富营养化水体中藻类的测定(叶绿素a法)
养鱼塘水中叶绿素a的测定
养鱼塘水中叶绿素a的测定孔琪摘要测定叶绿素a的仪器和方法有许多种，分光光度法测定叶绿素a是一简便易行的测定方法，水样经离心或过滤浓缩、研磨、丙酮提取后，定容，取上清液分别测量750nm、645nm、663nm、652nm等几个波长下的吸光度值，根据经验公式可分别计算出叶绿素a含量关键词分光光度法叶绿素a前言叶绿素作为水生态系统中主要初级生产者一浮游植物的生物量和生产力的指标,具有测定方便快速和重复性好等优点.在水生生物学研究,水质评价和富营养化水体的调查研究中,叶绿素既作为生态系统结构指标,又作为功能指标被广泛使用.叶绿素在红光(600nm以上)区域有吸收波长极值,因而用分光光度法可以测定叶绿素的含量1 试验部分1.1主要仪器与试剂90%丙酮溶液，2mol/LHcl；10mL具塞小试管 1cm玻璃比色皿，滤纸玻璃纤维滤膜，可见分光光度计1.2实验步骤1.2.1水样处理：所取的水样应往湖中间点不能去表面水样，水样中如有大的微粒，可用搅拌器搅拌2～3 min，以至混合均匀。
1.2.2 将100~500mL水样经玻璃纤维滤膜过滤，记录过滤水样的体积。
将滤纸卷成香烟状，放入小瓶或离心管。
加10mL或足以使滤纸淹没的90％丙酮液，记录体积，塞住瓶塞，并在4℃下暗处放置4h。
如有浑浊，可离心萃取。
将一些萃取液倒入1cm玻璃比色皿，加比色皿盖，以试剂空白为参比，分别在波长665nm和750nm处测其吸光度。
1.2.3 加滴2mol/L盐酸于上述两只比色皿中，混均并放置1min，再在波长665nm和750nm 处测定吸光度。
2 结果与讨论2.1结果处理酸化前： A=A665-A750酸化后： A a=A665a-A750a在665 nm处测得吸光度减去750 nm处测得值是为了校正浑浊液。
用下式计算叶绿素- a的浓度（μg/L）：2.2计算：叶绿素-a=29*（0.01+0.05）*12/200=0.1044μg/L3结论3.1池塘水中的叶绿素-a含量为0.1044μg/L.参考文献[1]王飞儿, 吕唤春, 陈英旭, 等. 2004. 千岛湖叶绿素a浓度动态变化及其影响因素分析[J]. 浙江大学学报(自然科学版)，30(1): 22-26.[2]中国药典2005版一部[s].北京:化学工业出版社.2005:3SQ[3]胡韧, 林秋奇, 段舜山, 等. 2002. 热带亚热带水库浮游植物叶绿素a与磷分布的特征[J]. 生态科学，21(4): 3l0-3l5.[4]林丽贞, 陈纪新, 刘媛,等.2007. 东、黄海典型海区分粒级浮游植物叶绿素a的周日波动及影响因子[J].台湾海峡，26(3): 342-350.[5] 刘镇盛, 王春生, 倪建宇, 等. 2003.抚仙湖叶绿素a的生态分布特征[J]. 生态学报，23(9): l773-l780.[6] 国家环境保护总局《水和废水监测分析方法》编委会编. 2002. 水和废水监测分析方法(第四版) [M]. 北京: 中国环境科学出版社，2002.[7] 黄祥飞. 湖泊生态调查观测与分析[M]. 2000北京: 中国标准出版社.。
环境化学---藻类叶绿素a的测定
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水体富营养化程度的评价
水体富营养化程度的评价富养分化（eutrophication)是指在人类活动的影响下，生物所需的氮、磷等养分物质大量进入湖泊、河口、海湾等缓流水体，引起藻类及其他浮游生物快速繁殖，水体溶解氧量下降，水质恶化，鱼类及其他生物大量死亡的现象。
在自然条件下，湖泊也会从贫养分状态过渡到富养分状态，沉积物不断增多，逐渐变为沼泽，最后演化为陆地。
这种自然过程十分缓慢，常需几千年甚至上万年，而人为排放含养分物质的工业废水和生活污水所引起的水体富养分化现象，可以在短期内浮现。
水体富养分化后，即使切断外界养分物质的来源，也很难自净和复原到正常水平。
