糖尿病大鼠胰岛素抵抗实验研究进展
雷公根水提取液对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响

雷公根水提取液对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响作者:孔彩霞彭聪郑承红等来源:《中外医学研究》2011年第26期【摘要】目的观察雷公根水提取液对糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响。
方法尾静脉注射链脲佐菌素(STZ),并给予高糖高脂饲料喂养诱导2型糖尿病大鼠模型。
随机分为雷公根水提取液低剂量组、雷公根水提取液高剂量组、二甲双胍组、模型组与正常组。
观察体重、口服糖耐量试验(OGTT)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、空腹血清胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(IRI)(IRI=FINS×F)的改变。
结果(1)模型组大鼠体重明显增加(),在降低IRI方面与二甲双胍组比较差异有统计学意义(P【关键词】雷公根;水提取液;2型糖尿病;胰岛素抵抗Effects of centella asiatica on insulin resistant effects in type 2 diabetic rats KONG Cai-xia,PENG Cong,ZHENG Cheng-hong,KE Shu-hong.Wuhan No.1 Hospital,Wuhan 430022,China【Abstract】ObjectiveTo study the water extract effects of Centella Asiatica(CA) on insulin resistant effects in type 2 diabetic rats.MethodsThe model of type 2 diabetes mellitus in rats was established by feeding with high fat and high caloric diet and injection of streptozotocin from tailvein.Diabetic rats were randomly divided into normal group,model group,metformin group,high dosage water extract CA group and low dosage water extract CA group.Weight,oral glucose tolerance test(OGTT),serum levels of triglyceride(TG) and cholesterol(TC),serum fasting insulin concentration(FINS) and insulin resistant index (IRI)()were tested. Results(1)Compared with the normal group the weight,the results of OGTT,serum levels ofTG,TC,FINS and IRI of rats in the model group increased significantly(P【Key words】Centella asiatica;Water extract;Type 2 diabetes;Insulin resistance糖尿病是一组全身性的内分泌代谢性疾病,尤其是慢性并发症几乎可涉及全身各器官组织,起病隐匿,呈渐进性发展,早期不易发现,而发展到一定阶段其治疗效果不佳,是造成致残致死的重要原因。
桑芪益气养阴方对胰岛素抵抗大鼠肝脏ACC1

1294 环球中医药2023年7月第16卷第7期 Global Traditional Chinese Medicine,July 2023,Vol.16,No.7㊃辨证保健专题㊃基金项目:国家重点研发计划(2018YFC1706803)作者单位:102488 北京中医药大学中医学院[李丽(硕士研究生)㊁刘佳琪(硕士研究生)㊁冯颖童(硕士研究生)㊁扈觐玺(硕士研究生)㊁姜斯佳(博士研究生)㊁贾岚㊁王景霞];北京中医药大学第三附属医院内分泌科(高晶)作者简介:李丽(1996-),2020级在读硕士研究生㊂研究方向:中药基础理论㊂E⁃mail:1527874193@ 通信作者:王景霞(1976-),博士,教授,博士生导师㊂研究方向:中药药性理论㊂E⁃mail:wjx20131210@桑芪益气养阴方对胰岛素抵抗大鼠肝脏ACC1/FASN /SCD1信号通路及GLUT2的影响李丽 刘佳琪 冯颖童 扈觐玺 姜斯佳 高晶 贾岚 王景霞【摘要】 目的 研究桑芪益气养阴方对胰岛素抵抗大鼠肝脏组织乙酰辅酶A 羧化酶1(Acetyl⁃coa carboxylase 1,ACC1)/脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)/硬脂酰⁃辅酶A 去饱和酶1(stearoyl⁃CoA desaturase 1,SCD1)通路及葡萄糖转运蛋白2(glucose transporter2,GLUT2)的影响㊂方法 雄性SD 大鼠48只,根据基础血糖水平分为空白组㊁模型组㊁阳性药组㊁桑芪益气养阴方低㊁中㊁高剂量组㊂采用甲状腺素皮下注射㊁连续高脂饲料喂养合并链脲佐菌素注射复合因素造模㊂空白组大鼠不予给药,模型组大鼠给予给予0.9%氯化钠溶液,阳性药组十味消渴胶囊灌胃剂量为1.32g /kg㊁桑芪益气养阴方低㊁中㊁高剂量组灌胃剂量分别为1.25㊁2.5㊁7.5g /kg㊂连续给药30天,比色法检测大鼠外周血谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)㊁谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)和肝脏肝糖原㊁游离脂肪酸(free fat acid,FFA)㊁丙二醛(malondi⁃aldehyde,MDA)㊁超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)㊁谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathioneperoxidase,GSH⁃Px)含量,使用RT⁃PCR 及Western blot 分别检测大鼠ACC1㊁FASN㊁SCD1㊁GLUT2的mRNA 和蛋白表达㊂结果 与空白组相比,模型组大鼠ALT㊁AST㊁MDA 显著升高,SOD㊁肝糖原㊁GSH⁃PX 显著降低(P <0.05,P <0.01),ACC1㊁FASN㊁SCD1的mRNA 和蛋白表达水平显著升高,GLUT2的mRNA 和蛋白表达水平显著降低(P <0.01);与模型组比较,各干预组大鼠ALT㊁AST㊁MDA 显著降低,SOD㊁肝糖原㊁GSH⁃PX 显著升高(P <0.05,P <0.01),桑芪益气养阴方中㊁高剂量组FFA 含量显著降低(P <0.05,P <0.01),桑芪益气养阴方中㊁高剂量组ACC1㊁FASN㊁SCD1的mRNA 和蛋白表达水平显著降低(P <0.01),GLUT2的mRNA 和蛋白表达水平显著升高(P <0.01)㊂结论 桑芪益气养阴方可调节大鼠肝脏糖脂代谢紊乱,缓解氧化应激,预防肝损伤,其机制可能与抑制ACC1/FASN /SCD1和上调GLUT2基因和蛋白表达相关㊂【关键词】 桑芪益气养阴方; 气阴两虚证; 胰岛素抵抗; 氧化应激; 肝脏糖脂代谢【中图分类号】 R285.5 【文献标识码】 A doi:10.3969/j.issn.1674⁃1749.2023.07.003Effects of Sangqi Yiqi Yangyin Fomula leaves on ACC1/FASN /SCD1pathway and GLUT2in