简述杜仲黄酮
杜仲黄酮是什么
杜仲黄酮是什么？近年来，食品安全问题逐渐成为限制畜牧养殖业发展的关键因子，特别是畜牧业饲料中抗生素及各种添加剂的滥用，严重威胁了畜牧业产品安全及人类健康。
中草药以其特有的天然性、功能多样性、低抗药性或无抗药性等优点，越来越受重视。
杜仲是我国特有的经济植物。
传统以树皮入药，近年来的研究表明，杜仲叶与皮的化学成分基本相同，药效类似。
以杜仲叶或其提取物作为动物饲料添加剂的相关研究及相关产品的开发得到越来越多人士的接受及认可。
从杜仲叶中提取得到的产品，其主要组成为绿原酸、黄酮类、环烯醚萜类及杜仲多糖等多种化合物，此外还含有丰富的粗蛋白、粗脂肪、钙、磷、维生素及各种氨基酸，是一种良好的天然动物饲料添加剂。
杜仲叶提取物中的某些成分具有提高人及动物体内胶原蛋白的合成与分解能力，可降低皮下及内脏周围的中性脂肪的功能，从而提高动物生产性能，改善肉质。
杜仲还具有抗疲劳、抗氧化、增强免疫等作用。
杜仲叶提取物作为饲料添加剂时可增强动物免疫力，提高畜禽生产性能，改善肉、蛋、奶品质等。
一、杜仲天然活性物质能替代饲用抗生素类添加剂，使畜禽肉质安全优质。
当前人们对安全优质畜禽产品的消费心理，促使世界范围的管理当局不得不严格控制抗生素的种类、用量及使用规程，积极寻找可以替代饲用抗生素类添加剂的新产品。
科学研究发现，杜仲叶中天然活性物质就是替代饲用抗生素类添加剂的最好产品。
杜仲叶中天然活性物质能显著增强畜禽的免疫力（抗病力）。
而且无毒、无公害，无残留。
杜仲叶中绿原酸含量相当高，绿原酸具有抗菌、抗病毒、增高白血球等作用，是理想的天然添加剂，正在受到人们的重视。
绿原酸对多种致病菌，如金黄葡萄球菌、溶血性链球菌、痢疾球菌、伤寒杆菌、肺炎球菌等有显著的抑制和杀灭作用。
绿原酸可通过抗病毒作用，有效抑制由念珠菌引起的化脓性关节炎。
其实，为了增加畜禽的免疫力（抗病力），我国四川农民在很早以前就有用杜仲叶饲喂牛和猪的习惯。
李金宝博士等（2013）发现，在断奶仔猪日粮中添加杜仲叶提取物来替代部分抗生素，可有效改善断奶仔猪生产性能，降低腹泻率，保证猪只健康成长，同时可以降低增重成本，增加经济效益。
超声波辅助提取杜仲皮中的杜仲胶和杜仲黄酮
超声波辅助提取杜仲皮中的杜仲胶和杜仲黄酮袁英髦, 曹雁平【摘要】摘要:对超声波辅助提取杜仲皮中的杜仲胶和杜仲黄酮进行了研究.通过筛分和风选方式分选物料,分别提取胶和黄酮,使杜仲有效成分得到较大利用.研究超声频率、功率、提取时间和物料质量浓度对杜仲胶提取量的影响.结果表明,频率40 kHz时提取效果较好,提取量随功率、时间的增加和物料质量浓度的减少而提高.空气压缩机风速为4.9 m/s时,物料分选效果和1 mm筛选效果近似.通过前期分选,杜仲胶和杜仲黄酮没有损失.将杜仲粉碎后,粉末中杜仲胶的含量远小于絮状物中杜仲胶含量,并且先提取杜仲胶再提黄酮,更有利于杜仲胶和杜仲黄酮的利用.【期刊名称】食品科学技术学报【年(卷),期】2014(032)002【总页数】5【关键词】关键词:杜仲胶;杜仲黄酮;筛选;风选;超声辅助提取杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)为木兰纲金缕梅亚纲杜仲目杜仲科落叶乔木,又名扯丝皮、丝棉皮、思仙、思仲、木绵、石思仙、丝连皮,为我国名贵药用植物.随着对杜仲在医疗、工业、保健等多个领域研究的不断深入,尤其是具有胶塑二重性的杜仲胶,已经引起了人们的广泛关注[1].除杜仲胶外,杜仲中还含有具有抗菌利胆、止血、增高白血球及抗病毒作用的绿原酸、黄酮类化合物等有效成分,黄酮类化合物中槲皮素具有抗自由基等作用[2].目前对杜仲资源的利用,主要用于提取杜仲黄酮.因为杜仲胶经济价值不及杜仲黄酮,所以在提取黄酮过程后,杜仲胶就被舍弃.本实验将杜仲皮首先分成两部分,分别用于提取杜仲胶和杜仲黄酮,减少杜仲中有效成分的损失.超声波是频率高于20 kHz的声波[3],超声辅助提取法是借助于超声过程中产生的强烈空化作用来破坏植物细胞壁,加速细胞内容物脱离植物基体进入溶剂的过程[4].