址、产地、生产日期、保质期、贮存条件、营养成分表。
6.3运输
运输时必须轻装轻卸，不得与有毒、有害、有异味、易污染物品混装载运，严防挤压、雨淋、暴晒。
6.4贮存
产品应贮存于阴凉、干燥的仓库中。避免与有毒、有害、易腐、易污染等物品一起堆放。
6.5保质期
在符合规定的贮运条件、包装完整、未经开启封口的情况下，保质期为24个月。
附录A
（资料性附录）
淀粉酶抑制剂活性检验方法
A.1适用范围
本方法拟测定白芸豆提取物中淀粉酶抑制剂活性。
A.2原理
α-淀粉酶抑制剂通过与哺乳动物α-淀粉酶形成可溶性的复合体，改变哺乳动物分泌的α-淀粉酶的构象，进而导致α-淀粉酶丧失分解淀粉的能力。利用淀粉溶液在碘-碘化钾作用下显蓝色，在一定浓度范围内，660nm处的吸光值和淀粉的量呈线性关系的特点，再根据加入α-淀粉酶抑制剂前后α-淀粉酶分解淀粉量的差值，即可计算出淀粉酶抑制剂的活性。
A.3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
A.3.1α-淀粉酶alpha-amylase
能水解淀粉分子链中α-1,4-葡萄糖苷键，将淀粉链切断成麦芽糖和葡萄糖，使淀粉不与碘液发生显色反应的酶制剂。
A.3.2α-淀粉酶抑制剂
特异糖蛋白结构能与α-淀粉酶分子上的糖苷剪切位点结合并引起α-淀粉酶分子构象改变，使其失去与淀粉糖苷结合的能力从而导致催化活性丧失的化合物为α-淀粉酶抑制剂。
A.3.3淀粉酶抑制剂活性
1g白芸豆提取物，于37℃、pH=6.0条件下，1min内抑制α-淀粉酶将淀粉链切断成1微摩尔（μmol）
麦芽糖的量，即为淀粉酶抑制剂活性，以U/g表示。
A.4试剂配制
A.4.1可溶性淀粉溶液（2mg/mL）：称取0.200g（精确至0.001g）可溶性淀粉（以绝干计）于烧杯中，用少量水调成浆状物，边搅拌边缓缓加入70mL沸水中，然后用水分次冲洗装淀粉的烧杯，洗液倒入其中，搅拌加热至完全透明，待冷却后定容至100mL。溶液现配现用。
A.4.2磷酸缓冲液（pH=6.0）：称取45.23g磷酸氢二钠（Na2HPO4?12H2O）和8.07g柠檬酸
（C6H8O7?H2O），用水溶解并定容至1000mL。pH计校正后使用。
A.4.3碘液：称取11.0g碘和22.0g碘化钾，用少量水使碘完全溶解，定容至500mL，贮存于棕色瓶中备用，吸取上述溶液2.00mL，加入20.0g碘化钾，加水溶解并定容至500mL，贮存于棕色瓶中。
A.5仪器与设备
A.5.1分光光度计。
A.5.2电子分析天平。
A.5.3标准磨口带塞容量瓶：100mL、500mL。
A.5.4恒温水浴锅：控温精度±0.1℃。
A.5.5试管：25mm×200mm。
A.5.6标准移液管（2mL、10mL）、微量移液枪。
A.5.7秒表。
A.5.8pH计：分度值0.05。
A.5.9离心机和离心管。
A.5.10超声波清洗仪。
A.6淀粉标准曲线的建立
淀粉标准曲线的建立：按下表在各试管中依次加入试液，混匀。各取1mL分别加入10mL稀碘
液中，混匀，在660nm下测定吸光度；同时以0号管作空白，以所取淀粉的质量（g）与相对应的吸光度进行回归分析，计算线性回归方程。
A.1淀粉标准曲线溶液配制
0号管1号管2号管3号管4号管5号管6号管7号管淀粉溶液（mL）01234567蒸馏水（mL）76543210 0.1mol/L盐酸溶液（mL）55555555
磷酸缓冲液（mL） 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 A.7测定液的配制
A.7.1供试品溶液的制备：精密称取白芸豆提取物0.1g于容量瓶中，加水充分溶解，定容至100mL，放置30min，取上清液作为供试品溶液。
A.7.2猪胰淀粉酶标准液的制备：精密称取标准猪胰淀粉酶加蒸馏水制成0.15mg/mL的溶液，摇匀备用。
A.7.3猪胰淀粉酶液（α-淀粉酶液）与白芸豆提取物结合溶液的制备：精密量取A.7.1和A.7.2各5m L，于37℃±0.2℃水浴中预热8min，临用前精密控制时间加入。
