免疫组化染色技术
检验科免疫组化常见检测与分析方法
检验科免疫组化常见检测与分析方法免疫组化技术是一种利用免疫学原理，通过检测和定位特定蛋白质在组织或细胞中的表达水平和位置的方法。
在医学检验科中，免疫组化技术被广泛应用于疾病的诊断、治疗及预后评估。
本文将介绍一些常见的免疫组化检测与分析方法。
一、免疫组化染色法免疫组化染色法是免疫组化技术中最常用的方法之一。
它通过采用免疫荧光、酶标记、金标记或放射性标记等技术，将特定抗原与特异性抗体结合，并通过染色或荧光的方式来显示其位置和表达水平。
免疫组化染色法广泛应用于各种疾病的诊断，如肿瘤标记物的检测、感染性疾病的诊断等。
二、免疫组织化学法免疫组织化学法是一种在组织切片上进行免疫组化染色的方法。
它通过对切片进行蛋白质抗原的恢复处理和抗体的特异性结合，来检测和显示抗原在组织中的位置和表达水平。
免疫组织化学法主要应用于病理学领域，帮助医生确定疾病的类型和分级。
三、免疫荧光法免疫荧光法是利用特异性抗体与抗原结合后，在显微镜下观察抗原在组织或细胞中的分布情况和表达水平的技术。
免疫荧光法具有高灵敏度和高特异性的优点，被广泛应用于自身免疫性疾病、感染性疾病等的诊断。
四、免疫电镜法免疫电镜法是一种在电镜下观察和检测抗体与抗原结合的方法。
它通过在样品上标记抗体或抗原，然后利用电镜来观察并获得高分辨率的图像。
免疫电镜法主要用于对超微结构进行研究和观察，是研究细胞和组织的重要手段。
五、免疫组化信号放大技术免疫组化信号放大技术是一种能够放大免疫染色信号并提高染色效果的方法。
常见的免疫组化信号放大技术包括多聚酶法、银增强法、酶蛋白复合物法等。
这些技术在免疫组化检测中可以提高检测的灵敏度和准确性。
免疫组化技术因其高度敏感、高特异性和定量分析的优势，成为了疾病诊断与治疗中不可或缺的重要方法。
随着技术的发展和创新，免疫组化技术将在临床医学中发挥越来越重要的作用。
综上所述，本文介绍了免疫组化检测与分析的常见方法，包括免疫组化染色法、免疫组织化学法、免疫荧光法、免疫电镜法以及免疫组化信号放大技术。
磷酸化指标免疫组化染色
磷酸化指标免疫组化染色磷酸化指标免疫组化染色：揭示蛋白质修饰的重要工具引言：在生物学研究中，了解蛋白质的修饰状态对于探索细胞信号传导、蛋白质功能以及疾病发生机制至关重要。
磷酸化作为一种常见的蛋白质修饰方式，参与了细胞的多种生理和病理过程。
磷酸化指标免疫组化染色是一种重要的实验手段，可以定量检测磷酸化蛋白质的表达和定位。
本文将从深度和广度上详细探讨磷酸化指标免疫组化染色的原理、技术流程和应用，并分享我对其个人观点和理解。
一、原理：1. 磷酸化的意义与作用磷酸化是一种通过在蛋白质分子中加入磷酸基团改变其结构和功能的修饰方式。
它参与了细胞信号传导、基因转录、细胞周期调控等重要生理过程，对于维持细胞的功能和稳态至关重要。
2. 磷酸化指标免疫组化染色的基本原理磷酸化指标免疫组化染色是一种通过特异性抗体与磷酸化蛋白质结合来检测和定量磷酸化蛋白质表达和定位的技术。
它利用免疫组化的原理，通过特异性抗体的结合，使得磷酸化蛋白质在组织切片或细胞标本中形成可视化的染色信号。
二、技术流程：1. 样本的制备与固定研究者需要选择适当的样本（组织切片或细胞标本）进行研究，并进行必要的固定处理，以保持蛋白质的磷酸化状态和细胞结构的完整性。
2. 抗体选择与优化磷酸化指标免疫组化染色的关键是选择和优化合适的抗体。
研究者需要根据研究的具体目的，在各种商业或自制的抗体中筛选出能够特异性识别目标磷酸化位点的抗体。
3. 抗原解蔽处理研究者需要对样本进行抗原解蔽处理，以提高抗体的结合能力。
抗原解蔽处理可以通过热解蔽、酶解蔽或碱解蔽等方法进行。