超声产生的机械振荡作用还可加快两相间的传质过程,提高传质速率,增大提取效率[5].超声辅助提取法的另一优点是低温提取,对于某些热不稳定的化合物尤为有效[6].Corrales等[7]比较了超声辅助提取法、静水压法和脉冲电场法对从葡萄中提取花青素的能力.Sanz等[8]利用超声场从大米中提取砷,提取率达到95%,提取时间只需几分钟,比传统提取方法减少数小时.Matthieu等[9]利用超声辅助提取法提取苹果渣中的多酚物质,提取率提高20%.Venkatasubramanian等[10]利用超声技术从甜菜中提取色素,提取率提高8%.Aparna等[11]研究了从杏仁中超声辅助提取杏仁油的工艺,使提取时间缩短为6 h,提取率提高77%.曹雁平等[12-14]、易克传等[15]对利用超声辅助提取法从植物中提取茶多酚、咖啡因、大蒜素、绞股蓝总皂甙等有效物质进行了深入研究,结果表明,超声辅助提取技术可以加快提取速度,提高提取效率.1 材料与方法1.1 材料和仪器杜仲皮,购于河北祁新中药公司,产地四川.FW-100型高速万能粉碎机,中国中兴伟业公司;ZW-0.05/7-x型无油空气压缩机,中国中浩公司;JXD-02型功率超声器,中国金星公司;RVC 2-18型离心浓缩机,美国CHRIST公司;RF-5301pc型分光光度仪,日本岛津公司;AVANCE III型核磁共振仪,瑞士布鲁克公司.石油醚(沸程60～90℃)、丙酮,分析纯,购于北京化工厂.1.2 实验方法1.2.1 杜仲皮前处理将5 g杜仲皮原料烘干后,用粉碎机粉碎.粉碎是为了破坏杜仲皮细胞壁和纤维质,使胶丝外露,有利于有机溶解提取.1.2.2 物料分选杜仲皮粉分成絮状物和粉状物两部分,直径1 mm以内称为粉状物,大于1 mm 为絮状物,分别用于提取杜仲胶和杜仲黄酮.使用通过1 mm孔径筛分(体积不同)和风选筛分(比重不同)两种方法进行区分杜仲皮粉中的絮状物和粉状物.在空气压缩机出风口接一长细管,出风口直径1.2 cm,面积1.13 cm2,,使其出风均匀,物料在出风口处下落直至静止始终受到风力影响,下落高度10 m.参数为物料质量及空气压缩机出风量,考察物料移动距离及分选质量.将絮状物和粉末分开,絮状物用于提取杜仲胶,粉状物用于提取杜仲黄酮.1.2.3 超声提取工艺流程由于杜仲胶在高温的石油醚中有很好的溶解性,将处理后的絮状物原料与石油醚混合装入圆底烧瓶置于85℃超声水浴场中提取杜仲胶,以一定的超声条件提取,圆底烧瓶上接冷凝回流装置,避免有机提取溶剂损失.将粉状物原料用体积分数为70%的乙醇在85℃下,提取杜仲黄酮.1.2.4 杜仲胶的析出与精制由于低温环境下杜仲胶在石油醚中的溶解度急剧下降,将提取液过滤后,置于-20℃冰箱3 h冷冻析出杜仲胶,滤去溶剂得到粗胶,将粗胶用丙酮洗涤,离心浓缩后过滤得到纯白色精胶.1.2.5 提取条件的选择选取频率为28,40,50,135 kHz的超声波,在超声功率0.05,0.15,0.25,0.35,0.45 W/cm2,提取时间 1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 h,物料质量浓度50.00,62.50,83.33,125.00,250.00 mg/mL的范围内进行研究.1.2.6 芦丁标准溶液的配制105℃干燥的芦丁标准品15 mg,加甲醇溶解并定容至100 mL,配置成150 μg/mL的芦丁标准溶液.取0.5,1.0,2.0,3.0,4.0 mL,加入体积分数为30%乙醇至5 mL,加0.3 mL质量分数为5%的NaNO2,5 min后加0.3 mL质量分数为10%的Al(NO3)3,6 min后加2 mL1 mol/L的NaOH,用30%乙醇加至10 mL,510 nm测吸光度绘制曲线,用于杜仲黄酮定量.2 结果与讨论2.1 物料分选对5 g已用粉碎机打碎的杜仲原料进行风选,见表1.