lcelROD手性柱上的拆分特
液相色谱手性物质分离工作总结
THF，MtBE，CHCl3，CH2Cl2 乙酸乙酯，1,4-二氧环乙烷，丙酮, 甲苯（紫外吸收强）
液相色谱手性物质分离工作总结
方法步骤： • 了解待分离化合物样品结构信息 • 了解化合物反相色谱信息 • 样品前处理 • 选择合适的手性固定相（手性分析柱） • 优化流动相，柱温
Chiralcel AD
Chiralcel OJ
纤维素三（3,5-二甲苯基氨基甲酸酯）
淀粉三[（S）-α-甲基苯基氨基甲酸酯] 淀粉三（3,5-二甲苯基氨基甲酸酯）
纤维素三（4-甲基苯基甲酸酯）
含有芳香基、酰胺基、羰基、 硝基、氨基、磺酰基、氰基、 羧基、羟基等化合物的分离， 及具有不对称点的位阻大的 化合物的分离
液相色谱手性物质分离工作总结
手性固定相分类
• 刷（Brush）型或称为Prikle型 • 聚合物固定相（如纤维素、淀粉，合成的手性聚
合物） • 大环手性固定相（环糊精、手性冠醚、大环抗生
素） • 蛋白质（Protein）型 • 配体交换（Ligand exchange）型 • 分子印迹固定相
液相色谱手性物质分离工作总结
拆分 1974年Blaschke：由光学活性单体合成出用手性LC的手性聚合物 1975年Gram等：用手性冠醚发展出主-客体色谱 1979年Pirkle和House：合成出第 一个硅胶键合手性固定相，并应用于手
性LC分离 1979年Okamoto等：合成出手性LC的螺旋形聚合物 1982年Allenmark等：把琼酯键合的BSA用于手性LC 1983年Hermansson：把硅胶键合的a1-酸糖蛋白用于手性拆分 1984年Armstrong和DeMond：制备出硅胶键合环糊精固定相
要大于1%，且要有空白对照。 3. 也可以先以少量DMSO，DMF，CHCl2溶解，然后再用
手性药物的拆分
*
COOH
COOH
COOH
酶
H2N CH3
H
＋H
CH3
NHCOCH3
消旋丙氨酸
NH2
消旋乙酰丙氨酸
NHCOCH3
L-丙氨酸（溶于乙醇）D-乙酰丙氨酸 （不溶于乙醇）
三．色谱法
1. 高效液相色谱法(HPLC)
HPLC法包括直接法和间接法 直接法的分离原理：手性药物对映体之 一与手性固定相或手性流动相之间发生 分子间的三点作用,同时另一对映异构体 则发生两点作用,形成暂时的非对映异构 体的结合物质,前者较后者稳定,通过洗 脱使两对映异构体分离
优先结晶法是一种高效、简单而又快捷 的拆分方法，晶种的加入造成2个对映异 构体具有不同的结晶速率是该动态过程 控制的关键。 利用循环优先结晶方法进行拆分的实例： 抗高血压药物L－甲基多巴的拆分[5]，见 图（三）。
HO HO H3C COOH NH2
图（三）L－甲基多巴
1.3 逆向结晶法
在外消旋体的饱和溶液中加入可溶性某 一种构型的异构体（如R-异构体），添 加的（R）-异构体就会吸附到外消旋溶 液中的同种构型异构体结晶的表面，从 而抑制了这种构造体结晶的继续生长， 而溶液中的（S）-异构体结晶速度就会 加快，从而形成结晶析出。
奥沙西泮新戊酸酯
2．气相色谱法(GC)
在气相色谱仪中选择适当的吸附剂作固 定相(通常是手性固定相),使之选择性地 吸附外消旋体中的一种异构体,可以快速 分离手性化合物。 手性化合物的直接气相色谱分离,其关键 问题是必须找到一个合适的手性固定相, 如高聚物固定相、均三氮苯型固定相、 菊酰胺型固定相、光学活性金属络合物 固定相等。
手性药物的拆分
【案例揭秘】液质联用手性分离技术研究人体口服雷贝拉唑钠肠溶片后
【案例揭秘】液质联用手性分离技术研究人体口服雷贝拉唑钠肠溶片后液质联用手性分离（或拆分）技术研究人体口服雷贝拉唑钠肠溶片后(R)‐(+)和(S)‐(−)雷贝拉唑的立体选择性药代动力学Lu-Ning Sun，Yi‐Wen Shen，Yu‐Wen Ying，Duo Li，Teng‐Fei Li，Xue‐Hui Zhang，Ping Zhao，Li Ding，Yong‐Qing Wang摘要雷贝拉唑是一种有效的质子泵抑制剂，用于治疗胃酸相关的疾病。
为了同时测定人体血浆中雷贝拉唑对映体的含量，我们开发并验证了一种手性LC-MS/MS方法。
选择含有0.1%铵盐的乙腈作为蛋白沉淀剂。