4. 抗体染色与信号放大将特异性抗体与样本中的磷酸化蛋白质结合，形成可见的染色信号。
为了增强信号的强度和稳定性，可以采用生物素-链霉亲和素（Biotin-avidin）系统和荧光标记等方法进行信号放大。
5. 染色结果的观察与分析通过显微镜观察染色结果，观察磷酸化蛋白质的表达和定位情况。
可以使用图像分析软件对染色结果进行定量分析，以获得更为准确的数据。
免疫组化染色评分标准
免疫组化染色评分标准
免疫组化染色评分是通过分析免疫染色取得的信号来判断蛋白质表达强度的方法。
以下是一般情况下使用的评分标准：
1. 快速评估：首先根据样本颜色和染色强度来判断阳性细胞的比例（比如：0-10%为阴性，10-30%为弱阳性，30-60%为中度阳性，60-100%为强阳性）
2. 细节评估：在快速评估的基础上，根据细胞膜、胞核或胞质等位置的染色强度来判断细胞的表达强度（比如：0为无表达，1+为弱表达，2+为中等表达，3+为强表达）
3. 分段评分法：根据膜、胞核或胞质位置的染色强度，将细胞分为不同的等级，然后统计每个等级的细胞数所占比例（比如：等级1（0-10%强度）为1分，等级2（11-40%强度）为2分，等级3（41-70%强度）为3分，等级4（71-100%强度）为4分），最后将所有得分加起来，得到总分。
免疫组化染色评分标准因不同研究需要而略有差异，需要根据实际情况进行调整。
常用免疫组化染色方法SP法免疫组化染色
常用免疫组化染色方法SP法免疫组化染色1. 原理：链霉素抗生物素蛋白（SA）是从链霉素中分离出的蛋白质，穿透组织的能力比ABC、PAP复合物大，反应速度快，它含有四个亚基，每个亚基都有与生物素（Biotin）连接的部位，且二者间有极强的亲和力，SA的等电位接近于6.5，近中性，而卵白素（Avidin）为10，因此，SA几乎不与组织中的内源性凝集样物质发生非特异性结合，使用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶放大系统，即可产生低背景、高放大效果。
S-P采用生物素标记的第二抗体与链霉素抗生物素蛋白连接的过氧化物酶及基质素混合液来测定细胞和组织中的抗原。
2. 基本染色方法：（1）石蜡切片脱蜡至水。
（2）3%H202室温孵育5～10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。
（3）蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟，(如需采用抗原修复，可在此步后进行)。
（4）5～10%正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温孵育10分钟。
倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37℃孵育1～2小时或4℃过夜。
（5）PBS冲洗，5分钟×3次。
（6）滴加适当比例稀释的生物素标记二抗（1%BSA-PBS稀释），37℃孵育10～30分钟; 或滴加第二代生物素标记二抗工作液，37℃或室温孵育10～30分钟。
（7）PBS冲洗，5分钟×3次。
（8）滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素(PBS 稀释)，37℃孵育10～30分钟；或第二代辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃或室温孵育10～30分钟。
（9）PBS冲洗，5分钟×3次。
（10）显色剂显色（DAB或AEC）。
