分光光度分析法
分光光度法分类
分光光度法分类
分光光度法是一种常用的化学分析方法，它利用物质对特定波长的光的吸收来测定物质的浓度。
根据测定原理和测定范围的不同，分光光度法可以分为多种分类。
一、紫外可见分光光度法
紫外可见分光光度法是利用物质对紫外或可见光的吸收来测定物质浓度的方法。
它广泛应用于生物化学、环境监测、食品检测等领域。
紫外可见分光光度法的优点是测定灵敏度高，测定速度快，操作简便，但其缺点是对样品的透明度和颜色有一定的要求。
二、原子吸收光度法
原子吸收光度法是利用物质对特定波长的光的吸收来测定物质浓度的方法。
它广泛应用于金属元素的分析和测定。
原子吸收光度法的优点是测定精度高，测定范围广，但其缺点是对样品的处理要求高，操作复杂。
三、荧光光度法
荧光光度法是利用物质在受到激发后发出荧光来测定物质浓度的方法。
它广泛应用于生物化学、环境监测、食品检测等领域。
荧光光度法的
优点是测定灵敏度高，测定速度快，但其缺点是对样品的处理要求高，操作复杂。
四、化学发光光度法
化学发光光度法是利用化学反应产生的发光来测定物质浓度的方法。
它广泛应用于生物化学、环境监测、食品检测等领域。
化学发光光度
法的优点是测定灵敏度高，测定速度快，但其缺点是对样品的处理要
求高，操作复杂。
总之，分光光度法是一种非常重要的化学分析方法，它在生物化学、
环境监测、食品检测等领域都有广泛的应用。
不同的分光光度法有不
同的优缺点，我们需要根据具体的实验要求来选择合适的方法。
原子吸收分光光度法
特点：常温测量；灵敏度、准确度较高（汞可达10-8g）
四、分光系统：单色器
1.作用 将待测元素的共振线与邻近线分开。 2.组件 色散元件（棱镜、光栅），凹凸镜、狭缝等。 3.单色器性能参数 （1）线色散率（D）两条谱线间的距离与波长差的比值 ΔX/Δλ。实际工作中常用其倒数 Δλ/ΔX （2）分辨率 仪器分开相邻两条谱线的能力。用该两条 谱线的平均波长与其波长差的比值λ/Δλ表示。 （3）通带宽度（W）指通过单色器出射狭缝的某标称波 长处的辐射范围。当倒色散率（D）一定时，可通过选择 狭缝宽度（S）来确定： W=DS
该法可消除基 体干扰；不能消 除背景干扰；
使用标准加入法应注意以下几点： （1）标准加入法的基础是待测元素浓度与其吸光度 成正比，因此待测元素的浓度应在此线性范围内。 （2）为了得到较为准确的外推结果，最少应采用4 个点来作校准曲线。加入标准溶液的量应适当，以 保证曲线的斜率适宜，太大或太小的斜率，会引起 较大的误差。 （3）本法能消除基体效应带来的影响，但不能消除 背景吸收的干扰。如存在背景吸收，必须予以扣除， 否则将得到偏高的结果。
二、基态与激发态原子的分配
共振线 波长/ nm Cs 852.1 Na 589.0 Nj/N0 T=2000 K 4.44×10-4 9.86×10-6 T=3000 K 7.24×10-3 5.88×10-4 T=4000 K 2.98×10-2 4.44×10-3 T=5000 K 6.82×10-2 1.51×10-2
2.标准加入法
取若干份体积相同的试液（cX），依次按比例加入不同 量的待测物的标准溶液（cO），定容后浓度依次为： cX ， cX +cO ， cX +2cO ， cX +3cO ， cX +4 cO …… 分别测得吸光度为：AX，A1，A2，A3，A4……。 以A对浓度c做图得一直线，图中cX点即待测溶液浓度。
分光光度法
原子发射光谱法 (atomic emission photometry) 分子发光分析法
II. 可见-紫外分光光度法
一、概述
1、定义：
利用物质的分子或离子对某一波长范围 的光的吸收作用，对物质进行定性、定量 及结构分析的方法
3、所用仪器： 分光光度计(spectrophotometer)
（1）主要部件：
信
光 源
单
吸
检
色
收
测
器
池
器
号 显 示 系
统
（2）使用： 1．开电源开关，打开箱盖，预热10min
2．将空白管、对照管、测定管分别装入 比色皿(3/4vol),并用吸水纸擦干光面外壁