选择ChialPak IC (4.6 mm × 150 mm, 5 μm)色谱柱对分析物进行分离，分离时间为8分钟。
流动相为含0.2%乙酸的10 mM乙酸铵-乙腈（35:65，v/v）。
使用API 4000质谱仪进行分析，多反应监测模式，雷贝拉唑对映体的母子离子对为m/z 360.1→242.2，内标为m/z346.1→198.1。
雷贝拉唑对映体和内标物（埃索美拉唑）的基质效应都不明显。
校正曲线在0.500～400 ng·ml-1的浓度范围内呈线性关系，日内精密度＜5.4%，日间精密度＜9.9%，准确度在−9.2%～9.3%之间。
样品在储存、制备和分析过程中未观察到手性转换，提示样品在本实验条件下稳定。
该方法应用于中国的健康受试者口服10 mg雷贝拉唑钠肠溶包衣片后，体内(R)‐(+)和(S)‐(−)雷贝拉唑的立体选择性药代动力学研究。
1.简介雷贝拉唑是一种质子泵抑制剂，通过阻断胃壁细胞的氢/钾腺苷三磷酸酶系统来降低胃酸的产生。
1,2雷贝拉唑肠溶包衣片已用于十二指肠、胃、食管溃疡的治疗。
2,3雷贝拉唑，其结构具有不对称硫原子(图1)，临床上常用其外消旋混合物（雷贝拉唑）或(R)(+)雷贝拉唑。
近期研究表明(R)(+)雷贝拉唑的药效作用优于(S)(−)雷贝拉唑。
第七章-化学手性制药工艺 第二节 外消旋体拆分
二、化学拆分法
外消旋底物 拆分试剂
非对映异构体 混合物
单一对映异 构体底物
水解
化学拆分
(结晶或柱层析)
单一非对映 异构体
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二、化学拆分法
★ 常用拆分试剂：
1）能分别与对映异构体反应，所生成的非对映异构体 有显著的物理性质差异；
2）所用拆分试剂自身具有足够高的光学纯度； 3）所用拆分试剂成本较低，便于回收。
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一、结晶拆分法 ✓ 优点：不需要加入拆分试剂，母液可以套用
多次，原料损耗小、设备简单，成本较低， 是比较理想的大规模拆分方法。 ✓ 缺点：必须采用间断式结晶，生产周期长， 拆分所得光学异构体的纯度不够高而需进一 步纯化。
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★ 注意： 所拆分的外消旋体属于外消旋混合物，而
非外消旋化合物。
➢ 外消旋混合物：是等量的两种对映异构体晶体的机 械混合物，虽然该混合物没有光学活性，但每个晶核 仅包含一种对映异构体； ➢ 外消旋化合物：晶体是两种对映异构体分子完美有 序的排列，每个晶核包含等量的两种对映异构体。
外消旋体 酸 碱 醇
醛、酮
光学拆分剂 麻黄碱、奎宁、α-苯乙胺等 酒石酸、扁桃酸、樟脑等 转化为酸性酯后，用活性碱拆分
光学活性的肼、酰肼等
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例如：度洛西汀合成中的化学拆分
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★ 不对称转换法制备D-脯氨酸：
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三、动力学拆分法 利用两个对映异构体在手性试剂或性催
化剂作用下反应速率的不同而使其分离。 ➢ 过程简单，生产效率高； ➢ 可以通过调整转化程度提高剩余底物的对映 体过量。
第七章 化学手性制药工艺
第一节 概述 第二节 外消旋体拆分 第三节 不对称合成反应
1
推荐阅读： 《手性药物质量控制研究技术指导原则》
有机化学基础知识点手性化合物的分离与合成
有机化学基础知识点手性化合物的分离与合成有机化学基础知识点：手性化合物的分离与合成手性化合物在有机化学领域中扮演着重要的角色，它们具有两种非对称的镜像异构体，即左旋和右旋。
手性化合物的分离与合成是有机化学中的一项重要技术和研究内容。
本文将探讨手性化合物的分离与合成的基础知识点。
一、手性化合物的分离方法1. 基于手性配体的手性柱层析法手性柱层析法是一种基于手性配体与目标分子之间的亲和性进行分离的方法。
通过选择适当的手性配体，可以实现对手性化合物的分离纯化。