A.8白芸豆提取物淀粉酶抑制剂活性测定
白芸豆提取物淀粉酶抑制剂活性测定：按下表依次吸取各溶液加入各试管中，混匀，将样品管在37℃水浴中准确反应5min，加入5mL0.1mol/L稀盐酸终止反应。取上述溶液各1mL，加入10mL 稀碘液中，摇匀，并以0号管作空白，在660nm波长下，测定吸光度（A），并记录数据。
A.2白芸豆提取物淀粉酶抑制剂活性测定时各溶液加入量表（单位：mL）
加入物空白管对照空白酶对照样品磷酸缓冲液（pH=6.0）（mL） 2.5 2.5 2.5 2.5水（mL）7210淀粉溶液（mL）0555
猪胰淀粉酶（mL）0010猪胰淀粉酶与供试品结合液（mL）0002
A.9
结果表述
白芸豆提取物淀粉酶抑制剂活性以U/g 表示，按公式（E.1）计算。
6
12
21
M -M /100010342.3342.3A A U g F M T M B T -=
?=
???????取样量取样量
........................（E.1）式中：
M 1——加抑制剂试管中剩余淀粉量（g ）；M 2——不加抑制试管中剩余淀粉量（g ）；U——白芸豆提取物淀粉酶抑制剂活性（U/g ）；M 取样量——白芸豆提取物的取样量（g ）；B——淀粉标准曲线回归方程中的斜率；A 1——淀粉酶对照品的吸光度；A 2——白芸豆提取物的吸光度；342.3——麦芽糖的摩尔质量（g/mol ）；T——反应时间（min ）；F——样品的转化系数，1000；106——摩尔与微摩尔的单位转化系数。
本品按干燥品计算，其淀粉酶抑制活性不得低于1000U/g 。
附录B
（资料性附录）
植物凝集素活性测定
B.1一般原理
植物凝集素是白芸豆原料中含有的一种为抵抗虫害而存在的一种天然产物，人体过多地食用会产生一定的凝血作用，故植物凝集素在白芸豆提取物中将作为杂质进行检查。植物凝集素活性测定方法根据植物凝集素的通用测定方法进行测定，用产生凝集活性的样品浓度表示凝集素活性。产生凝集活性的浓度越低表示样品凝集活性越强，反之，产生凝集活性的浓度越高表示样品凝集活性越弱。
植物凝集素活性：用产生凝集活性的样品浓度表示凝集素活性的大小，单位为mg/mL。
B.2仪器和设备
B.2.196孔板塑料板
B.2.29孔玻璃板
B.2.3微量移液枪：20-200μL
B.3试剂和材料
B.3.1植物凝集素对照品
B.3.2新鲜或醛化的人、兔或小鼠血液，经常规抗凝处理
B.3.3磷酸二氢钾：分析纯
B.3.4磷酸氢二钠：分析纯
B.3.5氯化钠：分析纯
B.3.6氯化钾：分析纯
B.3.7生理盐水
B.4溶液的配制
B.4.1PBS试剂的配制
精密称取0.2g磷酸二氢钾（KH2PO4），1.42g磷酸氢二钠（Na2HPO4），8g氯化钠（NaCl），
0.2g氯化钾（KCl）加水200mL溶解，并稀释定容至1000mL备用。
B.4.2血球细胞溶液
红细胞悬液（新鲜或醛化的人、兔或小鼠血液，经常规抗凝处理后保存在PBS溶液中）使用前加入PBS溶液混匀，3000转/min离心5min，弃上清液，同法反复4~5次。将最后一次离心后所得细胞液用生理盐水稀释至浓度为3%~4%。
B.4.3样品溶液
精密称取白芸豆提取物粉末0.4g，加PBS10mL混匀3min，离心10min（5000转/min）。取上清液1mL加入PBS试剂稀释至10mL备用。
B.4.4对照溶液
取植物凝集素对照品，配制成浓度为1mg/mL的溶液，放冰箱备用。
B.5检查
B.5.1样品溶液稀释
取样品溶液100μL，加入96孔板第一孔板中，在第一孔板中加入100μLPBS溶液，反复吹打混匀后，取出100μL稀释溶液至第二孔板中，再加入100μLPBS溶液，反复吹打后取100μL混合溶液至第三孔板中，依此操作，倍比稀释，至第7孔板为止。
B.5.2样品溶液与植物凝集素结合