局部海区可变成“死海”，或浮现“赤潮”现象。
许多参数可作为水体富养分化的指标，常用的是总磷、叶绿素a含量和初级生产率的大小。
一、试验目的1．把握总磷、叶绿素a及初级生产率的测定原理及办法。
2．评价水体的富养分化情况。
二、仪器和试剂1．仪器(1)可见分光光度计。
(2）移液管1mL，2mL,，10mL。
(3）容量瓶100mL,250mL。
(4）锥形瓶250mL。
(5）比色管25mL。
(6)BOD瓶250mL。
(7）具塞小试管10mL。
(8）玻璃纤维滤膜、剪刀、玻璃棒、夹子。
(9)多功能水质检测仪。
2．试剂(1)过硫酸按（固体）。
(2）浓硫酸。
(3)硫酸溶液lmol/L。
(4）盐酸溶液2mol/L。
(5)氢氧化钠溶液6mol/L。
(6)1%酚酞1g酚酞溶于90mL乙醇中，加水至100mL。
(7）丙酮液丙酮，水＝9:10(8）酒石酸锑钾溶液将4.4gK(SbO)C4H4O6 H2O溶200mL蒸馏水中，用棕色瓶在4℃时保存。
(9)铝酸按溶液将20g（NH4）6Mo7O24·4H20 溶于500mL 蒸馏水中，用塑料瓶在4℃时保存。
(10）抗坏血酸溶液（(0.1mol/L)溶解l.76g抗坏血酸于100mL蒸馏水中，转入棕色瓶。
若在4℃以下保存，可维持1个星期不变。
(11)混合试剂50mL 2mol/L硫酸、5mL 酒石酸锑钾溶液、15mL钥酸按溶液和30mL抗坏血酸溶液。
实验一 植物修复水体富营养化
实验仪器
1.
温度计 2. 照度计 3. 盐度计 4. pH计 5. 显微镜 6. 便携式水质仪 7. TOC测定仪 8. 透明度管
pH
直接插入水样读取pH值
盐度
用蒸馏水调零，然后直接读取样品盐度
水体叶绿素含量测定
（每次都要做）
取50mL污水离心，弃去上清 液，沉淀加少量蒸馏水稀释后移 至10ml塑料离心管中，再次离 心弃去上清液。 沉淀加7mL80%丙酮溶液，塞住瓶塞，振摇混匀 后，在冰箱中4℃下放置24 h。24h后在4℃下 5000 rpm离心10分钟。用滴管小心将萃取液转至 1cm玻璃比色皿中，以7mL80%丙酮为空白，测定 波长663nm处吸光度。叶绿素a浓度（mg/L）用 以下公式计算：
持缸中水样体积恒定。种植植物的过程中，
每隔一周取样测定水体中的有关指标。
泡沫 植物
玻璃缸
400mm 500mm
300mm
共5个处理：
1. 2. 3. 4.
空白 风车草
美人蕉
水稻/绿萝
分别在第6 （初始）、8、 10、12周取 样测定。
5.
富贵竹
实验基本步骤
实验用水的准备 嵩山区池塘污水与自来水配置的人工污水混 合，体积比为1:4。人工污水中加入磷酸二氢 钠（0.2mg/L磷）和硝酸钠（2.5mg/L氮）。 2. 用于修复的植物准备 到校医院后面取风车草和美人蕉，在教师办 公室取富贵竹、和绿萝（或水稻）各3株，清 洗根部，用纸巾擦干植物后称湿重。
太湖水华
湖泊（水库）富营养化状况评价指标：
叶绿素a(chla)、总磷(TP)、总氮(TN)、透
明度(SD)、高锰酸盐指数(CODMn)
第1.1节 水体富营养化的指标
水体富营养化的指标
富营养化或水体中富含营养物质会对水体的健康和生态产生负面影响。
有几个指标可用于衡量水体中的富营养化程度：
1.叶绿素-a浓度：叶绿素-a是一种存在于藻类和其他水生植物中的色素，其在水体中的
浓度常被用作营养富集的指标。
高水平的叶绿素-a可能表明存在过量的营养物质，这可能导致藻华和其他形式的氧气消耗。
2.总磷和氮浓度：磷和氮是水生植物生长所必需的两种营养素，但过量会导致富营养化。
测量水体中磷和氮的总浓度可以指示营养富集水平。
3.溶解氧（DO）水平：水生生物呼吸需要氧气，水体中溶解氧（DO）水平低可能是富
营养化的标志。
水中过量的营养物质会导致藻类和其他水生植物过度生长，这会在分解时耗尽水中的氧气。
4.pH值：水体的pH值是衡量其酸度或碱度的指标。
水体pH值的变化可能是富营养化的
