HPLC法测定紫草中的左旋紫草素的含量
紫草
·238·紫草ZicaoRADIX ARNEBIAE本品为紫草科植物新疆紫草Arnebia euchroma(Royle)Johnst．或内蒙紫草Arnebia guttata Bunge的干燥根。
春、秋二季采挖，除去泥沙，干燥。
【性状】新疆紫草(软紫草) 呈不规则的长圆柱形，多扭曲，长7～20cm，直径1～2.5cm。
表面紫红色或紫褐色，皮部疏松，呈条形片状，常10余层重叠，易剥落。
顶端有的可见分歧的茎残基。
体轻，质松软，易折断，断面不整齐，木部较小，黄白色或黄色。
气特异，味微苦、涩。
内蒙紫草呈圆锥形或圆柱形，扭曲，长6～20cm，直径0.5～4cm。
根头部略粗大，顶端有残茎1或多个，被短硬毛。
表面紫红色或暗紫色，皮部略薄，常数层相叠，易剥离。
质硬而脆，易折断，断面较整齐，皮部紫红色，木部较小，黄白色。
气特异，味涩。
【鉴别】(1)取本品粉末0.5g，置试管中，将试管底部加热，生成红色气体，并于试管壁凝结成红褐色油滴。
(2)取本品粉末0.5g，加石油醚(60～90℃)20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至约1ml，作为供试品溶液。
另取紫草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。
照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各4µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5：5：0.5：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干。
供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点；再喷以10％氢氧化钾甲醇溶液，斑点变为蓝色。
【检查】水分照水分测定法(附录Ⅸ H第一法)测定，不得过15.0％。
【含量测定】羟基萘醌总色素取本品适量，于50℃干燥3小时，粉碎(过三号筛)，精密称取0.5g，置100ml量瓶中，加乙醇至刻度，4小时内时时振摇，滤过。
精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀。
照紫外-可见分光光度法(附录Ⅴ A)，在516nm波长处测定吸光度，按左旋紫草素(C16H16O5) )为242计算，即得。
广东地区市售紫草紫草素含量的抽样检测
广东地区市售紫草紫草素含量的抽样检测
黄卫战;张继平
【期刊名称】《基层中药杂志》
【年(卷),期】1994(008)001
【摘要】紫草始载于《神农本草经》。
祖国医学认为它有凉血、活血、解毒透疹的作用,常用于血热毒盛、斑疹紫黑、麻疹不透、疮疡、温疹、水火烫伤等症。
紫草中紫草素为其疗效的主要成分,含量越高质量越好,与其质量有着直接关系。
为了保证紫草质量,《中国药典》1990版.一部,制定了紫草中紫草素含量测定标准。
云南、新疆等地据此标准抽查了本地市售紫草的合格率,但广东地区市售紫草质量的合格率尚未见报道。
【总页数】2页(P21-22)
【作者】黄卫战;张继平
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.RP-HPLC法同时测定新疆紫草中紫草素、乙酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素的含量 [J], 孙健文;温宪春;蔡德富;王玥;吴永会
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3.紫草油及紫草素油的含量测定方法研究 [J], 沈丽宫; 叶棣柏; 罗明可; 尤洁; 何文胜
4.紫草总色素β-环糊精包合物的定性鉴别及左旋紫草素含量测定 [J], 李俊江; 刘向娥; 李季文; 张增志; 牛建雄
5.不同产地蒙紫草中左旋紫草素和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁含量测定及质量标准研究 [J], 吕晓洁;渠弼;刘德旺;程丹丹;那生桑
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新疆紫草中紫草素提取方法研究
新疆紫草中紫草素提取方法研究张继业;杜蕊;刘婷婷;杨范莉;童华【摘要】Objective To optimize the extraction of shikonin from A rnebia euchroma with solvent extraction in four solvents .Meth-ods The extractions were carried out in petroleum ether ,ethanol ,chloroform ,and 10 g ・ L - 1 NaOH solution with stirring at 25 ℃ ,solvent extraction time of 30 min ,and solid to liquid ratio 1 ∶ 9 .The extraction process was conducted in duplicate .The shikonin content in extracts were measured by HPLC