通过和1 mm孔径筛分选的结果比较,由表1可知,风速为4.9 m/s时,分选效果已经基本达到目的,和1 mm 筛选效果(3 g杜仲皮粉得到2 g絮状物)近似.2.2 不同形态物料杜仲胶和杜仲黄酮含量的比较将絮状物和粉状物的粒度以1 mm为界,直接提取黄酮,絮状物中可提取ω(黄酮)=1%.先提取杜仲胶再提取黄酮,絮状物可提取ω(黄酮)=2.5%.直接提取黄酮,粉末中可提取ω(黄酮)=1.45%.先提取杜仲胶再提取黄酮,粉末可提取黄酮4%.直接提取杜仲胶,絮状物中可提取ω(杜仲胶)=9%.先提取黄酮再提取杜仲胶,絮状物可提取ω(杜仲胶)=1%.直接提取杜仲胶,粉状物中可提取ω(杜仲胶)=2.5%.先提取黄酮再提取杜仲胶,粉末可提取ω(杜仲胶)=0.5%.通过对絮状物料和粉末状物料分别在85℃下,物料质量浓度50.00 mg/mL,用石油醚浸提2 h提取杜仲胶和85℃下,与物料质量浓度50.00 mg/mL,用体积分数为70%乙醇溶液浸提2 h提取杜仲黄酮的结果比较发现,将杜仲粉碎后,粉状物中杜仲胶的含量远小于絮状物中杜仲胶含量.并且,对物料先提取胶再提黄酮,更有利于杜仲胶和杜仲黄酮的利用.2.3 超声条件影响分析2.3.1 超声频率对提取效果的影响用石油醚85℃提取2 h,物料质量浓度50.00 mg/mL,3 g杜仲絮状物,将超声功率设定为0.25 W/cm2,研究超声频率分别为28,40,50,135 kHz下的提取效果,与非超声提取效果进行比较,结果如图1.由图1可知40 kHz的超声频率对杜仲胶的提取效果较好,相对于非超声,提取量提高234%.2.3.2 超声功率对提取效果的影响用石油醚85℃提取2 h,物料质量浓度50.00 mg/mL,3 g杜仲絮状物,将超声频率设定为40 kHz,研究功率分别为0.05,0.15,0.25,0.35,0.45 W/cm2下的提取效果,结果如图2.图2表明杜仲胶的提取量随超声功率的提高而增长.2.3.3 时间对提取效果的影响用石油醚在85℃下提取,物料质量浓度50.00 mg/mL,3 g杜仲絮状物,将超声频率设定为40 kHz,超声功率设定为0.25 W/cm2,研究超声时间分别为1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 h下的提取效果,结果如图3.图3表明杜仲胶的提取量随提取时间的提高而增长.2.3.4 物料质量浓度对提取效果的影响用石油醚在85℃下提取2 h,将超声频率设定为40 kHz,超声功率设定为0.25 W/cm2,3 g杜仲絮状物,研究物料质量浓度分别为50.00,62.50,83.33,125.00,250.00 mg/mL条件下的提取效果,结果如图4.图4表明杜仲胶的提取量随物料质量浓度的提高而减小.2.4 杜仲胶的定性2.4.1 韦氏法用韦氏法[16]定性产物,将所得提取物0.1 g剪成细小颗粒,将其放入坩埚里,滴加少量的CCl4,待其发生溶胀后,加入4～6滴溴水,再在样品表面加入2 g苯酚将其覆盖.为加快其反应,将坩埚放置于沸水浴上,以蒸汽辅助加热5 min,使CCl4挥发.观察产物颜色,若为紫色、褐色或蓝色,则证明产物为杜仲胶.这种定性方法的优点是灵敏度高.本实验中所提取的产物呈褐色.2.4.2 提取物的核磁谱图将微量提取物溶解于氘代苯,进行1H-NMR分析,如图5.将图5进行解析并与标准样品谱图[17]对比,确定结构为杜仲胶.3 结论研究表明,40 kHz的超声波辅助提取效果较好,相对于非超声,提取物质量提高234%,3 g杜仲絮状物,超声功率0.45 W/cm2下物料质量浓度50.0 mg/mL提取3 h,提取量可达0.49 g,并且提取量随功率、提取时间和液料比的增加而提高.由于杜仲胶性质稳定,在鉴别方面一直存在困难,本实验通过灵敏度高的韦氏法和精确度高的1H-NMR对产物进行了鉴别,对本实验结果的准确度加以保证.