吸附色谱硅胶gf254中的f含义

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经典液相色谱法平面色谱分析

经典液相色谱法平面色谱分析
0.1~0.2 >5000 3~6 3 ~ 20 0.1 ~ 0.5 5 ~ 10
18.6 纸色谱法
18.6.1 纸色谱法的分离原理 paper chromatography
~是以纸为载体的色谱法,分离原理
属于分配色谱的范畴。
固定相:纸纤维上吸附的水分。(或甲酰胺、 缓冲液等滤纸可以吸留的物质。) 流动相:不与水相混溶的有机溶剂。或可与 水混溶的溶剂。
l2、l1分别为原点至两斑点中 心的距离, d为两斑点中心间的距离 ,W1、W2为斑 点的宽度。
分离数 定义在相邻斑点分离度为1.177时,在
Rf 0和Rf 1两种组分斑点之间能容纳的 色谱斑点数。
SN l0 /b0 b1 1
其中,b0、b1为Rf 0和1时组分的半峰宽, 二者由外推法获得。
c.点样方法 吸取一定量的样液,轻轻接触于薄层的
点样线上,点样线一般距薄层底边 1.5~2cm, 点间距约0.8~1.5cm(新药典规定为1.5~2.0 cm)。点样后形成的原点面积越小越好,一 般原点直径不超过2~4mm为宜。
展开和展开剂的流速
展开
先预饱和。展开前,将薄层板置于盛有展 开剂的色谱缸内饱和15~30min,此时薄板不与 展开剂直接接触,当色谱缸内展开剂蒸汽、薄 层与缸内大气达到动态平衡时,即饱和时,再 将薄层板浸入展开剂中,称预饱和。
常用展开剂:水饱和的正丁醇、正戊醇、 酚等,即含水的有机溶剂。
为了防止弱酸、弱碱的离解,加入少量 的酸或碱。如甲酸、醋酸、吡啶等。
纸色谱的操作步骤有点样、展开、显色、 定性定量分析几个步骤。
复习题
1、在硅胶薄层板A上,以苯-甲苯(1:3)为 展开剂,某物质的Rf值为0.50,在硅胶板B 上,用相同的展开剂,此物质的Rf值为0.40, 问哪块板的活度大?

色谱学 第三章 薄层色谱

色谱学 第三章 薄层色谱




在吸附色谱过程中,溶质、溶剂和吸附剂三 者是相互联系而又相互竞争的,如此构成了 整个层析分离过程 。 在薄层吸附色谱过程中,主要为物理吸附, 无选择性。因之吸附剂与多元组分溶液接触 时,一方面任何溶质都可被吸附(当然单位 重量吸附剂所能吸附物质的量,即“吸附量” 会因物质种类而异),另一方面,吸附剂也 可吸附流动相分子。由于物理吸附是可逆的, 故被吸附的分子同时也可被解吸出来。

偶氮染料 偶氮苯 对甲氧基偶氮苯 苏丹黄 苏丹红 对氨基偶氮苯 对羟基偶氮苯
Ⅱ 0.61 0.28 0.18 0.11 0.04 0.01
表3-2 硅胶活度分级法 Rf Ⅲ Ⅳ 0.70 0.83 0.43 0.67 0.30 0.53 0.13 0.40 0.07 0.20 0.01 0.07




除上二种外,还有其他一些吸附剂。吸附剂品种如下: (1)硅胶:薄层色谱用为200~250目粒度,规格很多,一般如有石膏作粘 结剂,称硅胶G;石膏含量为5~20%,一般为10~13%,亦有用淀粉作粘 结剂的,称硅胶S,不加粘结剂者称硅胶H或硅胶N,为了便于观察组分的 斑点,也可在硅胶中加入荧光指示剂。如果又加有粘结剂时,则称为硅胶 GF或硅胶GF254,即吸收254nm紫外光。 (2)氧化铝:根据加有粘结剂情况不同,有H、G、HF、GF等品种。 (3)硅镁吸附剂:即费罗里硅土,使用前要在130℃下活化二小时。 (4)纤维素:长度仅为2~20微米的短纤维,分天然纤维和微晶纤维两种 形式,也可加粘合剂、一般用于亲水性物质的分离,如羟基化物等,但缺 点为不能用浓硫酸等腐蚀性溶剂进行显色。 (5)聚酰胺:这是一种使用广泛的有机吸附剂,多用于分离酚类化合物, 样品容量大,但粘结能力差,可加入纤维素或淀粉作粘结剂。 (6)烧结薄层板:这是一种多次使用的薄层板,是由200~300目石英或玻 璃粉,与200~300目硅胶或氧化铝按1:25重量混合,用乙醇调成浆料,涂 在玻璃板上。0.25~0.3毫米厚,然后在700~780℃高温下烧结,即成烧结板。 烧结板用一次后可用乙醇或其它有机溶剂洗涤,最后用水洗干净后烘干再 继续使用。