liver of insulin resistance ratsLI Li ,LIU Jiaqi ,FENG Yingtong ,HU Jinxi ,JIANG Sijia ,GAO Jing ,JIA Lan ,WANG Jingxia School of Traditional Chinese Medicine ,Beijing University of Chinese Medicine ,Beijing 102488,China Corresponding author :WANG Jingxia ,E⁃mail :wjx20131210@【Abstract 】 Objective To study the effects of Sangqi Yiqi Yangyin Fomula on ACC1/FASN /SCD1pathway and GLUT2in insulin resistant rats.Methods According to the basal blood glucose level,a totalof 48male Sprague Dawley rats were divided into blank group,model group,positive drug group (Shiwei环球中医药2023年7月第16卷第7期 Global Traditional Chinese Medicine,July2023,Vol.16,No.71295 Xiaoke Capsule),and low,medium and high dose groups of Astragalus mulberry leaf and Yuzhu granules. Subcutaneous injection of thyroxine combined with intraperitoneal injection of STZ was used to establish a hyperglycemic rat model of insulin resistance.The gavage dose of the model group was0.9%sodiumchloride solutionn,the gavage dose of the Shiwei Xiaoke capsule positive drug group was1.32g/kg,andthe gavage dose of the Huangqi Mulberry Ye Yuzhu granule low,middle and high dose groups were1.25,2.5and7.5g/kg.Continuous administration for30days,The contents of alanine aminotransferase(ALT)and aspartate aminotransferase(AST)in peripheral blood and glycogen,free fat acid(FFA), malondialdehyde(MDA),superoxide dismutase(SOD)and glutathione peroxidase(GSH⁃PX)in liver were determined by colorimetry,the mRNA and protein expressions of Acetyl⁃coa carboxylase1(ACC1),fattyacid synthase(FASN),stearoyl⁃CoA desaturase1(SCD1)and glucose transporter2(GLUT2)in rat liverwere detected by RT⁃PCR and Western blot.Results Compared with the blank group,ALT,AST,MDA,FFA,GLUT2were significantly increased in the model group;the levels of SOD,liver glycogen,GSH⁃Px,ACC1,FASN,SCD1were significantly decreased(P<0.05,P<0.01).Compared with the model group,the levels of ALT,AST,MDA and GLUT2were significantly decreased in the Shiwei Xiaoke group and thelow,medium and high dose groups of Sangqi Yiqi Yangyin Fomula;the levels of SOD,liver glycogen,GSH⁃Px,ACC1,FASN and SCD1were significantly increased(P<0.05,P<0.01).FFA was significantly decreased in the medium and high dose groups of Sangqi Yiqi Yangyin Fomula(P<0.05,P<0.01).Conclusion Sangqi Yiqi Yangyin Fomula can regulate the disorder of hepatic glucose and lipid metabolism,relieve oxidative stress,and prevent liver injury in rats,and the mechanism may be related tothe inhibition of ACC1/FASN/SCD1pathway and GLUT2gene and protein expression.【Key words】 Sangqi Yiqi Yangyin Fomula; Qi and Yin deficiency syndrome; Insulin resistance; Oxidative stress; Hepatic glucose and lipid metabolism 胰岛素抵抗是2型糖尿病的重要发病机制,并贯穿疾病全程㊂肝脏是胰岛素作用的重要靶器官,其对胰岛素的低敏感性是推动2型糖尿病发展的关键环节[1]㊂正常生理状态下,胰岛素能调节肝脏中糖原㊁脂类㊁蛋白质等生物大分子的合成,抑制糖异生,维持血糖稳态[2];胰岛素抵抗状态下肝脏糖异生抑制受损,而脂肪合成仍保持较高水平,表现为肝脏脂肪酸和甘油三酯水平升高[3]㊂肝脏内脂质积累造成肝脏氧化应激和功能受损,进一步加重胰岛素抵抗,因此,缓解肝脏胰岛素抵抗为防治2型糖尿病的重点㊂中医学以整体观㊁辨证论治理念为指导,在糖尿病等慢性病防治方面独具优势㊂就中医而言,2型糖尿病当以消渴论治,其病机演变常遵循 阴虚-气阴两虚-阴阳两虚”这一规律,而气阴两虚是贯穿全病程的根本病机,也是病理转机的关键,故益气养阴法当为消渴病治疗的基本大法[4]㊂桑芪益气养阴方为结合中医辨证理论及临床经验,由黄芪㊁桑叶㊁玉竹㊁葛根㊁蜂胶粉组合而成,用于气阴两虚证消渴患者㊂前期课题组实验研究表明[5],该方除改善气阴两虚型糖尿病大鼠的证候表征外,还可使模型大鼠的空腹血糖和胰岛素抵抗指数显著降低,使空腹胰岛素㊁胰岛素敏感指数㊁胰岛β细胞功能指数显著升高,在改善高血糖大鼠糖脂代谢紊乱及胰岛素抵抗方面疗效显著㊂本研究进一步探究桑芪益气养阴方对胰岛素抵抗大鼠的肝脏保护作用,并从乙酰辅酶A羧化酶1(Acetyl-coa carboxylase1,ACC1)/脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FASN)/硬脂酰-辅酶A去饱和酶1(stearoyl⁃CoA desaturase1,SCD1)信号通路及葡萄糖转运蛋白2(glucose transporter2,GLUT2)表达等角度,探究其可能的作用机制,为临床应用提供科学的实验支持㊂1 材料与方法1.1 