标志，因为过量的营养物质会改变水的化学平衡。
5.底栖大型无脊椎动物：底栖大型无脊椎动物是生活在水体沉积物中的小动物，对水质变
化敏感。
某些种类的大型无脊椎动物的存在与否可用作富营养化的指标。
叶绿素A测定复习试题
叶绿素a测定复习试题一、填空题1.叶绿素a的测定方法有和，环境监测(生物)技术规范中规定用。
答：分光光度法；荧光光度法；分光光度法；2.地表水环境质量标准(GHZB1-1999)中，对控制湖泊水库富营养化的特定项目之一叶绿素a作了明确规定：Ⅰ类水质的标准值为，Ⅱ类水质的标准值为，Ⅲ类水质的标准值为，Ⅳ类水质的标准值为，Ⅴ类水质的标准值为。
答：≤0.001mg/L；≤0.004mg/L；≤0.01mg/L；≤0.03mg/L；≤0.065mg/L。
3.进行生物样品污染物测定的样品处理可概括为二个过程：第一步是将样品、、；第二步是将前一步处理过的样品以消除干扰，提高被测组分的浓度。
答：分离；纯化；浓缩；分解消化或提取。
4.经丙酮浸取含有叶绿素a的溶液，以溶液为参比，在波长、、、下测定吸光度。
在波长测定丙酮溶液的空白值。
丙酮溶液空白值应不大于。
答：丙酮；663nm；645nm；630nm；750nm；0.05。
5.经离心后的样品上清液，在750nm处测定吸光度，用以校正提取液的，当测定用1cm比色皿，吸光度超过时，提取液应。
答：浊度；0.005；重新离心。
二、问答题1. 控制叶绿素a指标值的意义是什么？答：叶绿素a是反映水体富营养化的一个重要指标。
控制叶绿素a就在于控制富营养化和藻类生物量，从而揭示湖库富营养化发生的内在实质。
2. 叶绿素a的涵义是什么？答：指水中藻类具有光合色素的叶绿素。
3.什么叫富营养化？答：营养物质特别是含氮和磷的化合物，在淡水或盐水中的富集。
富营养化加速了藻类和较高等植物的生长。
4.评定水质富营养化的几种类型标准是什么？答：参照国际经济合作与发展组织(OECD)规定和关于评定湖泊富营养化状态的叶绿素a划分标准：以≥78μg/L为重富营养型；11—78μg/L为富营养型；3.0—11μg/L为中营养型；＜3.0μg/L为贫营养型。
5.用于叶绿素a测定的水样应如何保存？答：每升水样加1%碳酸镁悬浊液1ml，以防止酸化引起色素溶解。
(整理)原水藻类监测及富营养化状况的调查
原水藻类监测及富营养化状况的调查一. 前言八三年的引滦入津结束了天津人喝咸水的历史，但滦河水系湖泊型水源，水体的富营养化日趋严重成为产水部门面临的最大难题。
同时它也是世界水环境重大的水质问题之一。
水体富营养化不仅导致生态系统的破坏，且严重干扰水资源的利用。
尤其是富营养水体作为供水水源时会产生如下三个不利因素其一：由于藻类的大量繁殖使水体的 pH增高，碱度下降影响混凝效果。
其二：藻类增多会严重堵塞滤池，运行周期缩短，降低产水率。
其三：有些藻种有霉臭味，藻类的死亡、腐败也使水体腥臭难闻。
蓝藻的代谢物释放毒素，严重威胁着人体健康。
由此可知，高藻水作为饮用水源处理不当对经济效益和社会效益都会产生影响。
二. 任务来源天津市饮用水和工业用水的供给水源主要来自引滦输水下游的于桥水库，早在八十年代环保等部门曾对于桥水库的富营养化进行了多方面的调查，判定其水质呈中富营养状态，随着工农业发展特别是乡镇企业的日益增多，于桥水库的污染负荷日趋增加，９７年由于气候、周边环境等诸多人为、自然因素的影响，在夏季藻类异常繁盛，严重影响了水处理工艺的正常运行，尽管产水部门竭尽全力，但其效果并非令人满意。
在我们不能改变源水水质的前提下，为确保九八年高藻期供水水质，公司主管领导组织相关人员进行对策性研究，并正式立项进行藻类监测，以便用有针对性的手段探索水体的富营养状况及季节性变化规律，为水厂能够根据水体含藻状况及规律采用行之有效的水处理方法提供科学依据。
三. 主要研究内容和技术路线：（一）. 收集湖泊、水库富营养化调查的历史资料，掌握滦河水库富营养化研究现状。
（二）. 依据“湖泊富营养调查规范”并借鉴历史资料确定监测项目、方法、采样站位及频率。