3．选定波长
4．打开箱盖(光路开关自动关闭)，用空 白管调T=0
5. 盖上箱盖(光路开关自动打开)，再用空 白管调T=100%(若调不到，则可调节灵敏 度开关)
6．将选择开关旋至A,此时显示数值应为0， 否则调节“消光零”旋钮调至0
7．逐步拉出试样架拉手，读取各管吸光度 值A
8．全部测定结束后，取出比色皿(洗净)， 关闭开关
4、比色法的定量方法：
①标准曲线法: 将一系列浓度不同的标准溶液按照一定
选择吸收
----组成物质的分子仅吸收与其内能变化 (基态与激发态能量差)相对应的波长或 频率的光，所得到的光谱称为吸收光谱
能量释放
----处于较高能态的分子(激发态分子)不稳 定，当其返回基态时，以热或发射光谱的 形式将能量释放出来。所发射出的相应光 谱，称分子发射光谱
激发态 发 射 光 谱
E1 吸 收 光 谱
分光光度法的原理
分光光度法的原理
分光光度法是一种常用的分析测量方法，它利用物质在特定波长下的吸收特性来确定其浓度。
具体来说，分光光度法是基于比尔-朗伯定律而建立的。
比尔-朗伯定律表示了物质吸收光的强度与其浓度之间的关系。
根据该定律，当一束单色光通过一定浓度的溶液时，被溶液吸收的光的强度和溶液的浓度成正比，即吸光度与浓度之间存在线性关系。
在分光光度法中，首先需要将要测定的样品转化为溶液，然后通过分光器将一束光分成不同波长的光线（称为光谱）。
接下来，将吸收比较强的光波长选择为测定波长，通过测定溶液对该波长光的吸光度，可以得到溶液中待测物质的浓度。
分光光度法的原理是基于颜色对光的吸收特性的利用。
不同物质对不同波长的光有不同的吸收特性，在特定波长下，吸光度与物质的浓度呈线性关系。
因此，通过分析样品吸收光的强度，再根据已知物质浓度的标准曲线，可以确定样品中待测物质的浓度。
分光光度法的优点是操作简单、灵敏度高且广泛适用于不同种类的化学物质分析。
因此，它在环境监测、食品安全、药物分析等领域得到了广泛应用。
红外分光光度法
红外光谱法红外光谱法又称“红外分光光度分析法”。
简称“IR”,分子吸收光谱的一种。
利用物质对红外光区的电磁辐射的选择性吸收来进行结构分析及对各种吸收红外光的化合物的定性和定量分析的一法。
红外光谱法的一般特点特征性强、测定快速、不破坏试样、试样用量少、操作简便、能分析各种状态的试样、分析灵敏度较低、定量分析误差较大。
红外光谱法的应用1.定性分析和结构分析红外光谱具有鲜明的特征性，其谱带的数目、位置、形状和强度都随化合物不同而各不相同。
因此，红外光谱法是定性鉴定和结构分析的有力工具2.定量分析红外光谱法对试样的要求红外光谱的试样可以是液体、固体或气体，一般应要求：（1）试样应该是单一组份的纯物质，纯度应>98%或符合商业规格才便于与纯物质的标准光谱进行对照。
多组份试样应在测定前尽量预先用分馏、萃取、重结晶或色谱法进行分离提纯，否则各组份光谱相互重叠，难于判断。
（2）试样中不应含有游离水。
水本身有红外吸收，会严重干扰样品谱，而且会侵蚀吸收池的盐窗。
（3）试样的浓度和测试厚度应选择适当，以使光谱图中的大多数吸收峰的透射比处于10%~80%范围内。
目前主要有两类红外光谱仪：色散型红外光谱仪和傅立叶变换红外光谱仪。
一、色散型红外光谱仪1 . 光源红外光谱仪中所用的光源通常是一种惰性固体，同电加热使之发射高强度的连续红外辐射。
常用的是Nernst灯或硅碳棒。
Nernst灯是用氧化锆、氧化钇和氧化钍烧结而成的中空棒和实心棒。
工作温度约为1700℃，在此高温下导电并发射红外线。
但在室温下是非导体，因此，在工作之前要预热。
它的特点是发射强度高，使用寿命长，稳定性较好。
缺点是价格地硅碳棒贵，机械强度差，操作不如硅碳棒方便。
硅碳棒是由碳化硅烧结而成，工作温度在1200-1500℃。
2 . 吸收池因玻璃、石英等材料不能透过红外光，红外吸收池要用可透过红外光的NaCl、KBr、CsI、KRS-5（TlI 58%，TlBr42%）等材料制成窗片。
第十章 分光光度法
