微生物检验中常用的生化反应
微生物的生化鉴定
微
生 物
4.甲基红实验（M.R实验）
生
（3）结果观察记录
化
鉴
加入甲基红1~2滴，红色——M.R实验阳性，用 + 表示；不变色——M.R
定
实验阴性，用 - 表示。分别将试验（“+”表示阳性，“-”表示阴性）
技
术37℃恒温倒置培养24-48h。
— 1—
• 微生物生化鉴定常规实验
微
生 物
2.淀粉水解实验
生
（3）结果观察记录
化
鉴
将平板打开盖子，滴入少量Lugol’s碘液于平皿
定
中，轻轻旋转平板，使碘液均匀铺面整个平板，
技
术
判断结果。
有水解圈—淀粉水解实验阳性，用 + 表示；
无水解圈—淀粉水解实验阴性，用 - 表示。
食品微生物检验技术
目录页
微生物生化鉴定原理 微生物生化鉴定常规实验
— 1—
微生物生化鉴定原理
— 2—
• 微生物生化鉴定的原理
微
生
物 生
微生物代谢类型多样性具体表现在生化反应的多样性，
化
不同微生物分解生物大分子的能力，分解利用含碳化合物、
鉴
含氮化合物的途径和产生代谢产物也各不相同。
定
微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产
技 术
的小导管，包扎灭菌。
试管标记：培养基名称和接种细菌菌名。
（试管4支，分别标记大肠杆菌、枯草杆菌，金黄色葡萄球菌，第四支空白对照）
接种培养：挑取少量菌种于试管中，37℃培养24h。
— 1—
• 微生物生化鉴定常规实验
微
生 物
1.糖发酵实验
生
临床微生物学检验技术复习练习试题(四)
临床微生物学检验技术复习练习试题厌氧性细菌及检验选择题A 型题1．下列产生外毒素的细菌中哪种细菌产生的毒素引起食物中毒A 霍乱弧菌B 肉毒杆菌C 白喉杆菌D 链球菌E 破伤风杆菌2．预防和治疗破伤风的方法是:A 清创处理B 有效抗生素治疗C 注射破伤风抗毒素血清D A+BE A+B+C3．当一民工因铁钉深刺足底造成外伤送医院急诊时，医生应首先考虑给予注射A．破伤风类毒素B．破伤风抗毒素C．白百破三联疫苗D．丙种球蛋白E．破伤风菌苗4.王某，48岁，建筑工人；因牙关紧闭、四肢痉孪而入院。
8天前，右脚被铁钉扎伤，伤口深，但几日后自愈。
5日后右腿有些麻木和疼痛，且咀嚼不便，吞咽困难，最后全身抽搐，四肢痉挛。
入院诊断为破伤风，请问下述哪项是最佳治疗原则A 注射青霉素B 注射破伤风抗毒素和白百破疫苗C 注射破伤风抗毒素和青霉素D 注射破伤风抗毒素E 注射青霉素和白百破疫苗5．鉴定破伤风杆菌有无致病性的最重要的根据是A G+细长杆菌B 顶端圆形芽孢C 有周身鞭毛D 专性厌氧生长E 产生特异性外毒素6．破伤风梭菌除致破伤风病外，还能引起何种疾病EA．菌血症B．食物中毒C．组织坏死D．坏死性肠炎E．以上均不是7．下列搭配哪项不恰当：A 大肠杆菌EHEC组——出血性肠炎B 炭疽杆菌——气性坏疽C 破伤风杆菌——脐带风D 淋球菌——尿道炎E 脑膜炎球菌——流行性脑脊髓膜炎8．不是肉毒梭菌特点的是A 芽胞位于菌体次极端，菌体呈网球拍状B 严格厌氧C 致病物质主要是肉毒毒素D 引起疾病主要是细菌性食物中毒E 肉毒毒素作用机制是阻止神经组织释放乙酰胆碱B型题A 常因滥用抗生素所致的疾病B 常经呼吸道所致的疾病C 常经消化道所致的疾病D 常经产道所致的疾病E 常因战伤所致的疾病1．假膜性肠炎2．气性坏疽3．肉毒中毒X型题1．可能引起食物中毒较常见的细菌有A 金葡菌B 伤寒杆菌C 产气荚膜杆菌D 破伤风杆菌E 副溶血性弧菌2．产气荚膜芽孢梭菌引起的疾病有A 气性坏疽B 坏死性肠炎C 产褥热D 食物中毒E 伪膜性肠炎3．有迁徙性生长现象的是A 链球菌B 变形杆菌C 破伤风杆菌D 结核杆菌E 大肠杆菌4．属G- 菌A 脆弱类杆菌B 具核梭杆菌C 艰难杆菌D 双歧杆菌E 丙酸杆菌5．无芽胞厌氧菌A 优杆菌属B 梭杆菌属C 伊色列放线菌D 肉毒梭菌E 乳酸杆菌属填空题1．厌氧菌感染的原因：、、。
微生物常规鉴定技术(带图片)
微生物常规鉴定技术一、形态结构和培养特性观察１、微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微生物的目的。
