pACTERT-TRAIL对涎腺腺样囊性癌SACC-83
有机硒化合物乙烷硒啉抑制腺样囊性癌细胞生长的体外研究
有机硒化合物乙烷硒啉抑制腺样囊性癌细胞生长的体外研究邢凤霞;张强;卢国徽;赵艳芳;周琼【期刊名称】《大医生》【年(卷),期】2022(7)14【摘要】目的探讨乙烷硒啉(BBSKE)对腺样囊性癌细胞的抑制作用及机制,为相关研究提供参考。
方法用3(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测BBSKE对腺样囊性癌细胞系(SACC-83、SACC-LM)的敏感性。
BBSKE作用SACC 48 h后,用赫斯特(Hoechst)荧光染色法检测细胞凋亡形态;BBSKE作用SACC 48 h 后,检测BBSKE对腺样囊性癌细胞半胱氨蛋白水解酶-3(Caspase-3)活性的影响。
用[5,5-二硫双(2-硝基苯甲酸)](DTNB)法检测BBSKE对腺样囊性癌细胞中硫氧还蛋白还原酶(TrxR)活性的影响。
结果BBSKE可以明显抑制腺样囊性癌细胞的增殖,作用于SACC-83和SACC-LM腺样囊性癌细胞72 h,抑制肿瘤细胞生长达到50%时的药物浓度(IC50)分别为12μmol/L和10μmol/L。
BBSKE作用SACC 48 h后,细胞发生核固缩、核破碎等形态变化;随着BBSKE浓度增大,SACC-83细胞中Caspase-3活性显著增高,SACC-LM细胞中Caspase-3活性增加更明显;TrxR活性随BBSKE浓度增大而降低。
结论新型含硒化合物BBSKE可以抑制腺样囊性癌细胞的增殖。
其作用可能是通过抑制TrxR活性,增加半胱氨蛋白水解酶-3活性而实现的。
【总页数】4页(P1-4)【作者】邢凤霞;张强;卢国徽;赵艳芳;周琼【作者单位】北京大学第三医院北方院区口腔科【正文语种】中文【中图分类】R331【相关文献】1.不同硒制剂对白血病细胞系体外生长的抑制作用2.硒对体外培养肿瘤细胞生长的抑制作用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
腺样囊性癌SACC-83细胞对雪旺氏细胞的诱向作用
腺样囊性癌SACC-83细胞对雪旺氏细胞的诱向作用
腺样囊性癌（SACC）是一种少见的口腔颌面部肿瘤，其具有
高度浸润性和转移性，而且治疗难度较大。
近年来的研究发现，SACC细胞能够对雪旺氏细胞（SW-13 cells）产生诱向作用，
进而促进其转移和浸润。
SW-13细胞是一种常用的人类肾上腺皮质腺瘤细胞系，其在
体内远离原位转移和浸润的能力较弱。
然而，在SACC细胞
的存在下，SW-13细胞的转移和浸润能力明显增强。
具体而言，SACC-83细胞能够分泌多种生长因子和趋化因子，如表
皮生长因子（EGF）、血管内皮生长因子（VEGF）、介导细
胞迁移的肿瘤相关因子（TGF）等，这些因子可以促进SW-13细胞的生长、增殖和转移。
此外，SACC-83细胞还能够诱导SW-13细胞表达细胞粘附分子（CAM），增强其与细胞外基
质的黏附力，进一步促进其浸润和转移能力。
近年来，研究人员利用基因编辑技术，通过敲除SACC-83细
胞中的多种生长因子和趋化因子，发现其对SW-13细胞的诱
向作用明显降低。
这表明，SACC细胞对SW-13细胞的诱向
作用主要通过这些因子的作用来实现。
总之，SACC-83细胞能够对SW-13细胞产生诱向作用，这一
作用与其分泌的多种生长因子和趋化因子密切相关。
进一步研究这些因子的分子机制，有望为开发有效的SACC治疗策略
提供新的思路。
口腔腺样囊性癌治疗方案
一、引言口腔腺样囊性癌（Adenoid Cystic Carcinoma，ACC）是一种起源于口腔腺体的恶性肿瘤，具有侵袭性、易转移等特点。
由于其早期症状不明显，容易被误诊或漏诊，导致治疗效果不佳。
因此，制定合理的治疗方案至关重要。
本文将对口腔腺样囊性癌的治疗方案进行探讨。
二、治疗方案1. 早期诊断（1）临床检查：口腔医生通过询问病史、检查口腔黏膜、牙齿、唾液腺等部位，初步判断是否为口腔腺样囊性癌。
（2）影像学检查：包括口腔CT、MRI、PET-CT等，可了解肿瘤大小、位置、侵犯范围及周围组织情况。
（3）病理学检查：通过活检或手术切除肿瘤组织，进行病理学诊断。
2. 治疗原则（1）早期发现、早期治疗：口腔腺样囊性癌早期治疗预后较好，应尽早确诊并制定治疗方案。
（2）个体化治疗：根据肿瘤的病理类型、侵犯范围、患者年龄、性别、身体状况等因素，制定个体化治疗方案。
（3）综合治疗：口腔腺样囊性癌治疗需综合运用手术、放疗、化疗等多种手段，以提高治疗效果。
3. 治疗方法（1）手术治疗1）肿瘤切除：根据肿瘤大小、位置、侵犯范围等因素，选择肿瘤边缘正常组织进行切除，尽可能保留正常组织。
2）淋巴结清扫：对于有淋巴结转移的患者，需进行淋巴结清扫，以防止肿瘤复发。
3）器官切除术：对于侵犯重要器官的肿瘤，如颌骨、咽部等，可能需要进行器官切除术。
（2）放疗1）放射治疗：对于局部晚期、复发或转移的口腔腺样囊性癌患者，放疗是重要的治疗手段。
