呼吸道九联检 (1)

2，洗板要充分，浸泡在PBS洗液中时要振荡，振荡完 之后的PBS洗液要倒掉，不能重复利用，避免污染。
3，实验片子最好在48小时内观察，若需保存，需避光 放置在2-8摄氏度下不超过7天.
4，结果判定，对结果荧光细胞数占3%以上时，报阳 性，其余阴性。
临床应用
一：儿童 儿童呼吸道感染的入院筛查项目
九项呼吸道感染病体IgM抗体检 测试剂盒临床应用
安图生物：客户服务部
研究背景
➢上呼吸道感染
鼻腔、咽、喉部 ----- 常见病因病毒，少数为细菌 ；
➢下呼吸道感染(最常见的感染性疾患)
气管、支气管、肺部----由病毒、细菌、支原体、 衣原体、军团菌等微生物引起。
以社区获得性肺炎(CAP)多见
研究背景
研究背景
国内CAP的混合感染
共入组665例病人，其中完成非典型病原体检测的为610例 刘又宁等．中华结核和呼吸杂志，2006;29(l):3-8．
研究背景
➢在CAP病原学中，非典型病原体占3％-40 ％ ➢大多数研究显示
肺炎支原体感染发病率居首位，占2％-30％ 肺炎衣原体占6％-22％ 军团菌属散发感染的病原体，发病率约为2％-15％ 混合感染占15％-38％
图表 2肺炎支原体（2孔）阴\阳
第5、6、7、8、9孔：国外荧光显微镜：荧光形态符合标准，亮 度明亮，荧光细胞比例超过3%即400倍镜下，每个视野中约5个 阳性细胞；国内荧光显微镜下：荧光形态符合标准，亮度较亮， 荧光比例超过1%，即400倍镜下，每个视野中约2-3个阳性细胞
附注：荧光形态为胞核、胞浆或胞膜混合荧光模式
➢5-15岁青年易被感染，尤其是人群聚集处 ➢多起病缓慢，潜伏期30天左右 ➢临床多出现流感样的症状，发热一般低于38度， 数天至数周后出现持续性干咳，若不及时治疗会持 续数月 ➢阳性率一般在1-5%左右
腺病毒
➢无外壳的双链DNA病毒，与人类呼吸道感染密切有关 ➢腺病毒肺炎80%发生于7～24月婴幼儿，冬春两季常见 ➢约占病毒性肺炎的20%～30%，居第二位 ➢潜伏期3～8天，急骤发热，自第1～2日即39℃以上的高热， 第3～4日呈不规则的高热；60%以上的病例体温超过40℃ ➢在呼吸、神经、循环、消化等系统都有症状显现
儿 童 下 呼 吸 道 感 染 病 原 体 检 出 率 （ ％ ）
154例 2月～17岁 检出率79% Michelow IC, et al. Pediatrics, 2004;113(4):701-707.
研究背景
亚太地区CAP的调查
➢ 亚洲12个中心1756例CAP患者 ➢ 获得1374例患者双份血清 ➢ 非典型病原体: 23.5% of CAP 病例
7.75%
数据分析—中国人民解放军301医院
名称 嗜肺军团菌 肺炎支原体 Q热立克次体 肺炎衣原体
肺炎支原体
➢介于病毒与细菌之间一种没有细胞壁的病原体； ➢儿童和青少年（5-15岁）--40%以上的非典型肺炎病例是 由肺炎支原体引起的，同时由多达18%的住院病例是儿童。 ➢冬季较多，地区性流行； ➢IgM抗体检测，PCR是目前公认的检测标准；
➢治疗：大环内酯类首选、喹诺酮类药物。
Q热立克次体
➢ 西班牙VIRCELL公司研发生产的九项呼吸道感染病原体 IgM抗体检测试剂盒涵盖了以上所有最常见的非典型呼吸道 病原体；联合检测，避免漏检，特别是避免混合感染的漏 检。
➢ 广泛应用于各级疾控中心SARS的筛查、鉴别，至2012年 国内已有超过200家的大型三甲医院、CDC在开展、使用。
试剂盒的设计理念
➢ 1. 嗜肺军团菌血清1型（悬浮于0.5%正常鸡卵黄囊中
➢
以增强抗原吸附性和避免细菌聚集）
➢ 2. McCoy细胞中的肺炎支原体
➢ 3. Q热立克次体II期（悬浮于0.5%正常鸡卵黄囊中以
➢
增强抗原吸附性和避免细菌聚集）
➢ 4. 肺炎衣原体（原生小体）
➢ 5. HEp-2细胞中的腺病毒
➢ 6. HEp-2细胞中的呼吸道合胞病毒
用于证明试剂盒及试验的有效性，含有人血清及防 腐剂。
羊抗人IgG抗血清用来吸附人IgG避免干扰IgM检测。
荧光素标记的抗人免疫球蛋白结合物，含有伊文思 蓝（对比染色）和蛋白稳定剂。和抗原抗体复合物 反应，并显色。
甘油缓冲液，便于观察。
用于洗涤步骤，从反应介质中除去未结合的免疫球 蛋白和结合物。
呼吸道九联检简要操作规程
呼吸道合胞病毒
➢ RNA病毒 ➢约有2/3的婴儿在出生第一年会感染；2.5%的感染者住院 （每年美国有超过9万的儿童），0.1%的感染者会致命 ➢占病毒性肺炎的 25%-35% ；居儿童病毒性感染第一位 ➢在冬季爆发流行 ➢潜伏期3-7天，IgM抗体在发病1周出现，持续2～3个月
流感病毒
➢球形RNA病毒 ➢根据其核蛋白的抗原性可以分为三类:
内科病人以及外科病人术后易发呼吸道感染或免疫力低下易受到感染的患者皆可
呼吸道病原体感染概况——郑州大学基础医学院
——《呼吸道联检试剂在儿童不典型呼吸道感染中的应用研究》
呼吸道病原体感染概况—云南省第一人民医院
——《呼吸道混合感染病因分析在临床诊治的应用》
数据分析—南京胸科医院
名称 嗜肺军团菌 肺炎支原体 Q热立克次体 肺炎衣原体
图表 1嗜肺军团菌（1孔）
3孔：形态为典型的球杆状， 4孔：形态典型的球状。
图表 3立克次体（3孔）
图表 4肺炎衣原体（4孔）
第2孔：国外显微镜下：荧光形态符合标准，亮度明亮，荧光细 胞比例超过50%；国内显微镜：荧光形态符合标准，亮度可以， 荧光细胞比例超过10%
附注：荧光形态为胞围荧光模式
甲型、乙型、丙型
✓ 呈季节性周期性流行爆发（12月-4月） ✓ 甲型流感的流行每年都会发生 ✓ 乙型流感的流行只在每3-6年爆发一次，感染人数超过总 人口的25%
副流感病毒
➢单链的RNA病毒 ➢致病性仅次于呼吸道合胞病毒，尤其在儿童中 ➢全年均发生 ➢第 1 和第 3 型常见于幼儿，局部流行发生于托儿所、儿科 病房、小学及其他儿童场所 ➢第3型为地方性流行，传染性强
➢ 血清学检测：IFA、操作简便、结果快速； ➢ IgM抗体检测：近期感染的有效指标，对临床
诊断有重要指导意义； ➢ 多种病原同时检测：节省时间、便于快速诊断； ➢ 实验条件：易于实现、利于基层医疗机构开展； ➢ 应用价值：为临床呼吸道病原鉴别诊断提供导向性依据。
载玻片
载玻片
➢ 包被有下列抗原：
九种呼吸道病原菌IgM抗体出现和持续时间
军团菌 肺炎支原体 立克次氏体
衣原体 腺病毒 合胞病毒 流感病毒 副流感病毒
IgM抗体出现时间
4-7天 感染后1周 感染后2周 感染后2周 感染后1周 感染后1周 感染后1周 感染后1周
持续时间
3-6个月 3-6个月 3-4个月 2-6个月 2-3个月 2-3个月 2-3个月 2-3个月
➢介于最小细菌和病毒之间一类的原核细胞型微生物 ➢大部分病例发于春天或初夏，流行分布全世界 ➢绵羊和牛是人类的主要传染源，吸入感染的污染物 ➢多见于男性青壮年，潜伏期12～39天，平均18天 ➢多急骤起病，发热、头痛、寒颤，肌痛、胸痛
体温可升至40℃持续1～3周 ➢治疗：氯霉素、四环素.
肺炎衣原体
➢ 肺炎支原体: 12.2% ➢ 肺炎衣原体: 4.7% ➢ 嗜肺军团菌: 6.6%
亚洲CAP患者中非典型病原体患病率高
Ngeow YF, et al. Int J Infect Dis. 2005, 9:144-153
研究背景
阳 性 率
7个城市、12个研究中心、665例
刘又宁等．中华结核和呼吸杂志，2006;29(l):3-8.
检测结果显示-阴性结果图谱
PPOOSSIITIVE TIVE
NNEEGGAATTIVI E VE
检测结果显示- 阳性结果图谱
呼吸道九联检结果判断标准
观察结果时，先在10倍镜下对载玻片进行观察，找到视野后再换至 40倍镜下观察结果。建议先观察第十孔（质控孔），这样有利于判 断本底（减少杂质荧光的干扰或者病人自身抗体的干扰），其余各 孔的观察顺序可以根据自己的习惯进行调整。 400倍镜下，九联检各孔的阳性判断标准如下： 第1、3、4孔：形态符合标准；亮度明亮；数量上均匀布满整个视野 ，400倍镜下每个视野内荧光个数超过70个 附注：1孔：形态为典型的杆状，详见下图：
二：呼吸科入院筛查项目 呼吸道感染的入院筛查项目
三：易发生呼吸道感染的病人人群
文献报道： 恶性肿瘤继发下呼吸道感染 肺癌合并肺部感染，发病率60%左右， 肺部感染是妇科肿瘤术后常见并发症 恶性淋巴瘤临床表现有呼吸道感染 呼吸道感染导致肾功能衰竭 呼吸道感染诱发加重肾功能不全 病毒感染时肾病综合征常见并发症
实验室检测方法
临床症状： 相似难以辨别；
影像学检查: 特异性差；
病原的分离培养： 培养时间长； 操作繁琐； 技பைடு நூலகம்难度大；
分子生物学检测：核酸检测、PCR； 血清学检测:ELISA、IFA等；
九项呼吸道感染病体IgM抗体检测试剂盒 产品简介
➢ 西班牙VIRCELL公司：成立于1991年。专业从事呼吸道病 原体检测试剂盒的研发和生产。
混合感染 嗜肺军团菌、肺炎支原体 肺炎支原体、乙型流感病毒 肺炎支原体、副流感病毒
嗜肺军团菌、乙型流感病毒
甲型流感病毒、副流感病毒 肺炎支原体、腺病毒
肺炎支原体、肺炎衣原体、乙 型流感病毒 总计
数量 13例 9例 7例 1例 1例 1例 1例
33例/426例
比例 3.05% 2.1% 1.6% 0.02% 0.02% 0.02% 0.02%
腺病毒 呼吸道合胞病毒
甲型流感病毒 乙型流感病毒 副流感病毒1.2.3型
总计