２、细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落（colony）。
不同微生物在某种培养基中生长繁殖，所形成的菌落特征有很大差异，而同一种的细菌在一定条件下，培养特征却有一定稳定性。
，以此可以对不同微生物加以区别鉴定。
因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别中的一项重要容。
１）细菌的培养特征包括以下容：在固体培养基上，观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等。
在液体培养中的表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。
半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。
２）霉菌酵母菌的培养特征：大多数酵母菌没有丝状体，在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，只是比细菌菌落大且厚。
液体培养也和细菌相似，有均匀生长、沉淀或在液面形成菌膜。
霉菌有分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜的培养基里，菌丝无限伸长沿培养基表面蔓延。
霉菌的基菌丝、气生菌丝和孢子丝都常带有不同颜色，因而菌落边缘和中心，正面和背面颜色常常不同，如青霉菌：孢子青绿色，气生菌丝无色，基菌丝褐色。
霉菌在固体培养表面形成絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌落。
革兰氏染色:革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。
该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。
G—菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。
[下载]细菌微生物生化反应对照表-生化反应对照表
![[下载]细菌微生物生化反应对照表-生化反应对照表](https://img.taocdn.com/s3/m/76834b08640e52ea551810a6f524ccbff121ca8b.png)
生化反应对照表（1）肠杆菌1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12A 鸟氨酸赖氨酸甲基红纤二糖山梨醇侧金盏醇鼠李糖木糖蔗糖丙二酸盐甘露醇阿拉伯糖阳紫色紫色红色黄色黄色黄色黄色黄色黄色兰色黄色黄色阴黄色黄色黄色紫色紫色紫色紫色紫色紫色绿色紫色紫色B 靛基质七叶苷苯丙氨尿素棉子糖精氨酸枸橼酸蕈糖H2S 硝酸盐蜜二糖VP阳红色黑色草绿红色黄色红色兰色黄色黑色红色黄色红色阴黄色灰色黄色黄色紫色黄色绿色紫色灰黄黄色紫色黄色注：用于氧化酶（—）的G（—）杆菌鉴定的生化反应孔位反应阳性阴性F12 O-F试验黄色紫色G12 葡萄糖黄色紫色H12 果糖黄色紫色（2）非发酵菌1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12硝酸盐精氨酸尿素七叶苷果糖半乳糖麦芽糖葡萄糖甘露糖甘露醇木糖麦康凯阳红色红色红色黑色黄色黄色黄色黄色黄色黄色黄色浑浊阴黄色黄色黄色灰黑紫色紫色紫色紫色紫色紫色紫色澄清乳糖空白氯化钠H2S 赖氨酸鸟氨酸鼠李糖明胶淀粉酶（醋酸盐）枸橼酸SS阳黄色浑浊黑色紫色紫色黄色液化无色兰色兰色浑浊阴紫色澄清灰黄黄色黄色紫色凝固黑色绿色绿色澄清（3）葡萄球菌/微球菌1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12A 硝酸盐蔗糖蕈糖麦芽糖VP 木糖甘露糖厌氧葡萄糖甘露醇空白凝固酶凝聚因子阳红色黄色黄色黄色红色黄色黄色黄色黄色阴黄色紫色紫色紫色黄色紫色紫色紫色黄色（4）链球菌/肠球菌1 2 3 4 5 6 7 8 9 10胆汁七叶苷七叶苷 6.5%氯化钠Optochin 杆菌肽山梨醇山梨糖V-P 精氨酸β-溶血阳黑色黑色浑浊浑浊浑浊黄色黄色红色红色有阴灰黑色灰黑色澄清澄清澄清紫色紫色棕黄黄色无（5）（无芽孢）阳性杆菌1 2 3 4 5 6 7A 硝酸盐尿素B-E 葡萄糖麦芽糖硫化氢明胶阳紫红色红色黑色黄色黄色黑色液化阴黄色或淡红黄色灰色紫色紫色灰色凝固注：B-E为胆汁七叶苷试验。