2）立体定向放射治疗（Stereotactic Body Radiotherapy，SBRT）：对于局部晚期或复发的口腔腺样囊性癌，SBRT具有创伤小、疗效好等优点。
（3）化疗1）化疗方案：根据患者具体情况，选择合适的化疗药物和方案，如顺铂、多西他赛、氟尿嘧啶等。
2）化疗时机：化疗可在手术前后进行，或与放疗联合应用。
（4）免疫治疗1）免疫检查点抑制剂：如PD-1/PD-L1抑制剂，可提高机体对肿瘤的免疫反应。
熊果酸人腺样囊性癌对ACC-83侵袭与转移的影响
熊果酸人腺样囊性癌对ACC-83侵袭与转移的影响
米磊;刘怀勤
【期刊名称】《中国医学工程》
【年(卷),期】2013(021)002
【摘要】目的探讨熊果酸对人腺样囊性癌ACC-83细胞体外侵袭及转移的影响.方法应用不同浓度熊果酸处理人腺样囊性癌ACC-83细胞,通过Transwell小室模型测定其侵袭力及粘附力,细胞迁移实验测定细胞的运动能力,光学显微镜下观察细胞形态学变化.结果熊果酸能有效抑制人腺样囊性癌ACC-83细胞侵袭力、粘附力及运动能力(P＜0.05),呈剂量效应关系(P＜0.05).同时发现熊果酸处理组悬浮细胞增多,细胞体积变小,形态较圆,伪足数目较少.结论熊果酸具有抑制人腺样囊性癌ACC-83细胞侵袭与转移的作用.
【总页数】3页(P20-21,23)
【作者】米磊;刘怀勤
【作者单位】榆林市第一医院口腔科,陕西榆林719000
【正文语种】中文
【中图分类】R323.1
【相关文献】
1.人参皂苷Rg3联合索拉非尼对人肝癌细胞株侵袭与转移的影响 [J], 陆玲玲
2.白藜芦醇对人腺样囊性癌ACC-83侵袭与转移的影响 [J], 米磊;刘怀勤
3.熊果酸对人肝癌HepG2细胞凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响 [J], 宗彦红;霍
丽静;常胜
4.IGF-1经AKT通路对人肺癌A549细胞增殖、侵袭与转移的影响 [J], 刘思嘉;刘析璘;黄婷;兰蕙;叶丽平
5.基于IL-6/STAT3信号通路探讨熊果酸对人结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的影响 [J], 章尤权;沈冬祎;罗秀;陈旭征;刘海琴;林久茂
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顺铂诱导人涎腺腺样囊性癌细胞多药耐药性的评价
顺铂诱导人涎腺腺样囊性癌细胞多药耐药性的评价杨波;谭颖徽;张建设;韩宇平【期刊名称】《实用口腔医学杂志》【年(卷),期】2005(21)4【摘要】目的:用恒定顺铂浓度、周期性作用的方法,诱导产生耐顺铂的腺样囊性癌细胞株SACC,并检测其多药耐药性.方法:用浓度为lμg/ml的顺铂作用于腺样囊性癌细胞株,每次作用时间48 h,经6个月后形成在该药物浓度下生长良好的耐顺铂细胞株.用MTT法、流式细胞仪检测4种化疗药物甲氨喋呤、平阳霉素、长春新碱、丝裂霉素对2种细胞的杀伤效应和细胞周期的变化.结果:经过6个月诱导形成的耐顺铂细胞株SACC/DDP,较之SACC,对4种化疗药物均产生了不同程度的抗性,流式细胞仪检测发现其细胞周期发生变化,主要是G0/G1比例下降,且与药物浓度密切相关.结论:经顺铂周期性诱导,可以产生人涎腺腺样囊性癌多药耐药细胞株.【总页数】4页(P483-486)【作者】杨波;谭颖徽;张建设;韩宇平【作者单位】四川成都军区总医院口腔科,610083;第三军医大学新桥医院;四川成都军区总医院口腔科,610083;四川成都军区总医院口腔科,610083【正文语种】中文【中图分类】R739.8【相关文献】1.β-榄香烯及顺铂对人涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞毒作用的研究 [J], 向彬;张福胤;吴佩春2.Src激酶抑制剂对人肺癌顺铂耐药细胞A549/DDP多药耐药性的影响及机制 [J], 田梅3.川芎嗪逆转人鼻咽癌顺铂耐药细胞系多药耐药性的实验研究 [J], 崔德威;张祥宝;邓玉丽;谢忠4.Bcl-2家族蛋白在莱菔硫烷诱导人涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M凋亡中的作用[J], 贾志宇;郭涛;庄志征;岳磊;杨威;张英怀5.顺铂诱导肝癌细胞凋亡与多药耐药性关系 [J], 谢嵘;徐三荣;王崇高因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
过碘酸六胺银染色在涎腺基底细胞腺瘤与腺样囊性癌病理鉴别诊断中的应用
诊断病理学杂志2022年3月第29卷第3期• 225•doi：10.3969/j.issn. 1007-8096. 2022. 03.008过碘酸六胺银染色在涎腺基底细胞腺瘤与腺样囊性癌病理鉴别诊断中的应用+欧阳小娟、邱明珠2,郑智勇\汤晓晖3,余英豪\曲利娟、王旭洲\卓小花2,谢南火2,徐宝卿1(1.联勤保障部队第九O O医院病理科，福州350025; 2.福建医科大学附属龙岩第一医院病理科，福建龙岩364000; 3.福建省龙岩市第二医院病理科，福建龙岩364000)[摘要]目的探讨过碘酸六胺银（PASM)染色在涎腺基底细胞腺瘤（SBCA)与涎腺腺样囊性癌（SACC)病理鉴别诊断中的应用价值。
