【CN110195102A】一种β地中海贫血基因分型方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910365366.1

(22)申请日 2019.04.30

(71)申请人 广州普世利华科技有限公司

地址 510320 广东省广州市海珠区仑头路

78号自编A01号楼自编402、403、406号

房屋(仅限办公)

(72)发明人 刘华勇　陈翀　黄嘉恩　

(74)专利代理机构 广州粤高专利商标代理有限

公司 44102

代理人 单香杰

(51)Int.Cl.

C12Q 1/6883(2018.01)

C12N 15/113(2010.01)

(54)发明名称

一种β地中海贫血基因分型方法

(57)摘要

本发明公开了一种β地中海贫血基因分型

方法。并基于该方法构建了基于CRISPR/Cas12a

的β地中海贫血基因分型检测试剂盒。该技术对

β地中海贫血基因分型检测特异性好、灵敏度

高、精度高，还能够实现多位点同时检测，对β地

中海贫血的检测及筛查具有重要的意义。同时该

方案检测成本低廉、操作方便快捷，具有广阔的

应用前景。权利要求书1页 说明书8页 附图1页CN 110195102 A 2019.09.03

C N 110195102

A

权　利　要　求　书1/1页CN 110195102 A

1.一种基于CRISPR/Cas12a检测β地中海贫血基因突变位点的gRNA组合，其特征在于，所述gRNA组合包括SEQ ID NO.4-8任一个或任几个所示gRNA。

2.一种基于CRISPR/Cas12a的β地中海贫血基因突变位点检测方法，其特征在于，利用Cas12a蛋白和gRNA进行CRISPR检测，检测靶标位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-3任一个或任几个所示。

3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述gRNA的序列如SEQ ID NO.4-8任一所示。

4.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述Cas12a蛋白为LbCas12a、SsCas12a、ScCas12a、FnCas12a或AsCas12a。

5.根据权利要求2所述方法，其特征在于，检测体系包括：2μl RPA产物，45nM Cas12a，22.5nM gRNA，100nM在Cas12a切割时可发出荧光的报告DNA链，0.5μl RNase抑制剂，及核酸酶检测缓冲液。

6.根据权利要求2所述方法，其特征在于，检测程序为：在37℃下反应1.5小时，荧光动力检测5分钟一次。

7.一种基于CRISPR/Cas12a的β地中海贫血基因分型检测试剂盒，其特征在于，包括Cas12a蛋白和gRNA，所述gRNA的序列如SEQ ID NO.4-8任一所示。

8.根据权利要求7所述检测试剂盒，其特征在于，所述Cas12a蛋白为LbCas12a、SsCas12a、ScCas12a、FnCas12a或AsCas12a。

9.根据权利要求7所述检测试剂盒，其特征在于，还包括非特异单链DNA荧光探针、RNase抑制剂和核酸酶检测缓冲液。

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