（6）弧菌科1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12A 纤二糖甘露醇蔗糖赖氨酸鸟氨酸水杨苷硝酸盐0%NaCl 靛基质乳糖七叶苷VP 阳黄色黄色黄色紫色紫色黄色深红色黄色红色黄色黑色红色阴紫色紫色紫色黄色黄色紫色黄色紫色黄色紫色灰色黄色B 枸橼酸盐阳兰色阴绿色（7）酵母样真菌1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12A 尿素麦芽糖蔗糖乳糖半乳糖蜜二糖纤维二糖肌醇棉子糖蕈糖木糖KNO3阳黄色黄色黄色黄色黄色黄色黄色黄色黄色黄色黄色红色阴无色紫色紫色紫色紫色紫色紫色紫色紫色紫色紫色黄色B 鼠李糖葡萄糖肉汤阳黄色黄色菌膜生长阴紫色紫色沉淀生长(8) 支原体1 2A 尿素精氨酸阳红色红色阴黄色黄色B阳阴(9) 嗜血杆菌1 2 3 4 5A X因子V因子溶血性触酶G-小杆菌阳生长生长溶血阴不生长不生长不溶血B阳阴药敏试验MIC值对照表（单位：μg/ml）注：表中的‘低’‘中’‘高’分别代表每种药物的三个MIC值，这三个MIC值确定了细菌对于药物敏感、中介或耐药的界限。
临床微生物检验_实验二
课后作业
复习今天接种细菌的各种生化反应原理与结果 预习第二天的各种生化反应原理及结果观察
第二天实验内容
试剂：苯丙、尿素、（赖氨酸、鸟氨酸、氨对）、 DNA酶、硝还、O/F 以上各种生化微量管 2支/人 O/F管 4支/人
菌种：大肠、变形、沙门、志贺、金葡、铜绿 其他：砂轮、接种针、酒精灯 观察昨天的生化反应结果并记录
③产生硫化氢 + 铁盐
FeS 黑色沉淀
应用：检测肠杆菌科细菌对乳糖、葡萄糖的分解和 产H2S能力。
克氏双糖铁试验结果示意图
未接种菌 的KIA
乳（－） 葡（＋） H2S(-)
乳（-） 葡（+）
H2S(+)
乳（+） 葡（产酸产气） H2S(-)
各种生化培养基接种的细菌
葡萄糖： 大肠埃希菌 、 沙门菌或志贺菌
砂轮接种针酒精灯?观察昨天的生化反应结果并记录mr和vp加试剂后观察无色红色vp试验甲基红试验紫红色橘黄色加试剂后观察乳葡产酸产气h2s大肠埃希菌在kia中结果乳葡h2s伤寒沙门菌在kia中结果乳葡h2s志贺菌在kia中生长结果kakakaaa?原理
广州医科大学
临床微生物学检验
实验 第二周
实验内容
指示剂
颜色改变
酸→碱
溴甲酚紫
黄→紫
溴麝香草酚蓝 黄→蓝
甲基红
红→黄
中性红
红→黄
酚红
黄红
感应0 6.8～8.0 6.8～8.4
碳水化合物代谢试验
1、糖(醇、苷)类发酵试验
原理：细菌含发酵糖(苷、醇)类的酶不同， 分解糖（苷、醇）能力不同，代谢产 物不同，指示剂呈酸性或碱性反应。
（再35℃0.5～1小时后观察）
微生物常规生化鉴定技术
微生物常规鉴定技术一、形态结构和培养特性观察１、微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微生物的目的。
２、细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落（colony）。
不同微生物在某种培养基中生长繁殖，所形成的菌落特征有很大差异，而同一种的细菌在一定条件下，培养特征却有一定稳定性。
，以此可以对不同微生物加以区别鉴定。
因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别中的一项重要内容。
１）细菌的培养特征包括以下内容：在固体培养基上，观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等。
在液体培养中的表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。
半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。