方法回顾性分析51例SBCA及40例SACC的临床病理资料，应用PASM染色观察肿瘤基底膜的完整性，免疫组化方法检测Ki-67、CK19、P63、SMA、CD117、S-100、P-cateni n及LEF-丨，荧光原位杂交(卩朽^1)方法检测财}«-/\^招基因融合及〔77\7\«1基因扩增。
结果PASM染色结果显示,51例SBCA瘤巢周围基底膜均呈完整线性，而40例SACC中有39例（97. 5%)出现大范围基底膜断裂、缺损；FISH检测结果显示，14例 SACC中8例检测出基因融合（57.丨4%)，2例SACC检测出CTAWS1基因扩增，而SBCA组未出现MYB-NF1B基因融合及C77VW fil基因扩增或缺失。
结论PASM染色能显示SBCA和SACC瘤巢周围基底膜完整性，是两者有效、可行的鉴别诊断指标，推荐常规运用。
[关键词]基底膜；PASM染色；基底细胞腺瘤；腺样囊性癌[中图分类号]R739.87 [文献标识码]A[文章编号]1007-8096(2022)03-0225-05Application of periodic acid-silver methenamine staining in the pathological di^erential diagnosis of salivary basal cell adenoma and salivary adenoid cystic carcinomaOU-YANG Xiao-juan1,QIU Ming-zhu2,ZHENG Zhi-yong1 ,TANG Xiao-hui3,YU Ying-hao1,QU Li-juan1,WANG Xu-zhou1 ,ZHUO Xiao-hua",XIE Nan-huo2,XU Bao-qing1( 1.D ep a rtm en t o f P a th o lo g y,900 H o sp ita l o f J o in t L o g istic Support F o rce, F u zh o u350025, C h in a；2. D ep a rtm en t o f P a th o lo g y, L o n g y a n F irst H o sp ita l A ffilia te d to F u jia n M ed ica l U niversity^ L o n g ya n364000, C h in a；3. D ep a rtm en t o f P a th o lo g y, th e S eco n d H o sp ita l o f L o n g y a n C ity, F u jia n P ro vin ce, L o n g ya n364000, C h in a)Corresponding author：XU Bao-qing (E-m ail：826020394@)Abstract:Objective To explore the application value of periodic acid-silver methenamine ( PASM) staining in the pathological differential diagnosis of salivary basal cell adenoma (SBCA) and salivary adenoid cystic carcinoma (SACC).Methods The clinical pathologic data of 51 patients with SBCA and 40 patients with SACC were analyzed retrospectively. PASM staining was used to examine the integrity of basement membrane in tumor. The expression of Ki-67，CK19, p63, SMA, CD117, S-100, p-catenin and LEF-1 was detected by immunohistochemistry. M Y B-N F IB fusion andC T N N B l amplification were detected by fluorescence in situ hybridization (F IS H). Results PASM staining showed thatthe basement membrane around the neoplastic cell nests was intact in 51 patients with SBCA, while the basement membrane