谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定
血清谷丙转氨酶活性的测定改良赖氏法
血清谷丙转氨酶的测定有何注意点？为什么要避免溶血？
血清谷—丙转氨酶活性的测定（改良赖氏法）
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掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。
【目的要求】
熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作方法。
了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。
【实验原理】 血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：
由于NADH在波长340nm处有特异吸收峰，因此ALT的活性可通过NADH的减少量，亦即通过340nm吸光度的减少量间接作出定量测定。这一方法特异性、准确性高。但是此法除要加入待测酶ALT的底物外，还需要加入指示酶LDH及其辅酶NADH，又需用紫外分光光度计，因此不易为一般临床化验室推广。
二是比色测定法，如：金氏法（King法）、穆氏法（Mohun 法）和赖氏法（Reitman-Frankel法）。其原理、试剂、操作步骤及作用温度等完全相同。不同之处在于作用时间：King法60min ，Mohun法和 Reiman法30min。因此它们的单位定义和标准曲线制备也不同。King法单位定义是：每1ml血清在37℃条件下与底物作用60 min，生成1μmol丙酮酸称为一个单位。 Mohun 法单位定义是：每毫升血清在pH=7.4，37℃条件下与底物作用30 min，每生成2.5微克丙酮酸为1单位。赖氏法没有制定自身的单位定义，而是以实验数据套用速率法的卡门氏单位作表示的。1个卡门氏单位的定义是：在温度25℃，pH7.4，波长340nm，光径1cm的条件下，1ml血清使NADH的吸光度下降0.001的转氨酶活性。可见卡门氏单位不是用物质的量浓度，而是用物质的吸光度表示酶的活性单位的。若将卡门氏单位的定义条件代入国际单位计算公式，即得卡门氏单位与国际单位的换算关系：1卡门氏单位=0.4821 IU/L(25℃)，便可将卡门氏单位兑换成国际单位。
血清谷丙转氨酶活性的测定改良赖氏法
改原赖氏法的反应温度(40℃改为37℃)和底物浓度(改为低 浓度)的改良赖氏法，对卡门氏单位的科学套用，使比色 法一些缺陷得到了卓有成效的克服，使其结果与速率法较 为一致，能较好反映酶的真实活性。 由于赖氏法设计的底物浓度,如a-酮戊二酸不足，反应速度 只能达到最大速度的65%；显色剂2,4-二硝基苯肼的用量只 及反应液中酮酸浓度的一半；保温30min的酶促反应后， 新生成的丙酮酸和未用完的a-酮戊二酸存在着无法人为控 制的竞争显色的几率问题，如此等等，使赖氏法的重现性 较差，在测量精度上仍与连续监测法相差甚大。
【方法评价 】 ALT活性测定主要有两类。一是卡门氏（Karman） 分光光度法，测定的是酶促反应速率。其原理如 下： 由于NADH在波长340nm处有特异吸收峰，因此 ALT的活性可通过NADH的减少量，亦即通过 340nm吸光度的减少量间接作出定量测定。这一 方法特异性、准确性高。但是此法除要加入待测 酶ALT的底物外，还需要加入指示酶LDH及其辅 酶NADH，又需用紫外分光光度计，因此不易为 一般临床化验室推广。
尽管基质液中余下的a-酮戊二酸同样可生成红棕色苯腙硝 醌化合物而影响测定结果，但因其量不多，加之对505nm 的吸光度远不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物强，尤其用 标准曲线作测定时，所用的酶活性单位通过卡门氏分光光 度速率法矫正，摈弃了赖氏法一些固有弊端，结果比其他 比色法准确。故卫生部临检中心建议国内无条件使用连续 监测法的单位使用赖氏法。1981年全国常规生化检验方法 学术讨论会认为赖氏法测定ALT活性较为合理，全国肝炎 协作会议也建议统一使用改良赖氏法。