毛细作用

毛细作用

毛细作用,是液体表面对固体表面的吸引力。

毛细管插入浸润液体中,管内液面上升,高于管外,毛细管插入不浸润液体中,管内液体下降,低于管外的现象。

毛巾吸水,地下水沿土壤上升都是毛细现象。

液体表面类似张紧的橡皮膜,如果液面是弯曲的,它就有变平的趋势.因此凹液面对下面的液体施以拉力,凸液面对下面的液体施以压力。

浸润液体在毛细管中的液面是凹形的,它对下面的液体施加拉力,使液体沿着管壁上升,当向上的拉力跟管内液柱所受的重力相等时,管内的液体停止上升,达到平衡.同样的分析也可以解释不浸润液体在毛细管内下降的现象.在自然界和日常生活中有许多毛细现象的例子。

植物茎内的导管就是植物体内的极细的毛细管,它能把土壤里的水分吸上来。

砖块吸水、毛巾吸汗、粉笔吸墨水都是常见的毛细现象。

在这些物体中有许多细小的孔道,起着毛细管的作用。

水沿毛细管上升的现象,对农业生产的影响很大。

土壤里有很多毛细管,地下的水分经常沿着这些毛细管上升到地面上来。

如果要保存地下的水分,就应当锄松地面的土壤,破坏土壤表层的毛细管,以减少水分的蒸发。

有些情况下毛细现象是有害的。

例如,建筑房屋的时候,在砸实的地基中毛细管又多又细,它们会把土壤中的水分引上来,使得室内潮湿。

建房时在地基上面铺油毡,就是为了防止毛细现象造成的。

硅胶可分为硅胶H(不含黏合剂)、硅胶G(含黏合剂)和硅胶HF(含荧光物质)化学式xsio 2·yh 2o。

透明或乳白色粒状固体。

具有开放的多孔结构,吸附性强,能吸附多种物质。

如吸收水分,吸湿量约达40%。

如加入氯化钴,干燥时呈蓝色,吸水后呈红色。

可再生反复使用。

薄层层析硅胶一般是GF254的,里面含有荧光剂,可以显色,柱层析有专门的硅胶目数很确定,薄层析用硅胶有荧光粉,太细,过柱用很慢,GF254里面的煅石膏粘合剂影响较大,TLC用硅胶应该是500目或更细,柱层析一般是500目以上,粒度要粗些GF254就是在波长254的光下有荧光。

在混合物薄层色谱中

在混合物薄层色谱中

溶剂前沿
展开
显色 比移值计算
碘蒸气显色法 试剂显色法 紫外光显色法 10%硫酸乙醇溶液
L1
点样线 比移值 Rf = L1/L0
实验步骤
1、薄层板的制备:
制薄层板的主要原料是吸附剂和粘结剂
吸附剂: “硅胶H”—不含粘合剂; “硅胶G”—含煅石膏做粘合剂; “硅胶HF-254”—含荧光物质,254nm 紫外光下观察光;
5、比移值的计算
Rf是表示色谱图上斑点位置的一个数值,它用来鉴定一
个未知的化合物。因某个特定化合物所移动的距离与溶剂 前沿所移动的距离相比是一个恒定的数值。任何一种特定 的化合物的Rf值是一个常数,由于在操作过程中不可能完 全准确地重复所测定的条件,所以Rf值不易重复,但参考 已知数据作相对的比较还是有一定意义的。 Rf=物质所移动的距离L1/溶剂前沿移动的距离L0 第二块板重复做一次,选择较好的一块板进行测量Rf值。
实验目的?初步掌握簿层色谱法的实验技术?学会用薄层色谱法跟踪有机反应薄层色谱小知识简称tlc是色谱法中的一种是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术属固液吸附色谱一方面适用于少量样品几到几微克甚至00
薄层色谱
Thin Layer Chromatography, TLC
实验目的
• 初步掌握簿层色谱法的实验技术 • 学会用薄层色谱法跟踪有机反应
2、点样
用内径为0.5mm的管口平整的毛 细管将溶于低沸点溶剂(醚、丙
酮)配成的约为1%的溶液点样。
点样前,先用铅笔在小板上距一 端5mm处轻轻划一横线,作为起始 线,然后用毛细管吸取样品在起 始线上小心点样。
3、展开
展开剂的选择主要根据样品 极性、溶解度和吸附剂的活性等 因素来考虑。薄层展开在密闭的 容器中进行。点样的位置必须在 展开剂液面之上,当展开剂上升 到薄层的前沿(离前端 5-10mm) 或多组分已明显分开时,取出薄 层板放平晾干,用铅笔划溶剂前 沿的位置后,即可显色。