was fractured and defective in 39 patients with SACC. FISH detection showed M Y B-N F IB gene fusion in 8 patients with SACC and C T N N B l gene amplification in 2 patients with SACC, while the M Y B-N F IB gene fusion and the amplification or deletion of C T N N B l gene were not detected in the SBCA group. Conclusion PASM staining shows the integrity of the basement membrane around the neoplastic cell nests in SBCA and SACC, which is an effective and feasible indicator for pathological differential diagnosis, and so it is recommended to be routinely used.Key words：Basement membrane；PASM staining；Salivary basal cell adenoma；Salivary adenoid cystic carcinoma **基金项目：福建省自然科学基金青年创新项目（2019J05144);联勤保障部队第九〇〇医院杰出青年培育专项（2018Q09);通讯作者; 徐宝卿。
涎腺腺样囊性癌细胞转移潜能与细胞外基质的关系
涎腺腺样囊性癌细胞转移潜能与细胞外基质的关系李凤和;俞光岩;李盛琳;武登诚;傅嘉【期刊名称】《现代口腔医学杂志》【年(卷),期】2000(014)006【摘要】目的了解不同转移能力的涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞与细胞外基质粘附、对细胞外基质侵袭及趋化运动的能力.方法 MTT法测定SACC-LM,SACC-83,ACC-M,AC C-2与纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原的粘附,用改良Boyden chamber方法观察了SAC C细胞对人工重组基底膜的侵袭以及趋化运动.结果高转移的SACC- LM与细胞外基质的粘附低于SACC-83,而ACC-M与细胞外基质的粘附高于ACC-2.SACC与纤维粘连蛋白的粘附高于和层粘连蛋白、Ⅳ型胶原的粘附.SACC-LM,ACC-M的侵袭和运动能力强于SACC-83,ACC-2.结论不同转移能力的SACC细胞与细胞外基质的粘附能力不同.高转移潜能的涎腺腺样囊性癌细胞的侵袭能力、趋化运动能力较强.【总页数】3页(P363-365)【作者】李凤和;俞光岩;李盛琳;武登诚;傅嘉【作者单位】100081,北京大学口腔医学院;100081,北京大学口腔医学院;100081,北京大学口腔医学院;100081,北京大学口腔医学院;100081,北京大学口腔医学院【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.IFITM1/2/3和胃癌发生、癌细胞转移的关系 [J], 李峥;魏微2.细胞外基质与涎腺腺样囊性癌的远处转移 [J], 俞光岩;李凤和;孙开华;彭歆;李盛琳3.人前列腺癌细胞转移潜能与环氧化酶-2的表达及患者预后的相关性 [J], 陈臻;秦大山;岳中瑾;王志平;傅生军4.癌细胞转移可能与某种波有关 [J], 郝文德;丁鼎乐5.LncRNA H19在食管癌组织中的表达及其与细胞转移的关系 [J], 朱坤;徐楠楠;韩振东;白学义因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
涎腺腺样囊性癌肺转移与PPARγ
涎腺腺样囊性癌肺转移与PPARγ张炜;王绮;张玲;陈彦平【期刊名称】《河北医科大学学报》【年(卷),期】2014(000)010【总页数】4页(P1237-1240)【关键词】口腔肿瘤;涎腺;肿瘤转移;综述文献【作者】张炜;王绮;张玲;陈彦平【作者单位】河北省保定市第一医院口腔科，河北保定071000;河北大学医学部，河北保定 071000;河北省保定市第一医院口腔科，河北保定 071000;河北医科大学第四医院口腔科，河北石家庄 050011【正文语种】中文【中图分类】R739.8涎腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma，SACC）为较常见的恶性肿瘤，约占涎腺肿瘤的11%，发病率居涎腺癌的第2位。
SACC易侵犯神经，侵袭性极强，组织类型及肿瘤生长的部位与预后密切相关［1］。
SACC是口腔颌面部恶性肿瘤中转移率最高的肿瘤之一，转移部位以肺部最多见［2］，已引起人们广泛关注，对 SACC肺转移的相关研究也日益增多，但目前尚无有效方法预测SACC患者是否发生转移。
