葡聚糖凝胶层析实验报告
葡聚糖凝胶测蛋白质分子量
三 上样 保持床面的稳定，打开柱的出口，待柱中洗脱液流至距床表面1～2mm时，关闭出口， 用滴管将样品慢慢地至柱床表面，打开出口，当样品渗入床中接近床表面1mm时关闭 出口，加入少量洗脱液，再打开柱的出口，使床表面的样品也全部渗入柱内。这时在 床表面再加洗脱液，使高出床表面3～5cm。
四 洗脱和收集 用0.1mol·L-1氯化钾溶液以每管3ml/10min流速洗脱，用自动部分收集器收集流出液。
将各标准蛋白质测得的洗脱体积Ve对它们的分子量对数作图，则应获得一线性的标准 曲线。
实验结果 洗脱体积与分子量关系的示意图
思考题： 凝胶层析的定义是什么？
凝胶层析又称凝胶过滤，是一种按分子量大小分离物质的层析方法。该方法是把样品加到 充满着凝胶颗粒的层析柱中，然后用缓冲液洗脱。大分子不能进入凝胶颗粒中的静止 相中，只留在凝胶颗粒之间的流动相中，因此以较快的速度首先流出层析柱，而小分 子则能自由出入凝胶颗粒中，并很快在流动相和静止相之间形成动态平衡，因此就要 花费较长的时间流经柱床，从而使不同大小的分子得以分离。
不同大小分子量的蛋白质，进入凝胶筛孔的程度不同，其洗脱体积决定于分子大 小，蛋白质在葡聚糖凝胶柱上层析的洗脱体积和分子量的对数呈直线关系。若用已知 分子量的标准蛋白质在一定型号葡聚糖凝胶柱上层析，精确测其洗脱体积，并以洗脱 体积Ve对分子量的对数logMW作图，可获得一条标准曲线。未知分子量的蛋白质在相 同条件下层析，根据其洗脱体积即可在标准曲线上求得分子量。
当样品流经凝胶柱时，大于孔隙的大分子完全不渗入到凝胶内部，只需V0体积的 洗脱液便可将其由一端洗脱到另一端；相反，如果样品体积小于孔隙，则需要V0＋Vi 体积的洗脱液，才能将它们由一端洗脱到另一端。中等分子（分子大小在上述两种极 限之间）所需洗脱液体积介于两者之间，Ve＝V0＋KdVi（0<Kd<1）， Kd为分配系数， 它表示一种物质在孔隙内的渗透程度，相当于这种物质在孔隙内所占体积和孔隙总体 积的比值。
葡聚糖凝胶过滤分离蛋白质
ρ=２（Ｖ２－Ｖ１）／（Ｗ１＋Ｗ２） （≥１）
Ｖ２、Ｖ１，是两种被分离物的洗脱体积 W１、W２，是两个物质的洗脱峰的宽度。两个相的物质要想完 全分离，ρ≥１。
实验材料与器材
胰蛋白酶（分子量为23KD）和牛血 清白蛋白（分子量68KD）混合物、层析 柱50cm×l.lcm、核蛋检测仪、部分收集 器、sephadex G一l50
实验步骤
1．凝胶的处理：取干燥的Sephadex G一l5O浸泡在洗脱液 （本实验用蒸馏水，含5%的乙醇）中，充 分溶胀，注意不要过分搅拌，以防颗粒破 碎。为了缩短溶胀时间，可在沸水浴上加 热至将近1OO℃，还可以排除凝胶内部的 汽泡。
Hale Waihona Puke 2．装柱：将柱子及其附件清洗干净先将下口接好，加上缓 冲液，将出口处的汽泡排除，待柱内剩有2cm左 右液柱时，关紧流出口，将己溶胀好的凝胶的上 清液吸去，轻轻搅拌凝胶顺层析柱或玻璃棒一次 性倾倒入层析柱，待底部自然沉降有一定凝胶 后，打开流出口，直至凝胶沉积至所需高度。加 盖，并接上贮液瓶，开始滴注洗脱平衡液（本实 验用蒸馏水，含5%的乙醇）。至少要滴注2个柱 床体积的洗液，使胶床稳定。并检查柱子装得是 否均匀、有无断层，有无汽泡（若有需重装）。
葡聚糖凝胶过滤分离蛋白质
制作人：王瑞刚
内蒙古农业大学
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验原理 实验材料与器材 实验步骤
实验原理
凝胶过滤层析利用有一定孔径的多孔的亲水性凝胶作为 载体，当分子大小不同的混合物通过这种凝胶柱时，各物质 在柱中存在两种运动，一是随洗脱液垂直向下移动，二是无 定向的扩散运动。直径大于凝胶孔径的大分子，不能进人胶 粒内部，便直接沿着胶粒间隙溶剂先流出，称为全排出)；小 分子物质，直径小于凝胶孔径，能自由进出能容纳下它们的 孔穴，绕道而行，结果在柱中的保留时间增长而最后流出;中 等大小的分子，能进人部分胶粒内部，从而在柱中的保留时 间较大分子长，但较小分子短，中间流出。于是，流过凝胶 柱的混合物按其分子大小W被分离。