２）霉菌酵母菌的培养特征：大多数酵母菌没有丝状体，在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，只是比细菌菌落大且厚。
液体培养也和细菌相似，有均匀生长、沉淀或在液面形成菌膜。
霉菌有分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜的培养基里，菌丝无限伸长沿培养基表面蔓延。
霉菌的基内菌丝、气生菌丝和孢子丝都常带有不同颜色，因而菌落边缘和中心，正面和背面颜色常常不同，如青霉菌：孢子青绿色，气生菌丝无色，基内菌丝褐色。
霉菌在固体培养表面形成絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌落。
革兰氏染色:革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。
该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。
G—菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。
细菌鉴定中常用理化生化反应
细菌鉴定中常用理化生化反应 . 实验日期： 实验班级：生物技术 指导教师：张建丽
姓名：高熹 学号： 1120212430
细菌鉴定中常用的理化生化反响
一、实验目的 1) 了解细菌生理生化反响原理 2) 通过细菌对不同含碳、 氮化合物的分解利用情况了解细菌碳、 氮代谢类型的多样性。 3) 了解细菌在培养基中生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理 1〕糖〔醇〕类发酵实验 因细菌所含的酶不同，其发酵糖〔醇〕后的代谢产物亦不相同，即可产酸产气，或产酸不产气。酸的产生可利用培养基中溴甲酚紫的颜色变化进行判断 〔 pH5.2 黄色— 6.8 紫色〕，即当发酵产酸时， 可使培养基由紫色变为黄色。 气体产生可由发酵管内倒置的杜氏小管中有无气泡来判断。 2〕甲基红〔 Methyl red 〕实验〔 MR实验〕
大肠杆菌等许多细菌分解葡萄糖产生丙酮酸 , 丙酮酸可进一步分解成甲酸〔或乙酸 乳酸〕, 使培养基的 pH 降低到 4.2 以下 , 此时参加甲基红指示剂， 呈现红色 。 产气杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸 , 培养基的 pH在 6.2 以上 , 故此时参加甲基红指示剂 , 呈现黄色。 3〕伏 - 普(Voges-Proskauer) 氏实验 (V.P. 实验 )
4〕靛基质 ( 吲哚 ) 实验 大肠杆菌等能分解蛋白质中的色氨酸 , 产生靛基质 ( 吲哚 ), 靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合形成玫瑰色靛基质 ( 红色化合物 ) 。 5〕硫化氢实验
;. 细菌鉴定中常用理化生化反应 . 某些细菌能分解含硫的氨基酸 ( 胱氨酸 半胱氨酸等 ), 产生硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐 , 形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁 . 为硫化氢实验。 6〕明胶液化实验
某些细菌具有胶原酶 , 使明胶被分解 , 失去凝固能力 , 呈现液体状态 , 为明胶实验阳性。 7〕淀粉水解实验
细菌不能直接利用淀粉 , 须经淀粉酶将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解为葡萄糖 ( 或麦芽糖 ) 后被细菌吸收利用 , 细菌水解淀粉的过程可通过底物的变化来证明 , 即加碘液测定时，不再产生蓝色。 8〕柠檬酸盐利用实验 产气杆菌等能以柠檬酸钠为碳源进行生长。其分解柠檬酸盐后产生碳酸盐 , 培养基呈碱性 . 使培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为蓝色 . 不能利用柠檬酸盐为碳源的细菌 , 在该培养基上不生长 , 培养基不变色 .