例如，利用氨基酸衍生物作为手性配体，可以成功地分离出手性氨基酸和手性药物等。
2. 经典拆分结晶法经典拆分结晶法是一种通过晶体生长的方式分离手性化合物的方法。
通过合适的溶剂和配体选择，可以在晶体生长过程中实现手性化合物的拆分和纯化。
这种方法适用于一些具有较高拆分度的手性化合物。
3. 手性萃取法手性萃取法是一种利用手性选择性较大的手性萃取剂对手性化合物进行分离的方法。
通常通过控制温度、pH值和萃取剂浓度等条件，实现对手性化合物的选择性萃取。
手性萃取法在手性酮、手性醇以及手性药物等的分离中得到了广泛应用。
二、手性化合物的合成方法1. 左旋-右旋互换法左旋-右旋互换法是一种将一种手性化合物转化为其对映异构体的方法。
通常可通过二氧化硫气体的作用，将左旋手性化合物转化为右旋手性化合物，或者通过酸碱反应进行互换。
这种方法在手性药物和手性农药的合成中得到了广泛应用。
2. 手性催化剂的应用手性催化剂是一种能够选择性地促使手性化合物发生反应的催化剂。
通过催化剂的选择，可以实现手性化合物的不对称合成。
例如，手性金属配合物催化剂在不对称氢化和不对称还原反应中起到了关键作用。
3. 有机合成中的修饰法有机合成中的修饰法是一种通过对已有手性分子进行化学修饰，合成新的手性分子的方法。
通过对已有手性分子的保留或改变官能团，可以得到一系列具有不同手性的化合物。
这种方法在新药开发和杂环合成中得到了广泛应用。
手性分离
手性色谱柱知识介绍手性色谱柱（Chiral HPLC Columns）是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（Chiral Stationary Phases）。
通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。
要实现手性识别，手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用。
这种相互作用包括氢键、偶级-偶级作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用。
手性分离效果是多种相互作用共同作用的结果。
这些相互作用通过影响包埋复合物的形成，特殊位点与分析物的键合等而改变手性分离结果。
由于这种作用力较微弱，因此需要仔细调节、优化流动相和温度以达到最佳分离效果。
在手性拆分中，温度的影响是很显著的。
低温增加手性识别能力，但可能引起色谱峰变宽而导致分离变差。
因此确定手性分析方法过程中要考虑柱温的影响，确定最优柱温。
迄今为止，尚没有一种类似十八烷基键合硅胶（ODS）柱的普遍适用的手性柱。
不同化学性质的异构体不得不采用不同类型的手性柱，而市售的手性色谱柱通常价格昂贵，因此如何根据化合物的分子结构选择适用的手性色谱柱是非常重要的。
根据手性固定相和溶剂的相互作用机制，Irving Wainer首次提出了手性色谱柱的分类体系[1]：第1类：通过氢键、π-π作用、偶级-偶级作用形成复合物。
第2类：既有类型1中的相互作用，又存在包埋复合物。
此类手性色谱柱中典型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱。
第3类：基于溶剂进入手性空穴形成包埋复合物。
这类手性色谱柱中最典型的是由Armstrong 教授开发的环糊精型手性柱[2]，另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物，如聚（苯基甲基甲基丙烯酸酯）形成的手性色谱柱也属于此类。
第4类：基于形成非对映体的金属络合物，是由Davankov开发的手性分离技术，也称为手性配位交换色谱（CLEC）[3]。
第5类：蛋白质型手性色谱柱。
手性分离是基于疏水相互作用和极性相互作用实现。
有机化学中的手性识别与拆分
有机化学中的手性识别与拆分有机化学是研究有机物质的结构、性质和变化的学科。
手性识别与拆分是有机化学中一个重要的研究领域，它涉及到手性化合物的性质、合成和应用等方面。
本文将从手性的概念、手性识别的方法、手性拆分的策略等方面进行探讨。
手性是指分子或物质的非对称性质。