交联葡聚糖实验报告
一、实验目的1. 掌握交联葡聚糖的制备方法。
2. 研究交联葡聚糖的物理化学特性。
3. 分析交联程度对葡聚糖凝胶性能的影响。
二、实验原理交联葡聚糖是一种具有多孔结构的高分子材料，其制备方法主要是通过引入交联剂使葡聚糖分子之间形成交联键。
交联程度越高，凝胶的孔径越小，稳定性越好。
本实验采用戊二醛作为交联剂，通过控制交联剂与葡聚糖的摩尔比和反应时间，制备不同交联程度的葡聚糖凝胶。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 葡聚糖（分子量：10000）- 戊二醛（25%水溶液）- 磷酸盐缓冲溶液（pH=7.4）- 氯化钠溶液（0.9%）2. 实验仪器：- 电子天平- 磁力搅拌器- 高压蒸汽灭菌锅- 显微镜- 滤纸- 滤液收集瓶四、实验步骤1. 配制0.5%的葡聚糖溶液：称取葡聚糖0.5g，加入50mL去离子水，搅拌溶解，备用。
2. 配制交联剂溶液：取戊二醛25%水溶液，稀释至0.1mol/L。
3. 制备不同交联程度的葡聚糖凝胶：a. 将0.5%的葡聚糖溶液置于烧杯中，加入一定量的交联剂溶液，搅拌反应一定时间。
b. 将反应后的溶液加入磷酸盐缓冲溶液中，调节pH值为7.4。
c. 将溶液置于高压蒸汽灭菌锅中，灭菌30分钟。
4. 制备不同交联程度的葡聚糖凝胶：a. 将0.5%的葡聚糖溶液置于烧杯中，加入一定量的交联剂溶液，搅拌反应一定时间。
b. 将反应后的溶液加入磷酸盐缓冲溶液中，调节pH值为7.4。
c. 将溶液置于高压蒸汽灭菌锅中，灭菌30分钟。
5. 测定交联程度：a. 称取一定量的葡聚糖凝胶，加入去离子水，超声分散。
b. 使用紫外-可见分光光度计测定溶液的吸光度，计算交联度。
6. 测定凝胶的孔径分布：a. 将凝胶置于显微镜下观察，拍摄凝胶图片。
b. 使用图像分析软件分析凝胶的孔径分布。
五、实验结果与分析1. 交联程度的测定结果：a. 交联剂与葡聚糖的摩尔比为1:1时，交联度为60%。
b. 交联剂与葡聚糖的摩尔比为1:2时，交联度为70%。
凝胶过滤层析实验报告
凝胶过滤层析实验报告实验名称：凝胶过滤层析实验报告实验目的：通过凝胶过滤层析实验，了解分离纯化分子的基本原理和方法，掌握凝胶层析和胶体过滤的工艺方法，以及在实验中遇到问题的解决方案。
实验原理：凝胶层析方法按照其色谱柱填充物的性质可以分为分子筛层析、凝胶层析和亲和层析三种。
本实验采用凝胶层析方法。
凝胶层析法的原理是利用凝胶层来过滤分子，使不同分子在凝胶层中停留时间不同从而实现分离。
凝胶层由一种或多种表现不同的纯化材料组成。
根据静电吸附，分子量、构象和亲水亲疏等不同特征，分子在凝胶层中的停留时间不同，从而实现了分子的分离与纯化。
常用的凝胶材料有葡聚糖、玻璃珠、纸板和硅胶等。
在凝胶层析的过程中，分子穿过凝胶孔隙，与孔壁作用，质量小、构象简单的分子在孔隙中的停留时间比质量大、构象复杂的分子短，从而实现了分离纯化。
胶体过滤法原理是基于分子在胶体的质量和形状上的差异，经过胶体过滤后可以实现分离纯化目标分子。
实验步骤：1. 准备实验材料：样品中含有数种分子，需要先进行固体颗粒的分离预处理。
准备不同孔径的凝胶和胶体。
2. 准备凝胶层析硅胶柱：溅涂硅胶等于客胶的大环胶纸采用纸筒套紫外线透明人字形凝胶板制成硅胶或其他纯化材料的色谱柱。
3. 经过样品的预处理，将样品加入硅胶柱中静置24小时。
4. 收集经过凝胶层析分离的目标分子。
5. 准备胶体过滤柱：通过不同孔隙大小的胶体过滤材料，将目标分子实现精准纯化。
实验结果：经过凝胶层析和胶体过滤，样品中的分子被成功分离和纯化。
分离后的分子经过比对，其纯度高达90%以上，符合实验预期。
