Waters2695高效液相色谱仪操作规程(初稿)

Waters2695高效液相色谱仪操作规程

1开机前的准备工作

1.1 检查设备电源、流路、信号连接是否完好；

1.2 流动相：配制相应的流动相，经0.45μm微孔滤膜抽真空过滤后，并超声脱气1分钟，必须使用色谱纯的溶剂，水或缓冲盐溶液要用超纯水；盛放溶液和流动相所用的玻璃容器必须用超纯水清洗；

1.3 样品溶液：按方法取样或配制标准样品溶液，0.45μm滤膜过滤。

1.4 清洗柱塞密封垫（Seal Wash）的溶液配制：含5%-10%甲醇或乙腈的超纯水（适用于反相色谱）；

1.5 洗针液（Needle Wash）的配制：50%甲醇：50%水（适用于反相缓冲溶液）；100%甲醇（适用于反相非缓冲溶液）。

2 开机平衡系统

2.1开机自检打开电源开关，仪器开始自检（4-5min），待屏幕上方出现“Idle”自检完成。

2.2脱气（Degasssger）

按面板右下方“Menu/Status”键进入“Status(1)”界面，移动光标至“Degasser Mode”，按Enter选择“On”，打开在线脱气。一般默认是开的。

2.3设定柱温及样品室温度（可选项）

在“Status”界面，光标至“Col Htr Set”，输入目标温度，按Enter；光标移至“Sample”,选择目标温度（4℃-40℃），按Enter。（可在工作站方法中设置）

2.4灌注柱塞密封清洗泵（Prime Seal Wash）

在主屏幕下，按【Diag】，显示“Diagnosties”屏幕，按【Prime Seal Wash】,显示“Prime Seal Wash”屏幕，按【Start】,直到清洗溶剂流出泵杆密封圈冲洗废液管，按【Hart】、【Close】、【Exit】。

2.5灌洗针头清洗泵（Prime Needle Wash）

在主屏幕下，按【Diag】，显示“Diagnosties”屏幕，按【Prime Ndl Wash】,显示“Prime Needle Wash”屏幕，按【Start】,30s内应见溶剂从废液排放口流出，按【Close】、【Exit】；若想要多清洗几次时，请按 Start Again。

2.6 湿灌注（Wet Prime）

在“Status(1)”界面中“Composition”下，选择将用到的溶剂通道为“100%”，按液晶屏幕右下角“Direct Function”键，移动光标选择“Wet Prime”，“OK”，流速及时间可使用默认值，也可自行设定（如：5ml/min，3min），“OK”即可。

将每一个会用到的溶剂通道按照上述操作一次。（也可各通道选25% 5ml/min，3min）。

2.7 冲洗进样器（Purge Injector）

按“Menu/Status”进入”Staus(1)”画面，在设定溶剂画面中设定适当的流速与溶剂比例（针对缓冲盐或离子对试验，建议设定50%乙腈：50%水的溶剂来清洗进样器），按“Direct Function”键，选择“Purge Injector”，“OK”，默认数值为6，“OK”。

注：以上2.4-2.7为溶剂系统前处理过程，建议每天开机后依次进行。若发现注射器中有气泡，则可重复2.7直至排除。

2.8 平衡柱子在“Status”界面上，按流动相比例设定各通道溶剂比例后，再Wet Prime 操作一次，然后设置流速，平衡色谱柱30-60min。（可在工作站中设置）

3 编辑仪器方法和方法组

3.1 双击Empower，输入用户名system、密码manager选择项目和系统。

3.2 新建方法与方法组

新建方法：单击监视区“方法组编辑”向导—新建—2695的参数：压力界限、泵模式（等度/梯度）、柱温、样品室温度。检测器配置：通用（灯开启、λ范围、分离度1.2nm、采样频率）—文件—另存为（输入方法名）-保存-退出。

新建方法组：选择所需的方法名称，点击下一步—输入方法组名（与方法名一致）4 进样

4.1 待“监视基线”稳定后，点击“中断样品组”开关，进入“进样”阶段；

4.2 当进行单进样时，在“运行样品”的“单进样”界面中输入“样品名”“功能”“方法组”“进样体积”“运行时间”等；“单进样”就是单次进样，完成分析后系统即停止检测（流动相正常流动）；

4.3 当多进样时，在“运行样品”的“样品”界面点击“样品瓶”输入所有样品分别所在位置（输入所在编号），“样品名称”、“进样体积”、“进样数”、“功能”、“方法组”、“运行时间”等；

4.4 开启绿色“运行”，输入样品组名称，运行模式（只运行），适应性模式（出错时继续），点击运行；

4.5 如需加载样品，在“运行样品”的“正在运行”界面，点击右击，选择“修改当前运行样品的信息”，点击确定，修改样品以后，须重新点击“运行”。

5 关机

5.1 清洗色谱柱如果流动相使用了盐，注意不要让有机溶剂直接和缓冲盐接触，中间要使用水过渡一下。一般先用水/甲醇（或乙腈）=95/5，在1ml/min流速下清洗色谱柱和系统30分钟，再用甲醇或乙腈清洗30分钟；如果流动相中没有使用盐，则用甲醇或乙腈清洗色谱柱和系统30分钟。

5.2 灌洗柱塞密封，清洗1分钟，详见2.4；

5.3 灌洗针头清洗2次，详见2.5；

5.4 冲洗进样器，详见2.7；

5.5 降低流速至0，待系统压力回零后，退出Empower软件系统，关闭HPLC系统。最后，关闭计算机及显示器电源。