另取9孔玻璃板，将96孔板中第一孔中溶液取50μL加至9孔板的第一孔，96孔板中第二孔溶液取50μL至玻璃板的第二孔，依此操作。加至第7孔板。在9孔玻璃板中的第8孔板中加入50μL 的植物凝集素对照溶液，第9孔板中加入50μLPBS溶液作为空白对照。然后在9孔玻璃板每孔中加入配置好的血球细胞溶液50μL，混匀静置。静置1h~2h后，观察各孔凝集情况。
B.5.3样品与植物凝集素结合时各孔样品浓度见下表B.1
表B.1各孔中样品的稀释度及样品浓度
板号1234567
PHA
对照PBS 对照
稀释度1/41/81/161/321/641/1281/256--浓度
mg/mL
10.50.250.1250.06250.031250.0156250.59050
B.6限度要求
凝集素的活性不得低于0.25mg/mL，9孔板第三孔之后不得出现凝集现象。
1）非商业性声明：上述所采用的设备、色谱柱、标准对照品等，涉及具体商业品牌、型号的，仅供参考，无商业目的，鼓励标准使用者尝试使用不同品牌、型号的设备、色谱柱及标准品。
植物组织蛋白提取方法
植物蛋白质提取方法总汇 一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清液，样品制备完成。 蛋白质提取液：300ml 1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml 2、甘油（Glycerol）75ml 3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g 这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！ 二、植物组织蛋白质提取方法 氯醋酸—丙酮沉淀法 1、在液氮中研磨叶片 2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。 3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm 以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。 4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。 5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。 药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS 溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。 这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！
三、组织：肠黏膜 目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达 应用TRIPURE提取蛋白质步骤： 含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量） 倒转混匀，置室温10min 离心：12000 g，10min，4度，弃上清 加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量） 振荡，置室温20min 离心： 7500g，5 min，4度，弃上清 重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次 沉淀中加入100％乙醇 2ml 充分振荡混匀，置室温20 min 离心： 7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀 1％SDS溶解沉淀 离心：10000g，10min，4度 取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT） 存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。 解决：提蛋白试剂盒，另外组织大小适中，要碎，立即加2X BUFFER，然后煮5－10分钟，效果很好的。 四、植物材料：水稻苗，叶鞘，根 1、200毫克样品置于冰上磨碎 2、加lysis buffer，离心，10000rpm，4度，5min取上清 3、重复离心5min