本研究为杜仲资源的综合利用提供了新的思路,在提取黄酮的过程中,杜仲胶损失少,利用物料预处理分选的方式,使杜仲胶和杜仲黄酮达到分别提取的效果,并且在提取过程中加以超声辅助,加快提取速度,提高提取效率.参考文献:[1] 周莉英,刘晓利.杜仲胶的研究现状[J].陕西中医学院学报,2004,27(4):55-57.[2] 江腾龙,何尤琥,吴凌伟.低频超声技术在杜仲叶有效成份分离提取中应用[J].南昌大学学报,2001,25(1):93-97.[3] 张志健,李新生,陈锐.超声浸提技术在杜仲叶饮料加工中的应用研究[J].食品工业科技,2008,29(11):181-185.[4] 冯若.超声手册[M].南京:南京大学出版社,1999.[5] 应崇福.超声学[M].北京:科学技术出版社,1990.[6] 李辉,李亚男,龙凌亮,等.超声助提杜仲叶中绿原酸的溶剂效应[J].吉首大学学报,2006,27(4):90-92.[7] Corrales M,Toepfl S,Butz P,et al.Extraction of anthocyaninsfrom grape 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杜仲化学成分及药理作用研究进展_0
杜仲化学成分及药理作用研究进展杜仲是杜仲科杜仲屬多年生落叶乔木，其药材是杜仲树的干燥树皮。
杜仲具有补肝肾、强筋骨、安胎的功效，用于肝肾不足、腰膝酸痛、筋骨无力、头晕目眩、妊娠漏血、胎动不安[1]。
杜仲单独用药或组方用药能够治疗阳痿、遗精、早泄、健忘、骨质疏松症、更年期综合征、高血压、类风湿性关节炎、腰痛、坐骨神经痛、膝盖痛、肾脏缺乏性疼痛、骨折和关节疾病等。
药理学研究发现，杜仲化学成分对高血压、高血糖、糖尿病、肥胖、骨质疏松症、阿尔兹海默症、衰老和性功能低下等均有药理活性[2]。
现将杜仲的化学成分和药理作用，综述如下。
1杜仲的化学成分目前相关研究已从杜仲中分离得到了70种化合物，包括27种木质素、6种环烯醚萜、13种酚类、9种甾体和萜类、8种黄酮和7种其他化合物。
见表1。
11木脂素类木脂素及其衍生物是杜仲的主要成分。
据统计，从杜仲中已分离出27种木脂素，包括双环氧木脂素、单环氧木脂素、新木脂素、倍半木脂素。
12环烯醚萜类杜仲的另一种主要成分是环烯醚萜类。
目前已有6种环烯醚萜类成分从杜仲中提取并鉴定出来。
在这些化学成分中京尼平苷酸在体内和体外实验中已经证实其具有多种生物活性[2-7]。
13酚类酚类成分具有抗氧化、抗突变、抗炎和抗癌活性。
据统计，从杜仲中已分离并鉴定出13种酚类成分。
在这些成分中，绿原酸具有保护神经的作用[2]，也是评价杜仲提取物和制剂质量的重要指标。
14甾体和萜类在杜仲中仅发现并纯化了9种甾体和萜类。
目前，在杜仲中已分离出β-谷甾醇、胡萝卜苷、杜仲丙烯醇、betalin、白桦脂酸、杜仲二醇、地黄酸C、1，α，，α-tetrahydro-7-hydroxymethylcyclopenta [c] pyran-4-carboxylic methyl ester[8]。
15黄酮类黄酮类成分是自然界中非常普遍的次生代谢产物。
目前，从杜仲中已经提鉴定出了山槲皮素、芦丁、槲皮素3-O-半乳糖苷、quercetin-O-α-L-arabino-pyranosyl--β-D-glucopyranoside、异槲皮素等。
杜仲叶黄酮的提取方法及其生物活性研究进展
杜仲叶黄酮的提取方法及其生物活性研究进展李佳【摘要】杜仲作为一种传统中药材在中国已有2000多年的历史,近年来,杜仲皮和杜仲胶都已得到了较为充分的开发,而资源更为丰富的杜仲叶却常被作为动物饲料直接饲喂给家禽家畜或废弃处理,未加以有效合理利用,造成了资源的极大浪费.杜仲叶中黄酮含量高,提取方法多样,并且具有良好的生物活性,是一种很好的天然植物黄酮来源.因此,将杜仲叶黄酮提取利用后,再把树叶残渣做成动物饲料等产品加以二次利用,对于杜仲资源的深度综合开发和天然黄酮的广泛应用有重要意义.