微生物的生理生化反应
微生物的生理生化反应姓名：王雪学号：201500140130 班级：2015级四班2组同组者：张彬、田文娅一、实验目的1、证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不通过的酶系统。
2、掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。
3、了解糖发酵的原理，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
4、了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。
二、实验原理微生物的生理生化反应原理：在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢。
代谢过程主要是酶促反应过程。
许多细菌产生胞外酶，这些酶从细胞中释放出来，以催化细胞外的化学反应。
各种细菌由于具有不同的酶系统，致使它们能利用不同的底物，或虽然可以利用相同的底物，却产生不同的代谢产物，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别细菌。
大分子水解：由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用.胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内.将大分子物质分解的过程可以通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实。
淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的区域，用碘测定不再产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。
如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精,双糖和单糖；而淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉，在淀粉培养基上培养用碘处理其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈，据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。
脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的PH，使PH降低，加入培养基的中性红指示剂会使培养基从淡红色转变为深红色，说明细胞外存在脂肪酶。
在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后观察菌苔的颜色，若出现红色斑点，则说明此中菌可产生分解油脂的酶。
糖发酵试验：是常用的鉴别微生物的生化反应。
某些细菌能利用糖类作为碳源和能源，使糖类分解为产酸产气或产酸不产气。
不同种的细菌对于各种糖类利用能力不同，分解产物也不同。
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微生物检验中常用的生化反应各种细菌所具有的酶系统各不相同，对养分物质的利用力量各异，因而在代谢过程中所产生的合成或分解产物也不同。
应用生物化学方法检测细菌的代谢产物，有助于细菌的种、属鉴定。
这种利用生化方法来鉴别细菌的试验，统称为细菌的生化试验或生化反应，是识别细菌的重要方法之一。
微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其他方面不易区分的微生物。
因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。
微生物检验中常用的生化反应有：(一)糖酵解试验各种微生物因含有不同的分解糖(醇、苷)类的酶，所以分解糖类的力量各不相同，而且分解相应糖类后形成的终末产物亦随细菌种类而异，有的产酸，有的还可以产生气体，因此可作为鉴别细菌的依据，对肠道杆菌的鉴别尤为常见。
可用指示剂及发酵管检验。
试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培育物少许，接种于发酵液体培育基鲁，若为半固体培育基，则用接种针作穿刺接种。
接种后，置36℃ 1.0 ℃培育，每天观看结果，检视培育基颜色有无转变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培育基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力，培育物可呈弥散生长。
本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵力量，从而进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。
一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫、溴百里蓝和An-drade指示剂。