薄层色谱

薄层色谱
不同类型的化合物需选用不同的显色剂。一些常用显色剂见表 1。
表 1 一些常用的显色剂
显色剂
配制方法
检出对象
浓硫酸
10%H2SO4
大多数有机化合物在加热后可显 出黑色斑点
碘蒸气
将薄层板放入缸内被碘蒸气饱和数 很多有机化合物显黄棕色
分钟
碘的氯仿溶液
0.5%碘的氯仿溶液
同上
5%磷钼酸乙醇溶液,喷后 120℃烘
硝酸铈铵
6%硝酸铈铵的 2mol/L 硝酸溶液 显色剂,多元醇在黄色底色上有
棕黄色斑点
香兰素-硫酸
3g 香兰素溶于 100mL 乙醇中,再加 高级醇及酮呈绿色
入 0.5mL 浓硫酸
茚三酮
0.3g 茚三酮溶于 100mL 乙醇,喷 氨基酸、胺、氨基糖
后,110℃热至斑点出现
东北师范大学化学学院综合化学实验学习资料
东北师范大学化学学院综合化学实验学习资料
了荧光)。也可将展开完毕的薄 层板烘干后用显色剂喷雾显色。常用的显色剂有碘和三氯化铁水溶液等。许多有机化合物能 与碘生成棕色或黄色的络合物,利用这一性质,在一密闭容器中(一般用展开缸即可)放几 粒碘,将展开并干燥的薄层板放入其中,稍稍加热,让碘升华,当样品与碘蒸气反应后,薄 层板上的样品点处即可显示出黄色或棕色斑点。除饱和烃和卤代烃外,均可采用此方法。
有关,其活性随含水量的增加而下降。活化温度:硅胶板于烘箱中逐渐升温至 105~110℃ 烘 30min;氧化铝板于 150~160℃烘 4h。活化后的薄层板放在干燥器内保存备用。
(3)点样 在距薄层板底端 8~10mm 处,划一条线,作为起点线。用毛细管(内径小于 1mm)吸 取样品溶液(一般以氯仿、丙酮、甲醇、乙醇、苯、乙醚或四氯化碳等作溶剂,配成 1%溶 液),垂直轻轻地接触到薄层的起点线上。如溶液太稀,一次点样不够,第一次点样干后, 再点第二次、第三次,多次点样时,每次点样都应点在同一圆心上。点样次数依样品溶液浓 度而定,一般为 2~5 次。若样品量太少时,有的成分不易显出;若量太多时易造成斑点过大, 互相交叉或拖尾,不能得到很好的分离。点样后的斑点直径以扩散成 1~2mm 圆点为度。若 为多处点样时,则样点间距为 1~1.5cm。 (4)展开 薄层的展开需在密闭的容器中进行。先将选择的展开剂放在层析缸中,使层析缸内的空 气饱和 5~10min,再将点好试样的薄层板放入层析缸中进行展开。样点的位置必须在展开剂 液面之上。当展开剂上升到薄层的前沿(离顶端 5~10mm)或各组分已明显分开时,取出薄 层板,立即用铅笔或小针划出溶剂前沿的位置,晾干或烘干后即可显色。根据标样对照或 Rf 值的不同对各组分进行鉴定。 展开剂的选择主要是根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素来综合考虑。溶剂 的极性越大,则对化合物的洗脱力越大,即 Rf 值也越大。如发现样品各组分的 R f 值 较大, 可考虑换用一种极性较小的溶剂,或在原来的溶剂中加入适量极性较小的溶剂展开,如原用 氯仿为展开剂,则可加入适量的苯。相反,如原用展开剂使样品各组分的 R f 值较小,则可 加入适量极性较大的溶剂,如氯仿中加入适量的乙醇试行展开,以达到分离的目的。 (5)显色 展开完毕,取出薄层板, 划出前沿线,如果化合物本身有颜色, 就可直接观察它的斑点。 如果本身无色,可用显色剂法或紫外光照射法显色。用硅胶 GF254 制成的薄板层,由于加入