（11）自来水充分冲洗，复染，封片。
（附，冰冻切片免疫组化染色步骤：冰冻切片4~8um，室温放置30分钟后，入4℃丙酮固定10分钟，PBS洗，5分钟×3次。
用3%过氧化氢孵育5～10分钟，消除内源性过氧化物酶的活性。
PBS洗，5分钟×2次。
免疫组化染色信号减弱的原因
免疫组化染色信号减弱的原因1.引言1.1 概述免疫组化染色是一种常用的实验技术，主要用于检测和定位细胞或组织中特定蛋白质的表达与分布情况。
免疫组化染色的结果通常通过观察显微镜下的染色信号来分析目标蛋白质的存在与表达水平。
然而，在某些情况下，免疫组化染色的信号可能会出现减弱的现象，即目标蛋白质的染色信号强度较低或难以观察到。
出现这种问题的原因可能是多方面的。
首先，可能是由于实验中的操作问题导致的。
例如，在固定细胞或组织时，固定剂的配比、浓度和处理时间等因素会直接影响到染色结果。
不当的固定条件可能会导致蛋白质丢失、改变染色性能或造成交叉反应，进而影响染色信号的强度。
其次，可能是由于抗体的选择和性能问题。
在免疫组化染色中，选择合适的抗体是非常重要的。
抗体的亲和力、特异性和纯度等因素都会对染色结果产生影响。
如果选择的抗体与目标蛋白质的结合特异性较低，或者存在交叉反应的问题，都可能导致染色信号的减弱。
此外，染色试剂的质量也是影响染色信号减弱的因素之一。
染色试剂如二抗、荧光染料等的质量差异可能导致染色信号的变弱。
因此，在实验过程中，需要严格控制试剂的质量和储存条件，以确保染色试剂的稳定性和有效性。
最后，样品预处理过程中可能存在一些问题。
样品的预处理包括脱脂、脱水、脱胶原等步骤，这些步骤的不当操作可能导致蛋白质的丢失或损伤，从而影响染色信号的强度。
总的来说，免疫组化染色信号减弱的原因可能涉及实验操作问题、抗体选择与性能、染色试剂质量以及样品预处理等多个方面。
在进行免疫组化染色实验时，务必要小心操作、选择合适的抗体和试剂，并严格控制样品预处理过程，以获得准确可靠的染色结果。
1.2文章结构文章结构部分的内容可以包括以下几个方面：1.2 文章结构本文主要包含以下几个部分：引言部分：介绍免疫组化染色在疾病诊断和研究中的重要性，以及免疫组化染色信号减弱的问题。
正文部分：列举和探讨导致免疫组化染色信号减弱的主要原因，包括可能的技术因素和样本处理因素。
皮肤免疫组织化学染色诊断
皮肤免疫组织化学染色诊断全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：皮肤免疫组织化学染色诊断是指通过对皮肤组织中特定免疫标记物的染色，来诊断皮肤病变的一种方法。
在临床实践中，皮肤免疫组织化学染色诊断逐渐被广泛应用，以帮助医生准确定位和诊断各种皮肤疾病。
皮肤是人体最大的器官，也是免疫系统的重要部分。
皮肤免疫组织化学染色诊断的重要性在于它可以帮助医生了解皮肤组织中不同免疫标记物的表达情况，从而帮助确诊和治疗各种皮肤病。
在进行皮肤免疫组织化学染色诊断时，医生通常会采集患者皮肤组织标本，然后对标本进行特定抗体的染色，最后通过显微镜观察染色结果，以确定病变的类型和程度。
在皮肤免疫组织化学染色诊断中，常用的标记物包括细胞表面标记物、细胞内标记物和细胞外标记物。
通过对这些标记物的染色，医生可以判断细胞的类型和功能，从而帮助诊断皮肤病变。
对皮肤组织中CD4和CD8的染色可以帮助鉴别T细胞的亚群，对IgA和IgE的染色可以帮助诊断过敏性皮肤病。
对于皮肤内炎症反应的研究，还可以通过对组织中炎性因子和细胞因子的染色来进行定量和定位分析。
皮肤免疫组织化学染色诊断在临床应用中具有重要的意义。
它可以帮助医生对皮肤病变进行准确定位和诊断，从而为患者提供更好的治疗方案。