1. 本次研究确定了 25个监测项目，其中水质参数 20项，生物参数 5项。
2. 根据本水系的特点，选择于桥水库为主要调查点，上游水库大黑汀、潘家口为辅助调查点，为使采集的水样具有代表性，分别在水库的进、出口及中心区域布设采样站位（见图1）。
浅析地表水叶绿素a的测定
浅析地表水叶绿素a的测定地表水中叶绿素a是一种重要的指标，用于评价水体的富营养化程度和水生态状况。
测定地表水叶绿素a的方法主要包括光谱分析法、化学分析法和生物分析法。
光谱分析法是测定叶绿素a浓度最常用的方法之一。
这种方法基于叶绿素a吸收可见光的特性，可以通过光谱仪来测定不同波长下的吸光度，然后根据叶绿素a的吸收光谱曲线和标准曲线来求得叶绿素a浓度。
这种方法非常灵敏，可以高效地测定样品中叶绿素a的浓度，但需要使用昂贵的设备，且对样品的净化和处理要求较高，所需的样品量也较大。
化学分析法是一种传统的测定叶绿素a的方法，其中较为流行的是酸醇抽提法。
该方法将样品用醇或丙酮溶解，加入酸后将叶绿素a从细胞中释放出来，然后用丙酮或乙酸乙酯分离出叶绿素a，最后通过分光光度计读取吸光度并计算浓度。
该方法精确度较高，且适用于不同类型的水体样品，但是需要大量的有机溶剂和较长的操作时间，可能对环境和健康产生不良影响。
生物分析法主要是指蓝藻荧光法和叶绿素荧光法。
蓝藻荧光法通过测定蓝细菌藻属细胞叶绿素a荧光的强度来间接测定叶绿素a浓度，具有操作简便、快速、成本低等优点，但其适用于淡水污染的水体，而且对于不同蓝藻荧光响应表现不同，需要进行标定和分析。
叶绿素荧光法是利用叶绿素a分子的荧光特性，通过检测叶绿素a荧光信号来测定叶绿素a浓度，其操作简便，适用于在线监测和大量样品分析。
总的来说，测定地表水中叶绿素a的方法各有优缺点，需要根据样品类型、测定目标、仪器设备等因素综合考虑选择合适的方法。
未来，随着科技的发展，新型的叶绿素a测定方法也将不断涌现，为地表水质量监测提供更多的选择。
环境化学实验教程
实验一水体富营养化程度的评价--水体中总磷和叶绿素含量的测定前言富营养化(eutrophication)是指在人类活动的影响下，生物所需的氮、磷等营养物质大量进入湖泊、河口、海湾等缓流水体，引起藻类及其他浮游生物迅速繁殖，水体溶解氧量下降，水质恶化，鱼类及其他生物大量死亡的现象。
在自然条件下，湖泊也会从贫营养状态过渡到富营养状态，沉积物不断增多，先变为沼泽，后变为陆地。
这种自然过程非常缓慢，常需几千年甚至上万年。
而人为排放含营养物质的工业废水和生活污水所引起的水体富营养化现象，可以在短期内出现。
水体富营养化后，即使切断外界营养物质的来源，也很难自净和恢复到正常水平。
水体富养化严重时，湖泊可被某些繁生植物及其残骸淤塞，成为沼泽甚至干地。
局部海区可变成“死海”，或出现“赤潮”现象。
植物营养物质的来源广、数量大，有生活污水、农业面源、工业废水、垃圾等。
每人每天带进污水中的氮约50 g。
生活污水中的磷主要来源于洗涤废水，而施入农田的化肥有50%～80%流入江河、湖海和地下水体中。
许多参数可用作水体富营养化的指标，常用的是总磷、叶绿素-a含量和初级生产率的大小（见表7-1）。
一、实验目的1. 掌握总磷、叶绿素-a及初级生产率的测定原理及方法。
2. 评价水体的富营养化状况。
二、仪器设备及试剂1. 仪器(1) 可见分光光度计。
(2) 移液管：1mL、2mL、10mL。
(3) 容量瓶：100mL、250mL。
(4) 锥型瓶：250mL。
(5) 比色管：25mL。
(6) BOD瓶：250mL。
(7) 具塞小试管：10mL。
(8) 玻璃纤维滤膜、剪刀、玻棒、夹子(9) 多功能水质检测仪2. 试剂(1) 过硫酸铵（固体）。
(2) 浓硫酸。
(3) 1 mol/L硫酸溶液。
(4) 2 mol/L盐酸溶液。
(5) 6 mol/L氢氧化钠溶液。
(6) 1%酚酞：1g酚酞溶于90mL乙醇中，加水至100mL。
(7) 丙酮:水（9:1）溶液。