细胞实验讲义

细胞实验讲义实验一光学显微镜的使用及显微绘图（3课时）实验目的在普通光学显微镜下辨识细胞和细胞器的形态结构，掌控生物绘图的方法。

实验原理细胞在形态上是多种多样的，有球形、椭圆形、扁平形、立方形、梭形、星形等。

虽然细胞的形状各异，但是它们却有共同的基本结构特点，都由细胞膜（动物）、细胞壁（植物）、细胞质和细胞核组成。

细胞中的各种细胞器，如线粒体、高尔基体、中心体、核仁、染色体等，一般经过一定固定染色处理后，大多数在光学显微镜下是可以看见的（图3-1）。

细胞器的形态结构在普通光学显微镜下与电子显微镜下所看到的结构有很大的差别。

图3-1细胞形态结构a.柿胚乳细胞示胞间连丝；b.马蛔虫受精卵分裂中期示中心粒；c.兔的神经细胞中高尔基体；d.小鼠肝细胞线粒体实验仪器、材料和试剂1．仪器：复式显微镜、擦镜纸2．材料：洋葱食道切片、柿胚乳细胞、小白鼠肝切片、动物细胞中的dna、马蛔虫受精卵切片3．香柏油或石蜡油、二甲苯方法与步骤一、洋葱食道切片细胞的观测先用低倍镜观察根尖的纵切面，注意分生区、伸长区、成熟区细胞的异同，然后再仔细观察细胞的形态结构，特别注意细胞的形状、大小，以及细胞壁、细胞核、核仁、细胞质、液泡的形态结构。

二、柿胚乳细胞而立胞间连丝的观测先在低倍镜下找到柿胚乳细胞，然后转用高倍镜观察，可看到细胞间丝状的联系。

三、小白鼠肝细胞切片糖原的观察先用低倍镜后用高倍镜观测，可以看见许多肝小叶，每小叶存有许多密切排成索状的多角形的肝细胞，细胞中央存有大而圆的细胞核。

这时，转回用油镜观测，可以看见细胞质内原产着许多被涂成深色的糖原颗粒。

四、马蛔虫受精卵切片中心体的观察取马蛔虫受精卵切片，在显微镜下找出充满著子宫腔的受精卵，每个马蛔虫受精卵外围存有一层较薄的卵膜，膜内有宽敞的围卵腔，各围站卵腔内有处于相同对立期的卵细胞。

找出对立中期的细胞，在细胞中央被涂成蓝色条状或棒状的结构，这就是染色体。

在染色体两侧可知各存有一个1较小的，亦被涂成蓝色的小粒，表示中心粒。

在中心粒的周围可知呈圆形放射状的星丝。

（五）动物细胞中的dna先用低倍镜找到动物细胞后，用高倍镜观察，可见到细胞中央被染成深色的细胞核。

【作业】1．画出洋葱根尖细胞图，并标示出细胞的各部分。

2．图画出来柿胚乳细胞胞间连丝图，并标示出细胞的各部分。

3．图画出来小白鼠肝细胞糖原图，并标示出细胞的各部分。

4．画出马蛔虫受精卵细胞中心粒图，并标示出细胞的各部分。

5.画出动物细胞中dna 图，并标示细胞的各部分。

实验二细胞膜的通透性观测（3课时）一、实验目的1.介绍细胞膜对物质通透性的通常规律。

2.介绍甲状腺现象及其出现机制。

ⅰ观测植物细胞的质壁拆分与复原质壁拆分原理当外界溶液浓度大于细胞液浓度时，根据扩散作用原理，水分会由细胞液中渗出到外界溶液中，通过渗透作用失水，使细胞壁和原生质层都出现一定程度的收缩。