通过对不同免疫标记物的染色，可以更好地了解皮肤病变的病理机制，为疾病的研究和治疗提供重要参考。
皮肤免疫组织化学染色诊断还可与其他诊断方法相结合，提高诊断的准确性和敏感性。
在进行皮肤免疫组织化学染色诊断时，也需要注意一些问题。
染色过程中需要选择合适的抗体和染色试剂，否则可能引起假阳性或假阴性结果。
由于皮肤组织结构复杂，染色结果可能受到组织处理和切片技术的影响，因此需要标本处理和操作精准。
对于某些罕见的皮肤病变，可能需要多种抗体联合染色才能确诊。
第二篇示例：皮肤免疫组织化学染色诊断是一种重要的诊断方法，在皮肤病学领域具有广泛的应用。
随着医学技术的不断进步，皮肤免疫组织化学染色诊断的准确性和可靠性也日益提高。
免疫组化染色分类
免疫组化染色分类
免疫组化染色分类，即免疫组织化学染色分析，在肿瘤学领域是一种
对肿瘤病理诊断带来积极意义的技术。
免疫组化染色利用特异性抗体
与肿瘤细胞的表面蛋白进行特异性结合，从而标记出肿瘤细胞的特征，使得医生能够更加精确地制定诊疗方案。
免疫组化染色分类按照抗体种类不同，可以分为多种类型。
其中，常
见的免疫组化染色分类包括：
1. 细胞角蛋白分类：细胞角蛋白属于一类在细胞层和皮肤表面具有重
要生物学功能的蛋白质。
肿瘤的恶性程度与其对细胞角蛋白的表达水
平有着密切关系，在免疫组化染色分类中，医生通常会用抗细胞角蛋
白抗体对肿瘤细胞进行染色，并根据染色结果判断癌细胞的类型。
2. 内皮细胞标记分类：内皮细胞标记分类，是指利用免疫组化染色技
术来检测肿瘤内皮细胞的表面标记，从而帮助医生鉴别肿瘤的恶性程
度及其类型。
3. 酪氨酸激酶分类：酪氨酸激酶分类是一种比较常见的免疫组化染色
分类方法，它通常用于判断癌细胞在生长及转移过程中所表现出来的
特征。
4. 雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）分类：ER和PR是乳腺癌发生的关键因素之一，在免疫组化染色分类中，医生通常会使用免疫组化染色技术来判断肿瘤细胞对雌激素和孕激素的反应能力，从而确定最佳的治疗方案。
总之，免疫组化染色分类技术在肿瘤学领域发挥着非常重要的作用。
通过对不同类型的免疫组化染色分类技术的应用和研究，医生可以更加准确地判断肿瘤的类型和恶化程度，从而制定出更加科学合理的治疗方案，提高治疗效果。
免疫组化法和免疫荧光染色法的区别
免疫组化法和免疫荧光染色法是生物医学领域常用的实验技术，它们在细胞和组织的研究中扮演着重要的角色。
虽然它们都是用于检测特定蛋白在生物样本中的表达情况，但在操作方法、原理和应用范围上却有着明显的区别。
在本文中，我将深入探讨这两种技术的区别，并就其在生物医学研究中的应用进行全面评估，以期帮助读者更深入地理解并灵活运用这两种技术。
1. 免疫组化法免疫组化法是一种用于检测组织或细胞中特定蛋白表达的技术。
它的操作流程大致包括取材、固定、脱水、包埋、切片、脱蜡、抗原修复、蛋白质检测、染色和显微镜观察等步骤。
在实验过程中，首先需要将样本切片，并通过特定的固定、脱水和包埋步骤将其固定在载玻片上。
随后，利用抗原修复方法还原蛋白的空间结构，以便后续的免疫染色。
接下来，通过加入特定的抗体和标记物，可以对目标蛋白进行特异性染色，并最终通过显微镜观察蛋白在组织或细胞中的表达情况。
2. 免疫荧光染色法免疫荧光染色法是利用特定抗体与荧光染料结合，通过检测荧光信号的方式来标记和检测生物样本中的特定蛋白表达。
它的操作流程也包括取材、固定、脱水、包埋、切片等步骤，与免疫组化法的操作步骤较为类似。
不同的是，在免疫荧光染色法中，需要利用特定的荧光标记的二抗或荧光素-抗素进行染色，通过激光共聚焦显微镜等设备观察样本中荧光的分布情况，从而检测目标蛋白的表达位置和水平。