血清谷—丙转氨酶活性的 测定（改良赖氏法）
【目的要求】 1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。 2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作 方法。 3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。
试验三、转氨酶活力测定
3）、向空白与样品管中分别加入0.5 mL 2，4－二硝基 苯肼，摇匀，水浴保温15分钟。
4）、向空白管中加入0.1 mL血清，摇匀。
5）、向所以3支试管中都加入5.0 mL 0.4 M NaOH溶液， 摇匀并水浴保温15分钟后在520 nm进行比色测定。
保温30分钟
五、实验结果
1、用测定吸光值在标准曲线上查出丙酮酸的生成量 2、计算：
六、酶活力单位的定义
国际单位：在最适温度下，1分钟内转化1μmol底物的 酶量称为1个酶单位（U）。
Katal单位：在一定条件下，1秒钟内转化1mol底物所 需要的酶量。 1 U＝16.67 nKat 1 Kat ＝6 107 U
七、注意事项
1. 在测定谷丙转氨酶活力时，应事先将底物、血清在37℃水 浴中保温，然后在血清管中加入底物，准确记时。 2.转氨酶只能作用于α-L-氨基酸，对D-氨基酸无作用。实验 室多用α-DL-氨基酸。 3. 进行样品测定时，加入2,4-二硝基苯肼溶液后要摇匀并保 温15分钟。 4. 血清样品的测定需在显色后30分钟内完成。
2. 标准丙酮酸（含丙酮酸2.0μmol/mL） 3.谷-丙转氨酶底物溶液 (含α-酮戊二酸2 μmol/ml及DL-丙氨酸200 μmol/ml) 4. 2.4二硝基苯肼溶液 (0.02%,1mol/L HCl溶液) 5. 0.4mol/L NaOH溶液 。
四、实验操作
1、标准曲线制作： 1）、取6支试管，分别标上0，1，2，3，4，5编号。 先将试管置于37℃恒温水浴中保温5分钟以平衡内外 温度。然后按下表所列的次序添加各试剂。
一．实验原理 转氨作用 指在转氨酶催化下 将-氨基酸的氨基转给 另一个-酮酸，生成相 应的-酮酸和一种新的 -氨基酸的过程,也称氨 基移换作用。
实验七.血清谷丙转氨酶(S-GPT)活性测定
混匀，３７℃水浴预温１０min
2,4-二硝基苯肼溶液
0.1mol/L ＮaOH
0.５
５.0
0.５
５.0
0.５
５.0
混匀，３７℃水浴保温２０min
A520nm波长处比色 计算公式：S-GPT活性单位%= A测/A标×57
三、思考题
以下思考题任选2个作答
1.
什么叫转氨基作用？根据所学理论阐明转氨基作用
实验考试
血清谷丙转氨酶(S-GPT)活性测定
生化与分子生物学教研室
注意事项
1. 2. 3. 4. 5. 6. 考试时间90分钟 血清样品每人一支，并记录编号 移液器及Tip头对应使用，正确操作 登记学号、姓名、血清编号、A测、A标、计算结果及实验报告 的平均成绩 每位同学书写当次实验报告包括思考题，并及时清洗自己所用 的器皿，并将试剂、器皿正确归位 值日生负责当次实验室整体卫生
在蛋白质的合成与分解及糖，脂肪代谢中有何重要
作用？
2. 3. 4. S-GPT活性测定二次保温有什么意义？ 影响酶促反应的因素有那些？ 本实验直接测定物质是什么？
一、实验原理
血清谷丙转氨酶（S-GPT）催化下列反应：
在足量底物条件下，生成产物越多表明酶活性越大，酶浓度越 高。一般以在一定时间内丙酮酸的生成量代表S-GPT活性的大小。
二、实验操作
赖氏法测定S-GPT活力：取干净试管3支，按下表操作： 加入物 测定管 标准管 空白管
谷丙转氨酶底物溶液 血清 丙酮酸标准液（２umol/mL） 0.1mol/L磷酸缓冲液 0.５ 0.1 0.５ 0.１ 0.５ 0.１
生化试验观察血清中谷丙转氨酶的活力变化讲解
= SALT活力
测定管微克数—对照管微克数 （单位） 2.5×0.1
五、注意事项
1. 2，4-二硝基苯肼可与有酮基的化合物作用形成苯腙 2. 吸量应准确，严格控制反应时间和温度。 3. 在测定SALT活力时，应事先将底物、血清在37℃水浴中恒 温 4. 溶血标本不宜采用，因血细胞内转氨酶活力较高，影响测定 结果。 5．在测定时，如酶活力较大（大于100单位），应将样品稀释 后再进行测定。
