酸性染料比色法原理
药分实验（吉林大学）硫酸阿托品注射液的含量测定
硫酸阿托品注射液的含量测定一、实验目的1.掌握酸性染料比色法的基本原理和操作。
2.熟悉注射剂分析的基本操作技术。
3.掌握比色法的基本方法，要求和计算。
二、基本原理在适当pH (5.6)溶液中，有机碱（B）可以与氢离子结合生成阳离子（BH+），酸性染料（HIn）在此pH值下可解离成阴离子（In-），阴离子可与上述阳离子（BH+）定量地结合成有色离子对。
定量的用有机溶剂提取，在420 nm处测定该溶液中有色离子对的吸收度，并与对照品比较，即可计算出有机碱药物的含量。
实验内容1.对照品溶液的制备取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品对照品25 mg，精密称定，置25ml 容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取5 ml，置100 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得，作为对照品溶液。
每1 ml溶液中含无水硫酸阿托品50 μg。
2. 供试品溶液的制备精密量取硫酸阿托品适量（约相当于硫酸阿托品2.5 mg），至50 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
3. 硫酸阿托品的含量测定精密量取对照品溶液与供试品溶液各2 ml，分别置预先精密加入氯仿10 ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液2 ml，振摇提取2 min后，静置使分层，分取澄清的氯仿液（以水2 ml同法平行操作所得的氯仿液为空白）于420 nm的波长处分别测定吸收度，并将结果与1.027相乘，即得。
本品含硫酸阿托品应为标示量的90.0%~110.0%。
四、说明1. 溴甲酚绿溶液的制备：取溴甲酚绿50 mg与邻苯二甲酸氢钾1.021 g，加氢氧化钠液（0.2mol/L）5 ml使溶解，再加水稀释至100ml，摇匀，必要时滤过。
2.本实验采用酸性染料比色法测定硫酸阿托品含量，实验中应严格控制水相pH并保证离子对化合物能定量提取进入氯仿层。
3.振摇提取时既要能定量地将离子对化合物提入氯仿层，又要防止乳化和少量水份不混入氯仿层，因此，需小心充分振摇。
酸性染料比色法原理
酸性染料比色法原理
酸性染料比色法是一种常用的化学分析方法，用于测定物质溶液中的浓度。
其原理基于酸性染料在酸性条件下与分析溶液中的特定成分发生可逆反应，形成一种带有颜色的配合物。
实验中通常选择合适的酸性染料，例如甲基橙、苏丹红等，这些染料在酸性条件下与所分析物质发生化学反应，生成具有颜色的配合物。
反应的程度与所分析物质的浓度成正比，通过测定配合物的吸光度，可以推算出样品中目标物质的浓度。
具体实验步骤如下：首先，将待测溶液与适量的酸性染料混合，并加入适量的酸性试剂，制备酸性条件；然后，以纯溶剂或标准物质制备一系列不同浓度的标准溶液；接下来，将样品和各个标准溶液分别与酸性染料混合，生成配合物；最后，使用分光光度计测量各个配合物的吸光度，并绘制标准曲线。
通过比较待测溶液与标准曲线上的吸光度数值，可以确定待测溶液中目标物质的浓度。
酸性染料比色法可以应用于各种化学分析，如测定水中的硬度、分析食品中的某些成分、检测环境水样中的污染物等。
总之，酸性染料比色法利用酸性染料与分析溶液中目标物质发生可逆反应，生成具有颜色的配合物，并通过测量配合物的吸光度来确定目标物质的浓度。
这种分析方法简单、灵敏且具有广泛的应用范围。
实验6 酸性染料比色法测定硫酸阿托品的含量(学生)
实验6 酸性染料比色法测定硫酸阿托品注射液的含量一、目的要求：通过硫酸阿托品注射液含量测定，掌握酸性染料比色法的操作条件。