在应用范围方面，免疫组化法主要用于研究组织切片或细胞样本中特定蛋白的表达情况，可以定量地评估蛋白的表达水平和分布情况，适用于体内和体外实验样本。
而免疫荧光染色法由于其高灵敏度和高分辨率的特点，适用于细胞共聚焦显微镜观察，可以用于检测细胞中蛋白的定位、表达和相互作用等，是细胞生物学和免疫学研究中常用的技术手段。
在本文中，我主要介绍了免疫组化法和免疫荧光染色法的操作原理、步骤和应用范围，并就其在生物医学研究中的应用进行了全面评估。
通过对这两种技术的深入了解，我们可以更好地选择合适的技术手段，并在实验设计和结果分析中更加灵活地运用这些技术来开展生物医学研究。
免疫组化HE染色步骤
免疫组化HE染色步骤免疫组化和HE染色是在病理学中常用的技术，用于对组织样本进行分析和诊断。
下面将详细介绍免疫组化和HE染色的步骤。
免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种通过使用抗体来检测组织样本中特定抗原的技术。
它可以用于确定细胞或组织中特定蛋白质的位置和表达水平。
免疫组化主要包含以下步骤：1.取得组织样本：首先需要从患者的切除组织或活检组织中获取样本。
样本通常以固定和包埋的形式保存在蜡块中。
2. 切片：将蜡块切割成非常薄的切片（通常为4-5um）。
这些切片通常被放置在载玻片上。
3.去蜡和脱水：跳过这一步，因为该步主要是用于从蜡中去除组织样本。
已经固定在切片上的组织样本无需这一步。
4.抗原检出：在这一步中，需要使用一种抗体来标记想要检测的抗原。
这个抗体会与目标蛋白质结合，并形成一种可以用来检测的复合物。
5.清洗：使用缓冲液对切片上的抗体复合物进行清洗，以去除未结合的抗体。
6.显色：在这一步中，需要使用一种可独特识别的物质来标记已结合的抗体。
典型的显色素有DAB、VIP等。
7.顶气及封片：使用适当的溶剂和覆盖剂对切片进行顶气和封片，以保护其结构并使其可供观察。
通过观察组织样本中的抗原的显色情况，可以确定抗原在组织中的分布和表达水平。
免疫组化广泛应用于病理学诊断中，可以帮助医生进行肿瘤分类、病理分级以及预后评估等。
HE染色（Hematoxylin and Eosin staining）是一种常用的组织染色技术，主要用于病理学的初步观察和诊断。
HE染色主要包含以下步骤：1.取得组织样本：与免疫组化相同，首先需要从患者的切除组织或活检组织中获取样本。
样本通常以固定和包埋的形式保存在蜡块中。
2. 切片：将蜡块切割成非常薄的切片（通常为4-5um）。
这些切片通常被放置在载玻片上。
3.去蜡和脱水：类似于免疫组化，这一步主要用于从蜡中去除组织样本。
4.染色：在这一步中，使用两种染色剂：血红素和紫杉醇。
免疫组化的原理及操作规程
免疫组化的原理及操作规程免疫组化，即免疫组织化学染色技术，是一种利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（如荧光素、酶、金属离子、同位素等）显色，从而确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质）的定位、定性及相对定量的研究方法。
该技术广泛应用于临床病理诊断、生物医学研究以及药物开发等领域。
本文将详细介绍免疫组化的原理及操作规程。
一、免疫组化的原理免疫组化的基本原理是抗原与抗体的特异性结合。
抗原是指能够刺激机体产生免疫应答，并能与免疫应答产物（抗体或致敏淋巴细胞）发生特异性结合的物质。
抗体是机体的免疫细胞在抗原刺激下产生的具有特异性识别能力的免疫球蛋白。