注：溶液的透光率T反映了物质对光的吸收程度， T越大表示它对光的吸收越弱；反之，T越小，表 示对光的吸收越强。
T 取值为0.0 % ~ 100.0 %
T
全部吸收
T = 0.0 %
全部透射 T = 100.0 %
2.吸光度： 为透光率的负 A lg I0 lg 1 ＝ lgT
（四）吸光系数 1．定义（物理意义）
一定条件下，吸光物质在单位浓度及单位液层 厚度时的吸光度，叫这个物质的吸光系数。
2．两种表示方法
(1) 摩尔吸光系数( ε )：表示一定波长下，吸光物质的溶液
浓度为1mol/L，液层厚度为1cm时，溶液的吸光度。
(2)百分吸光系数(
E1% 1cm
)：表示一定波长下，吸光物质的溶
黄 橙
红
/nm 颜色 400-450 紫
450-480 蓝 480-490 青蓝 490-500 青 500-560 绿 580-610 黄 610-650 橙 650-760 红
互补光 绿
黄 橙 红 紫 蓝 青蓝 青
物质的颜色与光的关系：
完全吸收
光谱示意 复合光
表观现象示意
完全透过
吸收黄色光
二.物质对光的选择性吸收
A. A~λ曲线
B. A~c曲线
C. A~V曲线
D. E~V曲线
4、紫外分光光度法中，为了使测定结果有较高 的灵敏度和准确度，入射光的波长应（ ）
A．最大吸收波长
B．最小吸收波长
检测器 作用：将光信号转换为电信号，并放大 光电管，光电倍增管
信号输出 表头、记录仪、屏幕、数字显示
第十章
1 光源
在紫外可见分光光度计中，常用的光源 有两类：热辐射光源和气体放电光源 热辐射光源适用350nm-800nm，用于可见 光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电光源适 用150nm-400nm，用于紫外光区，如氢灯 和氘灯。
分光光度法的作用
分光光度法的作用分光光度法是一种广泛应用于化学、生化、医学等领域中的定量分析方法，其作用在于从样品中测定化合物的浓度或反应的速率。
它可以利用光的吸收和透过性量测达到此目的。
以下是分光光度法的具体作用：1.测定样品浓度分光光度法是测定样品浓度的一种常用方法，它可直接测定溶液中某些物质的浓度。
在分光光度法中，通过测定样品溶液中包含的化合物吸收光的强度，然后与标准溶液中同样化合物吸收光的强度进行比较，可以得知样品中化合物的含量。
这种方法的优点是精度高、数据准确性好。
2.测定反应速率分光光度法可以用来测定反应速率，即反应在一定时间内消耗试剂的速度。
这种方法可以通过监测光谱特征来确定反应的进度，如在紫外范围内，吸收峰值和峰的宽度可以从反应速率定量得出。
3.鉴定物质分光光度法还可以用于鉴定不同物质，在通过测定标常曲线与未知物样品光谱数据比对后，可以确定未知物质中含有的化学物质种类和浓度。
4.探测营养成分在食品化学和营养学领域中，分光光度法可以用于探测食品中的营养成分，如蛋白质、脂肪、维生素和矿物质等。
这种方法可以根据光谱数据来测定食品的营养成分浓度，并可以与标准值进行比较，以评估食品品质和营养价值。
5.药物研究和制造在药物研究和制造中，分光光度法可以用于测定药物的吸收率。
通过检测光谱中吸收峰的位置和强度，可以得到关于样品、光波长和吸收相关的信息。
这些数据可以用于评价药物的质量，包括制定药物的生产工艺和生产控制标准。
总之，分光光度法在化学、生化、医学和食品领域中都有很广泛的应用。
它可以用于测定溶液中的化合物浓度、反应速率、鉴定物质、探测营养成分和药物研究和制造等，具有很高的优越性和实用性。
分光光度法的原理是什么
分光光度法的原理是什么分光光度法是一种广泛应用于化学分析和生物化学领域的分析方法，它基于物质对特定波长的光的吸收或透射特性进行定量分析。
分光光度法的原理主要包括光的吸收和透射、比色法和分光光度计的工作原理等几个方面。
首先，我们来看光的吸收和透射原理。
在分光光度法中，我们通常会使用紫外-可见分光光度计来测量样品溶液对特定波长光的吸收或透射。