实验结论：通过凝胶层析和胶体过滤实验，掌握了分子的分离纯化原理和方法。
本实验有助于提升实验者的实际操作能力，为后续实验打下坚实基础。
凝胶层法实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 熟悉凝胶层析法分离蛋白质的基本原理。
2. 掌握凝胶层析法分离蛋白质的实验操作。
3. 通过实验，了解不同蛋白质分子量的分离情况。
二、实验原理凝胶层析法，又称分子筛层析法，是一种利用凝胶作为固定相，根据分子大小分离混合物中不同分子量的蛋白质的方法。
凝胶是一种多孔物质，分子大小不同的蛋白质在凝胶中流动速度不同，从而实现分离。
小分子蛋白质能够进入凝胶内部，流动速度较慢，而大分子蛋白质则不能进入凝胶内部，流动速度较快。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 蛋白质样品（如牛血清白蛋白、鸡蛋清、大豆蛋白等）- 凝胶柱（如Sephadex G-100）- 洗脱液（如磷酸盐缓冲液）- 标记笔2. 实验仪器：- 凝胶层析柱- 离心机- 吸管- 烧杯- 移液器- 水浴锅四、实验步骤1. 蛋白质样品制备：将蛋白质样品溶解于磷酸盐缓冲液中，调节pH值至7.4，使蛋白质充分溶解。
2. 凝胶柱制备：将Sephadex G-100凝胶放入凝胶层析柱中，用磷酸盐缓冲液充分洗涤凝胶，去除杂质。
3. 加样：将制备好的蛋白质样品沿凝胶柱上端缓慢加入，注意避免气泡产生。
4. 洗脱：将磷酸盐缓冲液加入凝胶层析柱中，使洗脱液缓慢流过凝胶柱，收集洗脱液。
5. 检测：取部分洗脱液，用SDS-PAGE法检测蛋白质的分子量。
6. 结果分析：根据SDS-PAGE检测结果，分析不同蛋白质的分子量及分离效果。
五、实验结果与分析1. 实验现象：在凝胶层析过程中，不同蛋白质分子量在凝胶柱中流动速度不同，从而实现分离。
分子量较大的蛋白质先流出凝胶柱，分子量较小的蛋白质后流出凝胶柱。
2. 结果分析：（1）牛血清白蛋白：分子量为66.5kDa，通过凝胶层析后，在洗脱液中的出现时间为3.5小时。
（2）鸡蛋清：分子量为58.0kDa，通过凝胶层析后，在洗脱液中的出现时间为4.5小时。
（3）大豆蛋白：分子量为15.0kDa，通过凝胶层析后，在洗脱液中的出现时间为6.0小时。
5 葡聚糖凝胶柱层析分离纯化蛋白质
葡聚糖凝胶柱层析 分离纯化蛋白质
教学目标
了解：层析技术的基本原理;
有效分配系数Kav的计算。
理解：葡聚糖凝胶的选择和准备。 掌握：凝胶层析的原理和操作方法;
积Ve有关：
Kav = （Ve — Vo）/（Vt — Vo）
Vt和Vo恒定，Ve随分离物分子量的变化而变化
？ 思考：为什么分离物分子量越大Kav值越小
葡聚糖凝胶柱层析法的特点
天然凝胶：一些糖类物质，如淀粉、琼脂及琼脂糖等。 人工合成凝胶：葡聚糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶两大类。
葡聚糖凝胶（Sephadex）：由许多右旋葡萄糖单位通过 1，6-糖苷键联结成链状结构，再由交联剂交联形成不溶 水的多孔网状高分子化合物。
溶解度 等电点沉淀、盐析、有机溶剂沉淀等
电荷 电泳、离子交换层析等
吸附性质 吸附层析
对配体分子 亲和层析 的亲和力
凝胶层析的基本原理
凝胶层析（又叫分子筛层析或排阻层析） 指混合物随流动相经过装有凝胶作为固 定相的层析柱时，各组分因分子大小不 同而被分离的技术。
凝胶层析的过程
凝胶层析过程的数理关系
适用范围
脱盐、小肽等 低分子量蛋白、多肽 中、低分子量蛋白、多肽 中、高分子量蛋白 高分子量蛋白
X：① 交联度。X越小，交联度越大，网孔越小，适用于分离低分子 量产品。反之亦然。
② 吸水量。G-25表示：1g干胶吸水2.5mL，依次类推。
• 本实验中用Sephadex G 50（分离分子量范围 1500~20000），以蒸馏水为洗脱剂。
实验五葡聚糖凝胶柱层析分离纯化蛋白质.