在免疫组化中，通常将目标抗原（如某种蛋白质或多肽）作为待检测物，通过特定的抗体与之结合，再利用标记技术使抗体可视化，从而实现对目标抗原的定位、定性和定量研究。
免疫组化的标记技术主要有直接法和间接法两种。
直接法是将标记物（如荧光素、酶等）直接标记在抗体上，使其与目标抗原结合后直接显色。
间接法则是利用未标记的抗体（一抗）先与目标抗原结合，然后再通过标记的二抗（与一抗特异性结合的抗体）与一抗结合，最终实现显色。
间接法具有更高的灵敏度和灵活性，因此在实际应用中更为常见。
二、免疫组化的操作规程免疫组化的操作规程主要包括以下几个步骤：1. 标本处理：根据实验需求选择合适的组织标本，并进行固定、脱水、包埋等处理，制备成组织切片或细胞涂片。
固定是为了保持组织或细胞的形态结构，防止抗原丢失；脱水则是为了去除组织中的水分，便于后续操作；包埋则是将组织块包裹在支持物（如石蜡）中，便于切片。
2. 抗原修复：由于固定和脱水等处理过程可能导致抗原表位的遮蔽或改变，因此在进行免疫组化染色前，需要对抗原进行修复。
常用的修复方法包括热修复、酶修复和酸修复等。
具体方法应根据实验需求和抗原性质进行选择。
3. 阻断内源性酶活性：为了避免组织内源性酶对后续显色反应的干扰，需要使用相应的阻断剂（如过氧化氢）对内源性酶活性进行阻断。
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[分享] 免疫组织化学染色技术 法医学院 官大威 第一节 常规组织学染色技术概述 宏观微观超微结构基因水平 组织形态学研究技术的种类：
一、病理大体组织标本的染色方法 在标本制作中，为了某种特殊目的，突出显示标本的重要部分，借助组织切片的特殊染色方法对标本进行染色，将病变器官及不同组织成分用染料染成不同的颜色，以便于区分大体标本的不同成分和病变特点，如： ..脂肪组织染色法 目的：主要用于心、肝、肾脂肪变性，动脉粥样硬化大体标本的染色 试剂：苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ 结果：病变处脂肪组织呈橙黄色
..早期心肌梗死染色法 目的：显示早期心肌梗死的区域 试剂：% NBT(硝基四唑蓝) / mol / L PBS(pH 方法：将2-3 mm 厚新鲜心肌大片放入试剂中，37 °C 孵育20 min。 结果：正常心肌呈蓝色，早期心肌梗死区、纤维结缔组织、瘢痕组织呈浅蓝色或不显色。 注意：新鲜标本，尸检心肌不超过6小时。
二、光学显微镜下的组织学染色方法 .常规HE染色（hematoxylin and eosin staining） .组织学特殊染色 1. Mallory 三染色、Masson三染色 2. 神经纤维的镀银染色 3. 其他的特殊染色，包括钙、铁、铅、铜、黑色素和脂褐素、细胞DNA和RNA的染色等
上述的各种染色方法只能在细胞水平上显示组织结构的形态改变。 三、超微结构的观察 .光线波长的限制，光学显微镜的分辨率极限为μm 有效放大倍数最高不超过2000倍。 电镜的分辨率最佳可达，放大倍率最高可达100万倍。 第二节免疫组织化学染色技术 Immunohistochemical technique 由于该技术主要是用于研究和观察细胞中的某些结构或分子物质和组织细胞间的成分，因此现又称为免疫细胞化学技术。
根据标记物的不同，免疫细胞化学技术可分为： 1. 免疫荧光细胞化学技术 2. 免疫酶细胞化学技术 3. 免疫铁蛋白技术 4. 免疫金-银细胞化学技术 5. 免疫电子显微镜技术