二、原理：N OOHH3COH2 •H2SO4•H2O(C17H23NO3)2•H2SO4•H2O 694.84B + H+BH++ (BH+• In-)水相(BH+• In-) 有机相H++ In-在适当的介质中，如适宜的pH，生物碱类药物（B）可与氢离子结合成阳离子（BH+），一些酸性染料如溴甲酚绿等可解离成阴离子（In-），上述阳离子与阴离子定量结合成的有机络合物（BH+•In-)，即为离子对，并能全部溶于有机相中，过量的染料（In-）完全保留在水中。
用有机溶剂提取该离子对，在一定波长处测定其吸收度，即可计算出生物碱药物的含量。
或者，将显色的有机溶剂碱化（如加入醇制氢氧化钾），使与有机碱结合的酸性染料释放出来，再测定其吸收度从而确定生物碱的含量。
三、操作步骤1、对照液的制备已事先制备好，浓度见试剂瓶。
2、供试液的制备精密移取硫酸阿托品注射液1.0mL，置10mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
（2个人打开5支安瓿瓶，放于干净的10mL小烧杯中。
每人测定时配制10mL样液2份。
）3、测定法（空白）精密吸取阿托品对照液 2.0mL→置60mL分液漏斗中（4个）→精密加入溴甲酚绿染料2份2.0mL，混匀后→精密加入氯仿10.0mL→振摇提取3-4次后（注意放气），静置1-2分钟分层→将氯仿层收集于10mL试管中→加入无水硫酸钠脱水（脱水后，固体呈块状，溶液特别澄清）→移入吸收池中→420nm处测定吸收度。
四、数据记录与计算注射液按标示量计算的百分含量为：标示量% = %100⨯标示量每支注射液含量 硫酸阿托品注射液标示量% = %100027.1⨯⨯⨯⨯⨯标示量稀释倍数标对试A C A本法中换算系数1.027（694.85/676.83）系无水硫酸阿托品相当于硫酸阿托品。
酸性染料比色法原理
酸性染料比色法原理
酸性染料比色法是一种常用的分析化学方法，它主要用于测定物质中的酸性染
料成分。
该方法基于酸性染料在特定条件下与其他物质发生显色反应的原理，通过比色测定来确定物质中酸性染料的含量。
下面将详细介绍酸性染料比色法的原理。
首先，酸性染料比色法的原理基于酸性染料分子结构中含有苯环和杂环的特性。
在酸性条件下，酸性染料分子中的苯环和杂环结构会与酸性物质发生酸碱中和反应，形成显色化合物。
这些显色化合物具有特定的吸收波长和光谱特征，可以通过比色测定来确定酸性染料的含量。
其次，酸性染料比色法的原理还涉及到酸性染料与其他物质之间的化学反应。
在特定的酸性条件下，酸性染料分子中的官能团会与其他物质发生化学反应，形成显色产物。
这些显色产物可以通过比色测定来确定酸性染料的含量。
另外，酸性染料比色法的原理还包括了光谱分析的原理。
酸性染料显色产物具
有特定的吸收波长和光谱特征，可以通过光谱仪器进行测定。
利用光谱分析可以准确地测定酸性染料的含量，提高了测定的准确性和精密度。
总的来说，酸性染料比色法的原理是基于酸性染料分子结构和化学反应特性，
通过比色测定和光谱分析来确定酸性染料的含量。
这种方法简单、快速、准确，广泛应用于纺织品、食品、化妆品等领域的酸性染料含量测定。
通过了解酸性染料比色法的原理，可以更好地理解和应用这一分析方法，为相关领域的研究和生产提供技术支持。
酸性染料比色法原理及影响因素
酸性染料比色法原理及影响因素
酸性染料比色法是一种经常用于测定大量生物分子含量的分析方法。
该法使用含有具有酸性染料的标记试剂，能够有效提取和定量检
测生物分子，如蛋白质和核酸等，广泛应用于生物分子检测。
酸性染料比色法的原理主要是根据标记试剂中染料的色度变化，
来直接检测分子的浓度。
首先，选定要检测的生物分子，然后添加染
料标记试剂，当试剂和检测分子结合时，染料会变色，染色的强度和
活性分子的浓度成正比。
因此，根据标记染料的色度变化判断出检测
物质的含量，实现定量检测。
对于酸性染料比色法，影响检测结果的因素很多，其中最主要的
有染料的稳定性、灵敏度和定量范围等。
如果染料的稳定性不好，则
检测结果将受到影响；如果灵敏度较低，就会影响浓度检测的精确性；而定量范围合适则决定了该法能够应用在检测多大浓度范围内的分子。