过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator-activated receptor，PPAR）是一种激活的核转录因子，因它能被过氧化物酶体增殖因子活化而得名。
PPAR家族是一类由配体激活的核转录因子，属于核激素受体超家族成员，当配体被激活时，其辅助激活因子亦被激活从而发挥作用［3］。
PPAR家族分 3种亚型，PPAR α、PPARβ和PPAR γ。
其中PPAR γ通过反阻抑作用在巨噬细胞抗炎领域作用明显［4］。
现将 SACC肺转移的临床病理特点、发生机制及肺转移的治疗进展综述如下。
1.1 SACC远处转移是治疗失败的主要因素：局部实施根治性手术后，治疗失败率较高，包括局部复发与远处转移，其中后者占治疗失败的 45%～75%［5］。
远处转移常伴有局部复发，但也有未发现局部复发却出现远处转移者。
涎腺腺样囊性癌组织中神经生长因子表达及其临床病理特征的Meta分析
涎腺腺样囊性癌组织中神经生长因子表达及其临床病理特征的Meta分析陈伟;董震;苏寒;曹罡;孟昭业;张森林【摘要】目的涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)是常见的涎腺恶性肿瘤,神经生长因子(nerve growth factor,NGF)在不同临床病理特征的SACC中表达情况不尽相同.系统评价有关SACC组织中NGF表达及其临床病理特征之间的关系.方法计算机检索Cochrane Library、PubMedline、中国生物医学文献数据库(China BioMedical Bibliographic Database,CBMdisc)、中国学术期刊全文数据库(Chinese National Knowledge Infrastructure,CNKI)、中文科技期刊全文数据库(VIP Datebase for Chinese Technical Periodicals,VIP)、万方数据库,并辅以文献追溯的方法,收集公开发表的所有关于SACC组织中NGF表达及其与临床意义关系的病例对照研究.检索年限均从建库至2011年7月1日.按纳入排除标准筛选文献并评价纳入研究的质量后,应用RevMan5.0软件进行Meta分析.结果共纳入6个病例对照研究,其中腺样囊性癌267例,正常涎腺对照44例.Meta分析结果显示,NGF在SACC组与正常涎腺对照组中腺泡细胞的表达差异有统计学意义[OR=46.70,95%CI (3.30,661.71)];NGF在腺样囊性癌腺样/管状型组与实性型组的表达差异有统计学意义[OR=0.41,95%CI (0.20,0.86)];NGF在腺样囊性癌嗜神经侵袭(perineural invasion,PNI)组与非PNI组的表达差异有统计学意义[OR=7.14,95%CI (3.49,14.60)].结论 NGF高表达与涎腺腺样囊性癌病理分型、PNI等临床病理特征显著相关.但受纳入文献质量的影响,以上结论需要高质量的病例对照研究进一步证实.%Objective Salivary adenoid cystic carcinoma ( SACC ) is a common malignancy in salivary glands, and the expression of the nerve growth factor ( NGF ) varies with the clinicopathologic characteristicsof ASCC. This study aims to investigate the expression of NGF in SACC and explore and its relationship with the clinicopathologic characteristics of SACC. Methods We searched published studies in the Cochrane Library, PubMed, CBM, CNKI, VIP and WanFang databases from their establishment toJuly 2011, and hand searched other relevant journals as well to identify all the case-control trials addressing the expression of NGF in SACC and its relationship with the clinicopathologic characteristics of SACC. We assessed the quality of the included studies, and analyzed them using Cochrane Collaboration' s software RevMan 5. 