当样品溶液中的分子或离子处于基态时，它们会吸收特定波长的光，使得光子的能量被转化为激发态的能量。
而当处于激发态的分子或离子返回到基态时，它们会释放出吸收的光，这种现象被称为光的透射。
根据比尔-朗伯定律，物质对光的吸收或透射与其浓度成正比，因此可以利用这一特性来定量分析样品中的物质含量。
其次，比色法是分光光度法中常用的定量分析方法之一。
比色法通过将待测样品与标准溶液进行比较，利用它们在特定波长光下的吸光度差异来确定待测物质的浓度。
比色法通常需要使用分光光度计来测量样品溶液的吸光度，并通过构建标准曲线或使用已知浓度的标准溶液来进行定量分析。
最后，分光光度计是分光光度法的关键仪器。
分光光度计是一种能够测量样品溶液在不同波长光下吸光度的仪器，它通常由光源、单色器、样品室、检测器和数据处理系统等部分组成。
分光光度计能够选择特定波长的光进行照射样品溶液，并测量样品对光的吸收或透射情况，然后将吸光度转化为浓度信息，从而实现对待测物质的定量分析。
总的来说，分光光度法是一种基于物质对光的吸收或透射特性进行定量分析的方法，它包括光的吸收和透射、比色法和分光光度计的原理。
通过合理选择光源、单色器和检测器等参数，以及构建标准曲线或使用标准溶液，分光光度法能够准确、快速地对样品中的物质进行定量分析，因此在化学分析和生物化学领域得到了广泛的应用。
分光光度法 定量限
分光光度法定量限分光光度法是一种常用的分析化学测定方法，它基于物质与特定波长的光的相互作用的原理，通过测量光的吸收或透射来定量分析物质。
定量限是分光光度法中一个重要的参数，它表示在测定下限处的最低浓度，也是测定结果可靠性与敏感性的重要指标。
本文将从分光光度法的原理开始，逐步介绍定量限的概念、计算方法和影响因素。
分光光度法是基于比尔-朗伯定律的原理。
该定律描述了溶液中浓度与吸光度之间的线性关系，即：A=εlc，其中A为样品的吸光度，ε为摩尔吸光系数，l为光程，c为溶液浓度。
该定律的基本假设是分析物质对特定波长的光吸收的吸光度与浓度成正比。
定量限是指在测定下限处，仪器仍然能够给出可靠测定值的最低浓度。
定量限可以通过标准品系列稀释法来确定。
首先，准备一系列已知浓度的标准品，然后按照相同条件测定它们的吸光度。
找到吸光度和浓度之间的线性关系后，可以根据测定下限处的吸光度值来计算定量限。
定量限的计算方法一般有两种，分别是3倍标准偏差法和信号与噪声比法。
3倍标准偏差法是在无机构时测量一组标准品样品多次，并计算吸光度标准偏差。
定量限等于吸光度标准偏差乘以3后对应的浓度。
信号与噪声比法是在无机构时测量一个空白样品多次，并计算吸光度的标准偏差。
然后，信号与噪声比等于样品吸光度与噪声吸光度之比，定量限等于信号与噪声比对应的浓度。
定量限的计算结果受到多个因素的影响。
首先，光源的质量和光路设计的合理性会影响分光光度法的灵敏度。
其次，仪器的响应时间和检测器的噪声水平都会影响定量限的计算结果。
此外，测量温度和环境湿度的变化也可能影响定量限。
在实际操作中，为了提高定量限，可以采取一些措施。
首先，选择合适的波长，以最大程度地提高分析物质的吸收灵敏度。
其次，合理选择光程长度和溶液浓度，使测定结果更为准确。
此外，优化仪器参数，如峰宽和积分时间，也可以提高定量限。
总结起来，分光光度法是一种常用的分析化学测定方法，定量限是一个重要的参数，它表示在测定下限处的最低浓度。
分光光度法实验报告
分光光度法实验报告分光光度法实验报告引言：分光光度法是一种常用的分析方法，广泛应用于化学、生物、环境等领域。
本次实验旨在通过分光光度法测定溶液中某种物质的浓度，并探究实验中的操作步骤、仪器设备以及数据处理方法。
实验原理：分光光度法利用溶液中物质对特定波长光的吸收特性来测定其浓度。
根据比尔-朗伯定律，溶液中物质的吸光度与物质浓度成正比。
通过测量溶液对光的吸收强度，可以推算出物质的浓度。
实验步骤：1. 准备工作：清洗玻璃仪器、调节分光光度计，校准仪器。
2. 制备样品：按照一定比例配制出待测物质的溶液。
3. 测量吸光度：将样品放入分光光度计中，选择合适的波长，测量吸光度值。
