环糊精包合挥发油在祛风通络贴中的应用

２８１０·　现代中西医结合杂志Ｍｏｄｅｒｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ａｎｄ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　２０１１　Ａｕｇ，２Ｏ（２２）　表４样品测定结果　研钵研成薄片状，然后用小刀切成极细小块状，然后再称　质量。　大黄中的大黄素是蒽醌类的化合物，有游离葸醌衍生物　和结合蒽醌化合物，本试验测定主要是以大黄素为指标，合型　方式的大黄素需经水解后才能测定，为了使得水解完全，必须　使酸的浓度足够高，笔者所选的酸为８％盐酸溶液，并且加热　回流１　ｈ，保证了结合型的大黄素充分水解。　该巴布贴是传统的软膏剂改良剂型而来，在本试验中，按　上述处理方法制备了软膏剂的供试液，并用相同的高效液相　测定，结果显示，同比例的药物中，帖剂中的大黄素对应的含　量高于软膏剂，便于下一步对比研究。　［　参　考　文　献　］　［１］　林松青，彭力平．消瘀散治疗急性软组织损伤的临床疗效研究　［Ｊ］．中医正骨，２００９，２１（４）：１０—１１　［２］　金汝城，谢伟雪，逢艳，等．大黄的化学成分及药理作用研究进　展［Ｊ］．天然产物研究与开发，２００７，１９（Ｂ１１）：５４８—５５１　［３］Ｈａｚｎｉ　Ｈ，Ａｈｍａｄ　Ｎ，Ｈｉｔｏｔｓｕｙａｎａｇｉ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｎｓｔｉｔｕ－　ｅｎｔｓ　ｆｒｏｍ　ｃａｓｓｉａ　ａｌａｔａ　ｗｉｔｈ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ａｇａｉｎｓｔ　ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）［Ｊ］．Ｐｌａｎｔａ　Ｍｅｄ，２００８，７４（１５）：　１８０２—１８０５　［４］　刘昌，刘原兴，吕毅．大黄素抑制体外淋巴细胞增殖的作用研究　［Ｊ］．第四军医大学学报，２００６，２７（２４）：２２５１—２２５２　［收稿日期］２０１０—１０—３０　

环糊精包合挥发油在祛风通络贴中的应用　索建政，郄春鹏，严文利，董　莹，战嘉怡　（北京市中药研究所，北京１０００３５）　

［摘要］　目的　考察１３环糊精包合挥发油在祛风通络贴中的稳定性和对透皮吸收的影响。方法　采用正交试　验的方法，筛选出饱和水溶液法的最佳制备方法，并用薄层层析方法证明包合物的形成；用薄层层析和气相色谱的方　法测试包合物在工艺中的稳定性，并测定挥发油包合物透皮吸收的影响。结果最佳包合条件：Ｂ环糊精包舍挥发油　的比例是６：１，包合温度４０℃，搅拌时间６０　ｍｉｎ。通过检测，制剂中挥发油的含量比不包合的样品提高了１００％以上。　透皮吸收很快。结论Ｂ环糊精包合挥发油应用于贴剂可有效地保护挥发油，并不影响其透皮吸收。　［关键词】　丙烯酸酯；挥发油；Ｂ环糊精；透皮吸收　［中图分类号］　Ｒ９２７．１　［文献标识码］　Ｂ　祛风通络贴是由羌活、小茴香等十几味中药组成，其中挥　发油成分是不可少的有效成分。为了使挥发油在制剂中保持　稳定，笔者研制了用Ｂ环糊精包合挥发油的方法，采用薄层　检测的方法对包合物的包合质量和制作的贴剂样品的含油量　进行了考察。并研究了用气相的方法测定挥发油的主峰面　积，以此为目标进行了含量对比和透皮吸收的考察。通过以　上的试验证明，Ｂ环糊精包合挥发油用于压敏胶贴剂，可以有　效地保护挥发油，减少损失，并不影响挥发油的透皮吸收作　用。现报道如下。　１仪器与试药　１．１仪器乳化搅拌器（沈阳市理化仪器厂）；恒温水浴锅　（北京市西城医疗器械厂）；ＹＢ—Ｐ６智能透皮检测仪（天津药　典标准仪器厂）；ＬＣ一２０１０Ａ气相色谱仪——氢焰离子化检　测器（ＦＩＤ）（岛津公司）；色谱柱：ＩＮＮＯＷＡＸ　１９０９１Ｎ一１１３（安　捷伦公司）。　１．２试药与动物倍他环糊精（陕西礼泉化工有限公司）；　聚丙烯酸酯类压敏胶（四川三和医用材料有限公司）；其余乙　酸乙酯等均为分析纯。实验动物：Ｗｉｓｔａｒ大鼠，体质量１８０～　［文章编号】　１００８—８８４９（２０１１）２２—２８１０—０３　