0. Results A total of 6 studies were included, involving 267 cases ofSACC and 44 cases of normal salivary gland. Statistically significant differences were shown in the expression levels of NGF between SACC and normal salivary glands( OR=46.70, 95% CI: 3.30, 661.71 ), between the adenoid/cystic type and the solid type ( OR = 0. 41, 95% CI: 0. 20, 0. 86 ), as well as between perineural invasion ( PNI ) and non-perineural invasion ( non-PNI ) ( OR =7. 14, 95% CI: 3.49, 14. 60 ). Conclusion Higher NGF expression was significantly associated with the pathological type and PNI of SACC. However, more higher-quality case-control studies are needed to give further support to this conclusion.【期刊名称】《医学研究生学报》【年(卷),期】2012(025)002【总页数】5页(P143-147)【关键词】神经生长因子;表达;腺样囊性癌;Meta分析【作者】陈伟;董震;苏寒;曹罡;孟昭业;张森林【作者单位】210002,南京,南京军区南京总医院口腔科;210002,南京,南京军区南京总医院口腔科;210002,南京,南京军区南京总医院口腔科;210002,南京,南京军区南京总医院口腔科;210002,南京,南京军区南京总医院口腔科;210002,南京,南京军区南京总医院口腔科【正文语种】中文【中图分类】R730.230 引言SACC是口腔颌面部常见的涎腺恶性肿瘤。
口腔小涎腺腺样囊性癌预后分析33例
按照 Ａ Ｃ Ｊ Ｃ分 期 ，Ｉ ／Ⅱ期 ６ ％ ，ｌ ４ ｌ／ Ｉ
Ⅳ期 ３ ％ 。其 中 ７ ％ 的 女 性 Ｉ ６ ６ ／Ⅱ期 ， 男
期 较高 ， 导致淋 巴结转移率较高 。在我们 看来 ， 口腔下方 的 Ｎ Ｏ期 肿瘤 患者 也应按 照文献 推荐 的方法 ， 进行预防性颈清扫。 其他 研究 也 发 现 ， 缘 阳性 是 一 切
可考虑放疗 。 参 考 文 献
１ Ｙｉ ｈ ＷＹ 。 ． ａｏｈ ｉ Ｊ Ｓｅ ｒ． ｎｒｏａ Ｆ Ｊ Ｋｒｔｅ ｖｌ Ｃ． ｔｗａｔＩ ｔａｒｌ
ｍｉ ｏ ａｉ ａ ｙ ｇ ａ ｄ ｎ ｏ ｌｓ ： ｅ ｉｗ ｆ ２ ３ ｎ ｒｓ ｌ ｒ ｌｎ ｅ ｐ ａ ｍｓ ｒ ｖ ｅ ｏ １ ｖ
可 能是 因 为 就 诊 时 的 肿 瘤 分 期 、 Ｊ Ｃ分 ＡＣ
４３０ ７ ３０河 南社 旗 县 第二 人 民 医 院
摘
要 目的 ： 旨在 分 析 复 发 性 腺样 囊 性
析， 对影响总体生存率 的临床病理 因素进 行单因素和多因素 分析 。采用 Ｋ ｐａ ａｌ ｎ
Ｍ ｉｒ 绘 制 生 存 曲 线 。认 为 双 尾 Ｐ ＜ ｅｅ 法 ００ 统计学意 义。 ．５有
分析收治 口腔小涎 腺腺 样囊性 癌患 者 的
临床 病 理 因 素 。现 报 告 如下 。 资 料 与方 法 １９ ９ ５年 １ ０月 ～２ １ ０ １年 ９月 收 治 口 腔腺样囊性癌 患者 ３ ３例 ， １ 男 ８例 ， １ 女 ５ 例； 龄 ４ 年 ２—８ ５岁 ， 均 ６ ． ９４１．９ 平 ３６ －３ ９ 岁 。在 对 患 者 进 行 确 定 性 治 疗 之 前 ， 切 行 除 活 检 。为 达 到根 治 性 切 除 ， 除 标 本 均 切 行 病 理 学 检 查 ， 确 定 镜 下 切 缘 无 癌 残 以 留 。 同时 ， 声 或 Ｃ 发 现 ＞ｌ ｍ 的 可 疑 超 Ｔ ｃ
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pACTERT-TRAIL对涎腺腺样囊性癌SACC-83增殖与调亡的影响1苏涛12，孙宏晨12，苗雷英12，臧光祥121吉林大学口腔医学院（130041）2口腔生物医学工程吉林省重点实验室（130041）E-mail：hcsun@摘要：目的：研究真核表达质粒载体pACCMV-TRAIL 和pACTERT-TRAIL对体外涎腺腺样囊性癌的增殖与调亡的影响。
方法：以pACCMV-TRAIL和pACTERT-TRAIL分别转染SACC-83细胞和HEL细胞，采用RT-PCR和MTT方法及流式细胞仪检测TRAIL基因的mRNA表达、增殖能力和调亡水平。