with gradient elution .Extraction methods were evaluated by extraction yield .Results The yield of shikonin extraction differed in four solvents (10 g ・ L - 1 NaOH solution > ethanol > chloroform > petro-leum ether) .Conclusion The shikonin extraction in NaOH solution provides higher extraction yield and significantly reduces the amount of organic solvent .This economic and environmental method is suitable for shikonin extraction from A rnebia enchroma .%目的：采用石油醚、乙醇、氯仿、碱液4种溶剂提取紫草素，选出最优提取方法。
高效液相色谱法测定紫草油中β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量
高效液相色谱法测定紫草油中β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量王贵英;骆勇;左宏笛【期刊名称】《中国医院用药评价与分析》【年(卷),期】2013(013)012【摘要】目的:建立紫草油中β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱(HPLC)法,色谱柱为迪马C18钻石色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-水-甲酸(75∶25∶0.2);检测波长为275 nm;柱温为室温.结果:在80.6 ～564.5 ng范围内,β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁进样量和峰面积具有良好的线性关系,线性回归方程为C=1.027 9×10-6A +2.358 9×10-2,r =0.999 9.测得紫草油中β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁平均含量为0.869 2 mg/ml.结论:该方法简便可行,重现性好,可作为紫草油的质量控制方法.【总页数】3页(P1089-1091)【作者】王贵英;骆勇;左宏笛【作者单位】贵州省食品药品检验所,贵阳550004;贵州省食品药品检验所,贵阳550004;贵州省食品药品检验所,贵阳550004【正文语种】中文【中图分类】R965【相关文献】1.HPLC同时测定紫朱软膏中左旋紫草素和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁含量 [J], 丁叶芳;李西林;柳国斌;张钰泉2.薄层扫描法测定新疆不同产地新疆紫草中β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量 [J], 徐海燕;丁文欢;张慧;王延蛟3.紫草中β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁提取和含量测定及其稳定性研究 [J], 谢清春;陈燕忠;吕竹芬4.基于新疆紫草中β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁含量变化的浓缩工艺研究 [J], 王佩;汪斌;刘康;陈俊;葛海涛5.不同产地蒙紫草中左旋紫草素和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁含量测定及质量标准研究 [J], 吕晓洁;渠弼;刘德旺;程丹丹;那生桑因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
紫外可见分光光度法测定呼和-嘎日迪-13散中紫草的含量
紫外可见分光光度法测定呼和-嘎日迪-13散中紫草的含量成志平
【期刊名称】《中国民族医药杂志》
【年(卷),期】2016(022)009
【摘要】目的:紫外可见分光光度法测定呼和-嘎日迪-13散中紫草的含量.方法:采用紫外可见分光光度法,样品以石油醚(60～90℃)超声振荡提取.结果:左旋紫草素在8.264～28.924μg/mL范围内呈良好的线性关系,r=0.99982,平均回收率
96.2％,RSD为0.43％,结论:本法灵敏、准确,操作简单,重复性好.
【总页数】2页(P55-56)
【作者】成志平
【作者单位】包头市食品药品检验检测中心,内蒙古包头014060
【正文语种】中文
【中图分类】R291.2
【相关文献】
1.HPLC法测定蒙药嘎日迪-13味丸中甘草苷、甘草酸铵、木香烃内酯、去氢木香内酯含量
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5.HPLC法测定蒙药哈敦嘎日迪-13丸中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量
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复方紫草油的质量标准改进