4. 绘制标准曲线：根据已知浓度的标准溶液，测量吸光度值，绘制出标准曲线。
5. 测定未知样品浓度：根据标准曲线，测量未知样品的吸光度值，通过插值或外推得出其浓度。
实验结果：根据实验步骤，我们制备了一系列不同浓度的标准溶液，并测量了它们的吸光度值。
通过绘制标准曲线，我们得到了吸光度与浓度的线性关系。
利用该标准曲线，我们测定了未知样品的吸光度值，并通过插值的方法得出了其浓度。
讨论与分析：在实验过程中，我们注意到了一些实验误差。
首先，样品的制备过程中可能存在误差，如溶解不完全或溶液的稀释计算错误。
其次，仪器的使用也可能引入误差，如分光光度计的波长选择不准确或读数不精确。
此外，环境因素如光线的干扰也可能对实验结果产生一定影响。
为了减小误差，我们应该严格控制实验条件，如保持仪器的良好状态、避免环境光的干扰等。
此外，重复多次实验并取平均值可以提高结果的准确性。
结论：通过分光光度法，我们成功测定了溶液中某种物质的浓度，并得到了标准曲线。
实验结果表明，分光光度法是一种可靠、精确的浓度测定方法。
然而，需要注意的是，实验中的误差可能会对结果产生一定影响，因此在实际应用中需要综合考虑其他因素，如样品的性质和实验条件等。
总结：本次实验通过分光光度法测定溶液中某种物质的浓度，探究了实验步骤、仪器设备以及数据处理方法。
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2015年1月30日
在可见光，KMnO4溶液对波 长525 nm附近绿色光的吸收 最强，而对紫色和红色的吸 收很弱。λmax=525 nm。 浓度不同时，光吸收曲线形 状相同，λmax不变，吸光度不 同。
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2015年1月30日
* 单色器 单色器的作用是将光源发出的连续光谱分解为单色光 的装臵。分为棱镜和光栅。 * 比色皿也称吸收池或样品池。用于盛放试液的容器。 它是由无色透明、耐腐蚀、化学性质相同、厚度相 等的玻璃或石英制成，按其厚度分为 0.5cm ， lcm ， 2cm，3cm和5cm。 使用比色皿时应注意保持清洁、透明，避免磨损透 光面。 紫外光只能用石英比色皿； 可见光可用石英或玻璃比色皿。
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2015年1月30日
12.3.2 标准曲线法 借助分光光度计来测量一系列标准溶液的吸光度，绘制 标准曲线，根据被测试液的吸光度，从标准曲线上求得被 测物质的浓度或含量。
A
标液 A
1 C1 A1
2 C2 A2
3 4 5 C3 C4 C5 A3 A4 A5
2015年1月30日
12.3 光度分析的方法和仪器 12.3.1 目视比色法 用眼睛观察、从管口垂直向下观察（比色管），比较待 测溶液和标准溶液颜色的深浅，以确定物质含量的方法。
优点是仪器简单，操作简便，适宜 于大批试样的分析。灵敏度高，因为 是在复合光-白光下进行测定，故某 些显色反应不符合朗伯-比尔定律时， 仍可用该法进行测定。 主要缺点是准确度不高，标准系列 不能久存，需要在测定时临时配制。
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2015年1月30日
* 互补色光：按一定比例混合，得到白光。 * 物质的颜色是因物质对不同波长的光具有选择性 吸收作用而产生的。
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2015年1月30日
* 吸收光谱曲线或光吸收曲线： 以波长为横坐标，吸光度 为纵坐标作图。 * 最大吸收波长：光吸收程度 最大充处的波长，用λmax表 示。 * 吸光度A(也称消光度E或光 密度 D) ：溶液对光的吸收 程度。
2015年1月30日