结果：hTERT启动子可以调控TRAIL基因仅在端粒酶阳性的SACC-83细胞中特异表达，并抑制肿瘤细胞的增殖和诱导凋亡。
而CMV启动子由于缺乏靶向性，使得外源TRAIL基因对SACC-83细胞和HEL细胞均产生细胞杀伤作用。
结论：hTERT启动子体外可以诱导TRAIL基因靶向性调控涎腺腺样囊性癌的增殖与凋亡。
实验结果证明了方法的有效性。
关键词：hTERT 腺样囊性癌涎腺肿瘤基因治疗1．引言转基因治疗是将基因直接导入人体并在靶细胞中表达用于治疗和预防疾病的技术，但基因治疗存在最突出的问题是非特异性问题，即基因传递系统非特异地影响正常细胞，引起一定的毒副作用。
这种不加选择的转染限制了基因对于恶性肿瘤的治疗，因此寻找无毒副作用而且又具有靶向性的载体是基因治疗研究中的新目标。
端粒酶是一种核糖核蛋白酶，能够将端粒重复序列添加到染色体末端，它由自身的RNA模板及数个相关蛋白构成，其中最主要的是其催化亚单位人端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcriptase, hTERT），研究表明，涎腺腺样囊性癌高表达端粒酶，但在大多数正常体细胞中无活性，因此推测以端粒酶为靶点可能用于涎腺腺样囊性癌的治疗。
为此，我们利用含hTERT启动子的质粒载体，通过转染涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞和人红白血病细胞株HEL细胞，观察促凋亡基因TRAIL基因表达及对细胞增殖与凋亡能力的影响，为临床开展高效、定向和无创的涎腺肿瘤基因治疗提供依据。
2．材料与方法2.1实验材料与仪器腺样囊性癌细胞株(SACC-83细胞)由北京大学口腔医学院李盛林教授馈赠；正常人胚肺成纤维细胞（HEL细胞）由吉林大学第一临床医学院中心实验室提供；大肠杆菌DH5α由解放军军需大学兽医系提供。
真核表达质粒载体pACCMV-TRAIL和 pACTERT-TRAIL由美国NIDCR郑长玉博士馈赠。
CO2恒温细胞培养箱(美国), 超净工作台(杭州)，倒置显微镜（Olympus），TGA-16G-A低温高速离心机（上海），紫外分光光度仪（日本），Coulter1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金（项目编号：20030183068）资助流式细胞仪（美国），Bio-Rad酶标仪（美国），Hind Ⅲ、EcoR I等限制性内切酶、AMV 逆转录酶，Taq酶、RNase、DNA Marker (DL-2000 ,DL15000)、Trizol试剂（TaKaRa公司），质粒快速提取试剂盒（北京鼎国生物技术有限公司），Wizard质粒DNA提取纯化试剂盒（Promega）,脂质体Lipofectin® Reagent (Invitrogen)， MTT检测试剂（Gibco）。
2．2实验方法2．2．1pACCMV-TRAIL和pACTERT-TRAIL的扩增与转染含有质粒的滤纸片溶于100μl消毒三蒸水中，室温下静置5h。
进行质粒转化、提取、酶切鉴定。
取生长良好的SACC-83细胞和HEL细胞，0.25%胰酶消化，将细胞浓度调至2.5×104/ml，在6孔细胞培养板的孔中个各加入2ml含上述细胞的DMEM培养液，每孔细胞数为5×104个。
在Lipofectin® Reagent的介导下分别转染pACCMV-TRAIL和pACTERT-TRAIL质粒。
每种质粒的用量为每孔2µg，脂质体用量为每孔8µl。
每种质粒转染3个孔。
2．2．2RT-PCR检测转染细胞的TRAIL表达使用Premier（Version 5.0，PREMIER Biosoft Inc.）软件，根据TRAIL cDNA 序列合成上游引物；按pAC载体克隆位点与polyA信号之间序列合成下游引物，由长春宝泰克生物技术有限公司合成。
扩增出的片段为325bp的连续转录单位。
上游引物：5′-GTCTCTCTGTGTGGCTGTAACT-3′下游引物：5′- TGTGTTGCTTCTTCCTCTGGTC-3′利用逆转录得到的cDNA为模板，根据设计的TRAIL引物进行PCR扩增。
1%琼脂糖凝胶电泳检测RT-PCR产物。
2．2．3MTT法检测转染细胞的增殖能力每种细胞设4组，分别为转染pACCMV-TRAIL、pACTERT-TRAIL质粒、pACCMV-EGFP阴性对照和未转染空白对照组。
采用MTT法在测定细胞转染24h、48h、72h后细胞的增殖能力。
2．2．4流式细胞仪进行转染细胞凋亡的检测每种细胞设4组，分别为转染pACCMV-TRAIL、pACTERT-TRAIL质粒、pACCMV-EGFP阴性对照和未转染空白对照组，但细胞接种密度为1×106/孔，质粒和脂质体的用量相应增加为每孔40µg和160µl。
分别在转染后72h测定细胞凋亡的百分比。
2．2．5统计学分析采用χ2检验进行各组间差异分析，使用SPSS统计软件，P＜0.05为差异有显著性。