另外，为了保证测得准确的数据，还需要保证实验条件的恒定性，如
温度和湿度等。
酸性染料比色法是一种灵敏、可靠、有效的方法，能够快速准确
地定量检测生物分子含量，广泛应用于分子生物学的研究和实际应用。
但是，为了获得准确的定量检测结果，必须考虑对实验条件的恒定性
和对染料的稳定性、灵敏度和定量范围的要求。
简述酸性染料比色法的基本原理
简述酸性染料比色法的基本原理酸性染料比色法是一种分析技术，其基本原理是：当溶质中含有不同浓度的染料时，浓度越高的染料吸收的光谱线越强，可给出溶质中染料浓度的分析结果。
通过改变溶液的酸度，可以改变溶液中染料吸收光谱线的强弱，从而确定染料的浓度。
酸性染料比色法的基本原理是：溶液的酸度影响着染料的颜色，在不同的酸度环境下，染料吸收光谱线的强弱发生变化，由此可以比较染料在溶液中的浓度大小。
通过测量染料的颜色，可以判断出该溶质含有的染料的浓度。
酸性染料比色法的核心是基因工程技术，在分析和检测中，酸性染料比色法仅使用一种染料，即具有良好表观特性的酸性染料。
一般情况下，酸性染料比色法使用的染料是一种具有特殊量子效应的染料，如荧光素衍生物等。
在酸性染料比色法的检测过程中，采用的染料是一种有定容性的染料，也就是说，它的比色效果取决于溶液中染料的浓度。
此外，这种染料也有一定的吸光性，可以吸收定量的光线，进而发生光谱变化，特别是在紫外线或可见光线范围内，可以得到一种适宜酸性环境下的特定比色效果，从而达到识别染料浓度的目的。
此外，酸性染料比色法还有另一个特点，就是染料的活性取决于酸度的变化，在不同的酸度环境下，染料的吸收光谱线的强弱也会发生变化，从而影响酸性染料比色法的结果。
在实际操作中，酸性染料比色法使用的染料的颜色和吸收光谱线，将一定浓度的染料配液加入反应容器中，然后加入不同浓度的酸性溶液，并在适当的紫外线或可见光范围内测量染料吸收光谱线的强弱，从而识别染料浓度。
总之，酸性染料比色法是一种非常实用的分析技术，它可以帮助科学家快速准确地测定染料浓度。
它基于溶液中染料吸收光谱线变化的原理，可以根据染料的活性变化，通过改变溶液的酸度来比较染料的浓度，从而达到分析的目的。
生物碱类药物分析 酸性染料比色法
02
影响因素
1、最佳PH值的选择
能使有机碱全部以盐的形式存在，酸性 染料能够解离成离子，以便它们定量地结合成 离子对而转溶于有机相，且又能将剩余的染料 完全保留在水相。
02
影响因素
2、酸性染料的选择
溴麝香草酚蓝
甲基橙
溴甲酚绿
增加染料的浓度可提高测定灵敏度
02
影响因素
3 有机溶剂的选择
常用的有机溶剂有三 氯甲烷、二氯甲烷、 二氯乙烷、苯、甲苯、 四氯化碳等。
4 水分的影响
测定时用脱水剂或干燥 滤纸过滤
5 有色杂质的影响
测定时缓冲液与酸性染料 混合液先用有机溶剂提取
03
小结
01
酸性染料比色法的原理
02
常用的酸性染料
03
影响因素
04
思考题
常用的酸性染料有哪些？
酸性染料比色法
目录
01 02 03
基本原理 常用酸性染料
影响因素
01
基本原理
BH+ + In
[BH+·In-]
水相 有机相
[BH性染料
磺酞类指示剂
溴麝香草酚蓝(BTB)
pH 6.0-7.6（黄-蓝）
溴甲酚绿(BCG)
pH 3.6-5.2（黄-蓝）
溴酚蓝(BPB)
pH 3.8-4.6（黄-紫）
酸性染料比色法测定延胡索中总生物碱的含量 (1)
酸性染料比色法测定延胡索中总生物碱的含量一、目的要求掌握酸性染料比色法测定延胡索中总生物碱含量的原理和方法。
二、基本原理在适当的介质中，生物碱（B ）可与氢离子（H +）结合成阳离子（BH +），一些酸性染料，如溴百里酚蓝、溴酚蓝、溴甲酚紫或溴甲酚绿等，在此条件下可解离成阴离子（In -）。
上述阳离子与阴离子定量地结合成有色配位物（BH +In -）离子对，可以定量地溶于某些有机溶剂，在一定波长处测定该溶液有色离子对的吸光度，即可计算出生物碱含量。