(二)淀粉水解试验某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。
淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。
试验方法：以18h~24h的纯培育物，涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板（一个平板可分区接种，试验数种培育物）或直接移种于淀粉肉汤中，于36℃ 1 ℃培育24 h ~48 h,或于20℃培育5d。
然后将碘试剂直接滴浸于培育基表面，若为液体培育物，则加数滴碘试剂于试管中。
马上检视结果，阳性反应（淀粉被分解）为琼脂培育基呈深蓝色、菌落或培育物四周消失无色透亮环、或肉汤颜色无变化。
阴性反应则无透亮环或肉汤呈深蓝色。
淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的力量、培育时间、培育基含有淀粉量和pH等均有肯定关系。
培育基pH必需为中性或微酸性，以pH7. 2最适。
淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱，因而以临用时制备为妥。
(三) V-P试验某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培育基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V-P（+）反应。
1.O'Meara氏法将试验菌接种于通用培育基，于36 ℃ 1 ℃培育48 h,培育液1 mL加OMeara试剂（加油0.3%肌酸或肌酸酐的40%氢氧化钠水溶液)1mL，摇动试管1min~2min，静置于室温或36 ℃ 1 ℃恒温箱，若4h内不呈现伊红即判定为阴性。
亦有主见在48 ℃-50 ℃水浴放置2h后判定结果者。
2. Barritt氏法将试验菌接种于通用培育基，于36℃1℃培育4d,取培育液2.5mL先加入5%-萘酚纯酒精溶液0.6%mL，再加40%氢氧化钾水溶液0.2mL，摇动2min~5min，阳性菌常马上呈现红色，若无红色消失，静置于室温或36℃1℃恒温箱，如2h内仍不显现红色可判定为阴性。
3.快速法将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中，挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培育物一接种环，乳化接种于其中，加入5% a-萘酚3滴， 40%氢氧化钠水溶液2滴，振动后放置5min,判定结果。
不产酸的培育物不能使用。
本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。
在用于芽孢杆菌和葡萄球菌等其他细菌时，通用培育基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基甲醇的产生，故应省去或以氯化钠代替。
本试验常与甲基红试验一起使用。
本试验阳性，甲基红试验阴性，反之亦然。
(四) 甲基红试验大肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸、琥珀酸、乙酸和甲酸等大量酸性产物，可使培育基pH下降至4.5以下，使甲基红指示剂变红。
试验方法：挑取新的待试纯培育物少许，接种于通用培育基，培育于36℃1℃或30℃(以30℃较好)3d-5d,从其次天起，每日取培育液1mL,加甲基红指示剂1~2滴，阳性呈鲜红色，弱阳性呈淡红色，阴性为黄色。
迄至发觉阳性或至第5天仍为阴性即可判定结果。
甲基红为酸性指示剂， pH范围为4.4-6.0,其pH为5.0,故在pH5.0以下，随酸度增加而红色增加，在pH5.0以上，则随碱度增加而黄色增加，在pH5.0或上下接近时，可能变色不够明显，此时应延长培育时间，重复试验。
(五)靛基质试验某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚。
吲哚的存在可用显色反应表现出来。
吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。
试验方法：将待试纯培育物小量接种于试验培育基管，于36℃1 ℃培育24h后，取约2mL培育液，加入Kovacs氏试剂2滴~3滴，轻摇试管，呈红色为阳性；或先加少量乙醚或二甲苯，摇动试管以提取和浓缩靛基质，待其浮于培育液表面后，再沿试管壁徐缓加入Kovacs氏试剂数滴，在接触面呈红色，即为阳性。
试验证明靛基质试剂可与17种不同的靛基质化合物作用而产生阳性反应，若先用二甲苯或乙醚等进行提取，再加试剂，则只有靛基质或5-甲基靛基质在溶剂中呈现红色，因而结果更为牢靠。
(六)硝酸盐还原试验有些细菌具有还原硝酸盐的力量，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐、氨或氮气等。
亚硝酸盐的存在可用硝酸试剂检验。
1.试验方法临试前将试剂的A (磺胺酸冰乙酸溶液)和B(a-萘胺乙醇溶液)试液各0.2mL等量混合，取混合试剂约0.1mL,加于液体培育物或琼脂斜面培育物表面，马上或于10min内呈现红色即为试验阳性，若无红色消失则为阴性。