serum Aminotransferase/ transaminase
catalyze alanine α-ketoglutarate glutamic acid pyruvic acid alkali substrate
ABSTRACT
Observing Enzyme Activity Changes of Alanine Aminotransferase in Sample
三、实验原理
COOH
C H3
CH2 α-ketoglutarate C H2
C H N H2 COOH
CO
alanine
COOH
COOH GPT
SUBSTRATE
C H2 CH2
C H N H2 COOH
pyrivic acid
C H3 CO COOH
pyruvic acid glutamic acid
0.50 0.50
0.50
0.50
0.50
0.50
37℃水浴保温20min
氢氧化钠ml
5
5
5
5
5
5
室温下静置10min
蒸馏水调零点，于520nm处测吸光度
谷丙转氨酶的测定
实验九血清谷丙转氨酶的测定一、实验目的1．掌握比色分析法测定血清谷丙转氨酶活性的原理；2．熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的方法；3．了解血清谷丙转氨酶测定的临床意义。
二、原理血清谷丙转氨酶（Ｓ、Ｇ、Ｐ、Ｔ）作用于丙氨酸及α－酮戊二酸，结果生成谷氨酸与丙酮酸。
丙酮酸与2，4－二硝基苯肼作用，生成二硝基苯腙，此物在碱性溶液呈红棕色，与经同样处理的标准丙酮酸比色，求得丙酮酸的生成量以表示酶的活性。
GPTα－酮戊二酸＋丙氨酸谷氨酸＋丙酮酸丙酮酸＋２.４－二硝基苯肼丙酮酸二硝基苯腙(红棕色)三、操作15×25mm中试管4支，标号，按下表操作：静止10分钟后，选用520nm的单色光，以蒸馏水调零，测定各管光密度。
四、计算本法所规定的谷丙转氨酶活性单位的定义是：1ml血清于37℃与底物作用30分钟，产生2.5μg丙酮酸为一个谷丙转氨酶活性单位。
测定管光密度－测定空白管光密度 1 1血清谷丙转氨酶= × 10 ×标准管光密度－标准空白管光密度 0.1 2.5测定管光密度－测定空白管光密度＝×40（SGPT活性单位）标准管光密度－标准空白管光密度正常值：2～40单位/ml血清。
注意：1. 2，4-二硝基苯肼与丙酮酸的颜色反并不是特异性的，α-酮戊二酸也能与2，4-二硝基苯肼作用而现色。
此外，2，4-二硝基苯肼本身也有类似的颜色，因此空白管颜色较深，吸光度常在0.18左右。
2. 可用小白鼠肝匀浆（20倍稀释）代替血清进行实验。
3. 肝匀浆的制备：用右手抓住小白鼠的尾巴，另其头朝下，然后迅速置桌上，立即用左手按住鼠的颈子右手猛拉老鼠尾巴，使颈椎卡断死亡。
将肝脏取出，放在滤纸上，用天平称重，放在研钵中，生理盐水5ml研磨，然后再加生理盐水，配成1∶19（即20倍稀释）的肝匀浆，用双层纱布过滤，收集滤液备用，此液每ml含G.P.T200单位。
附：试剂的配制（1）1M/10磷酸盐缓冲液（PH=7.4）：取磷酸二氢钾2.69g，磷酸氢二钾13.97g 加水溶解后移至100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，贮于冰箱中备用。
血清谷丙转氨酶的测定实验报告
血清谷丙转氨酶的测定实验报告血清谷丙转氨酶的测定实验报告引言：血清谷丙转氨酶（AST）是一种存在于细胞质和线粒体中的酶，主要参与氨基酸代谢过程。
AST的测定在临床上具有重要意义，可以用于评估肝脏功能和诊断肝脏疾病。
本实验旨在通过酶促动力学方法测定血清中AST的活性，并分析实验结果。
实验材料与方法：1. 实验材料：- 血清标本：从健康志愿者采集的血样。
- AST测定试剂盒：包括底物、辅酶、酶标试剂等。
- 酶标仪：用于测定底物的光吸收值。
2. 实验方法：- 步骤一：标定酶标仪将已知浓度的AST酶标溶液分别加入不同的试管中，测定其对应的光吸收值，建立标准曲线。
- 步骤二：制备样本将采集到的血清标本离心，取上清液，稀释至适宜浓度。