本文对近年来杜仲叶黄酮的提取方法及其生物活性的研究情况进行综述,以期为杜仲资源的深度综合开发利用提供理论依据.【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2019(040)007【总页数】5页(P346-350)【关键词】杜仲叶;黄酮;提取方法;生物活性【作者】李佳【作者单位】陕西学前师范学院生命科学与食品工程学院,陕西西安710100【正文语种】中文【中图分类】TS201.1杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)是杜仲科杜仲属多年生落叶乔木,为我国特有的珍贵二类保护物种[1],种植范围广泛,主要分布在湖南、广西、贵州、四川、陕西等地[2],具有清肝明目、壮阳补肾、调整血压、抗疲劳、提高免疫力、延缓衰老等功效,作为一种中药上品在中国已有2000多年历史[3-4]。
然而,目前对杜仲的开发利用并不全面,多只局限于杜仲皮和杜仲胶,其中,杜仲皮从古至今一直在中医领域发挥着重要作用,杜仲胶也因其具有优异的橡塑二重性,作为一种天然橡胶被广泛应用于各个行业领域[5-7],在国内外拥有极大的产业覆盖面[8-9],而相比于这两者,资源更为丰富的杜仲树叶却一直缺乏有效的加工利用。
研究表明,杜仲叶与皮有相似的化学成分和药理作用[10-11],但在杜仲不同部位中的总黄酮含量有很大差别,以杜仲叶(尤其是老叶)中的总黄酮含量最高,若对其进行提取利用,不仅可以弥补传统药源的不足[12-14],还可以把天然的杜仲叶黄酮应用到各个领域,尤其是食品加工领域。
杜仲总黄酮对小鼠急性肝损伤的保护作用
杜仲总黄酮对小鼠急性肝损伤的保护作用蒋真真;袁带秀;胡倩;刘雯雯【摘要】研究了杜仲总黄酮对四氯化碳( CCl4)诱导的急性肝损伤的保护作用。
通过腹腔注射CCl4诱导小鼠急性肝损伤，检测小鼠血清中谷丙转氨酶( ALT)、谷草转氨酶( AST)的含量、肝脏中超氧化物歧化酶( SOD)的活性、谷胱甘肽( GSH)和丙二醛( MDA)的含量，考察杜仲总黄酮的保肝作用。
结果表明：杜仲总黄酮能显著降低急性肝损伤小鼠血清中的ALT、 AST活性与肝脏中的MDA含量，并能提高肝脏中的SOD与GSH活性。
杜仲总黄酮对CCl4引起的急性肝损伤小鼠具有保护作用，其作用机制可能与抗氧化作用有关。
%To study the protective effects of total flavonoids of Eucommia ulmoides on acute liver injury in mice by CCl4 , the experimental models of acute liver injury were induced by CCl4 ip. The levels of ALT, AST in serum, the activities of SOD, GSH and MDA in liver homogenates were examined to observe the protective effects of total flavonoids of Eucommia ulmoides. Results showed that The total flavonoids of Eucommia ulmoides could reduce the activities of ALT, AST in serum and the contents of MDA in liver homogenate of acute liver injury mice models. It could increase the activity of SOD and GSH in liver homogenate. The total flavonoids of Eucommia ulmoides have protective effects on acute hepatic injury induced by CCl4 in mice. The effects may be due to its antioxidant activity.