植物提取物白芸豆提取物
T 中国医药保健品进出口商会团体标准 T/CCCMHPIE 1.26—2018 ICS 11.120C 25 植物提取物白芸豆提取物 Plant extract ——White Kidney Bean Extract 中国医药保健品进出口商会 发布 2018-07-01发布 2018-07-15实施
前言 本标准按照GB/T1.1—2009和GB/T20004.1—2016给出的规则起草。 本标准由中国医药保健品进出口商会提出。 本标准由中华人民共和国商务部归口。 本标准由中国医药保健品进出口商会国际商务标准化技术委员会负责解释。 本标准负责起草单位：云南天保桦生物资源开发有限公司。 本标准主要起草人：钟毓、薛佳、孙艳、迟永楠、李丽波、何绍凯、张武松、任英。
植物提取物白芸豆提取物 1范围 本标准规定了白芸豆提取物的技术要求、检验方法、检验规则、包装、运输和贮存要求。 本标准适用于白芸豆的种子经粉碎、水提取、分离、干燥等工序得到的提取物。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB4789.2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定 GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验 GB4789.15食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数 GB4789.3食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数 GB4789.10食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验 GB4806.1食品安全国家标准食品接触材料及制品通用安全要求 GB5009.3食品安全国家标准食品中水分的测定 GB5009.4食品安全国家标准食品中灰分的测定 GB5009.5食品安全国家标准食品中蛋白质的测定 GB5009.11食品安全国家标准食品中总砷的测定 GB5009.12食品安全国家标准食品中铅的测定 GB5009.17食品安全国家标准食品中总汞的测定 GB5009.19食品中有机氯农药多组分残留量的测定 GB5749生活饮用水卫生标准 《中华人民共和国药典（2015版）》第四部通则2351黄曲霉毒素测定法 3技术要求 3.1工艺要求 3.1.1植物原料 本品以豆科植物菜豆属多花菜豆种Phaseolus coccineus Linn.白芸豆种子为原料。 3.1.2工艺过程 原料→粉碎→水提取→分离→干燥→产品
植物提取物分离流程
植物提取物分离流程 一、浸膏： 1．植物样品粉碎, 留样200-500g，将样品直接用氯仿浸提3次，每次7天，抽滤后将溶剂减压回收，得到氯仿部分浸膏； 2．氯仿浸提后的残渣用甲醇浸泡3次，每次7天，然后抽滤回收溶剂得到甲醇部分浸膏； 3．在浸提中，浸提次数至少3次，根据滤液的颜色判断是否需要增加浸提次数，最多浸提4次。 二、粗分离： 1．氯仿部分的分离：氯仿部分视全部浸膏数量决定留取多少，一般留样5g左右，以备活性筛选，如果浸膏大于100g，留样10g左右。 2．留样后，将浸膏用丙酮溶解，以硅胶60-100目拌样，样品与硅胶的比例一般为1：1，但也不绝对，要以样品完全被硅胶吸附，但又不浪费为原则； 3．第一次柱层析使用200-300目的硅胶，硅胶用量与样品比例为30：1，如果样品量很大，则选择10：1左右，采用干法装填柱子 4．