在有机化学中，手性分子由不对称的碳原子或其他原子组成，它们的镜像异构体无法通过旋转或平移重叠，因此具有不同的性质。
手性分子的存在对于生命体系、药物研究和有机合成等领域具有重要意义。
手性识别是指区分手性分子的方法和技术。
目前，常用的手性识别方法包括光学方法、核磁共振方法、质谱方法和色谱方法等。
其中，光学方法是最常用的手性识别方法之一。
光学活性物质对于不同偏振光的旋光度有不同的响应，通过测量旋光度可以确定手性分子的结构和组成。
核磁共振方法则是通过测量手性分子在磁场中的响应来识别手性。
质谱方法和色谱方法则是利用分子的质量差异或分子在柱上的分离来实现手性识别。
手性拆分是指将手性分子分离为其对映异构体的过程。
手性拆分的策略多种多样，常见的手性拆分方法包括晶体拆分、化学拆分和生物拆分等。
晶体拆分是通过晶体生长的方式将手性分子分离为不同的晶体，进而得到对映异构体。
化学拆分则是通过化学反应将手性分子转化为其他化合物，从而实现手性分子的拆分。
生物拆分则是利用生物体系中的酶或其他生物分子对手性分子进行选择性催化，从而实现手性分子的分离。
手性识别与拆分在药物研究和合成中具有重要的应用价值。
在药物研究中，手性药物的对映异构体往往具有不同的药理活性和毒性。
因此，通过手性识别和拆分可以选择性地合成和使用具有更好活性和安全性的手性药物。
在有机合成中，手性识别和拆分可以帮助合成化学家选择性地合成手性分子，从而提高合成效率和产率。
总之，手性识别与拆分是有机化学中的重要研究领域。
通过手性识别和拆分，我们可以更好地理解和利用手性分子的性质，为药物研究和有机合成等领域提供更多的选择和可能性。
三唑农药的手性拆分及对映体的转化
DO I :10.3724/S P.J .1096.2010.00237三唑农药的手性拆分及对映体的转化李朝阳*1张艳川2李巧玲2王未肖1李景印11(河北科技大学理学院应化系,石家庄050018) 2(河北科技大学生物工程学院,石家庄050018)摘 要 利用Chiralce lO J H 和Chira l ce lOD H 手性柱对烯唑醇、三唑酮和三唑醇的手性拆分进行了研究,进一步测定了烯唑醇和三唑酮对映体的旋光性质,据此确定了两种农药对映体的绝对构型,在此基础上结合三唑酮转化为三唑醇的还原实验确定了三唑醇4个对映异构体的绝对构型。
考察了几种三唑农药在有机溶剂和缓冲溶液中的手性稳定性,其中三唑酮在甲醇、乙醇和水中存在明显的对映体转化行为,而烯唑醇和三唑醇则是手性稳定的,升高温度及碱性环境会加快三唑酮的对映体转化。
关键词 三唑农药;手性拆分;对映体转化;旋光;绝对构型2009 07 25收稿;2009 10 10接受本文系国家自然科学基金(N o .20707005)及教育部留学回国人员科研启动基金(No .教外司留[2009]1001号)资助项目*E m ai:l liz y666@yahoo .co 1 引 言目前使用的农药中手性农药占相当比例,手性农药的农药活性往往只存在于一个或少数几个对映体上,只含高活性对映体的光学纯活性农药的开发和使用是手性农药发展的一个趋势[1]。
值得注意的是,有些手性农药在特定条件下会发生对映体转化,即消旋化,如菊酯农药一般有2个或3个手性中心。
研究表明,在甲醇和水中某些菊酯的 手性碳会发生消旋化[2,3]。
由于很多农药剂型在复配中要使用有机溶剂和水,农药在喷洒后也会进入水体,对光学纯农药而言,这种对映体转化会产生低效或无效对映体,同时对映体转化也使得手性农药的环境行为和生态效应变得复杂。
手性农药种类众多,目前除了菊酯有少量对映体转化的研究报道外,其他的手性农药仍有待进行相关内容的深入考察。
手性药物拆分技术及分析
手性药物拆分技术及分析在药物研究和开发中，手性药物是一个非常重要的领域。
手性药物指的是分子结构中含有手性中心（手性碳原子）的化合物，左旋和右旋两种异构体具有不同的生物活性和体内代谢途径。
因此，正确地分析和分离手性药物对于药物研究和有效性的评估至关重要。
手性药物分析技术主要包括色谱法、光学活性法和核磁共振（NMR）法。
色谱法是一种常用的手性药物分析方法。
它基于手性药物的两种对映异构体在手性固定相上的不同吸附能力进行分离。
常见的色谱法包括高效液相色谱法（HPLC）和毛细管电泳法。