实验动物SPF级雄性SD大鼠48只,体质量(220±20)g㊂购于北京维通利华实验动物技术有限公司,动物许可证号:SCXK(京)2016⁃0006,本研究经北京中医药大学医学与实验动物伦理委员会批准(批准号: BUCM⁃4⁃2021052405⁃2038)㊂大鼠于北京中医药大学动物房常规饲养,饲养条件:室温22~24℃㊁相对湿度60%~70%㊁光照节律12L:12D㊂由北京斯贝福生物技术有限公司提供特殊高脂饲料,配比为猪1296 环球中医药2023年7月第16卷第7期 Global Traditional Chinese Medicine,July2023,Vol.16,No.7油10%㊁蔗糖15%㊁蛋黄粉15%㊁酪蛋白5%㊁胆固醇1.2%㊁胆酸钠0.2%㊁碳酸氢钙0.6%㊁石粉0.4%㊁鼠维持饲料52.6%㊂1.2 实验药物桑芪益气养阴方由黄芪㊁桑叶㊁玉竹㊁葛根㊁蜂胶粉按照4∶2.5∶3∶4∶0.3配比而成,购自安徽亳州市京皖中药饮片厂㊂制备方法:全方饮片分别用10倍㊁8倍的加水量煎煮2次,每次2小时,合并2次的滤液,加热浓缩,真空干燥后打粉,使用前用蒸馏水配制成相应浓度的药液㊂十味消渴胶囊(天津中新药业集团股份有限公司,国药准字号: Z19990033)㊂1.3 实验试剂L⁃甲状腺素钠(美国BioRuler公司,批号: r5703);链脲佐菌素(美国Sigma公司,批号: 102364684);Trizol(美国Ambion公司,批号:15596⁃026),HiScript®II Q RT SuperMix for qPCR,HiScript II Q Select RT SuperMix for qPCR,SYBR Green Master Mix购于南京诺唯赞公司,批号分别为: R223⁃01㊁R223⁃01㊁Q111⁃02;Taq Plus DNA Polymerase,DL2000DNA Marker,dNTP购于北京天根生化科技有限公司,批号分别为:ET105⁃01㊁MD114⁃02㊁CD117㊂蛋白marker(10⁃250KD)(北京海利克思科技有限公司,批号:P12103⁃2);蛋白marker(20⁃120KD)(南京金斯瑞生物科技有限公司,批号:M00521);PVDF膜(0.45μm)(美国Millipore公司,批号:IPVH00010);兔多抗GAPDH (37KD)(杭州贤至生物有限公司,批号:AB⁃P⁃R001);兔多抗ACC1(250KD)㊁兔多抗FASN (272KD)购于武汉三鹰生物技术有限公司,批号分别为:21923⁃1⁃AP㊁10624⁃2⁃AP;兔单抗SCD1 (42KD)(英国Abcam公司,批号:ab236868);兔多抗GLUT2(57KD)(美国Affinity公司,批号: DF7510)㊂1.4 实验仪器台式高速冷冻离心机(德国Centrifuge公司, TY2017005846),水浴锅(姜堰市天力医疗器械厂有限公司,TL⁃420D),全自动研磨仪(武汉塞维尔生物科技有限公司,KH⁃III),酶标检测仪(美国Biotek公司,Epoch2C),全自动生化分析仪(深圳雷杜生命科技有限公司,Chemray240),冰冻切片机(美国Thermo公司,Cryotome E),切片刀(上海徕卡仪器有限公司,Leica819),成像系统(日本尼康株式会社,Nikon DS⁃U3),电泳仪(DYY⁃7C)㊁垂直电泳槽(DYCZ⁃24DN)㊁电转仪(DYCZ⁃40)购于北京六一仪器厂㊂1.5 实验方法1.5.1 动物分组及给药 雄性SD大鼠48只,适应性喂养5天后,禁食不禁水12小时,测定给葡萄糖前(即0小时)大鼠血糖值㊁给予2.5g/kg葡萄糖后大鼠0.5小时和2小时血糖值为基础值,以0㊁0.5小时基础血糖水平将48只大鼠平均分为6个组,即空白组㊁模型组㊁阳性药组(十味消渴胶囊)㊁桑芪益气养阴方低㊁中㊁高剂量组,每组8只㊂连续30天进行大鼠灌胃给药,给药体积为1mL/100g,阳性药组给药剂量为十味消渴胶囊1.32g/kg㊁桑芪益气养阴方低㊁中㊁高剂量组灌胃药物剂量分别为1.25㊁2.5㊁7.5g/kg,空白组㊁模型组灌胃同等体积生理盐水㊂1.5.2 造模方法 建立由高脂饲料喂养㊁甲状腺素(tetraiodothyronine,T4)皮下注射㊁联合链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)注射造成胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱大鼠模型[6]㊂适应性喂养5天后开始造模,造模周期维持30天,空白组给予维持料饲养,其余各组均给予高热能饲料;除空白组外,其余各组在实验第21~27天下午14﹕00进行上颈部皮下注射T4混悬液(0.2mg/kg);在实验第28天除空白组外,各组禁食24小时(不禁水),在实验第29天以1mL/100g体质量的剂量一次性腹腔注射2%STZ 溶液(30mg/kg),注射后继续给予高热能饲料饲养5天,实验结束后取材㊂1.5.3 血液及肝脏样本制备 在实验第35天,各组大鼠禁食不禁水16小时,第36天早晨,采用腹腔注射1%戊巴比妥钠(0.5mL/100g)麻醉大鼠,腹主动脉取血,室温静置2小时后4℃3500r/min,10分钟离心,取上层血清,-80℃保存㊂取肝大叶分装冻存管转移至液氮冻存,-80℃冰箱存放㊂1.6 指标检测1.6.1 血清生化分析及肝脏中游离脂肪酸(free fat acid,FFA)㊁丙二醛(malondialdehyde,MDA)㊁超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)㊁肝糖原㊁谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH⁃Px)的测定 采用比色法在全自动生化仪上测各组大鼠血清中谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)㊁谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)的浓度变化;采用比色法测各组大鼠肝脏中肝糖原㊁FFA㊁环球中医药2023年7月第16卷第7期 Global Traditional Chinese Medicine,July2023,Vol.16,No.71297MDA㊁SOD㊁GSH⁃Px含量㊂1.6.2 RT⁃qPCR检测大鼠肝脏组织ACC1㊁FASN㊁SCD1㊁GLUT2的mRNA表达 从-80℃超低温冰箱取大鼠肝脏组织,每组随机选取3个大鼠肝脏样本, Trizol法提取总RNA,将干燥后的RNA溶解于20μL DEPC水中,取2μL定量测试OD260㊁OD280,余量留待逆转录㊂以总RNA为模板合成cDNA,进行聚合酶链锁反应(polymerase chain reaction,PCR)反应㊂扩增条件:95°C10分钟;95°C 15秒,60°C60秒,循环40次;95°C15秒,60°C1分钟,95°C15秒㊂在PCR扩增结束后,以2-ΔΔCt表示mRNA相对表达量㊂引物序列见表1㊂表1 引物序列表基因名称引物序列(5'-3')长度(bp)ACC1F:TGAAGGGCTACCTCTAATGR:CAAGCGGATGTAGACTGG337FASN F:GCTTCGCCAACTCTACCAR:ATCGCTTCCAAGATAATGC105SCD1F:GTGGGTTGGCTGCTTGTGCR:TCCCGAGATTGAATGTTCTTGTC308GLUT2F:AGTCACACCAGCACATACGAR:AGAGGGCTCCAGTCAACGA209GAPDH F:ACAGCAACAGGGTGGTGGACR:TTTGAGGGTGCAGCGAACTT252 1.6.3 Western Blot检测大鼠肝脏组织ACC1㊁FASN㊁SCD1㊁GLUT2蛋白表达 每组随机选取3个大鼠肝脏样本,按试剂盒法提取细胞总蛋白,蛋白定量法(Bicinchoninic acid,BCA)测定蛋白浓度㊂取蛋白样品进行SDS⁃PAGE电泳,转膜,封闭㊂用ACC1(1∶1000㊁FASN(1∶1000)㊁SCD1(1∶1 