经典液相色谱法2

经典液相色谱法2

吸附剂粒径对展开速度、Rf 值和分离效果的影响: • 颗粒大,则总表面积小,吸附量低,展开速度快,展 开后斑点较宽,分离效果差。 • 颗粒太小,则展开速度太慢,而且不易用干法铺板。 因此,应该选用颗粒大小适宜的吸附剂,而且其 粒度分布要窄。 吸附剂颗粒大小表示方法: • 颗粒直径(以µm表示), • 筛子单位面积的孔数(以目表示) 干法铺板所用吸附剂颗粒直径一般在75~100µm 或150~200目较为合适,而湿法铺板则用更细的颗粒, 为10~40µm或250~300目。聚酰胺则一般在100~180 目范围内。高效薄层板的颗粒直径为5~10µm。
在薄层色谱使用的一般条件下,固定相、流动 相都不很明确,它们都与蒸汽相一起维持着一种变化 的状态,在分离过程中这三相都可能不断在变化。 • 在使用混合溶剂时,在展开过程中极性较弱、沸点 较低的溶剂在薄层板边缘容易挥发,致使边缘部分的 展开剂中极性溶剂的比例增大,使Rf值相对变大。同 一物质在同一薄层板上出现中间部分的Rf值比边缘的 Rf值小,这种现象称为边缘效应。
2. 软板的制备:直接铺制吸附剂。 3. 粘合薄层板(硬板)的铺制 (1)粘合剂:粘合剂的种类与用量会影响分离的效果,常用 的有煅石膏、羧甲基纤维素钠(CMC−Na) 和某些聚合物 如聚丙烯酸等。参看《分析化学实验》。 (2)倾注法制板:1. 在玻板上倾倒吸附剂糊,2. 用洁净玻棒 涂铺均匀,3. 稍加振动。 (3)平铺法制板:在水平台面上先放置玻璃平板,上面放置 载板,二边加上玻璃条做成的框边(框边高于载板0.25~ lmm),将吸附剂糊倒在载板上,刮平并振动均匀。 上述两法所铺薄层板只适宜于一般定性分离,不宜 于定量分离。
2.相对比移值 (Rr) 由于影响 Rf 值的因素很多,要在不同实验室、不 同实验者间严格控制色谱条件的一致性,达到 Rf 的可 比性很困难。因此建议采用相对比移值(relative Rf ;Rr) 作为定性参数: Rr = Rf (a)/Rf (s) =la/ls (19·2)

色谱法叶绿素分离实验PPT课件

色谱法叶绿素分离实验PPT课件

五、检测技术
检测灵敏度
1.系统适用性试验 比移值
分离效能
第37页/共48页
2.鉴 别
等浓度对照法----同板---大致同位、同大、同色泽
等体积混合法----斑点单一、紧密 结构相似对比法-----Rf不同或两斑点
杂质对照品法 3.杂质检查 样品溶液的自身稀释对照法
二者合用法
第38页/共48页
4.定量方法 (1)目视比色法 -----半定量法(精度±10%) (2)斑点洗脱法
第11页/共48页
• (2)如何选择流动相?
最佳方案总是实验确定
第12页/共48页
❖想一想 在吸附色谱
中,以硅胶为固定相, 当用三氯甲烷为流动 相时,样品中某些组 分保留时间太短,若 改用三氯甲烷–甲醇 (1:1)时,则样品中 各组分的保留时间是 变长,还是变得更短? 为什么?
4.吸附柱色谱操作技术
• (1)装柱
• A.质量要求
装柱之前,先将空柱洗净干燥,再将空柱垂直固定在铁架台上。如果色谱柱下端没有砂芯横隔,就 取一小团脱脂棉,用玻璃棒将其推至柱底,再在上面平铺上一层厚0.5~1cm的洗过、干燥石英砂,有助于 分离时色层边缘整齐,加强分离效果。柱的长度与直径比一般为10 ~ 20:1。色谱柱的填装要均匀,不能有 气泡。
(3)特点
消除系统误差, 值的重复性和可靠性都比 好
Rr
Rf
第23页/共48页
3.分离度
(1)定义 衡量薄层色谱分离效果的重要指标,是 指相邻两斑点中心至原点的距离之差与 两斑点平均径向宽度(径向宽度是指斑 点沿着展开方向的宽度)的比值
(2)计算方法
R l2 l1 2(l2 l1 ) (W1 W2 ) / 2 W1 W2