HPLC通常使用手性固定相柱，通过选择性地吸附左旋或右旋手性分子，实现对手性药物的分离。
毛细管电泳是一种高效的手性药物分析方法，基于对映异构体在电场中的迁移速率不同，通过毛细管中背景电解质的浓度和pH值调节来分离手性药物。
光学活性法是一种基于光学活性性质来分析和测定手性药物的方法。
光学活性手性药物由于具有旋光性，可以引起光的偏振方向发生旋转。
常用的光学活性法包括旋光仪法和圆二色光谱法。
旋光仪法是通过测定手性分子对光的旋转角度来判断手性药物的对映异构体的含量和比例。
圆二色光谱法则是测量手性分子对不同波长光的吸收性质，通过对波长的差异来判断手性药物的对映异构体。
核磁共振（NMR）是一种基于核磁共振现象来分析手性药物的方法。
NMR技术通过检测手性碳原子或核自旋的信号来确定手性药物的结构和对映异构体的比例。
通过对样品进行核磁共振实验后，通过解释谱图的峰位和峰形等信息，可以得到手性药物的分析结果。
此外，还有一些其他的手性药物分析方法，如质谱法、X射线衍射法和环光谱法等。
这些方法在手性药物分析中各有优劣，适用于不同类别和性质的手性药物。
总之，手性药物分析技术对于药物研究和评估的重要性不可忽视。
科学家们通过不断研究和发展新的手性分析技术，为新药开发和治疗提供了更可靠和准确的手性药物分析方法。
手性分子的拆分技术
手性分子的拆分技术郝婷玉1531025057 15级材料工程摘要：对外消旋体实施拆分是获得手性物质的重要途径。
本文综述了外消旋体的拆分方法，主要有直接结晶拆分法、化学拆分法、动力学拆分法、色谱拆分法( 含毛细管电泳法) 和手性膜拆分法等五大类。
其中, 包括目前作为手性拆分主要方法的色谱技术在内的前 4 类方法, 由于批处理能力小、工业放大成本高,不适合大规模生产; 相反,膜分离技术具有能耗低、易于连续操作等优点,被普遍认为是进行大规模手性拆分非常有潜力的方法之一,具有良好的应用前景。
关键词：手性分子；拆分；对映体；外消旋化合物手性是自然界存在的一种普遍现象, 在药物化学领域尤为突出,已知药物中有30 %～40 %是手性的。
手性是生物体系的一个基本特征, 很多内源性大分子物质,如酶、蛋白、核酸、糖, 以及各种载体、受体等都具有手性特征。
此外，手性还在医药、食品添加剂、杀虫剂、昆虫性信息素、香料和材料等领域有着深刻影响。
特别是在医药行业，手性药物对映体通过与体内大分子的立体选择性结合, 产生不同的吸收、分布、代谢和排泄过程, 可能具有不同的药理毒理作用[1]。
随着医药行业对手性单体需求量的增加和对药理的探究，如何获得高纯度手性单体已成为一个令人困扰的问题。
因此,手性药物的分离分析就显得尤为重要。
随着对手性分子认识的不断深入，人们对单一手性物质的需求量越来越大，对其纯度的要求也越来越高。
单一手性物质的获得方法大致有以下三种：（1）手性源合成法：是以手性物质为原料合成其它手性化合物，这是最常用的方法。
但由于天然手性物质的种类有限，要合成多种多样的目的产物会遇到很大困难，而且合成路线步骤繁多，也使得产物成本十分高昂。
（2）不对称合成法：是在催化剂或酶的作用下合成得到过量的单一对映体化合物的方法。
化学不对称合成高旋光收率的反应仍然有限，即使如此，所得产物的旋光纯度对于多数应用仍不够高；生物的不对称合成具有很高的选择性，反应介质通常为稀缓冲水溶液，反应条件温和，但对底物要求高、反应慢、产物的分离困难，因而在应用上也受到一定的限制。
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β2受体阻滞剂对映体在Chiralcel
○R
OD手性柱上的拆分特性
杨 非,王嗣岑,贺浪冲(西安交通大学药学院仪器分析中心,陕西西安 710061)
摘要:目的 研究β2受体阻滞剂对映体在Chiralcel○R手性柱上的拆分特性和规律。方法 色谱柱为Chiralcel
○R
OD手性
柱(250mm×4.6mm,10
μ
m),流动相为正己烷2异丙醇2三乙胺,荧光检测激发波长λ
ex275nm,发射波长λem310nm。