000)㊁GLUT2(1∶1000)㊁GAPDH(1∶1000)一抗,4℃孵育过夜,PBST洗膜5次,二抗(1∶10000),室温孵育2小时,PBST洗膜5次,显色曝光,image⁃pro plus分析胶片条带灰度值㊂1.7 统计学方法实验数据用均数±标准差(x±s)表示,采用SAS9.4软件进行统计分析,数据进行正态分布及方差齐性检验㊂数据呈正态分布,组间数据比较用单因素方差分析(One⁃way ANOVA)分析,两两比较方差齐时采用LSD进行统计分析;方差不齐采用Dunnett’s T3进行统计分析㊂各统计结果以P<0.05为差异有统计学意义㊂2 结果2.1 桑芪益气养阴方对胰岛素抵抗大鼠血清ALT㊁AST的影响与空白组相比,模型组大鼠ALT显著升高(P<0.01)㊂与模型组比较,阳性药组大鼠ALT㊁AST显著升高(P<0.01),桑芪益气养阴方各剂量组ALT均显著降低(P<0.01),桑芪益气养阴方中㊁高剂量组AST显著降低(P<0.01)㊂见表2㊂表2 桑芪益气养阴方对胰岛素抵抗大鼠ALT㊁AST的影响(x±s,U/L)组别鼠只ALT AST空白组840.38±6.70160.08±22.49模型组862.50±8.30a173.06±29.74阳性药组837.00±4.44b117.33±18.72b 桑芪益气养阴方低剂量组848.13±11.13b165.28±14.31桑芪益气养阴方中剂量组843.38±7.29b126.08±21.45b 桑芪益气养阴方高剂量组840.38±7.25b114.35±24.38b 注:与空白组比较,a P<0.01,与模型组比较,b P<0.01㊂2.2 桑芪益气养阴方对胰岛素抵抗大鼠肝脏肝糖原和FFA的影响与空白组相比,模型组大鼠肝脏肝糖原显著降低(P<0.01),FFA显著升高(P<0.05)㊂与模型组比较,阳性药组和桑芪益气养阴方各剂量组大鼠肝脏肝糖原均显著升高(P<0.05,P<0.01),桑芪益气养阴方中㊁高剂量组大鼠肝脏FFA显著降低(P<0.05,P<0.01)㊂见表3㊂表3 桑芪益气养阴方对胰岛素抵抗大鼠肝脏肝糖原和FFA的影响(x±s)组别鼠只肝糖原(mg/g)FFA(U/mL)空白组839.44±1.65 1.43±0.18模型组827.19±3.11b 1.73±0.35a阳性药组834.79±3.86c 1.93±0.32桑芪益气养阴方低剂量组833.14±2.28c 1.74±0.22桑芪益气养阴方中剂量组833.90±4.00c 1.28±0.18d 桑芪益气养阴方高剂量组838.85±1.43d 1.42±0.31c 注:与空白组比较,a P<0.05,b P<0.01;与模型组比较,c P<0.05,d P<0.01㊂2.3 桑芪益气养阴方对胰岛素抵抗大鼠肝脏MDA㊁SOD㊁GSH⁃Px的影响与空白组相比,模型组大鼠肝脏SOD㊁GSH⁃PX 显著降低,MDA显著升高(P<0.01)㊂与模型组比1298 环球中医药2023年7月第16卷第7期 Global Traditional Chinese Medicine,July2023,Vol.16,No.7较,阳性药组大鼠肝脏MDA显著降低,SOD㊁GSH⁃PX显著升高(P<0.01)㊂桑芪益气养阴方各剂量组大鼠肝脏SOD㊁GSH⁃PX显著升高,MDA显著降低(P<0.01)㊂见表4㊂2.4 桑芪益气养阴方对胰岛素抵抗大鼠肝脏ACC1㊁FASN㊁SCD1㊁GLUT2mRNA表达的影响与空白组比较,模型组大鼠ACC1㊁FASN㊁SCD1 mRNA表达显著升高(P<0.01),GLUT2mRNA表达显著降低(P<0.01)㊂与模型组比较,阳性药组和桑芪益气养阴方低㊁中剂量组大鼠ACC1㊁FASN㊁SCD1 mRNA表达显著降低(P<0.01),GLUT2mRNA表达显著升高(P<0.01)㊂见表5㊂2.5 桑芪益气养阴方对胰岛素抵抗大鼠肝脏ACC1㊁FASN㊁SCD1㊁GLUT2蛋白表达的影响与空白组比较,模型组大鼠ACC1㊁FASN㊁SCD1蛋白表达显著升高(P<0.01),GLUT2蛋白表达显著降低(P<0.01)㊂与模型组比较,阳性药组大鼠ACC1㊁FASN㊁SCD1蛋白表达显著降低(P<0.01), GLUT2蛋白表达显著升高(P<0.01);桑芪益气养阴方各剂量组大鼠FASN㊁SCD1蛋白表达均显著降低(P<0.01),桑芪益气养阴方中㊁高剂量组大鼠ACC1蛋白表达显著降低,GLUT2蛋白表达显著升高(P<0.01)㊂见表6,图1㊂表4 桑芪益气养阴方对胰岛素抵抗大鼠MDA㊁SOD㊁GSH⁃Px的影响(x±s,U/mL)组别鼠只MDA SOD GSH⁃Px空白组854.12±10.81884.19±46.95695.49±90.66模型组893.10±4.51a677.17±41.82a288.83±97.22a阳性药组852.78±6.20b769.83±16.62b542.68±111.67b 桑芪益气养阴方低剂量组861.70±5.97b817.24±33.39b519.95±74.44b 桑芪益气养阴方中剂量组856.36±8.46b817.22±54.32b564.98±69.67b 桑芪益气养阴方高剂量组849.22±4.91b869.06±24.21b537.56±116.03b 注:与空白组比较,a P<0.01;与模型组比较,b P<0.01㊂表5 桑芪益气养阴方对胰岛素抵抗大鼠ACC1㊁FASN㊁SCD1㊁GLUT2基因表达的影响(x±s)组别鼠只ACC1FASN SCD1GLUT2空白组30.478±0.1300.293±0.0350.415±0.124 2.407±0.111模型组3 1.010±0.153a0.954±0.042a 1.009±0.048a0.965±0.042a阳性药组30.877±0.072b0.782±0.038b0.892±0.092b 1.236±0.134b 桑芪益气养阴方低剂量组30.486±0.084b0.486±0.034b0.564±0.064b 2.213±0.112b 桑芪益气养阴方中剂量组30.620±0.025b0.555±0.079b0.702±0.115b 1.457±0.218b 桑芪益气养阴方高剂量组30.922±0.0850.810±0.0440.919±0.057 1.136±0.036注:与空白组比较,a P<0.01;与模型组比较,b P<0.01㊂表6 桑芪益气养阴方对胰岛素抵抗大鼠ACC1㊁FASN㊁SCD1㊁GLUT2蛋白表达的影响(x±s)组别鼠只ACC1FASN SCD1GLUT2空白组30.439±0.0410.291±0.0310.239±0.0270.661±0.081模型组30.787±0.085a0.686±0.090a0.666±0.081a0.205±0.022a阳性药组30.562±0.052b0.455±0.047b0.360±0.019b0.408±0.026b 桑芪益气养阴方低剂量组30.642±0.0440.525±0.020b0.541±0.031b0.259±0.014桑芪益气养阴方中剂量组30.483±0.029b0.421±0.037b0.430±0.013b0.325±0.015b 桑芪益气养阴方高剂量组30.524±0.040b0.368±0.044b0.292±0.027b0.507±0.019b 注:与空白组比较,a P<0.01;与模型组比较,b P<0.01㊂环球中医药2023年7月第16卷第7期 Global Traditional Chinese Medicine,July 2023,Vol.16,No.71299 注:A 空白组;B 模型组;C 阳性药组;D 桑芪益气养阴方低剂量组;E 桑芪益气养阴方中剂量组;F 桑芪益气养阴方高剂量组㊂图1 