中国荷斯坦奶牛K-酪蛋白基因多态性与泌乳性能关联性分析

草食 家 畜 （ 双 月刊 ）
Ｂ ｉ ｏ ｓ ｐ ｉ ｎ全 血基 因组 Ｄ Ｎ Ａ提 取试 剂盒 、溴酚 蓝 、 Ｔ Ｂ Ｅ缓 冲液 、去离 子水 和蒸 馏 水 、 Ｈｉ ｎ ｄ Ｉ Ｉ Ｉ 酶、 ｂ ｕ ｆ ｆ ｅ ｒ ２ 、
ｌ Ｏ ｘ ｍａ ｓ ｔ ｅ ｒ Ｍｉ ｘ 、 引物 、 显色 剂 ｇ ｏ ｌ ｄ ｖ ｉ ｅ ｗ、 Ｍａ ｒ ｋ ｅ ｒ — Ｄ Ｌ ２ ０ ０ ０ 、 硼酸 、 乙二胺 四 乙酸 （ Ｅ Ｄ Ｔ Ａ） 。
透 射仪 、 凝胶 成像 系统 、 冷冻 离心机 、 移 液器 、 振荡器 、 琼 脂糖水 平 电泳槽 、 微波 炉 。
收 稿 日期 ： ２ ０１ ３ — ０ ９ — ２ ０
基金项 目： 自治 区公 益 性 科研 院 所基 本 科 研 业 务 经 费项 目《 高 产奶 牛 选 育 新技 术 应 用研 究》 ； 自治 区科技 成 果 转化 专项 资金
现 该蛋 白存 在有 两 种变 异 型 ： Ａ和 Ｂ， 在 大 多数 牛品 种 中 ， Ａ 出现 的频 率 占主导 地位 。牛 Ｋ — Ｃ Ｎ对 奶 酪生
产 的影 响 可能是 由编 码序 列 的多态性 引起 的 ， 而 泌乳性 状 与牛 Ｋ — Ｃ Ｎ基 因型 的相 关可能 是 由于基 因调 控 区存 在 突变造成 的。 随 着分子 生 物学 技术 的发 展 ， 人 们 采用候 选 基 因法对 酪蛋 白基 因进 行 了广 泛 的研 究 ， 发 现 了多 个与 产奶性 状 显著相 关 的 Ｓ Ｎ Ｐ 。本实 验利用 Ｄ Ｎ Ａ测序 方法 检测 牛 Ｋ — Ｃ Ｎ的 Ｓ Ｎ Ｐ位 点 ， 并利 用 Ｓ Ｎ Ｐ标 记效 应
１ ． ５ 奶牛 Ｄ Ｎ Ａ 的提取
按 Ｂ ｉ ｏ ｓ ｐ ｉ ｎ全 血基 因组 Ｄ Ｎ Ａ提 取试 剂盒 说 明书操 作 。
１ ． ６ 基 因组 Ｄ Ｎ Ａ 的 检 测
取 ５ Ｌ加 ２ Ｌ溴 酚蓝 混 匀 ，在含 有 Ｔ Ｂ Ｅ的 １ ％琼 脂糖 凝胶 溶 液 中 ，同 时上样 ５ Ｌ Ｄ Ｎ Ａ Ｍａ ｒ ｋ ｅ ｒ ，
项 目（ ２ ０ｌ ２ ５４１ ３ ６）
作者简介 ： 郑新 宝（ １ ９ ７ １ 一） ， 男， 助理研 究员， 研 究方 向 ： 动 物 遗 传 育 种 与繁 殖 。
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２ ０ １ ３年 １ １ 月 第 ６期 （ 总第 １ ６ ３ 期）
１ ． ４ 主 要 试 剂 及 配 置
Ｉ Ｏ Ｏ Ｖ 电泳 ３ ０ ａ ｒ ｉ ｎ左右 ， 经 暗箱式 紫 外线 透射 仪观 察检 测结 果 。 之后 用凝 胶成 像 系统 照相 。
１ ． ７ Ｐ ＣＲ 反 应
１ ． ７ ． １ Ｐ Ｃ Ｒ引物 设计 （ 见表 １ ） 表 １ Ｐ ＣＲ引 物设计
频率 分别 为 ０ ． ６ １ ７ １ 、 ０ ． ３ ２ ７ ８ 、 ０ ． ０ ５ ５ １ ， 且 达到 平衡状 态。三种基 因型与 泌乳 性状 的 关联性 分析 表 明 ， Ｂ基 因