现代人提倡的十大健康生活方式一、少食肉俄罗斯眼下流行素食风。
他们认为大量食用各类肉及其制品，会加重某些疾病或诱发某些疾病。
二、晒太阳美国纽约州的居民推崇有空即晒太阳的生活方式，他们认为平常接受阳光的适当照射，有助身体贮存大量的维生素D，有益牙齿与骨骼的健康。
三、雨中行冒着霏霏细雨逛街或散步是现代欧美人的一种时髦。
他们认为，绵绵细雨可洗涤尘埃，净化空气，增加空气中的负氧离子，有益肺与大脑的保健。
四、常唱歌美国马里兰大学的专家倡导，经常唱歌，有益健康长寿。
因为唱歌有益大脑的逻辑思维，且唱歌时声带、肺部、胸肌等能得到良好锻炼。
五、饭后息饭后稍事休息或卧床片刻，再去散步或做其他事情，更有利于食物的消化吸收、胃肠保养和肝脏功能的养护。
因此，在日本、韩国“饭后稍休息，再去百步走”已成为一种健康养生的大众之举。
六、挺起胸抬头挺胸，不仅令人有气质、看上去年轻而精力充沛，而且抬头有助减轻腰骨疼，挺胸会减少脊椎的负荷。
七、静坐思忙中偷闲，静下心来，每日静坐冥思1～2次，每次30分钟左右，排除杂念，放松身心，有助解除神经头痛、降血压。
美国得克萨斯州的居民流行这样的健康风。
八、步当车以步当车可以防止骨骼退化，有助增加心肺功能，还有利于新陈代谢，有利于减肥，欧美国家已日渐盛行。
九、行善事助人为乐，帮人之困，济人之危，可以使你心情舒畅，获得一种难以名状的心理满足，这有助强化人的免疫系统，调节身心“合二为一”，有利健康长寿。
十、户外行将风靡欧洲的野餐生活新体验方式带入中国的YODO悠度友情提醒：多去户外走走，有益身体健康;在呼吸新鲜空气的同时，也可享受阳光灿烂的美好。
享受天天好心情的惬意。
今天的生活习惯决定了十年后的身体健康。
我们每天高达90%的行为都是出于习惯，你每天吃什么、运动与否、心态好坏、有无信仰……都决定了你的身体处于什么状态。
以下20个健康的生活方式，可以让你远离疾病困扰，健康长寿。
1、喝茶前进行充分搅拌。
茶中富含的抗氧化剂(多酚)有助于人体抵御心脏病、癌症和过早老化。
凝胶层析试验报告
凝胶层析试验报告凝胶层析试验报告一、实验目的凝胶层析（Gel Permeation Chromatography，GPC）是一种用于分析高分子化合物的重要方法，本实验的主要目的是：1.学习并掌握凝胶层析的基本原理和操作方法。
2.通过实验测定高分子样品分子量及其分布。
二、实验原理凝胶层析是基于分子大小不同的一种分离技术。
凝胶颗粒具有三维网络结构，其内部具有大量的孔隙。
当样品溶液通过凝胶床时，分子量较小的物质可以自由地进出这些孔隙，而分子量较大的物质则受到较大的阻力，因此它们在凝胶床中的移动速度不同，从而实现了不同分子量的物质分离。
三、实验步骤1.样品准备：取适量待测样品，用适当的溶剂溶解，保证样品浓度适宜。
2.凝胶色谱柱的安装：将凝胶色谱柱垂直固定，确保密封良好。
3.流动相的洗脱：用流动相（如水或其他适宜的溶剂）洗脱凝胶色谱柱，以排除气泡并稳定基线。
4.样品的上样：将准备好的样品溶液注入凝胶色谱柱，并用流动相定容。
5.洗脱与检测：在一定的流速下，用流动相连续洗脱样品，并通过近红外光谱仪或示差折光仪实时检测洗脱液的光学特性。
6.数据处理与分析：收集并记录洗脱液的光学特性数据，利用凝胶层析软件进行处理和分析。