【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2016(000)002【总页数】2页(P69-70)【关键词】杜仲总黄酮;四氯化碳(CCl4);保肝;急性肝损伤【作者】蒋真真;袁带秀;胡倩;刘雯雯【作者单位】吉首大学医学院，湖南吉首 416000;吉首大学医学院，湖南吉首416000;吉首大学医学院，湖南吉首 416000;吉首大学医学院，湖南吉首416000【正文语种】中文【中图分类】R285杜仲属杜仲科植物，为我国特有的单科目、单属科、单种属植物，在秦岭以南山地、四川、贵州、湖南、湖北、江西等省、自治区均有分布。
杜仲的主要成分和作用
杜仲的主要成分和作用杜仲的化学成分树皮含杜仲胶6～10%，根皮约含10～12%，树叶含杜仲胶2%～4%.此外，还含糖甙0.142毫克%、生物碱0.066毫克%、果胶6.5毫克%、脂肪2.9毫克%、树脂1.76毫克%、有机酸0.25毫克%、酮糖（水解前2.15毫克%、水解后3.5毫克%）、维生素C20.7毫克%、另外。
含有维生素E，维生素B及beta;-胡萝卜素等，还含有很多人体必须的微量元素，醛糖、绿原酸。
种子所含脂肪油的脂肪酸组成为亚麻酸67.38%、亚油酸9.97%、油酸15.81%、硬脂酸2.15%.棕榈酸4.68%.果实含胶量可达27%，易溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。
近年来许多学者对杜仲的化学成分进行了大量研究。
经研究发现杜仲的皮、叶、枝条、果实和花中含有的成分大致可分为以下几类：木脂素类（lignans）杜仲膏包括松脂醇二葡萄糖苷（pinoresinoldiglucoside）这一主要降压成分、丁香脂醇二葡萄糖昔、橄榄脂素、吉尼波西狄克酸甲脂（geniposidicacidmethylester）、儿茶素-（7，8-b，c）-4alpha;-（3，4-二羟苯基）-alpha;-（3H）吡喃糖、儿茶素-（7，8-b，c）-4beta;-（3，4-二羟苯基）-alpha;-（3H）吡喃糖等，迄今为止，从杜仲中已分离出木脂素类化合物27种，其中许多有效成分在抗肿瘤方面具有很好的活性。
苯丙素类化合物（penylpropanoids）包括香豆酸（coumaric）、咖啡酸乙酯（caffeicacidethylester）、绿原酸（chlorogenic-acid）、松柏苷（syringin）。
迄今为止，杜仲中发现苯丙素类化合物有11种。
环烯醚萜类（iridoids）杜仲醇（encommiol）、杜仲醇苷（encommio-side）、京尼平（genipin）、京尼平苷酸（geniposidicacid）、京尼平苷（geniposide）、桃叶珊瑚苷（aucubin）、筋骨草苷（ajugoside）、哈帕苷丁酸酯（harpagideacetate）、雷扑妥苷（reptoside）、车叶草酸、去乙酰车叶草酸、10-乙酰鸡屎藤苷、表杜仲醇。
杜仲叶总黄酮的提取和活性
Extraction and properties of flavonoids from Eucommia ulmoides leaves
WANG Wen-jun, XIANG Can-hui*, LUO Jian-fei, CHEN Yang, SUN Zhi-yong
(Bioengineering Faculty, Zuiyi Medical College Zhuhai Campus, Zhuhai 519041)
提取物与应用