有机化学实验教案--4.薄层色谱的制备

有机化学实验教案--4.薄层色谱的制备
在有机化合物的分离、鉴定等试验中经常使用的平面色谱主要包括薄层
色谱和纸色谱两类,分述如下。
二、薄层色谱
薄层色谱常用 TLC 表示,是一种微量、快速而简单的色谱法,兼具了
纸色谱和柱色谱的有点,一方面适合于小量样品的分离,另一方面在制备波
层色谱板吸附层加厚,样品点成线,又可以用作少量产品精制。
薄层色谱常用的有吸附色谱和分配色谱两类。一般能用硅胶或者氧化铝
者不锈钢尺子刮平,也可制得。
②倾斜法:将调好的浆料倒在玻璃板上,用手左右摇晃,使表面均匀光
滑,然后把薄层板平放试验台上晾干即可。
③浸涂法:把两块干净的大小一致的载玻片背靠背贴紧,浸入调好的吸
附剂中,取出后分开,晾干,即可。
薄层板的活化:把涂好的薄层板置于室温晾干,放在烘箱内加热活化,
活化条件根据需要而定。硅胶板一般在烘箱中渐渐升温,维持 105~110℃活
比 9:1 展开。若能将三种染料分开,并且按比移值对二甲氨基偶氮苯>靛酚
蓝>苏丹红,则与Ⅱ级氧化铝活性相当。
②氧化铝板活性测定:将偶氮苯 30mg,对甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏
丹红和对氨基偶氮苯各 20mg,溶于 50mL 无水四氯化碳中,取 0.02mL 此溶
液滴加于氧化铝板上,用无水四氯化碳展开,测定各染料的位置,算出比移
重庆工业职业技术学院教案
课题
教学目标
和要求
教学重点
和难点
课时
第四讲薄层色谱的制备
4 学时
1 了解色谱的基本知识、发展历程、应用范围
2 掌握薄层色谱的制备方法、活化色谱板
3 完成由普通玻璃管制备玻璃毛细管的玻璃工操作
薄层板的制备方法与应用
铺制高质量的薄层板及其活化方法
内容
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吸附色谱硅胶gf254中的f含义
吸附色谱是一种常用的分离技术,广泛应用于化学、生物、环
境等领域。在吸附色谱中,硅胶是一种常用的固定相材料,而
GF254型硅胶则是其中的一种。那么,GF254中的F到底代表
什么意思呢?

首先,GF254是硅胶的一种特殊型号,它是指GF(Gel
Filtration)型硅胶的254号规格。GF型硅胶是一种多孔性固
定相材料,具有较大的比表面积和丰富的吸附能力。而
GF254则是GF型硅胶中颗粒直径为254微米的一种规格。

在吸附色谱中,硅胶GF254常用于分离和检测有机化合物,
尤其是天然产物和药物。它具有以下几个特点:

1. 良好的吸附性能:硅胶GF254具有较高的吸附能力,可以
有效地吸附和分离目标化合物。这是因为硅胶GF254表面存
在许多活性位点,可以通过氢键、范德华力等相互作用与目标
化合物发生吸附。

2. 多孔性结构:硅胶GF254具有多孔性结构,可以提供较大
的表面积和孔隙容积,从而增加目标化合物与固定相之间的接
触面积,提高分离效果。
3. 良好的化学稳定性:硅胶GF254具有较好的化学稳定性,
可以在不同的溶剂和条件下使用。这使得它可以适应不同样品
的分离要求。

4. 良好的耐热性:硅胶GF254可以在较高温度下使用,这对
于某些需要高温条件下进行的分离非常重要。

5. 广泛适用性:硅胶GF254可以用于各种类型的色谱技术,
包括薄层色谱、柱层析等。它可以与不同类型的溶剂和流动相
配合使用,适应不同化合物的分离要求。

总之,GF254中的F代表了Gel Filtration(凝胶过滤)的意思。
它是一种常用的硅胶固定相材料,在吸附色谱中具有良好的吸
附性能、多孔性结构、化学稳定性和耐热性,广泛应用于有机
化合物的分离和检测。

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