对 中 国荷斯 坦奶 牛乳 脂率 有显 著影响 关键词 ： 中国荷 斯坦奶 牛 ； Ｋ一 酪蛋 白； 基 因多态性 ； 泌乳性 能 ： 关联性 分析
研究 了 中国荷 斯坦 牛群体 中酪 蛋 白基 因单 核苷 酸多 态性 与泌乳 性状 的关联 性 ， 为荷斯 坦奶 牛 的高乳 蛋 白 及 高乳脂 率新 品 系的培育 和早 期选 种选育 提供 参考 依据 。 １ 材 料 及 方 法
１ ． １ 试 验 样 品
本 试验 以新 疆 天 山畜 牧 生物股 份 有 限公 司种公 牛站 荷斯 坦种 公 牛和 奶 牛繁 育场 高 产荷 斯坦 奶 牛 为 研究 对象 ， 共 采集荷 斯坦 奶牛 血样 ３ ６ ３头份 。 样 品用 Ｅ Ｄ Ｔ Ａ抗 凝采 血管 ， 采用 颈静 脉方 法采集 。 样 品采集 混匀 后低 温带 回实 验窒 ， 一 ２ Ｏ℃保 存备 用 。
２ ０ １ ３年 １ １月 第 ６期 （ 总第 １ ６ ３ 期）
草食 家畜 （ 双 月刊 ）
中国荷斯坦奶牛 Ｋ一酪蛋 白基 因 多态性 与泌 乳性能关联性分析
郑 新 宝 ， 吴 琳 娜 ， 徐 世 永 ， 毋 状 元
（ １ ． 新 疆畜 牧科 学 院畜牧科 学研 究所 ， 新疆
１ ． ２ 性 状 的 表 型 记 录
试 验个 体均 有 完整 的档 案 资料 和生 产性 能 测定 （ Ｄ Ｈ Ｉ ） 记录， 包括 ： ３ ０ ５ ｄ产 奶 量 、 乳 蛋 白率 、 乳 脂 率 等
产 奶 记 录 、
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主要 仪器 设备 Ｐ Ｃ Ｒ扩 增仪 、 一 ２ ０℃冰箱 、 电热 恒温 水浴 锅 、 电 子天 平 、 磁 力搅 拌 器 、 水 平 电泳仪 、 多 功 能 暗箱式 紫 外
中图分 类 号 ： Ｓ ８ ｌ ３ － ３ 文献标 识码 ： Ａ 文章编 号 ： １ ０ ０ ３ — ６ ３ ７ ７ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ６ — ０ ０ ４ ０ — ０ ４
Ｋ 一 酪 蛋 白（ Ｋ — Ｃ Ｎ ） 是牛乳 腺分 泌 的一种含 有少 量磷 酸基 的磷 蛋 白 。它 与 一 酪蛋白、 Ｂ 一 酪蛋 白一样 是 牛乳 中酪 蛋 白的组成 之一 。牛 Ｋ — Ｃ Ｎ在 牛乳 中含量 约 占总酪 蛋 白的 １ ３ ％， 是凝 乳酶 的天 然底物 现 已发 乌 鲁源自齐８ ３ ０ ０ ０ ０ ：
２ ． 金陵科 技学 院 ， 江苏
南京
２ １ ０ ０ １ ４ ）
摘 要 ： 本研 究采 用 Ｐ Ｃ Ｒ — Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ技 术检 测新 疆地 区 中国荷 斯 坦奶 牛 Ｋ — Ｃ Ｎ基 因 多态性 ， 并分析 了该基 因
多态性 与 奶牛 泌乳性 能的 关 系。结果表 明 ： 检 测群 体 Ｋ — Ｃ Ｎ基 因表 现 出三种基 因型 ： Ａ Ａ、 Ａ Ｂ 、 Ｂ Ｂ， 基 因型