植物提取物提取dna方法
高中生物必修二实验十一--DNA的粗提取与鉴定
实验十一 DNA的粗提取与鉴定教学目的1．初步掌握DNA粗提取和鉴定的方法。
2．观察提取出来的DNA物质。
实验原理1．DNA在NaCl溶液中的溶解度是随NaCl的浓度变化而改变的。
DNA在0．14mol/L的NaCl 溶液中的溶解度最低，据此可使溶解于NaCl溶液中的DNA析出。
2．DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些物质可以溶于酒精溶液，据此可提取杂质较少的DNA。
3．DNA＋二苯胺−−沸水浴蓝色（用于DNA的鉴定）−→实验步骤1．材料制备0.1G/ml柠檬酸钠100ml500ml烧杯→玻璃棒搅拌→1000r/min离心2min→吸去上清液→活鸡血180ml即得鸡血细胞液（也可将上述烧杯臵于冰箱中，静臵一天使鸡血细胞自行沉淀）2．方法步骤取血细胞液5-10ml＋20ml蒸馏水，玻璃棒沿一个方向快速搅拌（1）提取血细胞核物质纱布过滤，滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质原理：血细胞的细胞膜、核膜吸水胀破，玻璃棒快速搅拌机械加速血细胞破裂（2）溶解核内DNA：滤液＋2mol/L NaCl溶液40ml，玻璃棒沿一个方向搅拌（3）析出含DNA的粘稠物：向上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向搅拌，出现丝状物，当丝状物不再增加时，停止加水（此时NaCl溶液相当于稀释到0．14mol/L）（4）滤取含DNA的粘稠物：用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上（5）（纱布上的）DNA粘稠物再溶解： 20ml2mol/L NaCl溶液 50ml烧杯，上述粘稠物缓慢搅拌3 min（6）过滤含DNA的2mol/L NaCl溶液：用2层纱布过滤，滤液中含DNA（7DNA：上述溶液＋95%酒精，缓慢搅拌，出现乳白色丝状物，用玻璃棒将丝装物卷起。
（8）DNA鉴定：实验关键：本实验成功的关键是获取较纯净的DNA，因此应注意：1．充分搅拌鸡血细胞液。
DNA存在于鸡血细胞核中。
将鸡血细胞与蒸馏水混合以后，应用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使血细胞加速破裂，并释放出DNA 2．沉淀DNA必须用冷酒精。
高二生物山选修课件DNA的粗提取与鉴定
07
实验注意事项与拓展思考
实验注意事项
实验材料选择
选择新鲜、无腐烂的动物组织 或植物细胞作为实验材料，以
确保DNA的质量和数量。
操作规范
遵循实验步骤，正确使用实验 器具，避免交叉污染和实验误 差。
安全防护
佩戴实验服、手套和护目镜等 防护用品，确保实验过程的安 全。
废弃物处理
妥善处理实验废弃物，避免对 环境造成污染。
生物技术的关键步骤
DNA的粗提取和鉴定是生物技术领域 中的关键步骤，如基因工程、DNA指 纹鉴定、遗传病诊断等。
02
DNA的基本知识与原理
DNA的分子结构和特点
01
02
03
双螺旋结构
DNA由两条反向平行的多 核苷酸链组成，形成双螺 旋结构。
碱基互补配对
DNA中的碱基遵循A-T、 G-C的互补配对原则。
DNA的粗提取与纯化
粗提取方法
利用DNA在特定条件下的溶解性，通过加入适量的盐和酒精 等试剂，使DNA从细胞中粗提取出来。
纯化方法
通过去除蛋白质、RNA等杂质，进一步纯化DNA。常用的纯 化方法有酚/氯仿抽提法、硅胶柱层析法等。
DNA的定量与质量检测
定量方法
利用紫外分光光度计测定DNA溶液在260nm处的吸光度，根据标准曲线计算 DNA的浓度。