用溶质计量置换保留模型考察固定相和流动相中置换剂强度对拆分的影响,同时考察三乙胺及温度对保留与拆分的影响。结果 考察了5种β2受体阻滞剂,其中3种β2受体阻滞剂对映体在选定色谱条件下均得到了基线分离,其R2对映体的lgI值均高于S2对映体,置换剂异丙醇对各对映体拆分有不同的影响;三乙胺浓度的增大,各对映体的保留减小,而分离度增加;柱温升高,各对映体的保留及分离度均降低。结论 溶质计量置换保留模型的计量置换参数lgI和Z值,可以分别表征ChiralcelOD柱的拆分能力和各对映体空间效应;增加三乙胺浓度可提高拆分效率,适当的柱温可以改善和提高拆分效果。关键词:β2受体阻滞剂;纤维素键合手性固定相;手性拆分中图分类号:R917文献标识码:A文章编号:167128259(2004)0220124203
Theseparationofβ2adrenoceptorantagonistenantiomersonChiralcel○RODcolumn
YangFei,WangSicen,HeLangchong(CollegeofPharmacy,XiπanJiaotongUniversity,Xiπan710061,China)
ABSTRACT:Objective
Tostudytheenantioselectivecharacteristicsandlawsofβ2adrenoceptorantagonist
isomersonChiralcel○RODcolumn.Methods TheexperimentswereperformedunderthefollowingHPLCconditions:aChiralcelODcolumn(250mm×4.6mm,10μm)asanalyticalcolumn,amixtureofn2hexane/22propanol/triethylamineasthemobilephase,thefluorescencedetectionwavelengthsat275nm(λex)and310nm(λem),andtheflowrateat0.5mL・min-1.Theeffectofinteractionbetweenstationaryphaseand22propanolor
triethylamineconcentrationinmobilephaseontheenantiomerresolutionwereinvestigatedbythestoichiometricdisplacementmodelforretention.Results ThelgIvaluesofR2enantiomersof3outof5β2adrenoceptorantagonistwerehigherthanthoseofS2enantiomers.The22propanolinmobilephasewoulddifferentlyaffecttheresolutionbetweenenantiomersforeachβ2adrenoceptor.Withtheincreaseoftriethylamineconcentrationinmobilephase,thecapacityfactor(k′)oftheenantiomersdecreasedbuttheresolutionincreased.Conclusion ThelgIandZvaluesofSDM2RcouldbeemployedtocharacterizetheresolutionefficiencyofChiralcelODcolumnandthespecificeffectofenantiomersinteractedwiththestationaryphase.Addingtriethylamineinmobilephasewillincreasetheresolutionefficacyandchangingcolumntemperaturecanpromoteenantiomerresolution.KEYWORDS:β2
adrenoceptorantagonist;ChiralcelODcolumn;enantiomericseparation
收稿日期:2003204221 修回日期:2003210220
通信作者:贺浪冲.Tel:(029)82655142,E2mail:helc@mail.xjtu.
edu.cn作者简介:杨非(19772),女(汉族),硕士生.