由于原生质层比细胞壁的伸缩性大，当细胞不断失水时，原生质层就会与细胞壁逐渐分离开来，也就是逐渐发生了质壁分离。

反之，外界溶液浓度大于细胞液浓度，则细胞通过渗透作用吸水，整个原生质层就会慢慢地恢复成原来的状态，使植物细胞逐渐发生质壁分离复原。

实验材料紫色洋葱的鳞片叶、质量浓度为30%、50%的蔗糖溶液、蒸馏水，5%的硝酸钾、碳酸氨溶液，2.5%、10%的氯化钠溶液。

０.０３％的中性红色溶液实验用具刀片、镊子、滴管、载玻片、盖玻片、吸水纸、显微镜.实验步骤trained：用小刀在鳞片内侧划为约２×２ｃｍ的小块，将摘下的小块放进０.０３％的中性红色溶液中染色１０～１５ｍｉｎ。

抽出大块稍加冲洗后，两手紧握处置过的鳞片两侧并朝内表皮方向对折。

即可遮住拎红色的薄膜内表皮。

1.制作临时装片(选材、取表皮、制片)2.观察（先低倍镜观察然后高倍镜观察）3.引流法加入30％的糖液（重复数次）4.静置、观察5.导流法重新加入清水（重复数次）6.静置、观测7.同样的步骤用50%蔗糖、蒸馏水、5%的硝酸钾、碳酸氨溶液，2.5%、10%的氯化钠溶液重复一遍。

ⅱ甲状腺的观测实验原理细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。

它是一种半透膜，可选择性控制物质进出细胞。

各种物质出入细胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，这种现象就是渗透。

渗透2作用是细胞膜的主要功能之一。

将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞内，可使细胞胀破，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这种现象称为溶血。

将红细胞放在某些等渗盐溶液中，由于红细胞膜对各种溶质的通透性不同，膜两侧的渗透压平衡会发生改变，也会发生溶血现象。

因此，发生溶血现象所需时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。

本实验选用红细胞作为细胞膜透性的实验材料，将其放入不同的介质溶液中，观察红细胞的变化。

实验用品（一）材料鸡血细胞（二）器材普通显微镜、普通离心机、扭力天平、10ml试管、10ml刻度离心管、试管架，2ml注射器（无须针头）或5ml移液管、洗耳球、滴管、载玻片、擦拭镜纸、记号笔等。

（三）试剂1．alsever溶液葡萄糖2.05g柠檬酸钠(na9c6h5o7.2h2o)0.89g柠檬酸（c6h6o7.h2o）0.05g氯化钠0.42g蒸馏水100ml调ph至7.2，过滤器杀菌或高压杀菌10min，复置4℃冰箱留存。

2.0.128mol/lnacl溶液。

3．0.05mol/lnacl溶液。

4．0.4mol/lnacl溶液。

3.0.128mol/lnh4cl溶液。

4.0.128mol/lnh4ac溶液。

5.0.128mol/lnano3溶液。

7.0.32mol/l葡萄糖。

8.0.32mol/l甘油。

9.0.32mol/l乙醇。

10.0.32mol/l丙酮。

11.蒸馏水。

实验步骤：1．从集市买一只活鸡现杀取血5ml（防止污染），放入盛有20mlalsever’s液瓶中，混匀后置冰箱保存备用（2周内使用）。

2.采用前，丢弃alsever’s液留存的新鲜鸡血5ml，重新加入8ml的0.128mol/l的nacl溶液，小心搅匀，1000r/minVergt5min，如此3次冲洗，最后硝酸锶30%的鸡红细胞（crbc）悬液。

3.取11支试管，按附表中所示测试溶液，分别取样各3ml，作出标记后，各管均加入红细胞悬液2滴，混匀后静置于温室中，观察各支试管中发生溶血的时间及其变化。

观测结果：1.试管内液体分两层：上层浅黄色透明，下层红色不透明为不溶血（－），镜检红细胞完好呈双凹盘状。

2.如果试管内液体浑浊，上层拎红色者，表示不全然甲状腺（＋或＋＋），镜检存有部分红细胞呈圆形碎片。

3.如果试管内液体变红而透明者，称完全溶血（＋＋＋），镜检发现细胞全部呈碎片。

实验建议31.鸡血在离心时，试管均需在扭力天平上平衡。

2.度角红细胞体积或放在拎刻度的离心管中，重新加入生理盐水硝酸锶30%的红细胞悬液；3.试管中存有红细胞和测试溶液时，不应当强力摇晃，以免导致人为的红细胞断裂。

度角法推论标准：快速甲状腺：＋＋＋；慢速甲状腺：＋＋或＋；不甲状腺：－作业：1.以表格记录各种溶液的甲状腺现象观测结果2.就细胞膜对不同物质的渗透性不同，对实验结果进行分析。