各组胰岛素抵抗大鼠肝脏ACC1㊁FASN㊁SCD1㊁GLUT2蛋白条带表达情况图3摇讨论胰岛素抵抗是导致2型糖尿病的重要病理机制之一,同时也是非酒精性脂肪肝㊁高脂血症㊁动脉粥样硬化等疾病的共同危险因素㊂胰岛素抵抗的分子机制主要有糖毒性㊁脂毒性㊁氧化应激等,导致胰岛素受体信号转导异常㊂肝脏作为胰岛素作用的主要靶器官及糖脂代谢的重要器官,肝脏胰岛素抵抗在2型糖尿病的发生发展中起着举足轻重的作用[7]㊂GLUT2是一种跨膜载体蛋白,是肝脏和血液之间葡萄糖转移的主要转运体,可调节葡萄糖跨细胞膜运动,维持血糖稳定㊂胰岛素抵抗情况下,GLUT2蛋白表达减少,肝细胞葡萄糖摄取减少,可导致血糖升高[8];反之,肝脏GLUT2表达水平上调可促进肝组织对血液中葡萄糖的摄取,降低血糖水平[9]㊂前期研究显示,桑芪益气养阴方能显著降低气阴两虚型糖尿病大鼠的胰岛素抵抗指数,本研究结果显示桑芪益气养阴方还能显著抑制胰岛素抵抗环境下肝脏GLUT2蛋白的减少,增加肝糖原合成,从而降低血糖水平㊂胰岛素抵抗加速脂肪组织分解并刺激肝脏脂肪合成,引起脂质代谢紊乱㊂脂肪组织加速分解,血液中大量游离脂肪酸流入肝脏,肝脏游离脂肪酸含量增加[10];另外,胰岛素抵抗过度刺激脂质的从头合成(de novo lipogenesis,DNL)并使肝脏脂质合成长期亢进[11]㊂DNL 是肝脏脂质合成的重要途径,在维持血清甘油三酯稳态方面发挥重要作用[12]㊂ACC1㊁FASN 和SCD1是DNL 的三个关键酶㊂葡萄糖经糖酵解,在三羧酸循环中产生柠檬酸盐,CoA 在ATP 柠檬酸裂解酶的作用下释放,后经ACC1催化并转化生成丙二酰辅酶A,FASN 以丙二酰辅酶A 为底物合成棕榈酸酯,SCD1催化棕榈酸酯发生去饱和反应并延长,产生复杂脂肪酸[13],造成肝脏内甘油三酯过度沉积㊂本研究显示,桑芪益气养阴方可减少肝脏游离脂肪酸含量,并通过下调胰岛素抵抗大鼠肝脏组织的ACC1㊁FASN㊁SCD1mRNA 和蛋白表达,抑制DNL 的过度激活,减少肝脏脂质沉积,改善脂代谢紊乱㊂氧化应激为肝脏糖脂代谢紊乱与肝脏胰岛素抵抗㊁肝功能受损中间环节㊂高血糖状态下氧化应激,一方面葡萄糖自身氧化作用增加,产生大量自由基;另一方面长期高血糖使多种蛋白质发生糖基化,形成糖基化终产物,过程中有大量自由基产生,其中SOD㊁GSH⁃Px 等抗氧化酶的糖基化及活性下降加剧了氧化与抗氧化作用的失衡[14]㊂此外,过量游离脂肪酸在肝细胞线粒体内发生β氧化,影响线粒体的活性,使脂肪酸转化为甘油三酯沉积在肝细胞中,肝脏脂质过量沉积加剧肝细胞氧化应激反应,产生过多的自由基与活性氧,导致脂质过氧化反应[15],并在反应末端产生MDA,并消耗SOD㊁GSH⁃Px 等多种抗氧化酶,从而引起蛋白质㊁核酸等生命大分子的交联聚合,使细胞丧失功能,引起肝脏细胞凋亡,从而导致肝脏功能紊乱[16]㊂本研究结果显示桑芪益气养阴方可缓解肝脏氧化应激,从而改善胰岛素抵抗并保护肝功能㊂从中医角度看,在2型糖尿病的发展过程中,脾虚气少,津不上承则气阴两虚,脾失健运,不能转谷为精,则湿浊内停,这与现代医学中促进胰岛素抵抗 糖毒” 浊毒” 氧化应激产物”等相似[17]㊂中医在健脾益气养阴的同时,必注重激浊扬清,化湿还津㊂桑芪益气养阴方中黄芪健脾补气,益气养阴;桑叶清热润燥养阴,生津止渴;葛根健脾益气,升举清阳;玉竹甘寒质润,益胃生津;蜂胶补虚弱,化浊脂,止消渴㊂诸药合用,中州得健,纳运有常,清阳得升,浊阴得降,湿浊得化,津液得复,则消渴得愈㊂现代药理研究显示,黄芪[18]㊁桑叶[19]㊁葛根[20]㊁玉竹[21]㊁蜂胶[22]均有确切的降糖作用㊂本实验研究显示,桑芪益气养阴方能通过增加肝糖原合成,降低血糖水平,减少糖毒;还能减少肝脏游离脂肪酸含量,减少肝脏脂质沉积,改善脂代谢紊乱,从而降低脂毒;尚能缓解肝脏氧化应激,从而1300 环球中医药2023年7月第16卷第7期 Global Traditional Chinese Medicine,July2023,Vol.16,No.7改善肝脏胰岛素抵抗并保护肝功能,其作用机制可能与调节ACC1/FASN/SCD1通路和GLUT2基因和蛋白表达有关㊂桑芪益气养阴方既能减少糖毒㊁又能降低脂毒,还能保护肝脏,体现了中医辨证论治,标本兼治的特点,为高糖高脂人群的疾病防治提供了方向㊂参考文献[1] SU Z Q,NIE Y T,HUANG X F,et al.Mitophagy in HepaticInsulin Resistance:Therapeutic Potential and Concerns[J].Frontiers in Pharmacology,2019,10:1193.[2] Matthew J W,Paula M M,William D N,et al.The liver asanendocrine organlinking NAFLD and insulin resistance[J].Endocr Rev,2019,40(5):1367⁃1393.[3] 刘福君,常李李,王为兰,等.肝脏胰岛素抵抗与2型糖尿病[J].中国医学科学院学报,2022,44(4):699⁃708. [4] 苏克雷,朱垚,郭立中.国医大师周仲瑛治疗糖尿病肾病经验[J].中华中医药杂志,2012,27(11):2854⁃2857. [5] 姜斯佳,冯颖童,扈觐玺,等.基于 方证对应”理论的益气养阴方对高血糖大鼠的功效研究[J].世界中医药,2023,18(1):1⁃6,13.[6] 孟靓,王景霞,孟智睿,等.基于中医辨证保健理论探索辅助降血糖功能评价方法[J].世界中医药,2022,17(16):2292⁃2298.[7] Sumida Y,Niki E,Naito Y,et al.Involvement of free radicals andoxidative stress in NAFLD/NASH[J].Free Radical Research,2013,47(11):869⁃880.[8] ZHANG Q,YUAN H,ZHANG C,et,al.Epigallocatechin gallateimproves insulin resistance in HepG2cells through alleviating in⁃flammation and lipotoxicity[J].Diabetes Res Clin Pract,2018,142:363⁃373.[9] González⁃Rodriguez A,Nevado C,EscriváF,et al.PTP1Bdeficiency increases glucose uptake in neonatal hepatocytes:involvement of IRA/GLUT2complexes[J].Am J PhysiolGastrointest Liver Physiol,2008,295(2):G338⁃G347. [10] Baothman O A,Zamzami M A,Tather I,et al.The role of gut mi⁃crobiotaa in the development of obesity and diabetes[J].LipidsHealth Dis,2016,15:108.[11] Sanders FWB,Griffin JL.De novo lipogenesis in the liver inhealth and disease:more than just a shunting yard for glucose[J].Bio Rev,2016,91:452⁃468.[12] 王凯,柳星峰,李平平.胰岛素抵抗状态下肝脏脂质合成增加的研究进展[J].药学学报,2020,55(2):189⁃194. [13] SONG Z,XIAO A M,YANG F.Regulation and MetabolicSignificance of De Novo Lipogenesis in Adipose Tissues[J].Nutrients,2018,10(10):1383⁃1404.