此，实验以贵州产杜仲叶为原料，对其中的总黄 酮进行了提取、纯化和抗氧化活性测定，希望为 杜仲叶总黄酮的开发提供实验数据支持。 1 材料与方法 1.1 材料及仪器 杜仲叶：500 g，产自贵州遵义市；芦丁标准 品：成都曼思特生物科技有限公司；ABTS标准 品[2,2′ -联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺 盐]：美国Sigma公司；其他试剂均为国产分析纯。 BSA124S电子天平：赛多利斯科学仪器北京 有限公司；UV-2550型紫外分光光度计：日本岛 津公司；Scientz-10N型冷冻干燥机：宁波新艺生 物科技股份有限公司；旋转蒸发仪：上海夏丰实 业有限公司；抽滤器：巩义市予华仪器有限责任 公司。 1.2 方法与步骤 1.2.1 杜仲叶粉碎，过80目筛，干 粉与石油醚按物料比1:5(w:v)进行混合，常温下搅 拌、浸泡2 h，然后超声20 min，抽滤至尽干，固 体在烘箱中50 ℃干燥12 h，称量，备用。 1.2.2 粗提取 按1:3料液比用体积分数为50%的乙 醇溶液对脱脂杜仲叶粉末超声辅助提取30 min， 60~70 ℃下减压旋蒸浓缩至尽可能少的体积。得 到黏稠的液体，备用。 1.2.3 定性分析 1.2.3.1 UV分析 用芦丁标准品和样品溶解于乙醇 中，以乙醇为空白，在200~600 nm范围内进行UV 分析，图谱比对。 1.2.3.2 TLC色谱分析 微乳液展开剂色谱法：用 十二烷基硫酸钠:正丁醇:正庚烷按照3.9:5.2:0.91(质 量比)称取各试剂，加入适量水，使水的含量达到 70%，配制总量为100 g，即为微乳液展开剂。用 毛细管在聚酰胺薄膜上点样，展开。 40%冰乙酸色谱分析：40%冰乙酸作为展开 剂，用毛细管在聚酰胺薄膜上点样，展开。 正丁醇:冰硫酸:水展开剂色谱分析：用正丁醇 :冰硫酸:水以4:1:2混合作为展开剂，用毛细管在聚 酰胺薄膜上点样，展开。 1.2.4 聚酰胺柱层析法提纯 将聚酰胺粉末在无水 乙醇中浸泡24 h、不断搅拌，然后装柱，静置24 h，用蒸馏水洗至流出液无醇味。湿法上样，静止 吸附24 h，用蒸馏水洗脱至流出液接近无色，然 后用体积分数为15%、30%、55%的乙醇溶液进行 粉碎与脱脂
微波提取杜仲总黄酮的工艺研究
微波提取杜仲总黄酮的工艺研究【摘要】目的研究微波提取杜仲总黄酮的最佳工艺条件。
方法利用微波技术通过正交实验方法，探讨杜仲总黄酮最佳提取工艺条件。
结果因素相关性为:乙醇浓度＞提取温度＞提取时间＞料液比；杜仲总黄酮提取的最佳工艺条件为微波时间9min，乙醇浓度60%，提取温度80℃，料液比1∶10。
结论微波技术具有提取效率高，提取速度快，能量消耗小等特点，应用于中草药有效成分提取的前景广阔。
【关键词】微波技术杜仲总黄酮正交实验杜仲Eucommia ulmoides是杜仲科杜仲属植物，它含有绿原酸、桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷、黄酮类物质、地普黄内酯、多糖等活性成分，具有补肝肾、强筋骨、降压、抗菌、利尿、抗肿瘤、抗衰老、增强免疫等药理作用，被广泛用于药品和疗效食品的研究与开发中［1，2］。
微波技术作为一种新兴的技术，近年在提取天然植物（特别是中草药）中的有效成分得到广泛应用［3，4］，与常规提取方法比较，具有选择性高、快速高效、溶剂消耗少、活性成分得率高、不产生噪音、适合于热不稳定物质等特点。
黄酮类化合物是杜仲的主要有效成分之一，具有多种生物活性。
杜仲黄酮类化合物含量的高低，是判断杜仲相关产品的重要指标［5］。
近年来，对杜仲黄酮类化合物的提取方法研究是热点，本实验采用微波技术通过正交实验提取杜仲总黄酮。
1 器材1.1 原料杜仲，购于湖南长沙康尔佳药店，粉碎过40目筛，80℃烘干备用。
1.2 试剂与仪器乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、NaOH等，均为分析纯；芦丁对照品，购于中国上海医药化学试剂公司；721型分光光度计，MDS-6型温压双控微波萃取仪，粉碎机。