实验三液泡系则的超活染色与观测（3课时）实验目的：观察动植物活细胞内液泡系的形态、数量与分布；学习一些细胞器的超活染色技术。

实验原理：活体染色就是能够并使生活有机体的细胞或非政府特异性着色但对活样品又没毒害促进作用的一种活体染色方法，其目的就是表明生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引发细胞的丧生。

活体染色技术需用去研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

根据所用染色剂的性质和染色方法不同，通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。

体内活体染色是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。

体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

活体染料之所以能够紧固、沉积在细胞内某些特定的部分，主要就是依靠染料的“电化学”特性。

碱性染料的胶粒表面拎阳离子，酸性染料的胶粒表面具有阴离子，而被染的部分本身也就是具备阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就出现了迎合促进作用。

但并非任何染料均可用作活体染色，理论上应当挑选那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且采用时须要硝酸锶稀淡的溶液。

一般说来，最为适用于的就是碱性染料，这可能将是因为它具备熔化在类脂质(例如卵磷脂、胆固醇等)的特性，不易被细胞稀释。

中性白(neutralred)这种弱碱性染料就是活体染色剂中最重要的染料，对于液泡系则的染色具备专一性。

只将养细胞中的液泡系则涂成红色，细胞核与细胞质全然不着色，这可能将与液泡中的某些蛋白质有关。

实验仪器设备：显微镜，擦镜纸，刀片，镊子，载玻片和盖玻片，吸水纸若干。

实验试剂：1、ringer溶液300ml：nacl2.55g；kcl0.75g；cacl20.09g；蒸馏水定容至300ml2、0.03%中性白溶液100ml：0.03g中性白溶100mlringer溶液中，棕色瓶留存实验材料：小麦种子或黄豆幼根食道实验步骤：液泡系的超活染色与观察1、实验前，把小麦种子或黄豆培育在培养皿内干燥的滤纸上，并使其幼苗至1cm以上2、挑洁净载玻片，几滴2几滴0.03%中性白溶液3、用刀片将出生的幼根根尖切一纵切面，放入染液中4、3染色10-15分钟，注意不可使染料干燥5、喷回去染液，几滴1几滴ringer液，加之盖片，轻轻敲打，并使食道压扁6、低倍镜检，油镜观测作业：1、绘小麦或黄豆根尖细胞示液泡系形态与分布。

实验四叶绿体的制取及其对染料的还原成（3课时）4实验目的：掌握分离与纯化叶绿体的方法，了解细胞器的一般分离程序及叶绿体的光还原活性。

实验原理：细胞或非政府和拆分介质搅匀，经碎裂匀浆后用差速离心法，经几次相同输出功率可以赢得相同的细胞器。

离体的完备具备无机活性的叶绿体的制取就是使用这种方法。

被分离的离替叶绿体是否具有光合活性，可以用不同的方法来鉴定，对染料（2-6―二氯苯酊酚）在光下还原作用是其中的一个方法。

光e-↓h2o+氧化型染料（兰色）→→o2+还原型染料（无色）所以我们通过染料和离体叶绿体混合液在照明设备光前后，染料颜色上变化可以辨别被拆分的叶绿体的活力。

叶绿体是比较大的细胞器，在叶肉细胞中含量丰富，用新鲜的植物叶片匀浆后使用普通离心机进行离心也能得到良好的分离效果。

叶绿体酶系则对热脆弱，在室温下难失活，因此，抽取叶绿体全部过程必须维持在热的条件下。