腈溶解并定容，摇匀，即得。
（3）阴性对照溶液：按处方制备缺
紫草药材的阴性对照样品，按供试品溶液制备方法制成阴性
对照溶液。
2.2.3 系统适用性试验 在上述色谱条件下分别测定阴性对
照、β，β-二甲基丙烯酰阿卡宁对照品、供试品溶液。结果，供试
品色谱中，在与β，β-二甲基丙烯酰阿卡宁对照品色谱相同保留
时间处有同一色谱峰出现，与其他组分能达到基线分离（R＞
测定，使原有标准得到提升与完善。
1 仪器与试药
1100 高 效 液 相 色 谱（HPLC）仪（美 国 Agilent 公 司）；
BP221S 电子天平（德国赛多利斯仪器系统有限公司）；薄层层
析硅胶 G 板（烟台大学生物科学与工程研究所）。
复方紫草油（第三军医大学第一附属医院药剂科自制，批
号：20100115、20100116、20100117）；左旋紫草素、β，β-二甲基
同一块硅胶 G 薄层板上，以环己烷-甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5 ∶ 5 ∶
0.5 ∶ 0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，日光下检视。结果，供试
品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的红色斑点；
再喷以 10％氢氧化钾甲醇溶液，斑点变为蓝色；阴性对照无干
扰。紫草的 TLC 见图 1。
2.2 含量测定
2.1
加适量稀盐酸使溶液变红色，加 20 mL 氯仿萃取，取氯仿层蒸
干，残渣加甲醇 1 mL 溶解，作为供试品溶液；另取左旋紫草素
对照品，加甲醇制成每 1 mL 含 0.5 mg 的溶液，作为对照品溶
液；按处方制备缺紫草的阴性样品，同法制成缺紫草阴性对照
溶液。照 TLC 法 [2] 试验，吸取上述 3 种溶液各 4 μL，分别点于
HPLC 法测定大鼠血浆及粪便中新疆紫草3种萘醌类色素的含量
HPLC 法测定大鼠血浆及粪便中新疆紫草3种萘醌类色素的含量古力扎努·阿合买提;买尔旦·马合木提【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2016(39)8【摘要】目的：建立测定大鼠血浆及粪便中新疆紫草3种萘醌类成分含量的高效液相色谱法（HPLC 法）。
方法采用 COSMOIL C18-AR-Ⅱ（4．6 mm×250 mm，5μm）色谱柱，流动相 A 乙腈（A）-0．15％甲酸（B）（v／v）溶液，进行洗脱，流速1．0 mL／min，检测波长275 nm ，柱温25℃，检测时间35 min。
结果血浆中左旋紫草素在0．40～6．40μg、乙酰紫草素在25．0～600．0μg、β，β′-二甲基丙烯酰紫草素在25．0～600．0μg 范围内均与峰面积呈线性关系，左旋紫草素回收率为97．78％～100．1％、乙酰紫草素为100．1％～100．2％、β-β′-二甲基丙烯酰紫草素为97．78％～100．1％，日间、日内 RSD 均＜1．5％。
粪便中各组分在10～400μg／mL 范围内与峰面积呈线性关系，平均回收率分别为（78．2±2．5）％、（82．0±2．9）％和（79．5±3．5）％。
0～12、12～24、24～48 h 粪便中左旋紫草素绝对回收量分别为23．61、38．28、4．13 mg；乙酰紫草素分别为7．20、70．78、11．53 mg；β-β′二甲基丙烯酰紫草素分别为46．32、60．15、16．88 mg。
结论HPLC 法准确可靠，重复性好，适用于测定血浆及粪便中新疆紫草萘醌类成分含量。
%Objective To establish a HPLC method for determine of three contents of naphthaquinone from Arnebia euchroma (Royle)Johnst in rats plasma and faeces.Methods COSMOIL C18-AR-Ⅱ (4.6 mm× 250 mm,5μm),column was used with acetonitrile (A)-0.15% formic acid (B)(v/v)as mobile phase by gradient eluting with the flow rate of 1.0 mL/min for 35 min,and the colum n temperature was maintained at 25℃,detecting wavelength at 274 nm.Results The linear range in plasma ofshikonin,acetylshikonin andβ-β,-dimethylacrylshikonin were between 0.40 to 6.40 μg,25.0 to 600.0 μg and 25.0 to 600.0 μg,re-spectively.The recoveries of these ingredients correspondingly were between 97.78 to 100.1%,100.1 to100.2% and 97.78 to100.1%.The RSD of intra-day and inter-day were less than 1.5%.The linear range in faeces