高二生物山选修课件DNA的粗提 取与鉴定
汇报人：XX 20XX-01-14
目录
• 引言 • DNA的基本知识与原理 • 实验材料与方法 • DNA粗提取的实验操作 • DNA鉴定的实验操作 • 实验结果与分析 • 实验注意事项与拓展思考
01
引言
目的和背景
探究DNA的粗提取和鉴定方法
天然植物产物与化学成分的鉴定和分析研究
天然植物产物与化学成分的鉴定和分析研究植物是地球上非常重要的生命体，它们不仅为我们提供氧气和食物，还有许多药用和工业用途的植物产品。
天然植物产物鉴定和化学成分分析是研究植物的重要途径之一，也是发掘植物资源和开发新药的必要步骤。
一、天然植物产物鉴定的方法天然植物产物鉴定的方法包括形态学、解剖学、化学和分子生物学等多种手段。
其中，形态学是最基本的方法，通过观察植物的形态特征，如叶片的形状、花的颜色和果实的大小等，可以初步确定植物的属、种和亚种。
解剖学是通过显微镜观察植物组织的结构和形态，进一步确认植物的分类和鉴别。
例如，在草本植物中，种子的大小形状和胚乳的结构等可以用于鉴别不同的种类。
化学方法是通过化学试剂对植物的成分进行分析和检测。
通常采用的方法有高效液相色谱（HPLC）、红外光谱（IR）、核磁共振（NMR）等。
这些分析技术可以鉴定植物中的化学成分和有无活性成分，评估其药理学和药效学价值。
分子生物学是通过DNA和RNA的分析，对植物进行鉴定和分类。
比如，PCR （聚合酶链反应）方法可以扩增植物DNA的一部分区域，通过比对已知的基因库或DNA条形码库，确认植物的种属和亚种。
二、天然植物产物化学成分分析的意义天然植物产物化学成分分析是研究植物的重要途径，可以分离和鉴定单一的化合物或化学成分，对植物体内的活性成分和药理作用进行评估和研究。
天然植物产物化学成分分析的研究领域非常广泛，包括天然药物、植物毒素、食品添加剂和香料等。
药用植物常被用于传统医学和现代医学中，它们的化学成分可能对治疗疾病、缓解症状和改善健康有一定作用。
分析药用植物的化学成分，可以为新药研发和药理作用的探索提供重要参考。
植物毒素是指植物体内毒性物质的总称，通常由一系列有毒的物质组成，包括生物碱、酸性天然毒素、蛋白质和多糖体等。
植物毒素会对人和动物造成中毒症状，如肝损伤、神经系统损伤和胃肠道问题等。
通过分析植物毒素的化学成分和毒性作用，可以为饲料和食品的质量检测提供科学依据。
RSAP分子标记技术
目录摘要 (1)Abstract (1)1 引言 (2)1.1 RSAP标记技术 (2)1.2 DNA提取方法 (2)1.3 PCR反应原理及成分 (3)2 材料与方法 (4)2.1 材料 (4)2.1.1 32个花生品种 (4)2.1.2 主要试剂 (5)2.1.3 主要仪器用具 (5)2.2方法 (5)2.2.1花生DNA的提取 (5)2.2.2 PCR反应体系的优化 (6)2.2.3 PCR反应条件中退火温度的确定 (6)2.2.4引物初步筛选 (7)2.2.5多样性检测 (7)3 结果及分析 (8)3.1 PCR反应体系的优化 (8)3.1.1引物浓度对扩增结果的影响 (8)3.1.2模板浓度对扩增结果的影响 (8)3.1.3TaqDNA聚合酶浓度对扩增结果的影响 (9)3.1.4dNTP S浓度对扩增结果的影响 (9)3.2退火温度对扩增结果的影响 (10)3.3引物筛选结果 (11)3.4多样性初步分析 (11)4讨论 (12)4.1RSAP特点 (12)4.2影响RSAP因素 (13)致谢 (14)参考文献 (15)RSAP标记技术在花生遗传多样性检测中的初步应用生物技术专业李鹏飞指导教师乔利仙摘要：限制性位点扩增多态性(restriction site amplification polymorphism ,RSAP) 是根据基因组内普遍存在的酶切位点来设计特殊的引物,通过简单的梯度PCR反应来产生多态性。