用a-萘胺进行试验时，阳性红色消退很快，故加入后应马上判定结果。
进行试验时必需有未接种的培育基管作为阴性对比。
a-萘胺具有致癌性，故使用时应加留意。
2.试验方法将含有0.02%-0.2%硝酸钾的蛋白胨水分装至试管中，每支试管预先放一个倒置的发酵管，然后在121℃高压灭菌15min。
按肉汤培育基方法接种，连同已灭菌的对比管一起在最佳生长温度培育2d-7d,在接种管和对比管中加上Griess Ilosvay试剂1 mL或亚硝酸盐试纸，几分钟内消失红色表明亚硝酸盐产生。
对比管应为微红色或无色。
阴性结果应进行确证。
向试管中加入微量锌粉，将残存的硝酸盐还原成亚硝酸盐，消失红色表明有硝酸盐存在；如没有颜色变化，则说明没有硝酸盐存在，硝酸盐已被微生物还原成亚硝酸盐。
发酵管中有气体产生表明有氮气生成。
(七)明胶液化试验有些细菌具有明胶酶(亦称类蛋白水解酶),能将明胶先水解为多肽，又进一步水解为氨基酸，失去凝胶性质而液化。
1.养分明胶培育基在养分肉汤中加入10%~15%的明胶，调整pH至7.2，115℃高压灭菌20min。
试验方法：挑取18h-24h待试菌培育物，以较大量穿刺接种于明胶高层约2/3深度或点种于平板培育基。
于20℃-22℃培育7d~14d,明胶高层亦可培育于36℃1℃。
每天观看结果，若因培育温度高而使明胶本身液化时应不加摇动、静置冰箱中待其凝固后，再观看其是否被细菌液化，如确被液化，即为试验阳性。
平板试验结果的观看为在培育基平板点种的菌落上滴加试剂，若为阳性，10min -20min后，菌落四周应消失清楚带环，否则为阴性。
2. Frazier明胶琼脂(改良型)培育基在养分琼脂中加入0.4%明胶，调整pH至7.2, 115℃高压灭菌20 min。
试验方法：在已倒好干燥培育基的平皿上划线接种或点接种。
在最佳生长温度下培育2d-14d。
使用8mL~10mL1%盐酸(HCI不像氯化汞溶液那样能很快的产生清楚的沉淀，但本书仍建议使用盐酸，这是为了避开汞盐的毒性及对环境造成的危害)试剂布满培育皿，没有水解的明胶与试剂渐渐形成不透亮的白色沉淀，水解的明胶部分呈现了一个清楚的环带。
以毫米为单位记录从菌落边缘到环带边缘的清楚带的大小。
(八)尿素酶试验有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解，产生2个分子的氨，使培育基变为碱性，酚红呈粉红色。
尿素酶不是诱导酶，由于不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。
其活性最适pH为7.00。
试验方法：挑取18h-24h待试菌培育物大量接种于液体培育基管中，摇匀，于36℃1℃培育10min、60min和120min,分别观看结果；或涂布并穿刺接种于琼脂斜面，不要到到达底部，留底部作变色对比。
培育2h、4h和24h分别观看结果，变为粉红色为阳性，如阴性应连续培育至4d,做最终判定。
(九)氧化酶试验氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶，氧化酶先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。
这个试验最适用于假单胞菌属和其他革兰氏阴性杆菌的鉴别。
试验方法：在琼脂斜面培育物上或血琼脂平板菌落上滴加试剂1滴~2滴，阳性者Ko-vacs氏试剂呈粉红色-深紫色， Ewing氏改进试剂呈蓝色。
阴性者无颜色转变。
应在数分钟内为判定试验结果。
(十)硫化氢试验有些细菌可分解培育基中含硫氨基酸或含硫化合物，而产生硫化氢气体，硫化氢遇铅盐或低铁盐可生成黑色沉淀物。
在肠杆菌科的细菌鉴别中有重要作用。
试验方法：在含有硫代硫酸钠等指示剂的培育基中，沿管壁穿刺接种，于36℃1℃培育24h-28h,培育基呈黑色为阳性。
阴性应连续培育至6d。
也可用乙酸铅纸条法：将待试菌接种于一般养分肉汤，再将乙酸铅纸条悬挂于培育基上空，以不会被溅湿为适度，用管塞住置36℃1℃培育为1d-6d,纸条变黑为阳性。
(十一)三糖铁(TSI )琼脂试验试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培育物，穿刺接种并涂布于斜面，置36℃1℃培育18h-24h,观看结果。
本试验可同时观看乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气(变黄),产生硫化氢(变黑)。
葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培育基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。
留意：TSI琼脂培育基可以代替Kligler铁琼脂检测硫化氢的产生。
但是，柠檬酸杆菌和变形杆菌属中的一些产硫化氢的菌株，在TSI琼脂培育基中产生的硫化氢会被蔗糖发酵产物所掩盖，因此，在做这些菌的产硫化氢试验时， Kligler铁琼脂是更为牢靠的试验培育基。
(十二)硫化氢-靛基质一动力琼脂试验试验方法：以接种针挑取菌落或纯养物穿刺接种约二分之一深度，置36℃1℃培育18h-24h,观看结果。