ofshikonin,acetylshikonin andβ-β,-dimethylacrylshikonin were between 10-400 μg/mL with the average recoveries of (78.2 ± 2.5)%,(82.0 ± 2.9)% and (79.5 ± 3.5)%,respectively.Absolute recovery amount of Naphthoquinone in feces as:shikonin 0-12 h:23.61 mg,12-24 h:38.28 mg,24-48 h:4.13mg;acetylshikonin 0-12 h:7.20 mg,12-24 h:70.78 mg,24-48 h:11.53 mg andβ-β,-dimeth-ylacrylshikonin 0-12 h:46.32 mg,12-24 h:60.15 mg,24-48h:16.88 mg.Conclusion The established method has a good selectivity and reproducibility for the determination of naphthaquinone from Arnebia euchroma (Royle)Johnst in plasma and faeces of rats.【总页数】5页(P1012-1016)【作者】古力扎努·阿合买提;买尔旦·马合木提【作者单位】新疆医科大学 1 药学院;附属肿瘤医院，乌鲁木齐 830011【正文语种】中文【中图分类】R914【相关文献】1.HPLC法测定紫草中萘醌类成分 [J], 曾祖平;韩旭阳;王宏;彭冰;石佳2.紫外-可见分光光度法测定紫草油中羟基萘醌总色素的含量 [J], 苗颖;李英男;李栋;梁莹莹;张淑君;陆进;赫军;马秉智;杨丽3.正交试验优选新疆紫草中羟基萘醌类色素的提取工艺研究 [J], 永春;锡林通拉嘎;4.HPLC法测定新疆软紫草属4种植物根中萘醌类成分 [J], 丁文欢;燕雪花;葛亮;徐海燕5.HPLC法同时测定泰山紫草中5种萘醌类成分的含量 [J], 董娜;高召军;曲晓兰;齐永秀因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
UV法测定紫草中羟基萘醌总色素含量的不确定度评定及应用
UV法测定紫草中羟基萘醌总色素含量的不确定度评定及应用作者：关卓明何敬铭林泳仪李砺来源：《品牌与标准化》2024年第01期【摘要】对采用紫外-可见分光光度（UV）法测定紫草中羟基萘醌总色素含量全过程进行分析，建立数学模型，确定影响总色素测定不确定度的因素并对其进行评估。
结果表明，总色素含量测定的扩展不确定度为0.06%，测定结果表示为（1.69±0.06）%（k=2），能力验证结果为满意。
【关键词】紫草；羟基萘醌；分光光度法；能力验证；不确定度【DOI编码】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.01.009Determination of Total Hydroxynaphthoquinone Pigment Content in Purple Grass by Spectrophotometry Evaluation of Uncertainty and Application in Capability VerificationGUAN Zhuoming， HE Jingming， LIN Yongyi， LI Li*（Sinopharm group fengliaoxing 〔Foshan〕herbal medicine decoction pieces Co.， Ltd.， Foshan 528000， China）Abstract： To verify the ability of UV spectrophotometry to determine the total content of hydroxynaphthoquinone pigments in purple grass， establish a mathematical model， determine the factors that affect uncertainty， and evaluate each factor. Results showed that the expanded uncertainty of the total pigment content determination was 0.06%， and the determination result was expressed as （1.69±0.06）% （k=2）， indicating a satisfactory capability validation result.Keywords： hydroxyanaphthoquinone； spectrophotometry； capability verification；uncertainty紫草的使用历史非常悠久。
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ＨＰＬＣ法测定紫草中的左旋紫草素的含量
摘要：目的：建立紫草中左旋紫草素的含量测定方法。