[14] Teresa Vanessa Fiorentino,Annamaria Prioletta,Pengou Zuo,et,al.Hyperglycemia⁃induced Oxidative Stress and its Role in Diabe⁃tesMellitus Related Cardiovascular Diseases[J].CurrentPharmaceutical Design.2013,19(32):5695⁃703. [15] Boden G.Obesity,insulin resistance,and free fatty acids[J].CurrOpin Endocrinol Diabetes Obes,2011,18(2):139⁃143. [16] Kiminori Sada,Takeshi Nishikawa,Daisuke Kukidome,et al.Hyperglycemia Induces Cellular Hypoxia through Production ofMitochondrial ROS Followed by Suppression of Aquaporin⁃1[J].PloS one.2016,11(7):e0158619.[17] 万小露,叶倩桦,方馨薇,等.基于肠道菌群探讨2型糖尿病之浊毒”病机[J].环球中医药,2022,15(2):280⁃283. [18] 邓锦满,胡润凯,韩伟超,等.黄芪甲苷联合西格列汀对糖尿病大鼠糖脂代谢㊁氧化应激及TGF⁃β1/PI3K/Akt信号通路的影响[J].中国老年学杂志,2022,42(18):4522⁃4526. [19] MENG Q,QI X,CHAO Y,et,al.IRS1/PI3K/AKT pathwaysignal involved in the regulation of glycolipid metabolicabnormalities by Mulberry(Morus alba L.)leaf extracts in3T3⁃L1adipocytes[J].Chin Med,2020,15:1.[20] 黎宇,罗新新,严奉东,等.葛根上调肝胰岛素抵抗Hep G2细胞OB⁃R,IRS2,GLUT1和GLUT2蛋白调节糖代谢的研究[J].中国中药杂志,2017,42(10):1939⁃1944.[21] 周骏,惠晓亮,毛滢,等.玉竹多糖对2型糖尿病大鼠糖脂代谢的影响及机制研究[J].中国现代应用药学,2021,38(10):1181⁃1187.[22] 杨明,隋殿军,陈文学,等.蜂胶总黄酮对自发性糖尿病大鼠糖脂代谢的影响及抗氧化作用[J].中国药学杂志,2015,50(3):217⁃220.(收稿日期:2023⁃03⁃02)(本文编辑:王馨瑶)。
大鼠糖尿病造模成功的标准

大鼠糖尿病造模成功的标准大鼠糖尿病造模成功的标准糖尿病是一种常见的代谢性疾病,其特点是血糖水平异常升高。
为了更好地研究糖尿病的发病机制和寻找新的治疗方法,科学家们常常使用动物模型进行实验研究。
而大鼠作为一种常用的实验动物,其糖尿病模型的建立和评价就显得尤为重要。
大鼠糖尿病模型的建立主要有两种方法:化学诱导和基因突变。
化学诱导法是通过给予大鼠某些化学物质,如链脲佐菌素(STZ)或高脂饮食,来诱导其发生糖尿病。
而基因突变法则是通过基因工程技术改变大鼠体内某些基因的表达,使其模拟人类糖尿病的发生过程。
无论是哪种方法,大鼠糖尿病模型的建立都需要满足一定的标准才能被认为是成功的。
下面将介绍大鼠糖尿病模型成功的标准。
1. 血糖水平异常升高:大鼠糖尿病模型的核心特征就是血糖水平异常升高。
正常情况下,大鼠的空腹血糖水平应该在3.9-6.1 mmol/L之间,而糖尿病模型大鼠的空腹血糖水平应该明显高于正常范围。
2. 葡萄糖耐量异常:正常情况下,大鼠在葡萄糖负荷后,血糖水平会在一定时间内迅速上升,然后逐渐恢复到正常范围。
而糖尿病模型大鼠在葡萄糖负荷后,血糖水平上升明显较高,并且恢复较慢。
3. 胰岛功能异常:胰岛是调节血糖水平的重要脏器,而胰岛功能异常是导致糖尿病发生的主要原因之一。
在大鼠糖尿病模型中,胰岛功能异常表现为胰岛细胞数量减少、胰岛素分泌减少或胰岛素抵抗增加等。
4. 病理学变化:糖尿病是一种慢性代谢性疾病,其发展过程中会引起一系列的组织和器官损伤。
在大鼠糖尿病模型中,可以观察到胰岛组织结构异常、肝脏脂肪变性、肾小球硬化等病理学变化。
5. 症状表现:大鼠在发生糖尿病后会出现一系列的临床表现,如多饮、多尿、消瘦等。
这些临床表现也是评价大鼠糖尿病模型是否成功的重要指标之一。
综上所述,大鼠糖尿病模型成功的标准主要包括血糖水平异常升高、葡萄糖耐量异常、胰岛功能异常、病理学变化和临床表现。
只有同时满足这些标准,才能认定大鼠糖尿病模型的建立是成功的。
Ⅱ型糖尿病胰岛素抵抗中医药治疗的研究进展

【 】 咏 明, 海 东. 重 球 毒 症 抗 凝 治 疗 的 新i ? J 中 华 儿科 1姚 4 孟 严 xi l . ,]
【】 守搞 . 芍承 气 汤 对 重症 急性 胰 腺 炎 患者 胃肠 功 能 恢 复 和 杂 志, 0 6 4 () 6 — 7 . 8何 柴 2 0 , 4 8: 9 5 2 5 【5方 艳琳 , 强 , 凡 鲜 . l1 张 张 白及 承 气 汤 治 疗 急性 胰腺 炎 临床 观 察 血 清细 胞 因子 的 影响【】 宁 中 医杂志 , 1, () 5— 6 . J. 辽 2 0 7 : 9 40 0 3 34 1 2 1, 7: 1- 13 9 1 【】 9张利 君 , 学敏 . 芩 承 气 汤辅 助 治 疗急 性 胰 腺 炎 4 [ . 【 . 中 医杂志 . 00l() 12 1 1. 邹 柴 0例 J 中 J 中国 】 医外治 杂 志, 0 ,71 1 — 5 2 81 () 4 1. 0 : 【 1i 1 i学敏, 6l l 钟赣 生. 临床 中药学【 . 家庄 : M] 石 河北科 学技术 出版
r t epo i , R 、以 及 上 述 的 脂 肪 细 胞 分 泌 的 多 种 细 胞 e v e 1 . 1西方 医 学 关 于 Ⅱ型糖 尿 病 胰 岛 素 抵 抗 发病 机 理 的 论 说 : 岛 c ai rt n C P) 素 抵 抗 又 称 胰 岛 素 敏 感 性 下 降 ,一 般 来 说 是 指 胰 岛 素 介 导 的 因 子等 。
究 有 了进 一 步 深 入 ,其 发 生 机 制 的 研 究 方 向逐 步 从 细胞 水 平 谢 。高 芳 脚 等认 为适 度 的 内质 网应 激 (nol merit m edp s i ec u a t d
向分子 生物学 水平侧重 。 现代医学研究显示 , 在胰岛素与其周 ses E S可 以起 到 适 应 性 的 细胞 保 护 作 用 , 过高 和 持 久 的 t s, R ) r 而 围靶 组 织 细胞 如肝 脏 、 肉 和脂 肪 组 织 等 发 生 生 物 学 效 应 时 , E S 过 激活 特 有 的凋 亡通 路促 使 胰 岛 B细胞 凋 亡 。张 好好 等 肌 R 通 若 出现胰岛素抵抗 , 因主要分 为① 受体前 因素 : 原 如胰岛素基 旧 对 近年 来 国外 有 关骨 骼 肌线 粒 体与 胰 岛 素抵 抗 关 系的 研 究做 因 突 变 , 岛素 生物 活 性 下 降 或 丧 失 , 岛素 受 体 抗 体 形 成 , 了总 结 , 为 虽 然两 者关 系 尚未有 统 一定 论 , 骨 骼肌 线 粒 体 及 胰 胰 认 但
玉液汤治疗大鼠胰岛素抵抗实验研究(Ⅰ)

玉液汤治疗大鼠胰岛素抵抗实验研究(Ⅰ)
冯锋;董琳;张义伟;于福生;付雪艳
【期刊名称】《时珍国医国药》
【年(卷),期】2008(19)4
【摘要】目的观察玉液汤对大鼠胰岛素抵抗的治疗作用并探讨其作用机制。
方法用高热量饲料复制胰岛素抵抗大鼠动物模型,观察各组大鼠FBG,FINS,ISI等指标的变化。
结果玉液汤高剂量组在改善大鼠FBG,FINS,ISI等方面都有显著的效果
(P<0.01)。
结论玉液汤对大鼠胰岛素抵抗有明显的治疗作用。
【总页数】2页(P945-946)
【关键词】玉液汤;胰岛素抵抗
【作者】冯锋;董琳;张义伟;于福生;付雪艳
【作者单位】宁夏自治区妇幼保健院,宁夏银川750000;宁夏医学院,宁夏银川750021;黑龙江农垦总医院,黑龙江哈尔滨150088
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
【相关文献】
1.化瘀温胆汤对代谢综合征大鼠胰岛素抵抗干预作用的实验研究 [J], 马伯艳;张福利;宋琳;田旭升