一、免疫组织化学染色方法的原理 .抗原（antigen） 1. 定义：是一类在适合条件下能激发机体免疫系统发生免疫应答，并能与免疫应答产生的效应物质（抗体和效应细胞）在体内或体外发生特异性结合反应的物质。抗原具有两种性能：
（1）免疫原性（immunogenicity）指抗原分子具有诱导机体产生免疫应答的特性。 （2）反应原性（reactogenicity）指抗原分子与抗体或效应T 细胞等免疫应答产物发生特异性反应的特性。
2. 抗原的分类------完全抗原、半抗原 免疫学分类 胸腺依赖抗原与非依赖抗原 外源性抗原：微生物、花粉等 内源性抗原：隐蔽的自身抗原、肿瘤相关抗原等 临床分类同种异型抗原：人类白细胞抗原、血型抗原 异嗜性抗原：人与其他动物、植物等之间存在的共同抗原
.抗体（antibody） 1. 定义：机体受到抗原刺激后，通过体液免疫应答，B淋巴细胞活化、增殖，分化为浆细胞，由浆细胞合成并分泌的仅与该抗原发生特异性反应的球蛋白，称为抗体。
大部分抗体电泳后位于γ区带，1972年国际免疫学联合会正式将化学结构相同或相似的一类球蛋白分子统一命名为免疫球蛋白(immunoglobin，Ig)。
2. 抗体的种类:五类，即IgA、IgD、IgE、IgG、IgM 免疫组织化学染色技术中，使用的抗体主要是IgG，个别情况下使用IgG的亚型，多为IgG1。 .免疫组织化学染色的反应原理及显色原理 1. 免疫组织化学染色的反应原理 ..染色反应的最基本原理是抗原抗体的反应。 ..通过对针对标本中相应抗原的抗体上标记某种发色剂或酶类，再通过激发发色剂或使用某种显色剂，在显微镜下使标本中抗原抗体反应的部位产生肉眼可观察到的颜色以确定所要检测的抗原是否存在。
..通过免疫组织化学染色技术，在光学显微镜下即可检测到所要研究的蛋白分子类物质的存在与否。
2. 免疫组织化学染色的显色原理 (1) 基本原理 荧光标记或酶标抗体的染色分为直接法和间接法。其中以酶标抗体法应用最为广泛。 n直接法：是将酶直接标记在第一抗体上，用酶标抗体与切片上待检测的组织或细胞中抗原反应，再用底物显色，显示出所检测的目的抗原的部位。
n间接法：是将酶标记在第二抗体上，检测组织或细胞内的特异性抗原物质。 ..间接法中所用的一抗是针对组织或细胞中某种抗原的特异性抗体，多数抗体是由家兔制备的多克隆抗体，单克隆抗体是由小鼠制备的。
..第二抗体是第一抗体的抗体，所以只要不同的第一抗体均来自同一种属动物，同标记的第二抗体结合就能用来显示不同特异性抗原的存在。这样可避免直接法中标记每一种第一抗体的麻烦。..通过某种技术增加第二抗体上标记酶的含量，可提高免疫组织化学染色的敏感度。IHC技术中，绝大多数以间接法为常用。
（2）显色的基本程序1抗孵育切片或细胞涂片2抗（酶标抗体）孵育切片发色剂显色（核复染）
（3）酶标抗体法的显色原理及显色剂 ..辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP） HRP + H2O2 HRP ·H2O2HRP ·H2O2+ DH2HRP + D + 2H2OHRP催化的酶促反应第一步是特异的，其余反应是非特异的，因此，可选用各种供氢体作为显色剂，可使反应的终产物呈现不同的颜色，如： CN（4-chloro-1-naphthol）为蓝色 TMB（tetramethyl-benzidine）为深蓝色 AEC（3-amino-9-ethyl-carbazole）为红色 DAB（3，3-diamino benzidine）为棕色
..碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)是以AS-Mx为底物，FB/FR (Fast blue/Fast red)为发色剂，生成蓝色/ 红色不容性沉淀物。