β2受体阻滞剂是临床上用于治疗心率失常、心绞痛、高血压及甲状腺机能亢进等疾病的有效药物1,2。大部分β2受体阻滞剂如阿替洛尔、美托洛尔及氧烯洛尔等为含手性因素的对映体药物,但均以消旋体用药3,4。实验研究表明,β2受体阻滞剂各对映体在体内的药代动力学5、药理作用6和毒性7均存在明显差异性,建立对映体的HPLC拆分方法并研究其拆分特性是手性药物研究的基础性课题。纤维素键合手性固定相是直接拆分对映体的一类有效固定相。日本Daicel公司开发的商品纤维素氨基甲酸脂类有Chiralcel(OD、OJ、OC、OG、OF)系列,其中ChiralcelOD柱适宜于拆分β2受体阻滞剂。本文首次利用溶质计量置换模型8,9,从溶质、置换剂和
固定相的作用特性研究了5种β2受体阻滞剂对映体在ChiralcelOD柱上的拆分规律,并以阿替洛尔为例
第25卷第2期2004年4月西安交通大学学报(医学版)
JournalofXiπanJiaotongUniversity(MedicalSciences)Vol.25No.2Apr.2004考察流动相及柱温对拆分的影响,为β2受体阻滞剂各对映体拆分和体内过程差异性研究奠定方法学基础。1 材料与方法1.1 仪器与试药 Shimadzu10Avp型高效液相色谱系统,配置LC210ATvp溶剂输送泵,RF2535型荧光检测器(日本岛津);Anastar色谱工作站(天津);LKB22219循环水浴(瑞士)。消旋体阿替洛尔(atenolol)、美托洛尔(metanolol)、氧烯洛尔(oxprenolol)、吲哚洛尔(pin2dolol)及新依比灵(isoproterenol)、S2阿替洛尔和R2阿替洛尔标准品(美国Sigma公司);正己烷、异丙醇及三乙胺(AR,西安化学试剂厂)用前重蒸,水为去离子三蒸水(本实验室自制)。1.2 药品标准溶液 精密称取各药物标准品适量,用甲醇溶解定容,配制成1g・L-1的标准品储备液,低温避光保存。试验用标准溶液依此储备液用流动相稀释得到(当天新配)。1.3 分析条件 色谱条件:色谱柱:Chiralcel○ROD柱(250mm×4.6mm,10μm);荧光检测(λex275nm,λem310nm);流动相:正己烷2异丙醇2三乙胺;流速0.5mL・min-1;柱温用循环水浴控制。1.4 分析方法1.4.1 溶质计量置分析 流动相中置换剂强度对拆分的影响,用溶质计量置换保留模型(stoichiometricdisplacementmodelforretention)10的简化表达式研究。公式为:lgk′=lgI-ZlgD(1)式中:k′为容量因子,lgI反映对映体分子对固定相亲合势的常数;Z为反映对映体分子与固定相接触面积变化的计量置换参数;D为流动相中置换剂的浓度。本实验中的置换剂为异丙醇,浓度在1.9～6.6mol・L-1范围内改变,考察对映体的计量置换参数(lgI,Z)、分离度(Rs)和容量因子(k′)。1.4.2 其他影响因素分析 流动相碱度对拆分的影响,通过在0.05～0.25mol・L-1添加范围内改变三乙胺的浓度,考察对映体的分离度;柱温对拆分的影响。通过循环水浴使柱温在4～40℃之间变化,考察对映体的容量因子和分离度。2 结 果2.1 置换剂强度对拆分的影响 流动相中三乙胺的浓度为0.12mol・L-1,异丙醇在1.9～6.6mol・L-1之间变化。结果随异丙醇浓度的改变。5种β2受体阻滞剂对映体的容量因子(k′)、分离因子(α)和分离度(R
s
)变化趋势如表1所示。
表1 5种β2受体阻滞剂ChiralcelOD柱上的拆分结果Table1 Theseparationofβ2adrenoceptorantagonistonChiral2celOD
DrugtR
S2ER2Ek′S2ER2E
αR
s
Atenolol26.4433.154.916.181.261.93Oxprenolol11.7628.912.185.372.469.74Metanolol9.2512.851.722.391.394.81Pindolol31.275.7710Isoproterenol11.752.1710
Note:R2EisR2enantiomer;S2EisS2enantiomer.
表2 β2受体阻滞剂对映体在溶质计量置换保留模型中的参
数值Table2 Theparametervaluesofβ2adrenoceptorantagonistonstoichiometricdisplacementmodelforretention
DrugIgIS2ER2EZ
S2ER2ER2S2ER2E
Atenolol1.431.541.891.810.9970.981Metanolol0.910.940.360.610.9260.980Oxprenolol0.170.420.380.640.9640.971Pindolol1.562.900.971Isoproterenol1.351.840.970
Note:R
2isthecorrelationcoefficientwithEq(1).
2.2 流动相中三乙胺的影响 采用正己烷2异丙醇(70∶30)为流动相,其中添加不同浓度的三乙胺,以阿
替洛尔为例,测定三乙胺浓度对阿替洛尔拆分的影响(图1)。
图1 三乙胺对阿替洛尔对映体保留(a)和拆分(b)的影响Fig.1Theeffectoftriethylamineinmobilephaseonthereten2tion(a)andseparation(b)ofatenolol2.3 柱温对拆分的影响 以正己烷2异丙醇2三乙胺(70∶30∶0.5)为流动相,柱温在4～40℃之间变化。