本研究首次建立了适合于花生RSAP分析的PCR反应体系和反应条件,并对RSAP标记技术在花生遗传多样性检测中的应用进行了初步研究。
利用所建立的体系，使用15对引物对32个花生DNA进行了PCR扩增,经过重复验证,有8对引物能够扩增出清晰且稳定的条带，这些条带具有一定的多态性，说明所建立的体系可用于花生遗传多样性分析。
关键词：RSAP；花生；遗传多样性The Application of RSAP Marker Technique in DiversityDetection of peanutStudent majoring in biotechnology Li PengfeiTutor Qiao LixianAbstract : Restriction site amplified polymorphism (RSAP) requires just a simple polymerase chain reaction(PCR)to generate polymorphic markers around restrictive site. An RSAP analytic system suit for peanut was set up and applied in diversity detection of peanut for the fist time. In this experiment, fifteen primer pairs were screened with 32 peanut varies by the RSAP analytic system; and eight of them produced stable and reproducible amplification patterns. Some of the fragments screened by the primer pairs were polymorphic, indicting that the analytic system was suit for the diversity detection of peanut.Key words:RSAP; peanut; diversity1 引言花生是世界范围内广泛种植的重要油料作物之一，营养价值高，用途广，深受人们喜爱。
基于ITS2序列的中药材藤梨根DNA分子鉴定
基于ITS2序列的中药材藤梨根DNA分子鉴定高婷;朱珣之【摘要】目的:通过DNA条形码鉴定技术区分中药材藤梨根及其常见混伪品.方法:对采集的中药材藤梨根样品及其常见混伪品进行DNA提取,PCR扩增和测序,运用CodonCode Aligner 3.5.7对所获ITS2序列进行拼接.应用MEGA 5.0软件计算藤梨根及其常见混伪品的Kimura 2-parameter(K2P)遗传距离,并构建NJ(邻接)系统聚类树,最后分析种间ITS2序列的二级结构差异.结果:中药材藤梨根两种基原植物的平均种内K2P遗传距离分别为0.001和0.002,远小于藤梨根与其常见混伪品之间的平均K2P遗传距离0.120;藤梨根与其常见混伪品的ITS2二级结构也存在明显差异;NJ树显示藤梨根的基原植物聚在一起,与混伪品可明显区分,但无法区别所有猕猴桃属植物.结论:ITS2序列可高效区分藤梨根及其常见混伪品,弥补了传统鉴定方法的不足,提高了鉴定效率及准确性.【期刊名称】《世界科学技术-中医药现代化》【年(卷),期】2016(018)002【总页数】7页(P214-220)【关键词】中华猕猴桃;DNA条形码;ITS2序列;分子鉴定【作者】高婷;朱珣之【作者单位】青岛农业大学生命科学学院山东省高校植物生物技术重点实验室青岛266109;青岛农业大学生命科学学院山东省高校植物生物技术重点实验室青岛266109;江苏科技大学生物技术学院镇江212018【正文语种】中文【中图分类】R282.5藤梨根Radix Actinidiae别名圆枣子、藤梨、洋桃藤，为猕猴桃科猕猴桃属植物中华猕猴桃Actinidia chinensis Planch.或软枣猕猴桃Actinidia arguta Planch.的干燥根[1]。