2.复元醒脑汤对糖尿病脑梗塞大鼠胰岛素抵抗干预作用的实验研究 [J], 方邦江; 周爽; 沈俊逸; 王宏; 陈淼; 陈宝瑾
3.抵挡汤对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗影响的实验研究 [J], 常柏;李巧芬;李春深;李云平
4.玉液汤治疗大鼠胰岛素抵抗实验研究(Ⅱ) [J], 冯锋;董琳;张义伟;于福生;付雪艳因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
胰腺干细胞治疗糖尿病鼠的实验研究

胰腺干细胞治疗糖尿病鼠的实验研究摘要:本文以胰腺干细胞为试验材料,对细胞的表达特征、生长特性、体内外分化能力进行了较为系统的鉴定,以进一步完善其生物学特性的检测,同时将其体外定向分化为胰岛样细胞团并植入糖尿病大鼠模型体内,观察其能否改善糖尿病症状,旨在为糖尿病的临床治疗研究提供一株背景清楚的种子细胞。
关键词:胰腺干细胞糖尿病鼠实验研究【中图分类号】r4 【文献标识码】a 【文章编号】1008-1879(2012)12-0028-02胰腺干细胞具有特定的分化潜能,在医学和生物学上能够表现出全能性、多能性。
现阶段,胰腺干细胞的研究虽尚处于早期阶段,但是它却以迅猛的速度发展着,经过多年的分离培养与研究,胰腺干细胞已成为一种有广阔前景的实验及治疗源细胞。
糖尿病是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征,临床上主要表现为高血糖。
1 资料与方法在实验中分别选取三组生理状况相同的大鼠,标为a、b和c三组。
a为正常对照组、b为患糖尿病组、c为干预对照组,每组九只大鼠。
实验分为3个阶段,分别于造模后的第3、7、14、21天时(摸索中四个时间是血糖变化的四个时相),采用光化学血糖监测仪,每组随机抽取三只大鼠,采鼠尾静脉取血、测血糖、c-肽水平测定。
1.1 研究方法。
胰岛干细胞的转分化研究,在现在的有关胰腺干细胞治疗糖尿病的医学研究中,医学研究人员通过一些特殊的分化(转分化)就可以很简单的得到降低血糖的有关细胞的分泌细胞(胰岛素分泌细胞),该类特殊的分化转具体指的是两种毫无关联的组织细胞在特定的条件下经过特定的技术进行由一种组织细胞到另一种组织细胞分化的过程。
最开始的研究表明,成体的胰腺干细胞的分化的能力是最差的,然而就现在的研究看来,胰腺干细胞的分化具有扩散性。
一些医学研究者的研究实验中,首先从大鼠的胰腺中分离出胰岛分泌细胞,接着在体外进行长时间的细胞培养,在培养的过程中增加适量的化学剂就能转分化出中间源细胞,这样就可以分化成为胰岛b细胞。
2型糖尿病大鼠模型的建立及其验证
model.Results successful
group of rats increased blood
S1.eose,insulin
decreased,from the biochemical indices
and
confirmed
the
model.Conclusion
rate is
The experimental rat
征,表现为胰岛素敏感性降低和胰岛素反应性降低№J。 临床和流行病学研究表明,通常胰岛素抵抗是启动2型 糖尿病发生的初始原因¨J。本研究将高糖高脂饲料喂 养和药物干预相结合,采用成年SD大鼠高糖高脂饲料 喂养一段时间后产生胰岛素抵抗,再给予小剂量的 STZ,诱导出病理、生理改变都接近于人类2型糖尿病的 动物模型。
Male
SD adult
rats
fed
hish一
month,induced Test
insulin resistance,given
low—dose
streptozotocin(STZ,25 mg/kg,intraperitoneal injection),set
sensitivity
up in type 2 morphology sug-
具有高度的异质性(有许多不同的病因),因此无论是自 胰岛素 发性遗传性、诱导性还是转基因动物模型,都难以完全 模拟出人类2型糖尿病的复杂性。本模型具有很多与2
两组大鼠胰岛素敏感性、胰岛素水平
敏感指数(ISI)结果显示模型组胰岛素降低,胰岛素
敏感性降低,与对照组相比,差异具有统计学意义。
见表3。
表3糖尿病模型大鼠与正常大鼠血清胰岛素 及胰岛素敏感指数{;4-s)
运动与胰岛素抵抗分子机制的研究进展
导致 I。 R
主要是 IS 。研究发现糖尿病时 ms 活性降低 , I 一1 L 一1 大鼠在 运动 1 天后 , 骨骼肌 中 一1 白表达 无改变 , 蛋 但酪氨酸磷 一1 酪氨酸 酸化增强 ; 而运动 5天后 , 虽然胰 岛素刺激的
(途径。在信号 )
动物实验中胰岛素抵抗检测的几个问题
及PPAR Y双激动剂等等,都是在动物实验研究时取得了良好的结果,甚至被奉为经典药物, 但在临床上却都遇到了问题,或者是临床无效,或者毒副反应过大,不能进入临床或迅即退 出。因此对于减轻IR的药物(包括中药及其复方)的实验研究,必须对其研究的方法学经过 详细的推敲,才能得出初步结论。动物实验即使有效,还应该进行慎重的临床研究,才能推 广。
(五)葛根素葛根属于解肌清热中药。我们曾研究过葛根素抑制醛糖还原酶的作用。 毕会民等对高脂饲料诱导的胰岛素抵抗大鼠模型用葛根素腹腔注射,用计算法可见胰岛素敏 感指数改善,骨骼肌的超微结构也有改善。
(六)桑叶总黄酮桑叶属于疏风清热中药,与之有关的桑白皮等中药早已发现有降糖 作用,其作用可能通过抑制a一糖苷酶来实现,而桑叶的提取物亦有类似作用。近年桑叶总 黄酮对糖尿病大鼠小肠双糖酶抑制作用的研究结果表明,桑叶总黄酮对蔗糖酶、麦芽糖酶、 乳糖酶活性的抑制率依次为68.O%、47.1%及27.896,效果与阿卡波糖相似。
胰岛素测定还有一个问题要注意,即体内胰岛素分泌呈脉冲式。故严格的科研要求间隔 5min抽3次血测定后取平均值,除非样本较多(>30例)时可考虑一次抽血测定。而小鼠抽 一次血即很困难,不可能做到这一点,即使大鼠要达到这一要求也很不容易。
二、检测IR的方法 目前临床上检测IR的方法很多,从主要是根据测定内源性胰岛素的作用,还是根据测 定外源性胰岛素的作用不同,而分为两大类型,即间接方法及直接方法两类。 间接方法需要测定内源性胰岛素。又可因机体是在受刺激状态下还是基础状态下(空腹 8h以上)再分为两类。前者如微小模型(M咖)及多次静脉抽血葡萄糖耐量试验(FSIVGl'T)、持 续静脉输注葡萄糖模型评估法(CIGMA)及口服葡萄糖耐量试验(0G1vr)等。后者如:1/空腹胰岛 素(FINS)、空腹血糖(FPG)/FINS、1/(FPG×FINs)、稳态模型评估的胰岛素抵抗(HOMA-IR) 及定量胰岛素敏感性检测指数(QUICKI)等公式。间接方法由于要测定体内胰岛素,因动物胰 岛素与人胰岛素化学结构不同,实验研究必然会遇到上述的测定难题。即使鼠类实验应用鼠 胰岛素药盒,也会遇到以下一些问题。 1.MMM、FSIVGTT、CIGMA等法:这些都是数学模型,都是根据人的研究数据而建立的, 因而并不适合于各种动物。从技术上说,频繁的抽血在小动物也很难做到。 2.oGl’T测胰岛素:有些动物实验用0G1vr法计算胰岛素曲线下面积。即使用鼠胰岛素药 盒,鼠的“口服”问题、所用葡萄糖的剂量问题等也未统一,另外也要多次抽血测胰岛素。 3.1/FINS、FPG/FINS:这些公式有很多缺点,根本不适合科研应用。 4.1/(FPGXFINS):这是1993年李光伟教授等提出的,称为胰岛素敏感性指数(IAI),国 外称为Bennett指数,是国内应用较多的公式。此值非正态分布,应取其自然对数。此公式 也是基于人的研究数据,并非动物的数据。李光伟教授认为适合于大样本的流行 病学研究。 5.HOMA—IR:简化公式为(FPGXFINS)/22.5。这是目前各种公式中用得最多的一个。但 1998年原作者Matthews等认为此线性公式只能定性,说明有无IR,而不能精确定量。他们 将此公式称为HOMAl一IR,以后综合近年所得许多非线性公式数据后,得出另一非线性公式, 称为HOMA2-IR。此非线性公式很难手工计算,故他们免费提供计算机运算。但HOMA2-IR要 把胰岛素值单位换为pmol/L。不论是HOMAI-IR还是HOMA2一IR都是非正态分布,统计时要 经过对数转换。这些公式所根据的资料都是人的研究结果,因而并不适合动物研究。至今还 未见将动物的钳夹试验结果与测定动物胰岛素的2种HOMA—IR公式作对比,因而即使用鼠胰