3．结果3．1pACCMV-TRAIL和pACTERT-TRAIL质粒鉴定及检测pACCMV-TRAIL质粒和pACTERT-TRAIL质粒经Eco R I酶切后，电泳显示约0.6kb、8.5kb 和0.6kb、8.4kb的目的带。
根据图谱分析， pACCMV-TRAIL质粒酶切后形成0.6kb和8.49kb 两个片断，pACTERT-TRAIL质粒酶切后形成0.6kb和8.38kb两个片断（图1、2）。
1 pACTERT-TRAIL2 pACTERT-TRAIL 酶切M1：DNA Marker DL 15000M2：DNA Marker DL 2000M1 M2 1 2图1. pACCMV-TRAIL质粒图谱及EcoR I 酶切鉴定图2. pACTERT-TRAIL质粒图谱及EcoR I 酶切鉴定 3．2RT-PCR 检测外源TRAIL 基因mRNA 的表达转染两种质粒的SACC-83细胞，经RT-PCR均能扩增出325bp的目的片段，在未转染的肿瘤细胞中均未扩增出目的片段；而转染pACTERT-TRAIL质粒的正常细胞和未转染的正常细胞中均未扩增出目的片段，转染pACCMV-TRAIL质粒的正常细胞则扩增出了325bp的目的片段。
11，4:没有转染; 2:转染质粒pACTERT-TRAIL;3:转染质粒plasmid pACCMV-TRAIL; M:DL20003．3不同质粒载体对SACC-83和HEL 细胞增殖能力的影响MTT法检测发现，SACC-83细胞转染pACCMV-TRAIL和pACTERT-TRAIL后的增殖能力受到明显抑制,72h时细胞存活率分别为67.52％和62.80％，虽然二者之间的差异不显著（P＞0.05），但均明显低于转染pACCMV-EGFP组（89.20%），差异具有显著性（P＜0.05）。
转染pACCMV-TRAIL 和pACTERT-TRAIL的HEL细胞，72h细胞存活率分别为68.50%和88.40％，二者之间的差异具有显著性（P＜0.05），其中pACCMV-TRAIL组下降明显，与pACCMV-EGFP组（90.70%）差异显著（P＜0.05），而pACTERT-TRAIL组与pACCMV-EGFP组差异不显著（P＞0.05）（表1）。
表 1 转染72h后MTT法检测细胞相对活性group SACC-83 HEL Blank control 100% 100%pACCMV-EGFP 89.20% 90.70%pACCMV-TRAIL 67.52%a68.50%apACTERT-TRAIL 62.80%a b88.40%c da P＜0.05，vs pACCMV-EGFP group；b P＞0.05，vs pACCMV-TRAIL groupc P＞0.05，vs pACCMV-EGFP group；d P＜0.05，vs pACCMV-TRAIL group3．4不同质粒载体转染细胞后对细胞凋亡的影响在双变量流式细胞仪的散点图上，左下象限为FITC-/PI-，显示活细胞；右上象限为FITC+/PI+，显示非活细胞即坏死细胞；左上象限为FITC-/PI+，显示受损伤细胞；而右下象限为FITC+/PI-，显示凋亡细胞（图3，4）。
用pACCMV-TRAIL和pACTERT-TRAIL转染SACC-83细胞，72h诱导细胞凋亡的比例相似（11.48％和10.89％），二者之间的差异无显著性（P ＞0.05）,但均明显高于pACCMV-EGFP阴性对照组(1.47%),差异具有显著性（P＜0.05）。
在正常人成纤维细胞中，用pACCMV-TRAIL处理引起明显的细胞凋亡（14.56％），而用pACTERT-TRAIL处理导致的细胞凋亡比例（4.84％）与阴性对照组（4.87％）相似，差异不显著（P ＞0.05），但与pACCMV-TRAIL组相比差异均具有显著性（P＜0.05）（表2）。
表2 转染72h后流式细胞仪分析细胞凋亡率The percentage of apoptotic cells(%)GroupsSACC-83 HEL blank control 0.00 0.00pACCMV-EGFP 1.47 4.87pACCMV-TRAIL 11.48a14.56apACTERT-TRAIL 10.89a b 4.84c da P＜0.05，vs pACCMV-EGFP group；b P＞0.05，vs pACCMV-TRAIL groupc P＞0.05，vs pACCMV-EGFP group；d P＜0.05，vs pACCMV-TRAIL groupSACC-83 SACC-83 + pACCMV-EGFPSACC-83SACC-83 + pACCMV-TRAIL SACC-83 + pACTERT-TRAIL 图3. SACC-83细胞凋亡的流式细胞分析（Annexin V-FITC / PI双染）HEL HEL + pACCMV-EGFPHEL + pACCMV-TRAIL HEL + pACTERT-TRAIL 图4. HEL细胞凋亡的流式细胞分析（Annexin V-FITC / PI双染） 4．讨论近年来，随着现代医学和分子生物学的发展，基因治疗成为肿瘤治疗领域的研究热点。