2 方法2.1 标准曲线的绘制精密称取在105℃下干燥至恒重的芦丁对照样品10 mg，加80%乙醇溶解后定容至25 ml。
分别移取0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml置10 ml容量瓶中，各加5%亚硝酸钠0.3 ml，6 min后加10%硝酸铝0.3 ml，放置6 min，加4%氢氧化钠溶液4ml，以80%乙醇稀释至刻度，摇匀。
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简述杜仲黄酮
杜仲黄酮为杜仲提取物主要活性成分之一，具有清除自由基、提高免疫力、抗菌消炎、护肝、雌激素样作用等。
以杜仲叶中的总黄酮含量最高，尤以老叶中的含量最高。
从杜仲中分离出已知的10种黄酮类化合物，其母核有山柰酚和槲皮素2 种类型，主要包括槲皮素、山柰酚、芦丁、异槲皮苷、金丝桃苷、紫云英苷、陆地锦苷、汉黄芩素、千叶素A和黄芩素等。
杜仲黄酮的主要生理活性
1、抗氧化作用
黄酮类化合物的抗氧活性与分子结构的有效酚羟基有关。
所谓有效酚羟基是指黄酮化合物在清除活性氧的时候起供氢体作用和稳定自由基中间体并起金属络合作用的那类酚羟基，它们对活性氧清除起重要作用。
酚羟基通过供氢与自由基反应生成酚氧自由基，该酚氧自由基又受到芳环大共轭体系的共振稳定，形成半醌式自由基，从而终止自由基链式反应，通过这种作用可以抑制氧化作用。
杜仲黄酮还能增强超氧化物歧化酶的活力，对肝脏、肌肉的脂质过氧化有明显保护作用。
2、提高免疫力作用
杜仲黄酮对免疫系统的多个环节都具有不同程度的调节能力，能增强巨噬细胞吞噬能力和自然杀伤细胞活性，增加抗体产量，增强体液免疫和细胞免疫功能，提高抗病力与自愈力。
黄酮类提高免疫功能的机制有：（1）直接作用于免疫器官（胸腺、脾脏）或细胞（各种免疫细胞）上的雌激素受体；（2）调节垂体生长激素或催乳素分泌，通过生长激素和催乳素间接发挥作用；（3）降低体内生长抑素水平，解除其对免疫系统的抑制作用，促进垂体生长激素分泌，明显提高免疫机能。
3、抗菌消炎作用
有研究报道，黄酮类对金黄色葡萄球菌、大肠埃希杆菌和枯草杆菌等的抑制作用较明显。
其抗菌机制主要有：（1）破坏微生物细胞壁及细胞膜的完整性，导致胞内成分释放而引起膜的电子传递、营养吸收、核苷酸合成及ATP活性等功能障碍，从而微生物抑制生长；（2）黄酮呈弱酸性，能使部分蛋白质凝固或变性，有杀菌和抑菌作用；（3）使微生物菌体扭曲变形，进而细胞壁破裂，内容物外漏，直至成为空壳或分解为颗粒状残渣。
4、雌激素样作用
黄酮类化合物均有雌激素样作用，可能是因其结构与己烯雌酚相似。
杜仲黄酮中的槲皮素、汉黄芩素、千叶素A、黄芩素等活性成分具有弱植物雌激素样作用。
杜仲黄酮和雌激素受体结合后刺激动物下丘脑-垂体-性腺轴发挥调节作用。
动物内源性雌激素不足，杜仲黄酮和雌激素受体结合后，刺激下丘脑释放促性腺激素释放激素，作用于垂体后，垂体产生促卵泡激素（FSH）和促黄体生成素（LH）作用于卵巢，刺激卵巢排卵，还可以降低卵泡闭锁，减少细胞凋亡，从而增加排卵率、增加产蛋量。
同时产生的FSH和LH还对动物的卵细胞的发育发挥作用。
5、对笼养蛋鸡疲劳综合症骨重塑具有重要作用
笼养蛋鸡骨质疏松症，是现代化集约化生产中产蛋鸡重要的营养代谢性骨骼疾病之一。
蛋鸡上笼过早，笼内密度过大，运动不足等均可导致鸡体质变弱而易发此病。
环境温度高、严寒、噪声、疫苗接种及饲料突然改变等应激因素，均能造成笼养蛋鸡钙、磷代谢紊乱而诱发该病。
研究证实，骨质疏松发病与雌激素水平降低有着密切的关系。
雌激素水平降低，对成骨细胞的刺激减弱，是最重要的原因。
雌激素能促进成骨细胞的增殖和胶原的合成，对维持骨吸收和骨形成的平衡具有极其重要的作用。
杜仲黄酮具有弱的植物雌激素样作用，在内源激素水平较低时，它可与雌激素受体相结合，表现出雌激素激动剂作用，从而对笼养蛋鸡疲劳综合征骨重塑具有重要作用。
（责编：张坤）。