藤梨根味甘、咸寒、微涩，具有清湿热、降血脂、治黄疸、促进食欲、畅通乳络的功效，在中国分布广泛，应用历史悠久[2]。
现代药理研究表明，藤梨根具有明显的抗肿瘤活性和调节免疫功能，尤其对肠道癌疗效甚佳[3,4]。
小球藻提取精华的原理
小球藻提取精华的原理小球藻是一种常见的淡水藻类微生物，其在水中广泛分布。
小球藻提取精华的原理主要涉及以下几个方面：1. 小球藻的组成与结构：小球藻主要由细胞壁、色素、蛋白质和核酸等组成。
细胞壁主要由纤维素和其他多糖组成，具有吸附能力；色素主要包括叶绿素和类胡萝卜素等，具有抗氧化作用；蛋白质主要包括酶和激素等，具有生物活性；核酸主要包括DNA和RNA等，参与细胞遗传信息的传递。
2. 提取方法：小球藻的提取主要使用机械破碎、酶解、溶剂萃取等方法。
机械破碎通过物理力量将细胞破坏，使细胞内的活性成分得以释放；酶解则通过添加合适的酶解剂对细胞进行酶解处理，以促进精华的释放；溶剂萃取则采用有机溶剂如甲醇、乙醇等，将精华从细胞中提取出来。
3. 小球藻提取精华的应用：小球藻提取精华主要应用于食品、保健品、医药和化妆品等领域。
首先，小球藻中含有丰富的蛋白质和氨基酸，可作为食品添加剂，增加产品的营养价值。
其次，小球藻提取物具有优异的抗氧化性能，能有效抑制自由基的产生，有助于防止细胞氧化和抗衰老。
此外，小球藻还具有良好的抗炎、抗菌和免疫调节等生物活性，可用于制备保健品和医药产品。
在化妆品领域，小球藻提取物可作为保湿剂、抗皱剂和抗氧化剂等添加到化妆品中，具有抗衰老、修复和舒缓肌肤的作用。
4. 小球藻提取精华的优势：相比其他植物提取物，小球藻具有以下优势。
首先，小球藻生长速度快，容易培养和大规模生产，成本相对较低。
其次，小球藻具有较高的营养价值，含有丰富的蛋白质、氨基酸和微量元素。
此外，小球藻适应性强，能在不同环境下生长，无需农业用地，对环境影响较小。
最后，小球藻通过提取可以得到不同种类的精华，如蛋白质精华、多糖精华等，可以根据需求生产不同功能的产品。
总之，小球藻提取精华是一种利用小球藻中的活性成分，在提取过程中通过机械破碎、酶解、溶剂萃取等方法将其从细胞中释放和提取出来。
小球藻提取精华具有丰富的应用前景，在食品、保健品、医药和化妆品等领域具有广阔的市场前景。
实验一质粒DNA的提取及浓度测定
9. Detach the syringe from the Minicolumn and remove the plunger from the syringe barrel. Reattach the syringe barrel to the Minicolumn.
质粒类型：
• 严谨型：这些质粒的复制是在寄主细胞严格控 制之下的，与寄主细胞的复制偶联同步。所以， 往往在一个细胞中只有一份或几份拷贝；
• 松驰型：这些质粒的复制是在寄主细胞的松弛 控制之下的，每个细胞中含有10-200份拷贝， 如果用一定的药物处理抑制寄主蛋白质的合成 还会使质粒拷贝数增至几千份。如较早的质粒 pBR322即属于松弛型质粒，要经过氯霉素处理 才能达到更高拷贝数。
0.2M NaOH 1% SDS
• Neutralization Solution
1.32M potassium acetate (pH 4.8)