- 步骤三：测定AST活性将标定好的试剂和稀释后的血清标本加入试管中，混匀后，放入酶标仪中测定吸光度。
- 步骤四：计算AST活性根据标准曲线，计算出各个样本的AST活性。
结果与讨论：通过实验测定，我们得到了一系列样本的AST活性数据。
根据标准曲线，我们可以计算出每个样本的AST活性，并进行进一步的分析。
首先，我们可以观察到不同样本之间AST活性的差异。
正常情况下，AST活性在一个相对稳定的范围内，超出该范围可能提示肝脏功能异常或疾病存在。
因此，通过测定AST活性，我们可以初步判断一个人的肝脏健康状况。
其次，我们还可以对不同条件下AST活性的变化进行研究。
例如，我们可以比较不同性别、不同年龄段、不同体重指数的人群的AST活性是否存在差异。
这样的研究有助于进一步了解AST在人体内的生理变化和代谢过程。
此外，我们还可以将AST活性与其他临床指标进行关联分析。
例如，我们可以比较AST活性与肝功能指标、炎症指标等之间的关系。
这些关联分析可以为临床诊断和治疗提供重要的参考依据。
总结：通过本实验，我们成功地测定了血清中AST的活性，并对实验结果进行了分析和讨论。
AST的测定在临床中具有重要意义，可以用于评估肝脏功能和诊断肝脏疾病。
7临床检测--谷丙转氨酶活性的测定(影像中医)
卡门氏单位的定义为： 卡门氏单位的定义为：
在紫外分光光度计中，1ml血清( 在紫外分光光度计中，1ml血清(反应溶液总量为 血清 3ml)在340nm波长下 用内径为1.0cm的比色皿， 波长下， 1.0cm的比色皿 3ml)在340nm波长下，用内径为1.0cm的比色皿，在 25℃， 分钟内生成的丙酮酸 在乳酸脱氢酶催化下， 丙酮酸， 25℃，1分钟内生成的丙酮酸，在乳酸脱氢酶催化下， 变成NAD 光密度下降0.001 0.001为 使NADH+H+变成NAD+，使光密度下降0.001为1个转氨酶 活性单位。 活性单位。 丙氨酸 + α-酮戊二酸 酮戊二酸
酶活性单位定义中必须规定哪些条件? 酶活性单位定义中必须规定哪些条件?
【实验原理】 实验原理】
血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、pH7.4的 血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、pH7.4的 ）， 条件下，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α 条件下，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸，然后测定丙酮酸的 酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸，然后测定丙酮酸的 生成量，即可计算酶活性的大小。 生成量，即可计算酶活性的大小。
参考值： 参考值： 5~25卡门氏单位 卡门氏单位
实验结果
1. 标准曲线
0 A520nm An-A0
卡门氏单位 0
1
2
3
4
5
28
57
97
150
200
2.血清 血清ALT活性 血清 活性 T C 注：酶活性在97卡门 酶活性在97卡门 97 氏单位以下， 氏单位以下，标本经 稀释后与光密度值的 线性关系良好， 线性关系良好，酶作 用时间较短， 用时间较短，更符合 酶测定要求。 酶测定要求。
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谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定
一、［实验目的］
1.用纸层折法观察肝脏丙转氨酶ALT的转氨作用；
2.用分光光度法测定血清丙转氨酶的活力；
3.学习治疗检测SGPT的方法及原理；
4. 了解检测肝损伤模型的制备及SGPT在科研中的应用。
二、［仪器与试剂］
1.实验材料
动物肝脏
2.实验试剂
(1) 0.9%NaCl 溶液
(2)海砂
(3)1%谷氨酸溶液(1%KOH溶液中和)
(4)1%丙酮酸钠溶液(用1%KOH溶液中和)
(5)0.1%KHCO廨液
3
(6)0.025%—澳乙酸溶液(用1%KOH中和)
(7)2%乙酸溶液