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相关概念 *吸收光谱：原子吸收光谱 和分子吸收光谱。是因物 质对不同波长的光具有选 择性吸收作用而产生的。 * 单色光：具同一波长的光。 * 复合光：由不同波长组成 的光。 *波段：各种色光的波长范 围不同。
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2015年1月30日
在分光光度分析法中，试液和空白溶液分别臵于同样质 料及厚度的吸收池中，然后让强度为I0的单色光分别通过 这两个吸收池，再测量其透过光的强度。此时反射光强 度基本上是不变的，且其影响可以相互抵消。 透光度或透光率 透过光强度It与入射光强度Io之比称为透光度或透光率， 用T表示溶液的透光度愈大，表示它对光的吸收愈小 ; 相 反，透光度愈小，表示它对光的吸收愈大。
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2015年1月30日
12.4 显色反应和显色条件 12.4.1 显色反应 待测物质本身有较深的颜色，直接测定； 待测物质是无色或很浅的颜色，需要选适当的试剂 与被测离子反应生成有色化合物再进行测定，此反应 称为显色反应，所用的试剂称为显色剂。 按显色反应的类型来分，主要有氧化还原反应和络 合反应两大类，而络合反应是最主要的。
2
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2015年1月30日
* 桑德尔(Sandell)灵敏度(灵敏度指数) S 指当仪器的检测极限A=0.001时，单位截面积光程内所 能检测出来的吸光物质的最低含量，其单位为μg·cm-2，S 与ε及吸光物质摩尔质量M的关系为：
cb : ? mol/ 1000 cm2
优点： （1）大大提高了测定准确度，可完全扣除背景 （2）可用于微量组分的测定 （3）可用于混浊液和多组分混合物的定量测定
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2015年1月30日
12.3.5多组分定量方法 由于吸光度具有加合性，因此可以在同一试样中测定 多个组份。设X,Y 组份在波长 1 和 2 处的摩尔吸光 系数 可由已知浓度的 X, Y 纯溶液测得。解上述方 程组可求得 cx 及 cy。
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2015年1月30日
* 检测器 接受从比色皿发出的透射光并转换成电信号进行测 量。分为光电管和光电倍增管。
* 显示装臵
作用是把放大的信号以吸光度A或透射比T的光度分析法 的设计方式显示或记录下来。分光光度计常用的显示装臵 是检流计、微安表、数字显示记录仪。
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2015年1月30日
（1） 显色反应的选择 A 选择性好，干扰少，或干扰容易消除;灵敏度高，有色 物质的ε应大于104。 B 有色化合物的组成恒定，符合一定的化学式。 C 有色化合物的化学性质稳定，至少保证在测量过程中 溶液的吸光度基本恒定。这就要求有色化合物不容易 受外界环境条件的影响。 D 有色化合物与显色剂之间的颜色差别要大，即显色剂 对光的吸收与络合物的吸收有明显区别，要求两者的 吸收峰波长之差Δλ(称为对比度)大于60 nm。
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2015年1月30日
朗伯(Lambert J H)和比尔(Beer A)分别于1760和1852年 研究了光的吸收与溶液层的厚度及溶液浓度的定量关系， 二者结合称为朗伯-比尔定律，也称为光的吸收定律。 当一束强度为I0的平行单色光垂直照射到长度为b的液层、 浓度为c的溶液时，由于溶液中吸光质点(分子或离子)的吸 收，通过溶液后光的强度减弱为I：
A bc