• Column Wash Solution
80mM potassium acetate 8.3mM Tris-HCl (pH 7.5) 40µM EDTA 55% ethanol
4. Add 200µl of Neutralization Solution (Solution III)and mix by inverting the tube 4 times.
5. Centrifuge the lysate at 10,000 × g in a microcentrifuge for 10minutes.
分子生物学实验技术
分子生物学实验技术目录实验一细菌的培养 (2)实验二质粒DNA的提取 (3)实验三紫外吸收法测定核酸浓度与纯度 (5)实验四水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA (6)实验五质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 (8)实验六植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析 (9)实验七聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA (10)实验八RNA提取与纯化 (12)实验九RT-PCR扩增目的基因cDNA (15)实验十质粒载体和外源DNA的连接反应 (17)实验十一感受态细胞的制备及转化 (18)实验十二克隆的筛选和快速鉴定 (20)实验十三DNA分析——Southern杂交 (22)一基本操作实验一、细菌培养实验二、质粒DNA提取实验三、紫外吸收法测定核酸浓度与纯度实验四、水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA实验五、质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定实验六、植物基因组DNA提取、定量、酶切及电泳分析实验八、植物RNA提取及纯化二、目的基因获取实验七、聚合酶链式反应（PCR）技术体外扩增DNA实验九、RT-PCR扩增目的基因cDNA三、目的基因的克隆和表达实验十、质粒载体和外源DNA的连接反应实验十一、感受态细胞的制备及转化实验十二、克隆的筛选和快速鉴定实验十三、DNA分析——Southern杂交实验一细菌的培养一、目的学习细菌的培养方法及培养基的配置。
二、原理在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。
质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。
特别是常用的大肠杆菌。
大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。
它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。
当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。
然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。
最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。
质粒DNA的提取及检测实验报告
四川大学实验报告题目：质粒DNA的提取及检测一．实验目的:1.学习碱裂解法提取质粒的原理和方法；2.学习DNA琼脂糖凝胶电泳的原理和方法。
二．实验原理1. 质粒 (Plasmid)：一种染色体外的稳定遗传因子，大小从1-200kb不等，为双链、闭环的DNA分子，并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。
主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，常常编码一些对宿主有利的酶的基因，这些基因的表型包括抗生素抗性，产生抗生素、限制酶、修饰酶等。
2.载体(Vector)：要把一个有用的外源基因通过基因工程手段，转化到细胞中去进行繁殖和表达，需要运载工具，携带外源基因进入受体细胞的这种工具就叫载体。
目前除了大肠杆菌中的质粒、λ噬菌体、噬菌粒外，还有酵母人工染色体载体以及动、植物病毒载体等。
噬菌体、M133.分离质粒DNA：（1）培养细菌使质粒扩增；（2）收集和碱裂解细菌；（3）分离和纯化质粒DNA。
4.碱裂解法（1）溶液Ⅰ：50mmol/L葡萄糖，10mmol/EDTA-Na，25mmol/LTris-HCl (pH8.0) 作用：分散细胞，螯合金属离子使酶失活，防止DNA的降解（2）溶液Ⅱ：0.4mol/L NaOH，2% SDS，临用前1：1配制作用：细胞在NaOH和SDS溶液中裂解时，蛋白质与染色体DNA发生变性1 / 9四川大学实验报告（3）溶液Ⅲ：5mol/L 醋酸钾60ml，冰醋酸11.5ml，双蒸水28.5ml作用：酸性条件上质粒DNA复性，留在上清液。
大肠杆菌DNA和蛋白质-SDS复合物等发生沉淀。
5.电泳带电荷的物质，在电场中的趋向运动称为电泳。