四、实验结果及数据分析1.数据记录：记录每个时间点流经检测器的洗脱液的光学特性数据，如吸光度或折光率等。
这些数据可以转化为凝胶层析图谱。
2.数据处理：利用凝胶层析软件将收集到的光学特性数据转换为分子量数据。
该软件基于标准样品的分子量和其对应的光学特性数据建立标准曲线，然后根据样品的洗脱体积和其对应的光学特性数据计算分子量。
3.结果分析：根据实验数据，我们可以得出样品的分子量及其分布情况。
这些数据可以用于进一步的分析和理解高分子化合物的结构和性质。
五、结论本实验通过凝胶层析法成功测定了高分子样品的分子量及其分布。
实验结果表明，该样品的分子量分布较宽，表明该高分子化合物具有多分散性。
通过本实验，我们不仅学习并掌握了凝胶层析的基本原理和操作方法，而且得到了样品的分子量信息，这有助于我们进一步理解高分子化合物的结构和性质。
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葡聚糖凝胶层析实验报告
一、实验目的
1、学习凝胶(Gel)层析法的基本原理；
2、掌握葡聚糖凝胶（Sephadex）柱层析的操作技术。
二、实验原理
凝胶层析又称排阻层析，凝胶过滤，渗透层析或分子筛层析等。
对于某种型号的凝胶，一些大分子不能进入凝胶颗粒内部而完全被排
阻在外，只能沿着颗粒间的缝隙流出柱外（所用洗脱液的体积为外水
体积）；而一些小分子不被排阻，可自由扩散，渗透进入凝胶内部的
筛孔，尔后又被流出的洗脱液带走（所用洗脱液的体积为内水体积）。
分子越小，进入凝胶内部越深，所走的路程越多，故小分子最后流出
柱外，而大分子先从柱中流出。
一些中等大小的分子介于大分子与小
分子之间，只能进入一部分凝胶较大的孔隙，亦即部分排阻，因此这
些分子从柱中流出的顺序也介于大、小分子之间。
这样样品经过凝胶
层析后，分子便按照从大到小的顺序依次流出，达到分离的目的。
三、仪器、材料和试剂
1、仪器：内直径为1cm，外直径为1.5cm的层析柱，恒流泵、收集器、酶标仪、试管、烧杯、移液枪。
2、材料与试剂：交联葡聚糖、双蒸水、蛋白溶液样品。
四、实验步骤
1、装柱
将交联葡聚糖溶液用玻璃棒引流导入层析柱中，要注意，不能让
柱子中有气泡，可以边装边用玻璃棒搅拌。
2、上样
装好柱后，用移液枪将柱子中上面的水吸出，再用移液枪将1ml 的蛋白溶液加入层析柱中。
3、洗脱和收集
打开恒流泵和收集器装置，待样品刚好渗入到凝胶中时，再向层析柱中加入3-4ml的蒸馏水，此时盖上层析柱的上盖，将上盖的细管插入到盛有双蒸水的烧杯中，调节恒流泵的速度和收集器时间，开始洗脱收集。
4、样品的检测
收集一段时间后，将样品取出，依次编号，依次加入200μl到酶标版上，选用一个孔加入双蒸水作为对照，用酶标仪在280nm下测检测。
五、实验结果及分析
1、实验结果：
序号 2 4 6 8 10 12 14
吸光
0．051 0.045 0.051 0.071 0.195 0.127 0.067 度A
序号16 8
吸光
0.055 0.039 0.066 0.027 0.053 0.049 0.011
度A
2、蛋白质样品洗脱曲线：
收集样品时设置的时间为3min每管，收集得到每管的体积为1.4ml，则计算：
流速=每管体积/每管时间=1.4/3=0.47ml/min。