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例 浓度为25.5μg/50mL的Cu2+溶液，用双环已酮草 酰二腙光度法测定，在波长600nm处用2cm比色皿测量 A=0.297，计算摩尔吸光系数。 解：
25.5 106 6 1 [Cu ] 8 . 0 10 m ol . L 50103 63.55 A 0.297 4 1 1 1 . 9 10 L . m ol . cm bc 8.0 106 2
样品 CX AX
AX λ
特点：入射光是纯度较高的单色光，故使偏离朗伯-比 尔定律的情况大为减少，标准曲线直线部分的范围更大， 分析结果的准确度较高。
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CX
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12.3.3 比较法： • 在一定条件下，配制标准溶液和样品溶液， 在λmax下测 A 标准溶液 As=εCsL 被测溶液 Ax=εCxL Cx=CsAx/As 注意： Cs 与 Cx大致相当
A a b
x y x y A lc 1 x 1 lc y 1 x y x y A lc 2 x 2 lc y 2
E
F
λ 1测
λ2 参
λ
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12.3.6 分光光度计 及其基本部件 分光光度计的 基本部件:光源、 单色器、样品池 （比色皿）、检 测器和显示装臵。
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12.2 光吸收基本定律 12.2.1 朗伯-比尔定律 当一束平行单色光通过任何均匀、非散射的固体、液 体或气体介质时，一部分被吸收，一部分透过介质，一 部分被器皿的表面反射。如图所示，设入射光强度为I0 ， 吸收光强度为Ia，透过光强度为It，反射光强度为Ir。
I0 I a It I r
光源
单色器
样品池
显示装置
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检测器
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*光源 光源的作用是提供辐射--连续复合光 可见光区 钨灯 320-2500nm 优点：发射强度大、使用寿命长 紫外光区 氢灯或氘灯 180-375nm 氘灯的发射强度比氢灯大4倍 玻璃对这一波长有强吸收，必须用石英光窗。 紫外-可见分光光度计同时具有可见和紫外两种光源。
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（2）显色剂 无机显色剂不多，因为生成的络合物不稳定，灵敏度 和选择性也不高。如用KSCN显色测铁、钼、钨和铌； 用钼酸铵显色测硅、磷和钒;用H2O2显色测钛等(Ti4+能 与过氧化氢反应产生橙黄色)。
Io A lg Kbc I
Io 1 A lg lg I T
定量分析的理论基础。
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比例常数K与吸光物质的性质、入射光波长及温度等 因素有关。 含有多种吸光物质的溶液，如果各吸光物质对某一 波长的单色光均有吸收作用，且各吸光物质的吸光质 点之间相互不发生化学反应，则：
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12.3.4 扣除法 1为选好的测定波长，一般为待测物质的max 2为选好的参比波长，一般为待测物质的min 测得的是样品在两种波长1和2处的吸光度之差A， A 为扣除了背景吸收的吸光度
A=A1 -A2= （ε1 -ε 2） CL
cb M 10 6 cbM 10 3 (? g / cm 2 ) S 1000