..ALP标记的抗体主要用于内源性过氧化物酶含量较高的血细胞、淋巴细胞等的ICC染色。 ..由于组织细胞内含有内源性ALP，在显色液中需加入终浓度为2-4mol/L的左旋咪唑(levamisole)，大多数内源性ALP活性可被抑制。
..葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD ) 是以葡萄糖为底物的酶，其显色方法为β-D-葡萄糖 67mg、NBT 、PMS (phenazinemethyl-sulfate ) 、L PBS (pH ，37oC孵育1小时，生成蓝色不溶性沉淀物，该终产物不溶于有机溶剂，切片可经脱水、透明后封片，长期保存。
（4）核复染 在显色后，特别是用DAB显色后，切片可用苏木素染料进行核复染，经水化后细胞核显示蓝色，与胞质中的DAB棕色形成对比。但用AEC显色后不能用苏木素做核复染，因为配制苏木素染料中使用酒精作为介质，可使AEC的红色终产物褪色，且AEC显色后只能用水溶性封固剂封片。
第三节免疫组织化学染色步骤 （一）ABC或SP法进行石蜡切片染色的主要步骤 1. 组织材料的采取； 2. 组织块的固定； 3. 组织块的脱水、透明及石蜡包埋； 4. 石蜡切片的制备； 5. 石蜡切片的脱蜡及水化； 6. 抑制内源性过氧化物酶活性； 7. PBS洗涤切片； 8. 抗原修复或蛋白酶消化切片，修复或暴露抗原； 洗涤切片； 10. 用与二抗来源相同的动物非免疫正常血清(或同时加入BSA)孵育切片，防止抗体的非特异性吸附； 11. 用特异性一抗(单克隆、多克隆)孵育切片； 12. PBS(可加入Tween 20#，PBST)洗涤切片； 13. 用针对一抗的生物素化的二抗孵育切片； 14. 用PBS或PBST洗涤切片； 15. 滴加SP试剂或ABC试剂； 16. PBS或PBST洗涤切片； 17. DAB或AEC显色； 18. 自来水洗涤切片，终止显色； 19. 用苏木素做核复染； 20. 切片脱水、透明，树胶封片。
（二）各染色步骤的具体操作及注意事项 1. 组织材料的采取 活检组织 组织标本手术切除标本 尸检标本 实验组织或培养细胞 ..活检组织：宫颈、鼻咽、口腔、喉、皮肤和内窥镜钳取的组织体积小，因活检钳直接钳取，常受压过度而变性，因此，活检钳的刃口必须锐利，以免组织受压，活检时应采取主要的病灶区。 ..抗原在组织中的分布不均一，故病灶较大的切除标本应考虑切取主要病灶。病灶与正常组织交界区及远距病灶的正常区。
..尸检组织 由于取材时一般均已超过死亡后2小时以上，组织有不同程度自溶，其抗原或变性消失或有严重的弥散现象。法医尸检一般多在24小时以上，甚至数月后，检材受死后变化影响严重，而影响染色结果。手术切除的组织较新鲜，取材后应立即固定，以保存组织结构和抗原。
..实验动物标本 新鲜，可按需要取材，特别是很多情况下是在灌流固定后取材，组织结构和抗原保持良好，非常适用于免疫组织化学染色。
..取材标本的大小 尸检组织材料大小以1cm×1cm ×0.2cm 为宜。实验动物常用大鼠或小鼠，其脏器体积小，有利于取材。一般标本体积不宜过大，防止固定不透，影响抗原的保存，也浪费试剂。
2. 组织块的固定、水洗 （1）固定液：种类较多，常用的有以下几种： ..4% 甲醛/PBS (pH 配制方法：10 ml 40% 甲醛(formalin) + 90ml PBS 使用新鲜甲醛，久存甲醛可分解，形成白色沉淀(多聚甲醛)，还可形成甲酸，影响染色结果。 ..4% 多聚甲醛/PBS (pH 配制方法：40g多聚甲醛(paraformaldehyde)+500 ml mol/L PB