++−→←+BH H B-++−→←In H HIn有机相水相)()(__In BH In BH In BH ⋅−→←⋅−→←+++-+三、实验方法对照品溶液的配制 取延胡索乙素对照品约2mg ，精密称定，置25ml 量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的配制 取延胡索粉末约0.5g ，精密称定，置50ml 具塞锥形瓶中，加少量氨水湿润（约20滴），密塞放置15分钟，精密加乙醚-三氯甲烷-甲醇（25：8：2.5）混合溶剂25ml ，轻轻摇匀，称重，冷浸一周，称重，补足重量，滤过，精密吸取续滤液10ml ，置25ml 具塞锥形瓶中，水浴加热挥干溶剂，精密加入三氯甲烷10ml ，使完全溶解，摇匀，即得。
测定法 精密量取对照品溶液和供试品溶液1ml ，分别置分液漏斗中，各精密加三氯甲烷9ml ，再分别加溴甲酚绿溶液5ml ，振摇3分钟后，静置使分层；同法制备空白溶液。
分取上述三种溶液的三氯甲烷液，在410nm 的波长处测定吸光度，按下式计算，即得。
%100%)1(25(%)⨯-⨯⨯=水分含量样对对样W C A A式中 A 样与A 对分别为供试品溶液与对照品溶液吸光度；C 对为对照品溶液中延胡索浓度，g/ml ；W 样为取样量，g 。
四、思考题1．酸性染料比色法的影响因素有哪些？2．本法中使用的溶剂均有挥发性，操作中应注意哪些事项？。
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+ N
OCH3
OH 香草醛
N
OCH3
OH
黄色异烟腙λmax=380nm，在105℃干燥后， 测定熔点，228231℃
(四)形成沉淀的反应（吡啶环）
（1）与金属离子反应生成有色沉淀 异烟肼,尼可刹米+HgCl2 → 白色沉淀↓ 异烟肼+CuSO4 → 红棕色↓（Cu2O） 尼可刹米+CuSO4+硫氰酸钾 → 草绿色絮 状沉淀
Cl
Cl Cl
HO
Cl2 HO
Cl2 O
N
N
N
NH3
ONH4
O
N
N
N
（二）光谱特征
1. UV Ch.P采用本法鉴别盐酸环丙沙星。 2. 荧光光谱特征 硫酸奎宁和硫酸奎尼丁，在稀H2SO4中均显
蓝色荧光，盐酸环丙沙星则无荧光，可用于本类药物的鉴别。 3. IR Ch.P中硫酸奎宁和盐酸环丙沙星均采用红外光谱的方
CONHNH2
COONa
COONa
NaOH
N
NCl
COONa
NO2
NaOH
N CHOH
NO2
NO2
紫红色
N NO2
NO2
NO2
（二）、酰肼基团的反应 1 还原反应：
CONHNH 2 4e
N
COOH
+ N2 N
常用的氧化剂：I2、Br2、KBrO3、AgNO3
取本品约10mg加水2ml溶解加氨制硝酸银试液
法进行鉴别，而硫酸奎尼丁未采用此法。
（三）无机酸盐
硫酸奎宁 硫酸奎尼丁
酸性条件
BaCl2
白色沉淀
盐酸环丙沙星
酸性条件
AgNO3
白色沉淀
第三节 托烷类（莨菪烷类）
莨菪烷衍生的氨基醇和不同有机酸缩合成酯 硫酸阿托品、氢溴酸东莨菪碱
N CH3
H OH O
O
,H2SO4,H2O
2
N CH3 O
O O HO H
二、鉴别： （一）吡啶环的开环反应 适用于,’未取代，,γ烷基或羧基取代的。
1. 戊烯二醛反应（kÖnig反应）
CONHNH2
COONa
COOH
KMnO4
CNBr
或Br2
溴化氰
N
N
N
Br CN
COOH
COOH
2Ar-NH2
CHO CHOH
Ar N CH CH NH Ar
2、与2，4-二硝基氯苯反应，加醇制氢氧化 钾紫红色
N
2
N
2
硫酸奎宁
硫酸奎尼丁
F
N HN
O
O
OH ,HCl,H2O
N
盐酸环丙沙星
➢ 主要化学性质： 1、碱性：喹啉环上的氮原子具有碱性，可
与强酸形成稳定的盐。 2、旋光性：硫酸奎宁为左旋体；硫酸奎尼
丁为右旋体。 3、荧光特性
二、鉴别试验
（一）绿奎宁反应
6－羟基喹啉，经氯水的氯化反应，再以氨 水处理，生成绿色的二醌基吲胺的铵盐。