胰岛素抵抗的中医药研究进展
床对前者的研究居多。嚣前资料表磺,两种情况采用
中医辨证分型治疗都能不同程度的改善胀,增强胰 骗素敏感性,大大掇高矾相关疾病的治疗效果。但 对其研究依然存在不足之处,主要表现:(1)孛溅对 IR尚没有统一的临床诊断标准和疗效评价标准。
[8]薛青,谢丹红.益肾疏肝泄毒祛瘀汤治疗胰岛素抵抗的 疗效观察[j】.陕西孛蹉,2006,27(8):920. [9]阮永队,陈红梅,莫冰泉,等.中医温阳健脾法与降糖药合 髑治疗2型糖浆癍获粒素抵抗阳盔诞[J】.r-期中医药大
学学报,2007.24(3):1源自186.【lO)王芬,万金兰。苦瓜对胰岛索抵抗鼠肾组织孛一氧化氮 合酶的影响[J].湖北预防医学杂志,2003,14(6):21。 [11】萎淼,至{鹭系.黄连入参对药治疗2型糖尿病胰岛素抵 抗机制的试验研究[J].新中医,2006,38(5):89-91.‘ [12]尹义辉,王经武.降浊消糖饮治疗胰岛素抵抗疗效观察 [J].山东中医杂志,2005。24(11):654。 【13]安其,李朝敞,程斌.安一胶囊治疗胰赫素抵抗综合 征的临床观察[J].成都中医药大学学报,2003,25(1):12。 【14]张智龙.针利对2型糖尿病胰岛素抵抗影响的临床疗效 [J]。中隰针灸,2002,22(11):723-724, (收稿日期"2009—04—15)
《伤寒论》共计10卷,22篇,397法,112方,用药
90余种,因其组合有度,结构严谨,用药精当,故疗效 卓著,被誉为“经方之祖”。是我国第一部理法方药完 羲,理论联系实际的医药著作,是一部阐述多种终感 疾病及杂病辨证论治的专书,为中医临床各科提供了 辨证和治疗的一般规律,视为规矩准绳。尤其是药食 同用的临床应用,对提高疗效、减少药物毒副作用和 不良反应有着重要指导意义。 l理论基础 承既是糖尿癍、高搬压、冠心病等多穆疾病的伴 随症状,又是其病理因素。中医对IR的研究有两种 方向,一是与2型糖尿病、高血压、冠心病等疾病的相 关性研究;一是对胰岛素抵抗综合征的独立研究,临
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
中医药信息20年第 2 裢箜 塑 07 4
糖 尿 病 大 鼠胰 岛素抵 抗 实 验研 究进 展
朱 爱 丽
( 黑龙 江 中医药大 学 , 黑龙 江 哈尔 滨 104 ) 500
摘
要 : 岛素抵抗在糖尿病、 胰 高血压、 脂类代谢异常、 动脉粥样硬化等多种疾病的病理生理过程中起到
述。
11 中医辨证分型和 2 . 型糖尿病胰岛素抵抗的关系 辨 证论 治是 中医诊 治 2型糖 尿病 的主要 思路 和方 法, 只有 揭示辨 证论 治 与胰 岛素 抵抗 的关 系 , 建立 规范 化, 能够反 映胰 岛素 抵抗 的 2型糖尿 病 的“ ”才 能更 证 , 好指导临床疗效。丁学屏等 将 2 J 型糖尿病患者分为 湿热 内蕴 、 阴虚 热 盛 、 阴两 虚 、 阳两 虚 4型 。观 察 气 阴 结果显示 : 各证型均存在较 明显 的 m, 但各组 程度略 有不同, 其中阴阳两虚型和湿热 内蕴型最为严重 , 并且 气阴两虚型 由于兼夹证不同, 对胰岛素敏感性不同, 以
主要作用,因此针对糖尿病胰岛素抵抗在 中医药、 西医等方面的实验研 究进展进行 了综述 , 以期 为深入
探讨 胰 岛素抵 抗机 理提 供一 定的依 据 。 关键 词 :t g 岛素抵 抗 ; 尿 病 大鼠 ; 糖 实验研 究 ; 综述 中图分类号 : 57 R 8 文 献标 识码 : A 文 章编 号 :02 46 20 )5 0 1 0 10 —20(070 —03 — 3
作者简介 : 丽( 7 一)女 , 朱爱 1 7 , 主管药师 。现任哈尔滨三乐生物工程 9 有 限公 司技术部部长兼总裁项 目助理 。
收稿 日期 ;07 4 1 20 —0 一O
修 回 日期 "07 4 2 20 —0 —2
致 m 更为严重 , 提示要重视糖尿病患者湿热兼证的治 疗 。李道本等 认为 m 的发生与肝郁密切相关 , ] 肝郁 是2 型糖尿病 的发生、 发展的始动因素 , 而后致肝郁化 火、 气伤津亏、 痰浊和瘀血内生而产生消渴各症。陈思 兰 等 ] 11 2型糖尿病 患者按 照 中医辨证 分 型标 将 5例 准分为 3 , 型 结果显示 2 型糖尿病各证 型与健康对照 组 比较 均存 在 明显 的 m , 3型 之 间胰 岛 素敏 感 性呈 而 阴阳两虚 >阴虚热盛 > 阴两虚型。 气 以上 研究 表 明 , 存 在 于 糖 尿 病 的各 证 型 中, m 但 有 些报道 结论 不一 , 尚有待 进一 步研究 。 12 单 味药 对 m 的实验研究 . 临床和实验研究表明黄连素具有显著的降血糖效 症, 并能改善糖耐量 , 降低血清胆固醇。高从容等[采 5 ] 用葡萄糖 一 胰岛素耐量试验, 观察了黄连素对高脂饮 食胰岛素抵抗大 鼠模型胰 岛素敏感性 的影响, 结果显 示黄连素能够显著增强大鼠的胰岛素敏感性, 其作用 强度与二甲双胍相似。王佳珍等 采用胰岛素抑制实 J 验 测定 四氧 嘧 啶糖 尿病 大 鼠稳态 胰 岛素水 平 (s ) s 1和 s 稳态葡萄糖浓度(s )评估 m 程度, sG , s 发现月见草油 治疗 后 的糖 尿 病大 鼠 ss 平 与 糖 尿 病 对 照 组 比较 s G水 差异无显著性 ( P>0o )但 s l . , s 水平显著低于后者 5 s ( P<00) I .1, R程度 明显改 善 , 用 强度 与多 烯康 相 当 作 ( P>00) .5 。 卜 单 味 中药 大黄、 参 、 ; 人 知母 、 芪、 门 黄 麦 冬 0等也 有 改善胰 岛素抵 抗 的作 用 。 ] 13 中药 复方对 m 的影 响 . m 是 Ⅱ型糖尿病 发病 机 制 的基 本环 节 , 多种 因 受 素影响 , 近几年来随着中医药降糖作用机理研究不断 深入 , 证实许多中药复方可 以显著改善 m, 其作用 是 多途径 、 多环节的、 多靶点的。 熊曼琪等u J l 经过临床和实验研究表 明, 加味桃仁 承气汤对于 ND M 具有 良好治疗作用 , 以改善症 ID 可 状、 降低 血糖 和血 脂 ; 进一 步研究 表 明加味桃 仁 承气 汤 能明显改善 ND M患者 m , ID 使空腹血糖 和胰岛素水 平下降( O0和 P< .1, P< . 5 OO)作用与西药美吡达组相 当, 而外周 胰 岛素敏感 度 和胰 岛素敏 感性 指 数升 高 ( P
胰 岛素抵 抗 (Isl s t c m) nui r ia e, 是指 血液 中胰 n e sn 岛素的生物效应降低 , 即机体对胰岛素的生物调节作 用 的反 应性 减低 的一 种状 态 。我们 可 以将胰 岛素抵抗 理解 为胰 岛素“ 值 ”也就 是说 胰 岛素生理 功 能 ( 贬 , 如胰 岛素降低血糖的能力 ) 在下降, 不能发挥应有的作用。 美 国糖 尿病协会 将 “ 机体 对 胰 岛素 任何 生 理 功 能反 映 受损 的现 象 ” 义 为 m。它 包 括 糖 、 肪 及 蛋 白质 代 定 脂 谢, 血管 内皮细 胞 功 能 以及 基 因 表达 等 方 面 的功 能异 常… 。2 1 型糖尿病是最具典型性 的 m 相关疾病 , 已成 为 当今世界 仅次 于 心血管 病 和肿瘤 的第 三大影 响人 类 健康 和生命 的疾 病 。 1 中医药对 m 的研 究 进展 人们越来越 重视 中医药对 胰岛素抵抗 的改善作 用, 中医阴阳平衡理论 , 整体辨证论治的方法在临床治 疗 中有 其独 到之处 。最 近几 年来 随着 中 医现代 化水 平 的不断 提高 , 医药 改善 胰 岛素 抵抗 已成 为 糖 尿病 研 中 究领域的热点。大量研究表明 , 中药以其多成分、 多途 径点 , 毒 在治 疗 m 多 系统 损 害 的疾 病 时 显 示 出 良好 的疗 效 。 以下 将 分别 从 中医辨证 及 中药 等 方 面针 对 m 的实验 进 行 综