(8)酚的饱和水溶液：将2份酚和2份水(按重量计算)混合，放入分液漏斗中，振荡。
静止24h以后分层，将下部酚层放入瓶中备用。
新配制的酚展层剂可以反复使用1周。
(9)0.1%水合茚三酮的正丁醇溶液
(10)0.1%标准谷氨酸溶液
(11)0.1%标准丙氨酸溶液
(12)1%KOH 溶液
谷丙转氨酶活性的鉴定（纸层析法）
一、［实验原理］
观察肌肉糜中谷丙转氨酶所催化的氨基移换反应。
通过纸层析法检查底物谷氨酸的减少和产物丙氨酸的生成。
为防止丙酮酸被肌肉糜中的其它酶所氧化或还原，在反应系统中加入了抑制剂澳乙酸。
二、［实验操作］
1.谷丙转氨酶提取液制备：2g肝脏+0.9%NaCL 6mL+海砂200mg，在低温下，研磨成浆，用稀薄的脱脂棉过滤，得提取液（滤液不清）。
2.转氨作用
沸水浴2min，使蛋白质完全沉下，过滤，作层析
3.纸层析操作方法
取圆形层析滤纸1张，在圆心处用圆规绘出直径为3cm的同心圆（滤纸不可以折），通过中心将滤纸绘成四等分扇形。
用毛细管点样2-4次（直径不超过2mm），在滤纸的圆心上剪一小孔，直径约1-2mm，取一小滤纸条，将下端剪成刷状，在卷成灯芯插入圆形小孔，不能使灯芯突出纸面，将圆形滤纸平放在盛有层析液（水饱和酚）培养皿上，使灯芯向下与溶剂接触，用大小相同的培养皿盖在滤纸上，溶剂通过灯芯上升到滤纸上向四周展层，直到溶剂前沿移至距滤纸边缘约1cm处时停止（展层时间为1h），80-100℃烘箱干
燥，喷洒水合茚三酮
的正丁醇溶液，80-100℃显色。
三、［实验结果］
实验血清谷丙转氨酶活力单位测定
一、［实验原理］
本实验用丙氨酸和a -酮戊二酸为底物，经转氨作用生成谷氨酸和丙酮酸。
丙酮酸与2 ,4-二硝基苯肌作用生成2, 4-二硝基苯腙，此物质碱性条件下呈棕红色，其颜色的深浅与丙酮酸的含量成正比，可用比色法进行定量测定。
通过与标准溶液的比较，即可计算出酶的活力单位。
COQ-产COO-C H2
CH3CH2CH3CH J
• U _ NHg T U _ O —G —U I M 一
Nn
cocr cocr cocr coo
丙敏酸a-■戊二酸内■酸谷氨酸
二、［实验试剂］
(1)1/15mol/L pH=7.4的磷酸缓冲液：取 1/15 mol/L 磷酸氢二钠(称取 Na2HpO4 9.47g 或 Na2HpO4• 12H2O 23.87g,溶于蒸馏水中定容至1000mL) 825mL； 1/15 mol/L 磷酸二氢钾( 称取KH2PO4 9.078g溶于蒸馏水中定容1000mL) 175mL混合。
(2)GPT 基质液：称a -酮戊二酸，29.2mg (2p mol/L)及a -DL-丙氨酸1.78g (200g mol/L )溶于50mL, pH=7.4的磷酸缓冲液中，加0.1mol/L NaOH溶液0.5mL,调pH为7.4,然后加磷酸缓冲液定溶至100mL，加少许氯仿防腐，置冰箱中可保存一周。
(3)1mmol/L 2,4-二硝基苯肌溶液：称取2,4-二硝基苯肌20mg,溶解于10mL浓盐酸中，以蒸馏水定容至100mL。
(4)2M m ol/mL丙酮酸钠标准液：精确称取丙酮酸钠22mg,加磷酸缓冲液溶解后，定容至100mL。
临用前配制。
(5)0.4mol/LNaOH 溶液
三、［实验操作］
充分摇匀后，置于37℃水浴，保温10min
以酶的活力单位数为横坐标，以光吸收值为纵坐标，绘制A 520nm 与对应的酶活力单位数 的标准曲线。
（1）丙酮酸钠标准液mL
数X 摩尔浓度（2g mol/mL ）。
（2） GPT 活力单位为：每 mL 血清在37℃与pH=7.4的基质液作用60min,生成
1〃mol 丙酮酸为一个单位（U ）。
本实验 （临床检验）取血清量为0.1mL,报告数据以100mL 血清计算，因此将实际测得结果X1000即 可。
（二）酶活力的测定
充分摇匀后，置于37℃水浴，保温20min
摇匀后，静置30分钟，520nm波长下比色。
查标准曲线的对应值，可得100mL血清中谷丙转氨酶的活力单位数
（三）实验结果
（四）注意事项
1.所需试剂如基质液、丙酮酸标准液、2, 4-二硝基苯肼等均需冷藏；
2.为防止溶血及其他因素对酶活性影响，实验所用器皿应干净、干燥方可使用；