装填好硅胶柱后，采用石油醚洗脱，一般洗脱3-5个柱体积（100g硅胶就洗脱300-500ml），但有时因为样品超载也需要经验判断是否加极性。 5．当需要增加极性时，首先选用100：1的石油醚丙酮，依照4中的操作进行，依次改变极性为80：1；60：1；40：1；20：1：10：1；8：2：7：3当溶剂比例达到8：2的时候，就需要TLC检测判断是否再进行7：3的比例了。一般到达10：1的时 候，氯仿部分基本上就可以结束洗脱； 6．甲醇部分也同氯仿部分，需要在拌样前留取样品，然后拌样上200-300目的硅胶柱（干法装填）作同氯仿部分，当完成3-5个柱子体积的洗脱后，根据回收溶剂后回 收瓶中提取物的多少判断改变极性，以100：1氯仿甲醇开始，逐步过度到80：1； 60：1；40：1；20：1；10：1；8：2；7：3；当达到7：3时，需要TLC检测是否 还有样品点； 三、精分离 1．氯仿部分各个回收段用TLC检测判断是否合并，并将合并部分用不同系统的溶剂进行TLC检测选择柱子洗脱所需要的比例，一般是石油醚+乙酸乙酯系统；石油醚 +丙酮系统；系统选择好以后，用60-100目硅胶拌样（比例依旧是1：1，尽可能少 用拌样硅胶），将拌样样品用湿法上硅胶H常压柱子，装填时，硅胶H溶解在石油 醚中，并至少静置12小时。 2．用选择的系统洗脱，每次收集一个柱体积馏分，回收后转移至试管中，经验上，一般洗脱5个柱体积后就需要改变溶剂的极性，极性的改变也是逐步加大。 3．2中柱子洗脱结束后，将回收在试管中的各个样品TLC检测，以荧光、碘显色、硫酸显色判断是否合并为同一馏分，一般荧光和碘显色是辅助检测，以硫酸显色为根 本判断。 4．合并后的馏分TLC检测选择继续分离。此次分离需要用减压柱子，填料依旧是硅胶H，填料与样品比例一般是50：1，样品在TLC中以展开3-4次，rf大小在0.2-0.3 之间最合适，一般只需要洗脱30柱子体积就可以结束分离。 5．减压柱层析中已经接近为单体化合物，有时也可以得到纯品。将减压的各个馏分TLC检测是否可以进行合并，并将合并的部分上Saphdex-LH20，一般用乙酸乙酯、丙酮进行装填凝胶柱，并以装填溶剂进行洗脱，凝胶柱都是以湿法上样。 6．此时，已经在得到纯品化合物。
植物提取物工艺及检测技术
植物提取物技术工艺 编著：魏少东第一部分主要的工业提取技术 一、常规提取物方法 1、煎煮法： 简介--水做溶剂，适用于有效成分能溶于水，但又对有效成分不清楚的，且对热较稳定的药材；缺点—用水煎煮， 浸提液中除有效成分外，往往杂质较多，尚有少量脂溶性成 分，给精制带来不利。 2、浸渍法： 分类--按照提取温度和浸渍次数分为冷浸渍法、热浸渍 法和重浸渍法。缺点—静止状态，不宜用水做溶剂，通常用 不同浓度的乙醇密闭浸渍，此法不能制得高浓度的制剂。 3、渗沥法 4、回流法： 简介—用乙醇等易挥发的有机溶剂提取药材成分，将浸提液 加热蒸馏，其中挥发性溶剂馏出后又被冷凝，重新流回进出器 中浸提药材，这样周而复始，直至有效成分回流提取完全。 二、超声波提取 三、微波提取（非电离的电磁辐射）
四、酶解细胞壁提取 主要的工业分离技术 1、树脂分离技术 2、工业萃取技术：①有机溶剂萃取技术；②二氧化碳超临界流体萃取技术；③微波萃取；④新型氯氟碳溶剂萃取—例如英国最近发明的Klea惰性溶剂，可以在低压室温下萃取，节省能源，又避免热破坏。 二、功效成分的含量检测方法（2种） 1、分光光度法（例如紫外分光光度法—UV法）：此法在国内普及较早，对于某类物质的检测都有一些经典的方法，如总黄酮的芦丁比色法、总多酚的盐酸-香草醛法、多糖的硫酸苯酚法等等；但是由于分光光度法自身的缺陷，如不能检测出总含量中各具体成分的含量比例，也不能检测出是否添加了化工合成产品，而且易受提取物中其他杂质含量影响等，其应用受到越来越多的限制。 2、高效液相色谱法—HPLC法：是一种正在普及的检测技术，在植物提取物行业的应用已逐渐成为主流手段，特别是近年来指纹图谱概念的兴起，使得更多的厂家把高效液相法作为含量测定手段，并制定HPLC指纹图谱。。