２２０　ｇ。　１．３样品祛风通络贴（自制）；挥发油（自制）。　２方法与结果　２．１挥发油包合　２．１．１挥发油稀释液的制备取挥发油２５　ｍＬ，置５０　ｍＬ容　量瓶中，用乙醇稀释至刻度，每Ｉ　ｍＬ含挥发油０．５　ｍＬ。倍他　环糊精的包合方法很多…，本实验采用水饱和溶液法。固定　搅拌速度（４００　ｒ／ｍｉｎ）和油的浓度（５０％），以油：环糊精为因　素Ａ，包合温度为因素Ｂ，搅拌时间为因素ｃ。每个因素３个　水平，采用Ｌ。（３　）正交表，进行优选实验。表头设计见表１。　表１　挥发油包合因素水平设计表　

２．１．２具体操作　因环糊精在不同温度下溶解度不同，用　１２倍量的水在温度８０℃以上使环糊精溶解，边搅拌边降温，　现代中西医结合杂志Ｍｏｄｅｒｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ａｎｄ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　２０１１　Ａｕｇ，２０（２２）　·２８１１·　在降至规定温度时加入挥发油。每次用４　ｍＬ挥发油稀释液。　在搅拌条件下缓缓滴加，达到搅拌时间后，从恒温水浴锅中取　出，放入４℃的冰箱内冷藏２４　ｈ，过滤，残渣用１０　ｍＬ乙醚冲　洗１次，取出残渣于５０℃干燥，即得包合物，称质量，计算收　得率。将包合物重新放入挥发油提取器中，提取挥发油，以回　收的挥发油量计算包合率。以挥发油的包合率和包合物的收　得率为考察指标，按权重系数分别为０．７和０．３计算两者的综　合评分，进行优选实验。包合物收得率＝包合物质量／（环糊精　质量（ｇ）＋加入挥发油质量（ｇ））×１００％；挥发油包合率＝回　收的挥发油量（ｍＥ）／加入挥发油的量（ｍＬ）×空白回收率×　１００％；挥发油空白回收率＝空白回收挥发油的量（ｍＬ）／加入　挥发油的量（ｍＬ）Ｘ　１００％。空白回收率＝１．７８／２×１００％＝　８９％。具体结果见表２和表３。　表２　挥发油包合正交实验　注：综合评分＝包合率×０．７＋收得率×０．３。　表３　方差分析表　注：Ｆｌ—ｌ０（２２）＝９．００，Ｆｌ０　０５（２，２）　１９·Ｏ０。　２．１．３正交实验结果　因素Ａ对结果有显著影响。因素Ｂ　和Ｃ对实验结果无显著影响。从极差分析表看，因素Ａ以Ａ，　为好；因素Ｂ以Ｂ。为好，因素Ｃ以ｃ　为好，最佳工艺为　Ａ，Ｂ。ｃ　。但Ａ：与Ａ，极差较小，当倍他环糊精的量达到１：６，　其包合率就能达到８５％。为此以Ａ　Ｂ。ｃ　和Ａ。Ｂ。Ｃ　进行包　合对比验证试验，结果显示２种方法的包合率差别不大，从节　省生产成本考虑，选用了Ａ：Ｂ　ｃ　，即挥发油：环糊精（１：６），温　度４Ｏ℃，搅拌时间为６０　ｍｉｎ。见表４。　表４包合验证实验　

２．１．４包合物的质量考察　薄层色谱分析　：取挥发油　０．１　ｇ用乙酸乙酯５　ｍＬ使溶解作为供试品Ａ，取倍他环糊精　包合物２　ｇ，用乙酸乙酯３０　ｍＬ浸洗５　ｍｉｎ后晾干，取晾干物１　ｇ，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，用乙酸乙酯５　ｍＬ溶解作为供　试品Ｂ，取晾干物１　ｇ用乙酸乙酯５　ｍＬ浸泡作为供试品Ｃ，取倍　他环糊精１　ｇ用乙酸乙酯少量浸泡作为供试品Ｄ，分别取以上　４个样品各ｌ０　，点在同一硅胶Ｇ薄层板上，以石油醚：三氯　甲烷：乙酸乙酯（４：２：１）展开，取出，晾干，用茴香醛硫酸乙醇　显色剂显色。结果：供试品Ａ和Ｂ显相同的色带，ｃ和Ｄ没　有色斑，证明包合物不是混合物，而且包合得很好。见图１。　