3.丙酮酸钠极易变质，配试剂时应选择外观洁白干燥者，否则应进行重结晶；
4.转氨酶只能用于a -L-Ala，对D-Ala无催化作用。
实验室多用a -L-Ala，是因为便宜，如果采用a -L-Aa,则用量需减半；
5.如活性高于500U/100mL，应将血清稀释一定倍数重新测定，结果应X稀释倍数；
6.为保证操作结果可靠，测定酶活性时应恒定pH、保温时间；
7.选用固定分光光度计及比色杯减少误差。
实验GPT/ALT在临床诊断意义及检测方法原理
一、GPT/ALT在临床诊断中的意义
转氨酶广泛存在于机体的各个组织中，在肝组织中谷丙转氨酶活性较高，在心脏中谷草转氨酶活性较高。
在正常新陈代谢中，血清内维持一定水平的转氨酶活性（即正常值）。
当组织发生病变时，由于组织细胞肿胀、坏死（或细胞膜破裂），使细胞膜通透性增高，而导致大量的酶释放至血液中，从而引起血清中相应的谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性显著增高。
因此测定其活性，对肝、心脏的某些疾病的临床诊断具有重要的参考价值。
二、丙氨酸氨基转移酶试剂盒使用说明
1.用途
本试剂用以测定人血清中丙氨酸氨基转移酶活力。
2.基本原理
底物L-丙氨酸与a -酮戊二酸在ALT作用下生成丙酮酸，生成的丙酮酸在乳酸脱氢酶作用下转化成L-乳酸，同时伴随着NADH氧化，引起在波长340nm处吸光度下降，下降速率与血清ALT活力成正比。
L-丙氨酸+ a -酮戊二酸一丙酮酸+ L-谷氨酸
氨氨酸 + NADH + H+fL-乳酸 + NAD+ + HO
2
3.试剂盒组成
LDH 三 5.0KU/L
三、［实验仪器］
1.具有能在波长340nm处测定生化分析仪
2.30℃、37℃水浴箱
3.定时器
4.准确的加样器
四、［操作方法］
混匀，准确记录时间，放设定温度1min后，在波长340nm处，以蒸馏水校零，连续监测1-2m i n，计算△A/m i n。
1-2min，计算△ A/min。
工作液制备：溶液A与溶液B以2:1混合，组成测定工作液。
工作液在2-8℃避光保存，可稳定3周。
五、［实验结果］
六、［注意事项］
1.本液体试剂按IFCC推荐法为基础设计，采用二步法，可防止胆红素的干扰；
2.试剂与样本量可按生化分析仪要求衡比例改变；
3.本试剂线性可达到600 U/L（30℃），或1000U/L（37℃），当样本中ALT活力超过600 U/L（30℃）或1000 U/L（37℃）时，可用生理盐水稀释，即0.1mL血清加0.2mL 生理盐水，测定，结果X3；
4.如试剂变混，或以蒸馏水为空白，工作液在340nm处吸光度＜1.0,请勿使用；
5.贮存条件与有效期（试剂在2-8℃,避光保存，有效期为1年；如用一步法，工作液在 2-8 ℃避光保存，可稳定3周）。
实验检测SGPT活性在科学研究中的应用
一、［基本原理］
测定SGPT活性可反映出肝细胞的坏死程度，因此是检测肝功能损坏的灵敏指标之一。
很多有毒物质易引起肝损伤，造成肝实质细胞的变性及坏死，例如，四氯化碳CCl4）等化
学药物可以诱发动物发生急性中毒性肝炎和肝坏死。
因此建立由CCl诱发病变的动物模
型， 4
然后检测SGPT活性，常被用于滋肝补肾中草药物的筛选研究。
二、［应用实例］
红缘层孔菌多糖对CCl4中毒小鼠转氨酶（SGPT）活性的影响。
将体重20-22g小白鼠随机分为三组，每组10只。
第1组为正常对照，第2组为四氯化碳中毒对照组，第3组为给药组。
给药组以150mg/kg体重的剂量，给小鼠灌胃红缘层孔菌多糖液，每日一次，连续给药
天，其余两组灌胃同体积生理盐水。
于末次给药后24h，给药组、四氯化碳中毒对照组均按 10mL/kg体重剂量腹腔注射0.1%CCl4豆油溶液，正常对照组注射同体积豆油，16h后，对三组小白鼠摘眼球取血制血清，按King氏法测定谷丙转氨酶活性（100mL血清与与基质液在37℃条件下作用60min，每生成1〃mol丙酮酸为1个活性单位）。
结果见下表:
红缘层孔多菌多糖对CCl4中毒小鼠SGPT活性的影响
SGPT（u%）MiSD
正常对照组205+17 PN0.05
由表中数据可见，红缘层孔多菌多糖可抑制由四氯化碳损伤肝细胞引起的小鼠血清谷丙转氨酶活性的升高。