DNA的琼脂糖凝胶电泳可以分离长度为200bp至近50kb的DNA分子。
DNA的迁移率（U）的对数与凝胶浓度（T）之间存在反平行线性关系。
因此，要有效地分离不同大小的DNA片段，选用适当的琼脂糖凝胶浓度是非常重要的。
6.提取质粒在质粒提取的过程中，由于操作原因，提取的质粒可能有三种：线性DNA、开环DNA 、闭环超螺旋DNA 。
产品简介DNaseI储存液的配制-天根生化科技（北京
产品简介本试剂盒可从植物组织，特别是富含多糖多酚或淀粉的植物组织（如棉花叶片，成熟水稻叶片，拟南芥种子，白松松针，香蕉，枇杷叶片，马铃薯块茎，苹果，梨，西瓜果肉，猕猴桃，月季，烟草，沙棘，百合等）中快速提取总RNA，可同时处理大量不同样品。
提取的总RNA纯度高，没有基因组、蛋白和其它杂质的污染，可用于RT-PCR、Real Time RT-PCR、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、PolyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆等多种下游实验。
预防RNase污染，应注意以下几方面：1. 经常更换新手套。
因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。
2. 使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3. RNA在裂解液SL中时不会被RNase降解。
但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。
4. 配制溶液应使用RNase-Free ddH2O。
（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%( v/v)，混匀后放置过夜，高压灭菌。
）RNA得率：使用前注意事项：1 操作前在SL中加入β-巯基乙醇至终浓度5%，如475 μl SL中加入25 μl β-巯基乙醇。
此裂解液最好现用现配。
配好的SL 4 ℃可放置一个月，裂解液SL在储存时可能会形成沉淀，如果有沉淀出现，请加热溶解后使用。
2 植物组织裂解是否充分直接影响到RNA提取的质量和产量，本试剂盒中提供的裂解液SL，适用于大多数植物组织的裂解，但有些植物组织（例如玉米的乳白色胚乳，红豆种子或小麦种子）或丝状真菌，由于次级代谢产物较特殊，异硫氰酸胍使样品产生沉淀，导致RNA提取效果不佳的现象，此时可以向TIANGEN 公司免费索取另一种裂解液HL，将解决该问题。
3 第一次使用前应在漂洗液RW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。
DNase I储存液的配制将DNase I干粉（1500 U）溶解在550 μl RNase-Free ddH2O中，轻柔混匀，分装后-20℃贮存（可保存9个月）。
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植物提取物提取dna方法
植物提取物提取DNA方法
植物提取物提取DNA是进行植物遗传学和分子生物学研究的重要一环。
本文将介绍几种常用的植物提取物提取DNA的方法。
一、CTAB法
CTAB法是一种经典的植物提取物提取DNA的方法。
其原理是利用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）作为提取试剂，通过蛋白酶K的作用，溶解细胞膜和核膜，释放出DNA。
然后通过酚/氯仿提取和乙醇沉淀的步骤，最终得到DNA。
二、改良的CTAB法
为了提高DNA的纯度和产量，研究者们对CTAB法进行了改良。
其中一种常用的改良方法是添加聚丙烯酰胺（PVP）和β-己内酰胺（β-ME）。
PVP能够结合并沉淀多酚等杂质，提高DNA的纯度。
而β-ME可以解除DNA与蛋白质的交联作用，增加DNA的产量。
三、快速法
为了节省时间和提高DNA的产量，研究者们开发出了一种快速的植物提取物提取DNA的方法。
该方法利用碱裂解和酚/氯仿提取的原理，通过简化操作步骤和缩短提取时间，快速获取高质量的DNA。
四、商业化试剂盒
除了传统的提取方法，市场上也有一些商业化的试剂盒可供选择。
这些试剂盒通常采用快速离心柱或磁珠技术，简化了操作步骤，提高了提取效率和纯度。
研究者们可以根据自己的需求选择合适的试剂盒。
需要注意的是，无论使用哪种提取方法，都需要注意以下几点：
1. 植物材料的选择：应选择新鲜、健康的植物组织，避免病虫害或老化组织，以保证提取到高质量的DNA。
2. DNA的保存：提取到的DNA应保存在低温下，避免酶解和降解。
3. DNA的纯度和浓度检测：使用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳等方法对提取到的DNA进行纯度和浓度检测，以确保后续实验的准确性。
总结起来，植物提取物提取DNA的方法多种多样，研究者可以根据实际需求选择合适的方法。
无论使用哪种方法，都需要严格操作，保证提取到高质量的DNA。
这些方法的应用将有助于深入了解植物的遗传背景和分子机制，为植物育种和基因工程提供重要的依据。