CONHNH 2
N
N
N
C2H5 CON
C2H5
吡啶
异烟肼
尼可刹米
2.性质：
（1）碱性：吡啶环上氮原子具有叔胺性质， pKb=8.8（水中），可非水滴定；
（2）母核能与金属盐反应生成有色沉淀 （3）异烟肼：酰肼基有强还原性,且能与羰基缩合,氧
化还原滴定；
（4）尼可刹米:酰胺基碱性下可水解,放出NH(C2H5)2↑， 用于鉴别或凯氏定N直接蒸馏测定。
CONHNH2 + AgNO3 + H2O
N
NH2-NH2 + 4 AgNO3
COOAg
+ NH2-NH2 + HNO3 N
4 Ag
+ N2 + 4HNO3
反应现象：产生气泡与黑色浑浊，并在试管壁上形 成银镜
2、缩合反应：与芳醛缩合形成腙， 如香草醛、水杨醛、二甲氨基苯甲醛
CONHNH2
CHO
CONHN CH
取本品，加水制成每 1ml 中含 50mg的溶液，作
为供试品溶液。另取硫酸肼加水制成每 1ml中含 0.20mg（相当于游离肼50µg 的溶液，作为对照溶液。 吸取供试品溶液 10µl 与对照溶液 2µl 分别点于同一硅 胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙 醇－丙酮（3∶2）为展开剂，展开后，晾干，喷以乙 醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15min后检视，在供试品 主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色 斑点。
第八章 杂环类药物的分析
概述
定义：
杂环类药物是指：碳环中夹杂有非碳原子的环状有机化 合物，其中的非碳原子成为杂原子，一般为氧 、硫、氮 等。
分类：
按其所含的杂原子种类与数目，环的元数与环数的不同 分为：吡啶类、喹啉类、托烷类、酚噻嗪类和苯并二氮 卓类等。而各大类又可根据环上取代基的类型、数目、 位置的不同衍生出众多的同系列药物。
（五）分解产物的反应
1. 尼可刹米 ChP（2000） 【鉴别】 （1）取本品 10 滴，加氢氧化钠试液 3 ml ， 加热，即发生二乙胺的臭气，能使湿润的红色石蕊试 纸变蓝色。
尼可刹米 NaOH Δ二乙胺
（六）紫外与红外吸收光谱特征
三、杂质检查 （一）异烟肼中游离肼的检查
杂质来源 原料引入、降解产生 1. 薄层色谱法（TLC） （1） ChP（2000） 杂质对照品法
（二）尼可刹米中有关物质的检查
ChP（2005） TLC 高低浓度对比法
配制两种不同浓度的对照溶液
第二节 喹啉类药物
共性：含有吡啶与苯环稠合而成的喹啉杂环 代表药物：硫酸奎宁、硫酸奎尼丁
H3CO
HO N
H
H
H
CH=CH2 ,H2SO4,2H2O H3CO
H H
N
HO
H CH=CH2 ,H2SO4,2H2O
共性: (1)杂环类药物是合成药物中所占比例最多 的一大类药物. (2)多为五元环或六元环,单环或并合环. (3)杂环结构较稳定,不易开环,其性质受杂 原子种类、数目、位置影响. (4)杂环上取代基性质较活泼,常用于分析. (5)含氮杂环,其碱性的强弱往往用于分析.
第一节 吡啶类药物分析
一、结构分析 ➢1. 结构：本类药物均有吡啶环
允许杂质存在的最大量
L
供试品量
100%
ห้องสมุดไป่ตู้
50 103 2 100% 0.02% 50 10
（2） BP（1998） 游离肼 杂质对照品法 有关物质 高低浓度对比法
2. 比浊法 JP（13） 检查方法 灵敏度法 反应原理 游离肼+水杨醛→水杨醛腙↓ 优点：不用对照品，价廉、简单易行 缺点：准确度差
硫酸阿托品
氢溴酸东莨菪碱
,HBr,3H2O
主要化学性质
1. 水解性 本类药物分子结构中具有酯的结构，易水解。 以阿托品为例，水解生成莨菪醇(Ⅰ)和莨菪 酸(Ⅱ)。
2. 碱性 阿托品和东莨菪碱的结构中，五元脂环上含有 叔胺氮原子,具有较强的碱性,易与酸成盐。如 阿托品的pKb1为4.35。