１　２　３　４　１挥发油；２水蒸气蒸馏法提取包合物挥发油；　３包合物乙酸乙酯溶液；４环糊精乙酸乙酯溶液　图１挥发油包合考察　２．２制剂中包合物稳定性考察把等量的挥发油和挥发油　包合物分别按制剂工艺做成贴片。分别取上述贴片各１张，　按药典规定的水蒸气蒸馏方法，在收集器的上端加１　ｍＬ乙酸　乙酯，提取挥发油４　ｈ，收集乙酸乙酯液，并用乙酸乙酯定容于　５　ｍＬ容量瓶中，作为供试品溶液。用薄层色谱法进行检测，　吸取上述２份溶液各５　Ｌ和１Ｏ　Ｌ，分别点在同一硅胶Ｇ薄　层板上，以石油醚：三氯甲烷：乙酸乙酯（４：２：１）展开，用茴香　醛硫酸乙醇显色剂显色，结果挥发油未包合的样品中的挥发　油斑点几乎没有，与包合物的样品的色斑差别较大，见图２。　说明包合物提高了挥发油的稳定性，在工艺中起到了很好的　保护作用。　２．３透皮吸收的考察　挥发油的测定采用气相色谱法　。　色谱条件：进样口温度２５０℃；起始温度为８Ｏ℃，保持１０ｒａｉｎ，　以２℃／ｍｉｎ速率升温至９０℃，保持１０　ｍｉｎ，再以２０℃／ｍｉｎ速　２８１２·　现代中西医结合杂志Ｍｏｄｅｒｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ａｎｄ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　２０１１　Ａｕｇ，２０（２２）　率升温至２５０　ｏＣ，保持１０　ｍｉｎ，ＦＩＤ温度为２６０　ｏＣ，载气为高纯　氮（９９．９９％），流速为３．０　ｍＬ／ｍｉｎ，进样量１　Ｌ。　１包合挥发油制备的样品５　；２包合挥发油制备的样品ｌ０　ＩｘＬ；　３未包合挥发油制备的样品５　；４未包合挥发油制备的样品１Ｏ　Ｌ　图２　挥发油包合物在贴剂中稳定性考察　２．３．１样品中挥发油含量的测定　取样品７５　ｃｍ　剪碎，置　挥发油提取器中，提取器上端加２　ｍＬ乙酸乙酯，水蒸气蒸馏　法提取挥发油４　ｈ，收取乙酸乙酯液置２５　ｍＬ容量瓶中，用ｌ０　ｍＬ乙醇洗提取器，乙醇洗液置容量瓶中，并用乙醇定容；取ｌ　ｍＬ（相当于３　ｃｍ　样品量）置１０　ｍＬ（与透皮吸收接收池同容　积）容量瓶中，用３０％乙醇稀释定容，作为对照样品溶液。取　２　ｍＬ乙酸乙酯、１０　ｍｇ冰片用乙醇定容于２５　ｍＬ容量瓶中，取　１　ｍＬ置１０　ｍＬ容量瓶中，用３０％乙醇定容，作为空白溶液。　取对照样品溶液和空白溶液各１　Ｌ进样，行气相色谱，色谱　图见图３、图４。色谱图中１，２，３号峰为挥发油色谱峰，４，５号　峰为冰片的色谱峰，１号峰为挥发油的主峰。以１号挥发油　峰面积为样品中指标总含量。见图５。　图３　３　ｃｍ　对照样品气相色谱图　图４空白色谱图　图５透皮试验４　ｈ样品色谱图　２．３．２离体皮肤的制备取体质量１８０—２２０　ｇ的大鼠，刮净　皮毛，处死，剪下腹部皮肤，剥离皮下脂肪组织及黏液组织，选　用完整皮肤用生理盐水洗净，冷藏备用。　２．３．３透皮实验方法将离体鼠皮的真皮层一侧面向扩散　池，将上述样品紧贴于离体鼠皮角质层一侧，固定扩散池，向　池中加满（１０．０　ｍＬ）３０％乙醇溶液，循环水浴恒温（３２±　１）℃，电磁搅拌速度３００　ｒ／ｍｉｎ，分别于２，４，６，８，ｌ０，２４　ｈ取５　ｍＬ接受液，同时补加等量的３０％乙醇液。取１　Ｌ进样，按上　述气相方法，行气相色谱；测定透皮吸收样品中挥发油的峰面　积，并按以下公式计算累计渗透量：Ｃ　＝Ｃ　＋Ｖ。∑ｃ．．．／Ｖ（ｉ＝　１一ｎ）。Ｑ＝Ｃ　Ｖ／Ａ。式中ｃ　为校正浓度，ｃ　为实测浓度，Ｖ。　为取样体积，Ｖ为接受池容积，Ｑ为累积渗透量，Ａ为接受池　面积。本实验中Ｖ，＝５　ｍＬ，Ｖ＝１０　ｍＬ，Ａ＝３．１４　ｅｍ　。测试结　果见表５、图６。从峰面积累积数据来看，挥发油４　ｈ的透过量　达到了８０％。用倍他环糊精包合挥发油有明显的保护作用，　提高了挥发油的稳定性，对挥发油的透皮吸收没有影响。　表５　包合挥发油透皮吸收情况（ｎ＝３）