方法：采用HPLC 法，色谱柱为YWG-C-18，流动相为甲醇-0.025mol/L磷酸(80∶20)，测定波长：516nm，柱温为25℃，流速为1.0mL/min，进样量为20μL，结果：左旋紫草素在0.176~0.880μg间，左旋紫草素进样量与峰面积呈良好的线性y=2×107x+31103，R2=0.9993，测得紫草中左旋紫草素的平均含量为1.78%。
结论：应用HPLC法测定紫草中的左旋紫草素含量，结果准确，重现性好。
关键词：紫草；左旋紫草素；HPLC；含量测定
紫草(Alkanna Tinctoria)是传统中药之一，属于紫草科多年生草本植物，以其干燥根入药。
《中国药典》有收载，谓其性寒、味甘咸、归心肝经，具有凉血、活血、解毒透疹、补中益气作用。
紫草的药理作用很多，如：抗生育作用、抗菌、抗炎、抗癌、降糖、保肝及提高肌体免疫功能。
紫草中的有效成分为紫草宁衍生物，属萘醌类色素[1]。
《中国药典》2005版采用紫外分光光度法测定左旋紫草素的含量。
本实验采用HPLC(高效液相色谱)法对紫草中的左旋紫草素进行含量检测。
1 仪器与试剂
实验中紫草由亚洲大药房提供，左旋紫草素对照品由中国生物制品药品检定所提供，其余试剂均为分析纯。
高效液相色谱仪(紫外可见检测器，LC-05Pi液体泵)，AG204电子天平，KQ2200B超声机
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件[2，3]
色谱柱：YWG-C-18柱；流动相：甲醇-0.025mol/l磷酸(80∶20)；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；测定波长：516nm。
按左旋紫草素计算理论塔板数为2500(>103)。
在此条件下，样品中左旋紫草素与其他相关峰均能达到基本分离。
2.2 对照品溶液的配制
精密称定5.5mg左旋紫草素对照品置10mL容量瓶中，用甲醇定容到10mL，得0.55mg/mL对照品溶液。
用移液管精密移取4mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀释定容到50mL，得浓度为0.044mg/mL对照品溶液。
2.3 供试品溶液的配制[4]
称取紫草10g，加入95%乙醇100mL，超声20min。
放冷过滤，滤渣加入95%乙醇50mL超声10min。
放冷过滤，合并滤液，加入2%的氢氧化钠溶液使溶液
呈碱性(变蓝色)，过滤，滤液加酸调pH到呈酸性(变红色)，过滤，滤液减压浓缩回流至20mL左右。
在50℃下进行干燥。
精密称定提取物的重量，把提取物加入甲醇，超声溶解，定容在100mL的容量瓶中。
2.4 线性关系与标准曲线[5]
精密移取已经配制好的0.044mg/mL标准品溶液 2.0mL，4.0mL，6.0mL，8.0mL，10.0mL于10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，分别吸取20ul，注入液相色谱中，测定色谱峰面积，得回归方程y=2×107x+31103，R2=0.9993。
2.5 精密度考察
用上述方法制备的供试品连续进6针，测定峰面积。
考察相对标准偏差。
见下表：
结果：精密度考察符合要求。
2.6 回收率的测定[6]
方法：取紫草粉末两份，各10g精密称定，置100mL具塞三角瓶中，一份加入左旋紫草素对照品溶液(0.044mg/mL)20mL作为对照品溶液；另一份不加作为样品溶液。
然后各加入95%乙醇100mL超声20min。
放冷过滤，滤渣加入95%乙醇50mL超声10min。
放冷过滤，合并滤液，减压浓缩回流至20mL左右。
在50℃下进行干燥。
精密称定提取物的重量，把提取物加入甲醇超声溶解，定容在100mL的容量瓶中。
见表2：
结果：回收率符合要求。
2.7 紫草中左旋紫草素的含量测定
方法：将不同批次的中药紫草制备成供试品进针，测定含量。
见表3：
3 讨论
(1)在紫草的提取过程中，浸出液要浓缩到溶液体积20mL左右，使得乙醇的含量很少，才能利用加碱使紫草素溶于水相，过滤后加酸使沉淀析出。
在加碱时不要剧烈摇动、搅拌，以免产生乳化效果，不利于提取；加酸时要使溶液变成红色，静置析出。
(2)由于紫草中紫草素含量很低，所以在进液相时浓度要比较大，使得误差能够减少。
进针后，其色谱峰周期过长，在对照品出峰时间过后可以将流速由1.0mL/min提高到1.5mL/min。
(3)测定方法的选择。
有文献报道用紫外分光光度法及薄层扫描测定紫草素的含量。
本实验采用高效液相色谱法测定紫草中的左旋紫草素的含量，结果准确、重现性好、灵敏度高。
(4)样品测定结果表明，通过对样品颜色的观察发现，左旋紫草素含量高的成品颜色深红，而所测含量较低的成品颜色较浅，这可能与紫草原药材的质量有关。
参考文献：
[1] 卢贺起，丁家欣，魏雅川.紫草的实验研究进展[J].中国中医药信息，1998，5(1)：20.
[2] 马瑛，王嗣芩，黄猛.HPLC测定紫草中紫草素含量[J].中国药学，2000，35(20)：98.
[3] 李忠良，张敏，郭兰建.紫草中紫草素的含量测定[J].药物分析，1986，6(1)：41.
[4] 杨晓笛，卢锋，黄美充.中药紫草有效成分的提取[J].汕头大学学报，2002，17(4)：67.
[5] 孟宪生，沙明，曹爱民，张东方.HPLC法测定紫草及其制剂紫金油中左旋紫草素的含量[J].中草药，2003，34(7)：615.
[6] 陈发奎.常用中草药有效成分含量测定[M].北京：人民卫生出版社，1997：732~732.。